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1 Treg Tfh 1, 2, Treg Tfh EAT ICR PTg TGAb TPOAb CD4 CD25 Foxp3 Treg CD4 CD154 CXCR5 Tfh TGAb ± U /ml ± U /ml P < TPOAb P > CD4 CD25 Foxp3 Treg ± % ± % P < CD4 CD154 CXCR5 Tfh P > PTg 5 CD4 CD25 FoxP3 Treg Treg Tfh R R A DOI / j. issn Detection of the Treg and Tfh cells in the peripheral blood in experimental autoimmune thyroiditis mice WANG Maolin SUN Binjie BAO Huiwen ZHANG Peng ZHANG Haomin TAO Mengying TANG Xingli LIU Hui School of Clinical Medicine Wannan Medical College Wuhu China Abstract Objective To investigate the function of Treg and Tfh cells in the pathogenetic process in experimental autoimmune thyroiditis in mice. Methods ICR female mice were divided into model group and normal control group. Mice in the model group were immunized with porcine thyroglobulin PTg and Freund's adjuvant combined with high iodine stimulation and sacrificed at the 6th week. Enzyme-linked immunosorbent assay ELISA was performed to detect the thyroglobulin antibody TGAb and thyroid peroxidase antibody TPOAb levels and thyroid tissues obtained from the mice were pathologically examined. Flow cytometry was used to determine the percentages of CD4 CD25 Foxp3 Treg and CD4 CD154 CXCR5 Tfh cells in peripheral blood from experimental mince. Results Mice in the model group had higher TGAb level than those in the control group ± U / ml vs ± U /ml P < yet the TPOAb level remained no significant difference between groups P > Pathological examination showed minor inflammation in the thyroid tissues. Percentage of circulating CD4 CD25 Foxp3 Treg cells was significantly higher in the model group than the control group ± % vs ± % P < whereas the two groups had no significant difference regarding CD4 CD154 CXCR5 Tfh cells P > Conclusion PTg combined with high iodine stimulation for five weeks may lead to autoimmune in mice when mild inflammation occurs in the thyroid tissues. CD4 CD25 Foxp3 Treg cells may be associated with autoimmune response in early stage. Key words autoimmune thyroiditis Treg cells Tfh cells flow cytometry autoimmune thyroiditis regulatory T cells Treg T T AIT follicular helper cells Tfh Treg T Tfh B T CD4 T B @ qq. com hegenlh@ sina. com

2 522 1 porcine thyroglobulin PTg thyroglobulin antibody TGAb ICR 5 thyroid peroxidase antibody TPOAb experimental autoimmune thyroiditis EAT EAT Treg Tfh EAT 10% HE SPF ICR ± 2 g CD PTg FITC CD154-PE CXCR5-PerCP-cy5. 5 CFA IFA sigma ELISA 4 30 min ELISA PBS 1 ml PBS300 μl CD4 CD25 Foxp3 Treg CD4- Tfh FITC CD25-APC Foxp3-PE CD154-PE CXCR5- CD4-FITC CD25-APC 4 PerCP-cy5. 5 / BD 30 min PBS 1 ml 1. 3 Bio Tek min 1 Perm /Wash buffer 1 ml Von BD Accuri C6 BECKMAN Allegra X-15R 4 50 min CD25-APC Foxp3-PE g CD4 CD154 CXCR5 Tfh 1 L CD4 CD154 CXCR5 Tfh 100 μl 1 Fix /Permbuffer 50 Foxp3-PE Perm /Wash buffer 2 ml g 6 min PBS 300 μl C6 BD PBS PTg FSC / 50 μg / SSC CFA IFA CD4-FITC CD154-PE CXCR5- PerCP-cy5. 5 Treg CD4-FITC CD4 6 CD25 Foxp3 Treg CD4 T 1. 5 ± x 珋 ± s t P < SPSS

3 523 皖南医学院学报 J of Wannan Medical College 细胞核增大 淋巴细胞浸润不明显见图 1 结果 一般状况 建模前所有小鼠饮食 活动均正 常 皮毛光滑建模第 4 周 模型组小鼠免疫部位出 2 1 现红肿硬结 免疫部位周边毛发油亮不整 个别小鼠 硬结轻微破溃 渗血 小鼠有舔舐现象 正常对照组 小鼠则为正常建模第 6 周 与对照组相比 模型组 小鼠体质量减轻 饮食 活动减少 皮毛欠光滑 脾脏 增大增重 2 2 小鼠血清 TGAb 和 TPOAb 水平分析 结果显 示 模型组小鼠 TGAb 水平高于对照组 差异有统计 学意义 P 0 05 而模型组小鼠 TPOAb 水平与对 照组差异无统计学意义 P 0 05 见表 1 A 模型组 100 B 模型组 400 a 滤泡上皮细胞 b 滤泡腔 C 对照组 100 D 对照组 400 表1 两组小鼠血清 TGAb 和 TPOAb 水平 U / ml 指标 模型组 正常对照组 TGAb ± ± TPOAb 2 22 ± ± t P 甲状腺组织病理学检查 正常对照组小鼠甲 状腺组织结构正常 甲状腺滤泡上皮细胞排列较为 2 3 整齐疏松 细胞呈扁平状与正常对照组相比 模型 组小鼠甲状腺滤泡部分萎缩 胶质减少 滤泡上皮细 胞增生 排列较为紧密 细胞轻微肿胀呈低柱状 个 别滤泡上皮细胞成簇排列为微滤泡结构 可见部分 图1 小鼠甲状腺组织病理图 小鼠外周血 Treg 和 Tfh 细胞的比例分析 小 鼠外周血 CD4 CD25 Foxp3 Treg 和 CD4 CD CXCR5 Tfh 流式细胞术检测结果如图 2 所示 分析 结果发现 模型组 CD4 CD25 Foxp3 Treg 占 CD4 T 细胞比例 % 低于对照组 差异有统计学意义 P 0 05 但 模 型 组 CD4 CD154 CXCR5 Tfh 占 CD4 T 细胞比例 % 与对照组相比 差异无统计 学意义 P 0 05 见表 2 A 淋巴细胞区域设门 B 模型组小鼠 CD4 T 细胞比例 C 模型组小鼠 Treg 比例 D 模型组小鼠 Tfh 比例 图2 小鼠外周血 Treg 和 Tfh 细胞流式图

4 524 2 Treg Tfh % t P Treg ± ± Tfh ± ± TG EAT AIT TPO TGAb TG TPO TSHR TPOAb CFA 5 4 Tg EAT Tg 5 6 TG BALB /c EAT Treg Tfh CD4 CD25 Treg TG T Foxp3 Treg 7 8 -β 10 CD4 CD25 T TGAb T CD4 CD25 Foxp3 Treg CD4 T 8 EAT CD4 CD25 Foxp3 Treg EAT EAT 2 5 TGAb TPOAb TG TPO CD4 CD25 Foxp3 Treg EAT TGF-β CTLA-4 5 PTg ICR IL-10 /TGF-β Treg CD4 CD25 Foxp3 Treg 13 Treg TGAb TPOAb T Tfh 14 - TGAb 15 B CXCR5 CD154 ICOS Th1 Th2 MHC-Ⅱ Tfh 16 CXCR5 B 8 CD4 T Tfh B 17 CD154 B CD40 TPOAb B 5 PTg 531

5 531 3 HUKUDA S MOCHIZUKI T OGATA M et al. Operations for cervical spondylotic myelopathy. A comparison of the results of anterior and posterior procedures J. Journal of Bone & Joint Sur- gery British Volume layed surgery for acute cervical spinal cord injury J 1 SMITH GW ROBINSON RA. The treatment of certain cervicalspine disorders by anterior removal of the intervertebral disc and interbody fusion J. Journal of Bone & Joint Surgery American Volume A J. J J. 5 MIRZA S ANDERSON P BAILEY J et al. Early versus de-. Clinical Orthopaedics & Related Research J J J Langer 10. J J Tfh CXCR5 CXCL13 5. B B J B 6. β 18 J CD4 CXCR5 CD154 Tfh CD4 T 7. NOD. H - 2h4 J Tfh 8. M EAT Tfh 9. J Treg /Th17 Tfh Th2 Tfh B J CD4 IL-21 B CD25 T 19 J Tfh 12. CD4 CD25 B T J Tfh 13. M TPOAb Tfh 14 XIAO N ETO D ELLY C et al. The E3 ubiquitin ligase ltch is required for the differentiation of follicular helper T Cells J. Nat EAT Immunol T J VINUESA CG TANGYE SG MOSER B et al. Follicular B helper 1. T J EAT Th1 /Th2 J T cells in antibody responses and autoimmunity J. Nat Rev Immunol LINTERMAN MA VINUESA CG. Signals that influence T follicular helper cell differentiation and function J. Semin Immunopathol TANGYE SG MA CS BRINK R et al The good the bad and the ugly-tfh cells in human health and disease J. Nat Rev Immunol M J

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