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1 四 免疫分析 免疫学概述 一 免疫与免疫学 1. 免疫 (Immunity): 机体对 自己 和 异己 识别 应答过程中所产生的生物学效应的总和, 正常情况下是维持机体内环境稳定的一种生理功能 2. 免疫学 (Immunology): 是研究机体免疫系统结构和功能的一门学科来源于抗感染免疫 ( 微生物学的分支 ) 1. 免疫防御 (immune defense): 即抗感染免疫, 主要指机体对外来抗原 ( 如微生物及其毒素 ) 侵袭的免疫保护作用 * 应答过强或持续过长 在清除病原微生物的同时, 导致自身组织损伤和功能异常 ( 超敏反应 ) * 应答过低或缺如 免疫缺陷病 2. 免疫自稳 (immune homeostasis): 免疫系统通过调节网络实现免疫系统功能相对稳定 ( 主要针对衰老 损伤的细胞 ) 自稳机制发生异常 机体对 自己 或 非己 抗原的识别和应答紊乱, 破坏自身耐受 自身免疫病 3. 免疫监视 (immune surveillance): 指免疫系统识别畸变和突变细胞并将其清除的功能免疫监视功能异常 肿瘤发生或持续性感染 1
2 抗原 (Antigen,Ag) 防御病原微生物侵害 清除复制错误 / 突变细胞 细胞癌变持续性感染 1. 抗原的概念抗原 : 是引起机体免疫应答的外因, 也是决定免疫反应特异性的关键 因此, 任何一种物质能刺激机体的免疫系统, 使之产生抗体或致敏的淋巴细胞, 并能与之特异性结合, 即统称抗原 2. 抗原的特性 1) 免疫原性 (immunogenicity) 2) 免疫反应性 (immunoreactivity) 或抗原性 (antigenicity) 具有两种性质的物质为完全抗原 1) 免疫原性 (immunogenicity) 2) 免疫反应性或抗原性 指抗原能刺激机体产生特异性抗体及致敏淋巴细胞的特性 活化的杀伤 T 细胞 活化的 B 细胞 指抗原能与相应免疫应答产物 ( 抗体或致敏淋巴细胞 ) 发生特异性结合的特性 抗体 3) 半抗原与载体 * 半抗原 (Hapten): 仅具有免疫反应性而无免疫原性的物质, 也称不完全抗原, 如小分子化合物 药物等 * 载体 (carrier): 与半抗原结合而赋予其免疫原性的物质, 一般是蛋白质半抗原可被视为完全抗原的表位, 完全抗原可被视为载体上附有若干半抗原 决定抗原免疫原性的因素 1. 抗原的理化性质 1) 分子大小 2) 化学组成 3) 抗原表位的易接近性易接近性是指抗原表位与淋巴细胞表面抗原受体结合地难易程度 4) 物理性状 2
3 抗原的特异性抗原特异性 (antigenic Specificity): 指抗原诱导机体产生特异性免疫应答并与免疫应答产物发生专一结合的特性 1. 决定抗原特异性的分子结构基础 1) 抗原表位的概念表位 (epitope)/ 抗原决定簇 (antigenic determinant): 抗原分子中决定抗原特异性的特殊的基本结构或化学基团, 是 TCR /BCR 及抗体特异性结合的基本单位一般 5~15 氨基酸残基 5~7 多糖残基或核苷酸残基构成一个表位 2) 表位的类型根据结构分为两类 1 线性表位 : 主要由连续性 线性排列短肽构成, 又叫连续性表位 2 构象性表位 : 由序列上不连续排列 空间上形成特定构象的短肽 多糖残基或核苷酸构成 构像表位和线性表位 由识别的淋巴细胞分类 1T 细胞表位 : 为 T 细胞表面 TCR 识别 结合的表位 2B 细胞表位 : 抗原中被 BCR 和抗体分子所识别 结合的表位 共同表位与交叉抗原 1) 共同表位 : 在两种不同的抗原之间可以存在有相同或相似的抗原表位共同抗原是交叉反应的物质基础含共同表位的不同抗原为交叉抗原或共同抗原 3
4 交叉反应 (cross-reaction) 共同表位 2) 交叉反应 : 抗体或致敏淋巴细胞对具有相同或相似表位的不同抗原发生反应 抗原的种类 1. 依据抗原诱生抗体时对 T 细胞的依赖性 1) 胸腺依赖抗原 (TD-Ag) 此类抗原分子量大, 结构复杂 如蛋白质 菌体及鞭毛等 这类抗原除可产生体液抗体外, 也可有细胞免疫应答 2) 胸腺非依赖抗原 (TI-Ag) 此类抗原结构简单, 是由相同单位排列成单链构成, 能直接刺激 B 细胞, 主要是多糖类抗原 2. 依据与机体的亲缘关系 1) 异种抗原 (xenogenic Ag): 来自不同种属的抗原称为异种抗原 如 : 微生物 治疗用的动物免疫血清等马血清抗毒素马血清抗毒素的两重性 : * 特异性抗体 中和毒素 * 异种抗原 可刺激机体产生抗马血清抗体 2) 同种异型抗原 (allogenic Ag): 毒素 类毒素 马血清 在同一种属不同个体之间所存在的抗原人类同种异型 : 红细胞血型抗原 超敏反应 抗体 血型 :ABO 系统 抗原 抗毒素 血型 A B O AB 抗原 A B - A,B 抗体抗 B 抗 A 抗 A, 抗 B - 4
5 3) 自身抗原 (autoantigen) 在正常情况下, 机体对自身组织细胞不会产生 药物 免疫应答, 即自身耐受 ; 但在感染 外伤 服用某些药物等影响下, 使隔离抗原释放, 或改变和修饰了自身组织的抗原结构, 而成为自身抗原 RBC RBC 自身免疫性溶血性贫血 自身抗体 6 7 C C 5b 8 C9 RBC 激活补体 红细胞膜 3. 根据抗原所引起的作用分类 完全抗原 (Complete antigen): 具有免疫原性和免疫反应性 如蛋白质 细菌 病毒 细菌外毒素 动物血清等, 它们都有决定簇和载体 不完全抗原 (Incomplete antigen) 或称半抗原 (Heptene), 只有免疫反应性而缺乏免疫原特性, 一旦与蛋白结合后, 就具有免疫原性 半抗原又可分为复合半抗原和简单半抗原 免疫球蛋白 (Immunoglobulin,Ig) 一 概述免疫球蛋白 (Ig) : 即抗体 (antibody,ab), 是血液和组织液中一类糖蛋白, 由 B 细胞接受抗原刺激后增殖 分化为浆细胞产生, 是体液免疫应答的重要效应分子 Ig 是化学结构上的概念, 而抗体是生物学功能的概念 所有的抗体都是 Ig, 但并非所有的 Ig 都有抗体活性 二 免疫球蛋白的结构 1. 基本结构 ( 以 IgG 为例 ) Ig 的基本结构是 Y 形四肽链, 两条相同的重链 (H 链 ), 两条相同的轻链 (L 链 ), 之间以二硫键相连 5
6 可变区 (V 区 ) N 端 超变区 L 链 二硫键 H 链 恒定区 (C 区 ) C 端 重链与轻链 可变区与恒定区 抗原抗体的反应 免疫球蛋白 抗原抗体反应 (antigen-antibodyreaction) 是指抗原与相应抗体之间所发生的特异性结合反应 可发生于体内 (invivo), 也可发生于体外 (invitro) 体内反应可介导吞噬 溶菌 杀菌 中和毒素等作用 ; 体外反应则根据抗原的物理性状 抗体的类型及参与反应的介质 ( 例如电解质 补体 固相载体等 ) 不同, 可出现凝集反应 沉淀反应 补体参与的反应及中和反应等各种不同的反应类型 因抗体主要存在于血清中, 在抗原或抗体的检测中多采用血清作试验, 所以体外抗原抗体反应亦称为血清反应 ( serologicreaction) 抗原抗体结合力有四种分子间引力参与并促进抗原抗体间的特异性结合 1. 电荷引力 ( 库伦引力或静电引力 ) 这是抗原抗体分子带有相反电荷的氨基和羧基基团之间相互吸引的力 例如, 一方在赖氨酸离解层带阳离子化的氨基残基 (-NH3+), 另一方在天门冬氨酸电离后带有阴离子化的羧基 (-COO-) 时, 即可产生静电引力, 两者相互吸引, 可促进结合 这种引力和两电荷间的距离的平方成反比 两个电荷越接近, 静电引力越强 反之, 这种引力便很微弱 2. 范德华引力 : 这是原子与原子 分子与分子互相接近时发生的一种吸引力, 实际上也是电荷引起的引力 由于抗原与抗体两个不同大分子外层轨道上电子之间相互作用, 使得两者电子云中的偶极摆而产生吸引力, 促使抗原抗体相互结合 这种引力的能量小于静电引力 3. 氢键结合力 氢键是由分子中的氢原子和电负性大的原子如氮 氧等相互吸引而形成的 当具有亲水基团 ( 例如 -OH,-NH2 及 -COOH ) 的抗体与相对应的抗原彼此接近时, 可形成氢键桥梁, 使抗原与抗体相互结合 氢键结合力较范登华引力强, 并更具有特 异性, 因为它需要有供氢体和受氢体才能实现氢键结合 4. 疏水作用 抗原抗体分子侧链上的非极性氨基酸 ( 如亮氨酸 缬氨酸和苯丙氨酸 ) 在水溶液中与水分子间不形成氢键 当抗原表位与抗体结合点靠近时, 相互间正 负极性消失, 由于静电引力形成的亲水层也立即失去, 排斥了两者之间的水分子, 从而促进抗原与抗体间的相互吸引而结合 这种疏水结合对于抗原抗体的结合是很重要的, 提供的作用力最大 6
7 抗原抗体反应的特点 ( 一 ) 特异性 抗原抗体的结合实质上是抗原表位与抗体超变区中抗原结合点之间的结合 由于两者在化学结构和空间构型上呈互补关系, 所以抗原与抗体的结合具有高度的特异性 这种特异性如同钥匙和锁的关系 例如白喉抗毒素只能与相应的外毒素结合, 而不能与破伤风外毒素结合 但较大分子的蛋白质常含有多种抗原表位 如果两种不同的抗原分子上有相同的抗原表位, 或抗原 抗体间构型部分相同, 皆可出现交叉反应 ( 二 ) 按比例 在抗原抗体特异性反应时, 生成结合物的量与反应物的浓度有关 无论在一定量的抗体中加入不同量的抗原或在一定量的抗原中加入不同量的抗体, 均可发现只有在两者分子比例合适时才出生现最强的反应 ( 三 ) 可逆性 抗原抗体反应遵循生物大分子热动力学反应原则, 其反应式为 :[Ab-Ag]/[Ab].[Ag]=k1/k2=k 式中各反应项的单位以 mol 表示,k1 表示反应速度常数,k2 为逆反应速度常数,K 是反应平衡时的速度常数 由上式可知,K 值是反映抗原抗体间结合能力的指示, 所以抗体亲和力通常以 K 值表示 影响抗原抗体反应的因素 抗原抗体复合物解离取决于两方面的因素 : 一是抗体对相应抗原的亲和力 二是环境因素对复合物的影响 ( 一 ) 电解质 抗原与抗体发生特异性结合后, 虽由亲水胶体变为疏水胶体, 若溶液中无电解质参加, 仍不出现可见反应 为了促使沉淀物或凝集物的形成, 常用 0.85% 氯化钠或各种缓冲液作为抗原及抗体的稀释液 由于氯化钠在水溶液中解离成 Na+ 和 C1-, 可分别中和胶体粒子上的电荷, 使胶体粒子的电势下降 当电势降至临界电势 (12~15mV) 以下时, 则能促使抗原抗体复合物从溶液中析出, 形成可见的沉淀物或凝集物 ( 二 ) 酸碱度 抗原抗体反应必须在合适的 ph 环境中进行 蛋白质具有两性电离性质, 因此每种蛋白质都有固定的等电点 抗原抗体反应一般在 ph 为 6~8 进行 PH 过高或过低都将影响抗原与抗体的理化性质, 例如 ph 达到或接近抗原的等电点时, 即使无相应抗体存在, 也会引起颗粒性抗原非特异性的凝集, 造成假阳性反应 ( 三 ) 温度 在一定范围内, 温度升高可加速分子运动, 抗原与抗体碰撞机会增多, 使反应加速 但若温度高于 56 时, 可导致已结合的抗原抗体再解离, 甚至变性或破坏 ; 在 40 时, 结合速度慢, 但结合牢固, 更易于观察 常用的抗原抗体反应温度为 37 每种试验都有其独特的最适反应温度, 例如冷凝集素在 4 左右与红细胞结合最好,20 以上反而解离 此外, 适当振荡也可促进抗原抗体分子的接触, 加速反应 7
8 抗原抗体反应的类型 根据抗原和抗体性质的不同和反应条件的差别, 抗原抗体反应表现为不同的形式 颗粒性抗原表现为凝集反应 ; 可溶性抗原表现为沉淀反应 ; 补体参与下细菌抗原表现为溶菌反应, 红细胞抗原表现为溶血反应 ; 毒素抗原表现为中和反应等 利用这些类型的抗原抗体反应建立了各种免疫学技术, 在医学检验中广泛用于抗原和抗体的检测 为了提高反应的敏感性和特异性, 便发展了一些新的试验类型, 如各种标记的抗原抗体反应等 免疫分析 免疫分析方法内容 : 免疫分析方法是利用抗原与抗体特异性反应这一特性对抗原和抗体进行量和质的测定分析 免疫分析方法特点 : 1. 特异 2. 灵敏 3. 快速 免疫分析方法应用领域 : 1. 医学 2. 食品 3. 生命科学研究 常见的免疫分析方法 1. 免疫凝集 (agglutination) 2. 免疫沉淀 (preciptation ) 环状沉淀实验 (ring preciptant test) 单向免疫扩散实验 (radial immuno diffusion) 双向免疫扩散实验 (double immuno diffusion) 免疫电泳 (immuno-electrophoresis) 火箭电泳 (rocket- electrophoresis) 3. 酶联免疫分析技术 (enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA) 直接 ELISA 间接 ELISA 夹心 ELISA 4. 免疫印迹 5. 免疫亲和层析 1. 免疫凝集 (agglutination) 定义 : 细菌和红细胞等颗粒性抗原, 当与相应抗体 特异结合后, 在适量电解质存在的条件下, 可逐渐聚集, 出现肉眼可见的凝集现象称为凝集反应 反应中的抗原称为凝集原 (agglutinogen) 抗体称为凝集素 (agglutinin) 分为直接凝集反应 (direct agglutination) 间接凝集反应 (indirect agglutination) 直接凝集反应原理 细菌 螺旋体和红细胞等颗粒抗原, 在适当电解质参与下可直接与相应抗体结合出现凝集, 称为直接凝集反应 (direct agglutination) (1) 玻片凝集试验 玻片凝集试验为定性试验方法, 一般用已知抗体作为诊断血清 与受检颗粒抗原如菌液或红细胞悬液各加一滴在玻片上, 混匀, 数分钟后即可用肉眼观察凝集结果, 出现颗粒凝集的为阳性反应 此法简便 快速, 适用于从病人标本中分离得到的菌种的诊断或分型 玻片法还用于红细胞 ABO 血型的鉴定 常用的凝集试验有 : (1) 玻片法 (2) 试管法 8
9 (2) 试管凝集试验 试管凝集试验为半定量试验方法, 在微生物学检验中常用已知细菌作为抗原液与一系列稀释的受检血清混合, 保温后观察每管内抗原凝集程度, 通常以产生明显凝集现象的最高稀释度作为血清中抗体的效价, 亦称为滴度 在试验中, 由于电解质浓度和 ph 不适当等原因, 可引起抗原的非特异性凝集, 出现假阳性反应, 因此必须设不加抗体的稀释液作对照组 临床上常用的直接试管凝集试验为肥达试验 (Widal test) 和外斐试验 (Weil-Felix test) 在输血时也常用于受体和供体两者的红细胞和血清的交互配血试验 间接接凝集反应原理 将可溶性抗原 ( 或抗体 ) 先吸附于适当大小的颗粒性载体的表面, 然后与相应抗体 ( 或抗原 ) 作用, 在适宜的电解质存在的条件下, 出现特异性凝集现象, 称间接凝集反应 (indirect agglutination) 或被动凝集反应 (passive agglutination) 这种反应适用于各种抗体和可溶性抗原的检测, 其敏感度高于沉淀反应, 因此被广泛应用于临床检验 应 用 血凝试验 (hemagglutination test) 是红细胞凝集试验的简称 间接血凝试验是以红细胞作为载体的间接凝集试验, 在临床检验中应用广泛 胶乳凝集试验也是一种间接凝集试验, 所用的载体颗粒为聚苯乙烯胶乳, 是一种直径约为 0.8μm 大小的圆形颗粒, 带有负电荷, 可物理性吸附蛋白分子, 但这种结合牢固性差 2. 免疫沉淀 沉淀反应是指可溶性抗原 ( 细菌培养滤液 细胞或组织的浸出液 血清蛋白等 ) 与相应抗体在液相中特异结合后, 形成的免疫复合物受电解质影响出现的沉淀现象 反应中的抗原称为沉淀原 (precipitinogen), 可以是类脂 多糖或蛋白质等 ; 反应中的抗体称为沉淀素 (precipitin) 环状沉淀试验 (ring precipitation test) 免疫比浊法 (immunoturbidimetry) Ascoli 于 1902 年建立 用于检查兽类内脏 毛皮浸液等标本中的炭疽杆菌抗原 优点 : 校正曲线稳定, 简便快速, 易于自动化, 无放射性核素污染 缺点 : 特异性 灵敏度稍差 9
10 凝胶扩散实验 原理 : 利用可溶性抗原抗体在半固体琼脂内扩散, 若抗原抗体对应, 且二者比例合适, 在其扩散的某一部分就会出现白色的沉淀 ( 圈 ) 每对抗原抗体可形成一条沉淀线 有几对抗原抗体, 就可分别形成几条沉淀线 琼脂扩散可分为两种类型 : 单向扩散 (radial immuno diffusion) 是一种定量试验, 可用于抗原和抗体相对浓度的测定 双向扩散 (double immuno diffusion) 多用于定性试验, 由于方法简便易行, 常用于测定分析和鉴定复杂的抗原成分的特异性, 纯度和相互关系 单向免疫扩散实验 1 将适当浓度抗体混合到琼脂 ( 0.8%-1%), 凝固 ; 2 打成小孔, 加入抗原 ; 3 扩散以后形成沉淀环 ; 4 沉淀环面积与抗原浓度成正相关 5 比较面积 ; 可以确定被测抗原浓度 6 缺点 : 使用抗体多, 抗原浓度低于 5 10µg/mL 不适用 免疫电泳 (immuno-electrophoresis) 原理 : 在一定的 ph, 混合的蛋白质在电场中因迁移率不同而被分离开来, 使混合的抗原组分得以分离, 然后通过扩散与特异性抗体形成相应的沉淀线 特点 : 具有较高的灵敏度 常见的免疫电泳有 : (1) 血清免疫电泳 (2) 火箭电泳 血清免疫电泳 1 用于检测病人血清与正常人血清的差异 ; 2 将病人血清与正常人血清电泳分离 3 在槽内加入抗血清 4 进行双向扩散 5 分析血清蛋白的缺少和增加 火箭电泳 1 制备含有抗体的凝胶, 打孔 2 加入标准和待测抗原 免疫共沉淀 (Immunoprecipitation) 免疫共沉淀是以抗体和抗原之间的专一性作用为基础的用于研究蛋白质相互作用的经典方法 是确定两种蛋白质在完整细胞内生理性相互作用的有效方法 3 电泳 4 沉淀线高度与抗原浓度成正比 5 待测抗原的定量 10
11 结果分析 应用范围 1. 寻找新的相互作用蛋白 2. 验证目的蛋白和待测蛋白是否有相互作用 免疫共沉淀的局限性 Nat Immunol Apr;9(4): (1) 难以检测低亲和力和短暂的相互作用 (2) 不能够确切分辨第三种蛋白的桥联作用 (3) 灵敏度不如亲和色谱高 (4) 需对未知蛋白的相关信息有一定了解 染色质免疫共沉淀 (chromatin immunoprecipitation assay, CHIP) CHIP 是目前唯一研究体内 DNA 与蛋白质相互作用的方法 它的基本原理是在活细胞状态下固定蛋白质 -DNA 复合物, 并将其随机切断为一定长度范围内的染色质小片段, 然后通过免疫学方法沉淀此复合体, 特异性地富集目的蛋白结合的 DNA 片段, 通过对目的片断的纯化与检测, 从而获得蛋白质与 DNA 相互作用的信息 结果分析 应用范围 1. 研究蛋白与 DNA 的动态作用 2. 研究组蛋白的各种共价修饰与基因表达之间的关系 Science 297, 1833 (2002) 11
12 免疫印迹 (Immunoblotting) 蛋白质印迹 (Western blotting) 根据抗原抗体特异性结合, 检测样品中某种蛋白的方法 原理 : 将混合抗原样品在凝胶板上进行单向或双向电泳分离, 然后取固定化基质膜与凝胶相贴 在印迹纸的自然吸附力 电场力或其它外力作用下, 使凝胶中的单一抗原组份转移到印迹纸上, 并且固定化 最后应用免疫覆盖液技术如免疫同位素探针或免疫酶探针等, 对抗原固定化基质膜进行检测和分析 Western Blot 基本原理 对蛋白质样品进行分离生物学活性不变 多肽类型 转移到固相载体 保持 吸附蛋白质 转移后的 NC 膜就称为一个印迹 (blot) 抗原抗体复合物 加入一抗封闭剩余疏水结合点 蛋白溶液 清洗 未结合的一抗 靶蛋白质与一抗结合 处理过的印迹 标记的二抗 抗体复合物 待研究的蛋白质的位置 指示一抗的位置 直接法 间接法 二抗与底物反应显色 辣根过氧化物酶法 (HRP) 碱性磷酸酶法 (AP) 化学发光显色法 (HRP) Western Blot 应用 目的蛋白的表达特性分析 目的蛋白与其它蛋白的互作 目的蛋白的组织定位 目的蛋白的表达量分析 12
13 Western Blot 结果分析 目的蛋白的灰度值除以内参的灰度值以校正误差, 所得结果代表某样品的目的蛋白相对含量 标记免疫分析技术 标记免疫技术 = 免疫技术 + 标记技术 Western Blot 结果分析软件 Gel-Pro Analyzer 4 绿色版 ( 附动画演示教程 ) 抗原抗体反应 特异性 示踪物标记 灵敏性 标记免疫技术的主要特点 : 高特异性 高灵敏性 一 放射免疫分析 ( radioimmunoassay,ria) 标记免疫技术 免疫组化技术 免疫测定技术 示踪物及标记技术 放射免疫技术荧光免疫技术酶免疫技术化学发光技术金免疫技术 1. 历史 : 1950, 美国免疫学家.Pressman Eisen, 放射性 I 标记抗原, 研究抗原 - 抗体反应 , Solomon Berson, Rosalyn Yalow 美国, 放射性 I 标记蛋白, 作为代谢示踪, 发现非标记抗原抑制标记抗原与抗体结合 创建放射免疫分析法 (Radioimmunoassay)RIA 测定胰岛素. 后又发展标记抗体 RIA, 又称之为免疫放射分析 (Immunoradiometric assay)irma 1977.Yalow 获诺贝尔生理医学奖 放射免疫技术 - 原理及分类 放射免疫分析 (radioimmunoassay,ria) 以标记抗原与反应系统中未标记抗原竞争结合特异性抗体来测定待检样品中抗原量 免疫放射分析 (immunoradiometric assay,irma) 以过量标记抗体与抗原非竞争结合, 采用固相免疫吸附载体分离游离和结合标记抗体 其他 : 放射受体分析 (radioreceptor assay,rra) 放射配体结合分析 (radioligand binding assay,rba) J. Clin. Invest. 35 (1956):
14 放射免疫技术 - 常用的放射性核素 放射免疫分析 - 基本原理 常用标记核素 125 I 3 H 射线 γ β 理化性 活泼 差 核素丰度 >90% - 半衰期 60.2d 12.3y 标记方法 简单 复杂 标记设备 低廉 昂贵 测量条件 简单 复杂 竞争性结合反应的经典标记抗原 (Ag*) 和非标记抗原 (Ag) 与限量抗体 (Ab) 竞争性结合 Ag* 和 Ag 具有等同的与 Ab 结合能力 Ab 限量,Ag* 定量, Ag* 和 Ag 的量大于 Ab 结合位点, 二者通过竞争方式与 Ab 结合 ; 随着 Ag 增加, Ag* 与 Ab 结合形成 Ag*Ab 复合物的放射量降低, 二者变化成函数关系 以未结合的 Ag* 为 F,Ag*Ab 复合物为 B, 则 B/F 或 B/(B+F) 与 Ag 的量变存在着函数关系 - 剂量反应曲线 注 :T 即是 B 与 F 的总和 放射免疫分析 - 实验方法及测定 抗原抗体反应 均相免疫分析 结合产物 B(Ag*Ab 或 AgAb*) 游离标记抗原或抗体 F(Ag* 或 Ab* Ag* Ag Ab 反应条件体积温度时间 ph 平衡非平衡 一步法二步法 不需分离 B.F 可直接测定 B, F 变化. 必要条件 : 结合前后必须标记物检测性能有变化 ( 标准 Ag/ 样品 Ag) 14
15 非均相免疫分析 : 需分离 B 与 F 测量 数据处理 二抗体沉淀法 PEG 沉淀法 PR 试剂法活性炭吸附法 分离彻底, 迅速 分离试剂和过程不影响反应平衡 效果不受反应介质影响 操作应简单 重复性好 经济 晶体闪烁计数器包括了 NaI 闪烁晶体 光电倍增管以及计数器 测量的放射性信号是仪器输出的电脉冲数 : 每分钟计数 (cpm) 参数 cpm 计算 B/T (%) 拟合 F/T (%) B/F (%) B/B 0 (%) 注 :T 即是 B 与 F 的总和 实例 :RIA 测定胰岛素 免疫放射分析 - 基本原理 第一步 : 製備血漿 ( 其 insulin 之濃度待測 ) 或已知濃度之 insulin 溶液 ( 作為對照之用 ) 第二步 : 加入抗體 (anti-insulin), 同時也加入已知量的標示 insulin, 混合均勻 第三步 : 靜置在 4,4 天 第四步 : 加入滑石粉 (talcum powder) 或活性炭以吸著自由態之 insulin ( 包括標示的 insulin) 第五步 : 遠心沉澱後, 自由態之 insulin 隨著滑石粉或活性炭沉到管底, insulin 與抗體之複合物 (complex) 則懸浮在上層液 第六步 : 取出上層液, 測量其放射性活性, 算出 insulin 之量 以过量 125 I 标记抗体与待测抗原进行非竞争性免疫结合反应, 用固相免疫吸附剂对 B 或 F 进行分离, 其灵敏度和可测范围均优于 RIA 操作也较 RIA 简单 单位点 IRMA 双位点 IRMA 先用过量标记抗体与待测抗原进行反应, 形成抗原抗体复合物 ; 用固相抗原结合未结合标记抗体并将其分离, 测定上清液的放射量 先用固相抗体与抗原结合, 再用过量的标记抗体与抗原的另一决定簇结合, 形成固相抗体 - 抗原 - 标记抗体复合物, 洗弃剩余标记抗体, 测固相上放射性 15
16 IRMA 与 RIA 比较 RIA IRMA 标记物 抗原 抗体 放射免疫分析技术的应用 原理 竞争性结合 非竞争结合 反应体系 Ag* Ag Ab 固相 Ab Ab* Ag 反应动力学 慢 快 灵敏度 相对低 高 检测范围 窄 宽 1~2 数量级 特异性 差 (PcAb) 优 (McAb) 放射免疫分析技术的灵敏度高 特异性强 精密度好, 常用于各种激素 微量蛋白质 肿瘤标志物和药物等微量物质的测定 但由于放射污染和危害, 常用核素半衰期短, 试剂盒稳定期不长等诸多不足, RIA 将逐渐被取代 标准曲线 结合率与测值成反比结合率与测值成正比 待测抗原大小分子二抗原决定簇 二 酶免疫分析法 (enzyme immunoassay EIA) 酶标半抗原抗体 分类 均相酶免疫测定 (EMIT), 非均相酶免疫测定 (ELISA) 均相酶免疫测定 酶扩大免疫测定技术 (enzyme-multiplied immunoassay technique EMIT) ( 小抗原 ) E + > = E > x + > = x > 待测半抗原 ( 小抗原 ) 因抗原较小, 酶与抗体接触紧密, 抑制酶活性, 无需相分离, 测定酶活性检测 特点 : 竞争性 均相, 结合前后酶受抑制 主要测抗原的方法, 抗原要小, 小抗原或半抗原 酶联免疫吸附实验 (enzyme-linked immunosorbent assay,elisa) 原理 : 先将抗体或抗原包被到某种固相载体表面, 并保持其免疫活性 测定时, 将待检样本和酶标抗原或抗体按不同步骤与固相载体表面吸附的抗体或抗原发生反应, 用洗涤的方法分离抗原抗体复合物和游离的未结合成分, 最后加入酶反应底物显色, 根据底物被酶催化产生的颜色及其吸光度 (A) 值的大小进行定性或定量分析的方法 16
17 基本过程 ELISA 的试剂 ELISA 中有三个必要的试剂 : 免疫吸附剂 结合物和酶的底物 (1) 已包被抗原或抗体的固相载体 ( 免疫吸附剂 ); (2) 酶标记的抗原或抗体 ( 结合物 ); (3) 酶的底物 ; (4) 阴性对照品和阳性对照品, 参考标准品 ; (5) 结合物及标本的稀释液 ; (6) 洗涤液 ; (7) 酶反应终止液 ELISA 的分类 : 直接法 (direct ELISA) 间接法 (indirect ELISA) 夹心法 (sandwich ELISA) 竞争法 (competitive-elisa) 间接 ELISA 此法是测定抗体最常用的方法 将已知抗原吸附于固相载体, 加入待检标本 ( 含相应抗体 ) 与之结合 洗涤后, 加入酶标抗球蛋白抗体 ( 酶标抗体 ) 和底物进行测定 1 包被固相载体 : 用已知抗原包被固相载体 ; 2 加待检标本 : 经过温育 (37 2h), 使相应抗体与固相抗原结合 洗涤, 除去无关的物质 ; 3 加酶标抗抗体 : 再次温育 (37 2h) 与固相载体上抗原抗体复合物结合 ; 洗涤, 除去未结合的酶标抗抗体 ; 4 加底物显色 : 终止反应后, 目测定性或用酶标仪测光密度值定量测定 17
18 双抗体夹心法 此法常用于测定抗原. 将已知抗体吸附于固相载体, 加入待检标本 ( 含相应抗原 ) 与之结合 温育后洗涤, 加入酶标抗体和底物进行测定 操作步骤 1 用已知特异性抗体包被固相载体 ; 2 加待检标本, 经过温育使相应抗原与固相抗体结合 ; 洗涤, 除去无关的物质 ; 3 加酶标特异性抗体, 与已结合在固相抗体上的抗原反应 ; 洗涤, 除去未结合的酶标抗体 ; 4 加底物显色, 终止反应后, 目测定性或用酶标仪测量光密度值进行定量测定 三 发光免疫分析法 ( luminescence immunoassay LIA) 光照发光 发光 : 是指分子或原子中的电子吸收能量后, 由基态 ( 较低能级 ) 跃迁到激发态 ( 较高能级 ), 然后再返回到基态, 并释放光子的过程 光照发光 (photoluminescence): 发光剂经短波长入射光照射后进入激发态, 当回复至基态时发出较长波长的可见光 根据形成激发态分子的能量来源不同可分为 : 光照发光 生物发光 化学发光等 生物发光 生物发光 (bioluminescence) : 是反应底物在荧光素酶的催化下利用 ATP 产能, 生成激发态的氧化荧光素, 后者在恢复到基态时多余的能量以光子形式放出 典型例子为萤火虫发光 化学发光 化学发光 (chemiluminescence): 在常温下由化学反应产生的光的发射 化学发光是一个多步骤的过程, 其机制为某些化合物 ( 发光剂或发光底物 ) 可以利用一个化学反应产生的能量使其产物分子或反应中间态分子上升至电子激态 当此产物分子或中间态分子衰退至基态时, 以发射光子的形式释放能量 ( 即发光 ) 18
19 ( 一 ) 直接化学发光剂 1. 吖啶酯 在发光免疫分析过程中不需酶的催化作用, 直接参与发光反应, 它们在化学结构上有产生发光的特有基团, 可直接标记抗原或抗体 在碱性条件下被 H 2 O 2 氧化时, 发出波长为 470nm 的光, 具有很高的发光效率, 其激发态产物 N- 甲基吖啶酮是该发光反应体系的发光体 2. 三联吡啶钌 三联吡啶钌 [RU(bpy)3]2+ 是电化学发光剂, 它和电子供体三丙胺 (TPA) 在阳电极表面可同时失去一个电子而发生氧化反应 ( 二 ) 酶促反应发光剂利用标记酶的催化作用, 使发光剂 ( 底物 ) 发光 1. 鲁米诺及其衍生物 Luminol 标记物 + H 2 O 2 + NaClO 混合后数秒测强度 三联吡啶钌 [Ru(bpy) 3 +2 ] + N 羟基琥珀酰胺酯 (NHS) + 三丙胺 TPA 620 nm 2. AMPPD 3-(2 - 螺旋金刚烷 )-4- 甲氧基 -4-(3 - 磷酰氧基 ) 苯 -1,2- 二氧杂环丁烷 化学发光剂标记技术 1. 碳二亚胺 (EDC) 缩合法 19
20 2. 过碘酸钠氧化法 3. 重氮盐偶联法 只适用于含糖量较高的酶 过碘酸钠将多糖氧化为醛基, 醛基与抗体分子上的氨基形成 Schiff 碱而结合 后者可进一步用 NaBH4( 或乙醇胺 ) 还原生成稳定的酶标记抗体 在酸性条件下, 可在实验室内临时制成一种重氮盐 ( 重氮化反应 ), 这种重氮盐在与一种芳香胺或苯酚化合时, 生成偶氮化合物, 称为偶联反应 4. N- 羟基琥珀酰亚胺 (NHS) 活化法 化学发光免疫分析系统 类型 : 第一种以发光剂作为抗体或抗原的标记物, 直接通过发光反应检测标本中抗原或抗体的含量 第二种是以发光剂作为酶免疫测定的底物, 通过发光反应增强测定的敏感性 夹心法为例 直接化学发光免疫分析 化学发光酶免疫分析 化学发光酶免疫分析 (chemiluminescence enzyme immunoassay,cleia) 是用参与催化某一化学发光反应的酶如辣根过氧化物酶 (HRP) 或碱性磷酸酶 (ALP) 来标记抗原或抗体, 在与待测标本中相应的抗原 ( 抗体 ) 发生免疫反应后, 形成固相包被抗体 - 待测抗原 - 酶标记抗体复合物, 经洗涤后, 加入底物 ( 发光剂 ), 酶催化和分解底物发光 20
21 1 HRP 标记的 CLEIA 该分析系统采用辣根过氧化物酶 (HRP) 标记抗体 ( 或抗原 ), 在与反应体系中的待测标本和固相载体发生免疫反应后, 形成固相包被抗体 - 待测抗原 - 酶 (HRP) 标记抗体复合物, 这时加入鲁米诺发光剂 H 2 O 2 和化学发光增强剂使产生化学发光 增强剂 四苯硼钠对碘苯酚 2- 碘苯酚 2 ALP 标记的 CLEIA 该分析系统以碱性磷酸酶标记抗体 ( 或抗原 ), 在与反应体系中的待测标本和固相载体发生免疫反应后, 形成固相包被抗体 - 待测抗原 - 酶标记抗体复合物, 这时加入 AMPPD 发光剂, 碱性磷酸酶使 AMPPD 脱去磷酸根基团而发光 3 电化学发光免疫分析电化学发光原理 : 电化学发光免疫分析 (electrochemiluminescence immunoassay,eclia) 是以电化学发光剂三联吡啶钌标记抗体 ( 抗原 ), 以三丙胺 (TPA) 为电子供体, 在电场中因电子转移而发生特异性化学发光反应, 它包括电化学和化学发光两个过程 21
22 磁性微粒子固相载体 链霉亲和素与生物素 链霉亲和素 (streptoavidin,sa) 和生物素 (biotin,b) 是具有很强的非共价相互作用的一对化合物 带有磁性的聚苯乙烯微粒 直径最小 2.8μm 表面积大而均一, 吸附率高 在液体中呈均匀悬浮状态 参与反应类似液相, 速度快 游离和结合标记物分离, 只需磁铁吸引, 方便迅速, 提高反应灵敏度 一分子 SA 可与 4 分子 B 相结合 在 Elecsys 的试剂中,SA 通过特殊的蛋白结合物均匀牢固地包被在磁性微粒上, 形成通用的能与 B 结合的固相载体 另一试剂为与经活化的 B 衍生物化合的抗原或抗体 两种试剂混合时,B 化合的抗原或抗体即结合在磁性微粒上 链霉亲和素 - 生物素包被技术 电化学发光免疫测定示意图 电化学发光免疫分析的应用与发展 应用实例 - 禽流感病毒检测 - 国家标准 1. 免疫标记技术日益融合 (1) 蛋白质 激素和肿瘤检测 (2) 病毒 毒物检测 (3) 其它方面应用 2. 与生物化学固定化技术日益融合 3. 与微细加工技术日益融合 NASBA+ECL 22
23 四 荧光免疫分析法 ( fluoroimmunoassay FIA) 荧光免疫技术是在免疫学 生物化学和显微镜技术的基础上建立起来的一项技术 免疫荧光技术包括荧光抗体技术和荧光抗原技术, 因为荧光色素不但能与抗体球蛋白结合, 用于检测或定位各种抗原, 也可以与其他蛋白质结合, 用于检测或定位抗体, 但是在实际工作中荧光抗原技术很少应用, 所以人们习惯称为荧光抗体技术, 或称为免疫荧光技术 基本原理 免疫荧光技术是将抗原抗体反应的特异性和敏感性与显微示踪的精确性相结合 以荧光素作为标记物, 与已知的抗体 ( 或抗原 ) 结合 但不影响其免疫学特性 然后将荧光素标记的抗体作为标准试剂, 用于检测和鉴定未知的抗原 在荧光显微镜下, 可以直接观察呈现特异荧光的抗原抗体复合物及其存在部位 在实际工作中, 由于用荧光素标记抗体检查抗原的方法较为常用, 所以一般通称为荧光抗体技术 荧光色素的标记 适于标记蛋白的荧光色素主要有 : 异硫氰酸荧光素 (fluorescein isothiocyanate, FITC) 四乙基罗丹明 (rho-damine B200,RB200) 四甲基异硫氰酸罗丹明 (tetramethyl rhodamine isotheynate,tmritc) 藻红蛋白 (R-RE) FITC 标记 FITC 为黄色结晶形粉末, 分子量为 389.4, 易溶于水和酒精等溶剂中, 溶解后呈黄绿色荧光, 最大吸收光谱为 nm,FITC 的溶液不稳定, 易因水解或迭聚而变质, 故需在配好后 2h 内应用 FITC 含有异硫氰基, 在碱性条件下能与 IgG 的自由氨基 ( 主要是赖氨酸的 ε- 氨基 ) 结合, 形成荧光抗体结合物 一个分子的 IgG 有 86 个赖氨酸残基, 但一般最多只能标记 个 实际上目前应用最多的只有异硫氰酸荧光素一种 其它荧光标记物质 1) 镧系螯合物铕 铽 钐 铈等 2) 酶作用后产生荧光的物质 ( 荧光底物 ) 4 甲基伞酮 -β-d 半乳糖苷 异硫氰酸荧光素 (FITC) 荧光免疫分析常用仪器设备 荧光显微镜荧光分光光度计流式细胞仪 23
24 荧光抗体的标记 ( 制备 ) 略公司承担 FIA 原理 荧光抗体的保存 以 0~4 或 -20 低温保存, 防止抗体活性降低和蛋白变性 最好加入浓度为 1:5000~10000 的硫柳汞或者 1:1000~5000 的叠氮钠防腐, 小量分装如 0.1~1ml, 真空干燥后更易长期保存 时间分辨免疫荧光技术 (time resolved fluorescence immunoassay,trfia ) 用三价稀土离子及其螯合物作为示踪物, 代替荧光物质 同位素 酶和化学发光物质, 标记抗原 抗体 激素 核酸探针等物质 ; 当免疫反应发生后, 根据稀土离子螯合物的荧光光谱的特点 ( 特异性强 荧光光谱的 Stokes 位移 寿命长 ), 用时间分辨荧光分析仪, 测定免疫反应最后产物的荧光强度 根据荧光强度和相对荧光强度比值, 判断反应体系中分析物的浓度, 达到定量分析的目的 具有独特荧光特性的稀土金属 --- 镧系元素 镧系元素共有 15 种, 应用在时间分辨荧光免疫技术中有四种 : 铕 (Eu) 钐(Sm) 镝(Dy) 锝(Te) 镧系元素荧光特点 : 荧光寿命极长 镧系元素螯合物 (60~900 us) < 铕 :714us> 普通荧光免疫中荧光团 :1~100us 样本中蛋白质荧光 :1~10us, 易猝灭 Stokes 位移大 ( 大约 290nm) 铕 : 发射光 613nm 激发光 340nm, 荧光素的 Stokes 位移为 28nm 荧光特异性强 ( 发射光谱带很窄 :615± 5nm) 时间分辨荧光免疫原理图 利用镧系元素荧光物理特性, 荧光激发后在固定时间段检测特异性荧光而在此时间之前, 非特异性荧光已完全衰减为 0 24
25 利用镧系元素光谱特点, 将发射荧光与激发荧光分辨开来 时间分辨荧光免疫 --- 突出优点 发射光谱与激发光谱间存在的巨大 Stokes 位移 可以通过干涉滤光片将发射光谱与激发光谱完全 零本底 灵敏度高 线性范围宽 试剂有效期长 标准曲线稳定性好 易于自动化 分离 金标记免疫分析技术 免疫胶体金技术是以胶体金作为示踪标志物应用于抗原抗体的一种新型的免疫标记技术 胶体金是由氯金酸 (HAuCl4) 在还原剂如白磷 抗坏血酸 枸橼酸钠 ( 柠檬酸三钠 ) 鞣酸等作用下, 聚合成为特定大小的金颗粒, 并由于静电作用成为 不同粒径胶体金的制备和特性 1% 柠檬酸 胶体金特性 胶体金粒径 (nm) 三钠加入量 (ml)* 呈色 λmax 紫色 518nm 红色 522nm 橙红 525nm 橙色 535nm 一种稳定的胶体状态, 称为胶体金 (colloidal gold) 人民卫生出版社 金免疫层析原理 将已知的特异性抗原或抗体固定于硝酸纤维素膜上某一区带作为检测带, 在样品区滴加样品后, 借助毛细作用, 样品泳动至玻璃纤维膜, 金标复合物溶解, 并与样品进行抗原抗体反应, 形成复合物 继续泳动至检测区, 带有金标记的复合物被检测区抗原或抗体捕获, 呈现红色条带 如样品中没有待测抗原或抗体, 则不发生结合, 即不显色 在硝酸纤维素膜检测区附近一般再固定上针对金标结合物相应的抗原或抗体作为质控带, 作为阳性对照 整个过程一般在 15 分钟内完成, 操作简单 快速, 且不需任何仪器 试验方法 25
26 试纸条组成结构 免疫层析法检测原理介绍 ( 双抗体夹心 ) 控制线 (C 线 ) ( 以 HCG 检测为例 ) 胶体金垫 吸水滤纸 样品垫 PVC 底板 层析方向 测试线 (T 线 ) NC 膜 ( 硝酸纤维素膜 ) 有 4 个组分 :⑴ 吸水纸 ( 样品垫 ) ⑵ 玻璃纤维膜 ( 胶体金垫 ) 膜上吸附着干燥的金标抗体 ( 流动带 ) ⑶ 硝酸纤维素膜, 膜上包被着抗原或抗体条带和能与标记物直接起反应的质控物条带 ( 检测带 ) ⑷ 吸水纸 以上各组份首尾互相衔接 HCG-β 亚基抗体 Y2, 羊抗鼠二抗固定于硝酸纤维素膜上, 金标 HCG-α 亚基单抗 Y1 固定于玻璃纤维素膜上 放射免疫 ( 精度 :10-12 mol/l ) 酶联免疫 ( 精度 :10-9 mol/l ) 胶体金标记 ( 金标 :10-15 mol/l ) 化学发光 ( 精度 :10-15 mol/l ) 电化学发光 ( 精度 :10-17 mol/l ) 时间分辨荧光 ( 精度 :10-18 mol/l ) 放射性免疫分析法 (RIA) 应用 放免自 60 年代问世以来对临床诊断起了革命性的贡献, 是一项较为成熟的诊断技术 夹心法 竞争法的标记原理为以后的检测技术的发展奠定了基础 缺点 放射性 ( 125 I), 对环境的污染及对身体的危害, 该方法已经为重视环保的国家逐步取消 ( 如整个欧洲仅尚存几个放免试验室 ) 125 I 的半衰期短而导致其试剂有效期短 标记物 125 I 的稳定性差, 导致试剂盒批间 批内的变异较大 ; 标准曲线有效期短, 必须每次定标, 造成浪费 操作繁琐, 出报告时间长 无法保存备用 酶免疫分析法 (ELISA ) 应用 酶免的最大优势在于避免了对环境和人体危害 试剂有效期较长 衍生技术 : 荧光酶免疫分析 增强化学发光酶免疫技术 曾经一度被认为是取代放免的检测手段 缺点 灵敏度 重复性不及放免, 易造成漏检和假阳性 因酶的纯度和反应过程容易受环境因素影响, 导致稳定性不好 化学发光免疫分析法 (CLIA) 应用 单个样本检测速度快, 适合做急诊 灵敏度较高 自动化程度高 分类 : 以丫啶酯直接标记 ACS180 系统 以 HRP 标记, 鲁米诺为发光底物 Amerlite 系统 以 AP 为标记物,AMPPD 为发光底物 Immulite 系统 缺点 发光过程短, 样品不能重复检测 本底较高, 易受环境物质干扰 仪器故障率较高 试剂稳定性较差, 需多次定标 检测精度不高, 在超微量分析及早期诊断方面能力不足 非开放性试剂 ; 试剂价格高 26
27 电化学发光免疫分析法 (ECL) 应用 缺点 80 年代末期问世的新型化学发光免疫分析方法 基本原理 : 根据三联吡啶钌 [Ru(bpy)3] 和三丙胺在电场触发下产生发光的化学发光反应 本底较小 灵敏度较高 线性范围较宽 非开放性试剂系统 不能做科研 试剂价格过高 27
材料 方法
生物技术通报 姜燕 采用鼠抗人血红蛋白 单克隆抗体 和胶体金标记鼠抗人血红蛋白 单克隆抗体 及对照抗体羊抗鼠 利用双抗体免疫夹心反应原理特异性地结合人血红蛋白抗原 在 内可得到胶体金显色结果的原理研制便潜血单克 隆一步法胶体金检测试卡 用于诊断因各种原因引起的消化道出血疾病 应用杂交瘤技术制备两株鼠抗人血红蛋白 抗 体 方法检测 效价 免疫胶体金技术制备胶体金检测试卡 法检测 效价的结果显示 鼠抗人
第2章 抗原抗体反应.doc
安徽理工大学医学院 School of Medicine 教案首页 第次课授课时间年月日教案完成时间 : 年月日 课程名称免疫学检验年级专业 层次医学检验 ( 本科 ) 教师许礼发 专业技术 职 务 授课方式 ( 大 小 ) 大学时 3 授课题目 ( 章 节 ) 第二章抗原抗体反应 基本教材或主要参考书王兰兰主编 临床免疫学与免疫学检验 ( 第三版 ) 教学目的和要求 : 了解 : 抗原抗体反应的基本类型
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Really Good Antibodies Bethyl 二抗产品册 超过 670 种抗小鼠 兔子 山羊和大鼠的二抗 bethyl.com Bethyl 公司 Bethyl Laboratories, Inc. ) 成立于1972年 一直秉承改善生活的理念致力于科学研究的理念 提供高质量的抗体产品 和抗体定制服务 Bethyl所销售的每一个抗体都是在德克萨斯州的蒙哥马利的唯一工厂生产 并且都经过Bethyl
第 期 甘金华等 强力霉素人工抗原的合成与抗体制备 材料与方法 试剂及溶液
第 卷第 期 年 月 食品与生物技术学报 强力霉素人工抗原的合成与抗体制备 甘金华 邓薇 李进平 艾晓辉 中国水产科学研究院长江水产研究所 湖北荆州 武汉纺织大学环境与城建学院 湖北武汉 采用改进的碳二亚胺两步法将强力霉素半抗原与载体蛋白 连接制备强力霉素 牛血清白蛋白 人工免疫抗原 并用同样方法将强力霉素与载体蛋白 连接制备人强力霉素 卵清白蛋白 人工包被抗原 经紫外扫描分析和动物免疫试验证实 强力霉素人工抗原合成成功
第5章 凝集反应.doc
第五章凝集反应一 选择题㈠ A1 型题 ( 标准型 ) 1. 关于醛化红细胞, 说法错误的是 A. 保存时间较长 B. 血凝反应效果较新鲜红细胞强 C. 可反复冻融不易破碎 D. 能耐 60 加热 E. 有较强的吸附蛋白质抗原或抗体的能力 2. 下列试验不属于凝集试验的是 A. 外斐试验 B. 肥达试验 C.RPR D.TRUST E.MHA-TA 3. 关于凝集反应, 说法正确的是 A.IgM 类抗体的作用比
第一章 图 １ １ 传染病的特征 ９ Ｔ ｈ１ Ｔ ｈ２ 细胞调节机制简图 正调节 负调节 细胞因子与细菌的相互作用机制目前尚未完全明了 有实验表明 细胞因子与细菌之间 存在有互利和互抑双重效应 例如 Ｔ Ｎ Ｆα 和 ＩＦＮγ 可抑制放线菌的生长而 ＩＬ ６ 的作用则 反之 ＩＬ １ ２ 和 ＧＭ ＣＳＦ 可促进某些致病性大肠杆菌生长而 ＩＬ １ｒａ 可抑制之 研究表 明 某些致病性大肠杆菌有与
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抗原 (antigen,ag) 第一节 抗原的概念和特点 一 抗原的性质 ( 一 ) 概念抗原 (antigen, Ag) 指所有能启动 激发和诱导免疫应答的物质, 其可被 T B 淋巴细胞表面的特异性受体 (TCR 或 BCR) 识别及结合, 激活 T/B 细胞产生应答产物 ( 特异性抗体或效应淋巴细胞 ), 并与之发生特异性反应 ( 二 ) 特性 1. 免疫原性 (immunogenicity
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福建农业学报 材料与方法 试验菌株 引物 主要仪器 主要试剂 细菌培养 模板的制备 反应条件 扩增产物的检测 特异性试验 敏感性试验 分离菌株检测 产物的克隆及序列测定 结果与分析
(Microsoft Word - \316\304\265\265 1)
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《免疫学》实验教学大纲.doc
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安徽理工大学医学院 School of Medicine 教案首页 第次课授课时间年月日教案完成时间 : 年月日 课程名称免疫学检验年级专业 层次医学检验 ( 本科 ) 教师张荣波 专业技术 职 务 授课方式 ( 大 小 ) 大学时 3 授课题目 ( 章 节 ) 第五章凝集反应 基本教材或主要参考书王兰兰主编 临床免疫学与免疫学检验 ( 第三版 ) 教学目的和要求 : 1 掌握凝集反应的原理和特点;
免疫化学技术
免疫化学技术 1 免疫化学技术简介现代免疫化学是研究抗原与抗体的组成 结构以及抗原和抗体反应的机制 此外, 还研究体内其他免疫活性物质, 如补体分子的组成 结构及其功能 目前, 免疫化学已应用于免疫性疾病发病机制的基础研究和临床检测等 随着免疫化学 细胞生物学及分子生物学的进展, 免疫学实验技术也迅猛发展, 并已成为当今生命科学研究的重要手段, 尤其是在医学基础研究和临床实践中得到广泛应用 免疫学检测方法可分为体液免疫测定及细胞免疫测定
Qubit-DNA RNA 总浓度测定 dsdna BR Assay Kits 各试剂加样量 : Buffer 标准 1 标准 2 样品 试剂 ( 荧光染色 ) 总量 ( 溶液体积 ) 50 或 250ml 1 或 5ml 1 或 5ml 待测 250µl 或 1.25ml 原始浓度 未知 0 ng
Qubit-DNA RNA 总浓度测定 dsdna BR Assay Kits 各试剂加样量 : 总量 ( 溶液体积 ) 50 或 250ml 1 或 5ml 1 或 5ml 待测 250µl 或 1.25ml 原始浓度 未知 0 ng/μl 100 ng/μl 待测 200 测定时要求浓度 未知 0 ng/μl 5000ng/ml 0~5000 ng/ml 1 备注 -Buffer:Qubit dsdna
标题
实 践 技 能 考 试 大 纲 11 ( 一 ) 医 德 医 风 ( 二 ) 沟 通 能 力 ( 三 ) 人 文 关 怀 一 职 业 素 质 二 病 史 采 集 ( 一 ) 发 热 ( 二 ) 皮 肤 黏 膜 出 血 ( 三 ) 疼 痛 头 痛 胸 痛 腹 痛 关 节 痛 腰 背 痛 ( 四 ) 咳 嗽 与 咳 痰 ( 五 ) 咯 血 ( 六 ) 呼 吸 困 难 ( 七 ) 心 悸 ( 八 ) 水
2015年7月霉菌毒素污染分析报告
侧流免疫层析技术在真菌毒素检测中的应用 1 侧流免疫层析检测技术侧流免疫层析检测技术 ( LFIA) 也称横向流动免疫检测技术, 是出现于 20 世纪 60 年代初期的一种独特的免疫分析方式, 以条状纤维层析材料为固相, 借助毛细管的吸附作用使样品在层析材料上移动, 其中样品中的待测物与层析材料上一定区域的抗体结合, 通过酶促显色反应或直接使用着色标记物短时间获得直观的测试结果 侧流免疫层析技术是一种将免疫技术和色谱层析技术相结合的快速免疫分析方法,
器之 间 向一致时为正 相反时则为负 ③大量电荷的定向移动形成电 流 单个电荷的定向移动同样形成电流 ３ 电势与电势差 １ 陈述概念 电场中某点处 电荷的电势能 Ｅ ｐ 与电荷量 ｑ Ｅｐ 的比值叫做该点处的电势 表达式为 Ｖ 电场中两点之间的 ｑ 电势之差叫做电势差 表达式为 ＵＡＢ Ｖ Ａ ＶＢ ２ 理解概念 电势差是电场中任意两点之间的电势之差 与参考点的选择无关 电势是反映电场能的性质的物理量
第一章 化学反应中的质量关系和能量关系
第 章酸碱反应和沉淀反应习题参考答案 解 :(1)pHlg (H )1.00 ()0.050mol HOA 溶液中, HOA H OA 平 /(mol ) 0.050 (H ) (OA ) a 1.8 (HOA ) 0.050 (H ) 9.5 mol ph lg (H ).0. 解 :(1)pH 1.00 (H ) 0.mol ph.00 (H ) 0.0mol 等体积混合后 :(H ) (0.mol
臧晓南 张学成 王高歌 刘金姐 张晓辉 刘 滨 对两种丝状蓝藻 钝顶节旋藻和盐泽螺旋藻 在基因工程中常用作选择试剂的 种抗生素 氯霉素 氨苄青霉素 红霉素 链霉素 卡那霉素 庆大霉素和新霉素 的敏感性作比较实验 结果表明 两种蓝藻对抗生素的敏感性既有共同的特点 也有 明显的差异 它们对红霉素 氯霉素和链霉素最敏感 致死浓度分别为 和 两种蓝藻对氨苄青霉素比较敏感 的氨苄青霉素即可抑制 和 的生长 但
第 期 黄雪莲等 响应面优化绿色木霉菌培养基 材料与方法 菌种 仪器与试剂 菌种的活化 单因素试验 响应面优化试验 优化工艺的验证 数据处理 结果与分析
第 卷第 期 年 月 食品与生物技术学报 响应面优化绿色木霉菌培养基 黄雪莲 于新 仲恺农业工程学院轻工食品学院 广东广州 利用响应面分析法对绿色木霉菌的培养基进行优化 通过测量不同营养条件下绿色木霉 菌落生长直径研究其生物学特性 在单因素实验的基础上 选定葡萄糖添加量 丙氨酸添加量和磷酸二氢钾添加量 个因素进行中心组合实验 建立二次回归方程 并应用响应面分析法进行优化 结果表明 绿色木霉菌最佳培养基为葡萄糖
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创 业 板 风 险 提 示 本 次 股 票 发 行 后 拟 在 创 业 板 市 场 上 市, 该 市 场 具 有 较 高 的 投 资 风 险 创 业 板 公 司 具 有 业 绩 不 稳 定 经 营 风 险 高 退 市 风 险 大 等 特 点, 投 资 者 面 临 较 大 的 市 场 风 险 投 资 者 应 充 分 了 解 创 业 板 市 场 的 投 资 风 险 及 本 公 司 所 披 露 的 风 险
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第二十四章免疫诊断免疫学检测技术已广泛应用于医学和生物学领域的研究 在临床医学中, 免疫学检测可用于免疫相关疾病的诊断 发病机制的研究, 病情监测与疗效评价等 如传染病 免疫缺陷病 自身免疫病 肿瘤 移植排斥反应 超敏反应等 随着免疫学理论的进展和相关技术的发展, 检测技术也不断发展和更新, 新方法层出不穷 本章仅介绍免疫诊断常用技术的原理 基本步骤及其应用 第一节抗原或抗体的检测一 抗原抗体反应的原理抗原与抗体发生结合反应的物质基础是抗原的抗原决定基与抗体的抗原结合部位之间的结构互补性,
<4D F736F F F696E74202D DBBAFD1A7B7A2B9E2C3E2D2DFB1EABCC7B7D6CEF6BCBCCAF52DBCC3C4CFBACFD1EE2E BBCE6C8DDC4A3CABD5D>
化学发光免疫标记分析技术 免疫学检测是应用免疫学理论设计的一系列测定抗原 抗体 免疫细胞及其分泌的细胞因子的实验手段及分子生物学技术在免疫学研究中的应用 北京科美生物技术有限公司 抗原抗体的免疫反应 高特异性 抗原抗体的结合实质上只发生在抗原的抗原决定簇与抗体的抗原结合位点之间 由于两者在化学结构和空间构型上呈互补关系, 所以抗原抗体反应具有高度的特异性 高亲和性 抗原与抗体结合形成抗原抗体复合物的过程是一种动态平衡,
生命科学研究 房 蓓 武泰存 王景安 以玉米沈单 号为材料 用溶液培养的方法研究了缺锌 低锌和正常供锌对玉米生长发育的影响 进一步明确了一定量低锌比缺锌对玉米的伤害更大 并对其 同工酶谱及蛋白质表达进行了分析 结果表明 一定浓度的低锌培养使玉米生长受抑及受害最重 且地上部分比地下部分更敏感 低锌和缺锌处理时 种同工酶的酶谱和蛋白表达与正常供锌时均有明显的差异 尤其在一定量低锌浓度时 有些同工酶的表达增强或被特异性诱导
+
~ 1 ~ ~ 2 ~ 1-1 UHPLC-SEC 法对治疗性抗体的分析 TSKgel UP-SW3 UHPLC HPLC A TSKgel UP-SW3 2 μm (4.6 mm ID. 15 cm B UHPLC-SEC 1.7 μm (4.6 mm ID. 15 cm mmol/l (ph 6.7 + 2SO4 mmol/l Na +.5 % NaN3.35 ml/ 25 UV 28 nm 5
食 品 与 生 物 技 术 学 报 第 卷
第 卷第 期 年 月 食品与生物技术学报 山药多糖研究进展 王洪新 王远辉 江南大学食品学院 江苏无锡 山药是药食兼用植物 山药多糖被认为是山药中重要的活性物质 综述山药多糖的提取分离工艺 纯化方法 化学结构分析和生理活性研究的现状 为未来研究山药多糖的新提取工艺 探讨构效关系 作用机制提供参考 山药多糖 研究进展 提取与分离 食 品 与 生 物 技 术 学 报 第 卷 第 期 王洪新等 山药多糖研究进展
第1~3章.doc
一 选择题 第一章概论 ( 一 )A1 型题 ( 标准型 即肯定型 ) 1. 免疫监视功能低下常可发生 : A. 反复感染 B. 移植物排斥反应 C. 肿瘤 D. 超敏反应 E. 免疫增殖病 2. 免疫自稳功能是指 : A. 抑制病原微生物在体内繁殖和扩散 B. 防止自身免疫病的发生 C. 清除体内病原微生物, 防止感染 D. 清除体内突变细胞, 防止肿瘤发生 E. 防止病毒的持续感染 3. 人体内最大的免疫器官是
(Microsoft Word - ELISA\265\304\324\255\300\355\274\260\262\331\327\367.doc)
Elisa 的原理及操作 注意事项 一 ELISA 基础知识 ELISA 是一种免疫测定 免疫测定 (immunoassay,ia) 是应用免疫学技术测定标本的方法 在临床检验中主要通过抗原抗体反应检测体液中的抗体或抗原性物质 1. 抗原抗原是能在机体中引起特异性免疫应答的物质 抗原进入机体后, 可刺激机体产生抗体和引起细胞免疫 在免疫测定中, 抗原是指能与抗体结合的物质 能在机体中引起抗体产生的抗原多为分子量大于
证 明
Elisa 的原理及操作 注意事项 一 ELISA 基础知识 ELISA 是一种免疫测定 免疫测定 (immunoassay,ia) 是应用免疫学技术测定标本的方 法 在临床检验中主要通过抗原抗体反应检测体液中的抗体或抗原性物质 1. 抗原抗原是能在机体中引起特异性免疫应答的物质 抗原进入机体后, 可刺激机体产生抗体和引起细胞免疫 在免疫测定中, 抗原是指能与抗体结合的物质 能在机体中引起抗体产生的抗原多为分子量大于
证券代码： 证券简称：迪瑞医疗 公告编号：
证券代码 :300396 证券简称 : 迪瑞医疗公告编号 :2017-033 迪瑞医疗科技股份有限公司 关于公司部分医疗器械产品完成延续注册的公告 本公司及董事会全体成员保证信息披露的内容真实 准确 完整, 没有虚假 记载 误导性陈述或重大遗漏 迪瑞医疗科技股份有限公司 ( 以下简称 公司 ) 于近日取得由吉林省食品 药品监督管理局颁发的 52 项 医疗器械注册证, 具体情况如下 : 序号 产品名称
程汉良 夏德全 吴婷婷 孟学平 吉红九 董志国 陈淑吟 对文蛤 青蛤 硬壳蛤 江户布目蛤 薄片镜蛤 和菲律宾蛤仔 种帘蛤科贝类和 个地理种 群文蛤 大连 连云港 湛江 防城港 的细胞色素 氧化酶亚基 基因片段的核苷酸序列进行了分析 以探讨这一序列在种质鉴定 种群遗传结构和分子系统发生研究中的应用价值 测序结果 表明 所有物种扩增片段长度均为 序列 含量 明显高于 含量 物种间共有变异位点 个 其中简约信息位点
乔永民 黄长江 于 年 月在汕头湾采集了 个表层沉积物样品 测定了它们的细粒级组分 总有机质 铝 铁 锰 铜 锌 铅 镉 铬 镍 钴的含量 对其分布特征及其彼此之间相关性进行了分析 并以南 海陆架区重金属含量为背景值计算了汕头湾表层沉积物重金属元素的富集系数 结果表明 铁 锰 铜 锌 铅 镉 铬 镍 钴的含量范围分别为 其分布由汕头湾上游的榕江口至湾口呈波浪状递减 锰除外 汕头湾表层沉积物中各重金属
第一节传染和抗传染免疫
第十章 传染与免疫 第一节传染和抗传染免疫 一 传染与传染病传染 (infection) 指病原微生物侵入机体后, 克服机体的防御机能, 在一定部位生长繁殖, 引起不同程度的病理过程 病原微生物 (pathogenic microorganism) 是能够引起人体或动物体发生传染病的微生物, 它包括的范围很广, 有细菌 放线菌 立克次氏体 病毒和支原体 衣原体 螺旋体及真菌等 病原微生物侵入机体后,
南通大学杂志社 南通大学学报 医学版. */(& 0 1&( () (' / ' '-& -' (- 评价血清 %'8$ 在肝细胞肝癌诊断中的作用 张 玉 邵建国 陈 琳 卞兆连 管海涛 南京中医药大学 南京 江苏省南通市第三人民医院肝病研究所 摘 要 目的 探讨血清 %'8$ 作为一种新的生物标志
.*/& 0 1&) '/' '-& -'- 评价血清 %'8$ 在肝细胞肝癌诊断中的作用 张 玉 邵建国 陈 琳 卞兆连 管海涛 南京中医药大学 南京 江苏省南通市第三人民医院肝病研究所 摘 要 目的 探讨血清 %'8$ 作为一种新的生物标志物在肝细胞肝癌 2&-*&/ -&/-'%&3 44 诊断中 的作用 方法 采用实时定量聚合酶链式反应 /&$'% 9*&'&' 2%/& -&' /&-'3
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李俊新 崔 敏 刘艳春 姚艳君 周广芬 孙 宝 河北科技大学理学院 河北石家庄 滦南县职业教育中心基础部 河北滦南 在物理化学实验的基础上 对一级反应的 种不同数据处理模型进行比较和分析 通过对 实验数据处理模型进行系统的比较 来改善传统实验数据处理中存在的一些问题 从而简化数据处 理 减小作图工作量与作图误差 提升实验水平 提高数据处理结果的准确性 一级反应 数据处理模型 过氧化氢 图 过氧化氢分解实验装置图
煤 炭 学 报 仪器与药品 黏土矿物的提纯 黏土样品的制备 红外光谱 分析 射线衍射 分析 射线光电子能谱 分析
张明青 刘炯天 单爱琴 刘汉湖 为了深刻认识煤泥水中 同黏土矿物颗粒之间的相互作用 笔者用 溶液在不同 值条件下分别同高岭土和蒙脱土作用 测定黏土作用前后的 射线衍射 红外光谱和 射线光电子能谱 实验证实了在 溶液中 在黏土表面以静电形式吸附 在 溶液中 以 沉淀和静电形式吸附 此外 在 以上的溶液中还可能存在一 羟基络合吸附形式 提出了 沉淀吸附和一羟基络合吸附的吸附过程模式 黏土颗粒表面的 沉淀使颗粒间形成的非选择性
黄寿松等 儿种植物中的过氧化物酶同工酶分析 图版 两种不同凝胶系统同工酶谱的比较 ７ 凝胶系统分离的酶谱 Ｖ ０ 凝胶系统分离的酶谱 材料 一高梁 亨加利 发芽 ３天的全苗 Ｖ一水稻 银坊 发芽 ４天的全苗 ２ 正极向电泳时过硫酸 按 澳 酚蓝 和过氧化物 酶同工酶 带的位置 ａ 同工酶带 ｂ 澳酚蓝 ｃ 过硫酸按 材料 高梁 亨加利 发芽 ６天的全苗 ３ 预电泳和未预电泳凝胶分离的酶谱比较 一未预电泳凝胶分离的同工酶谱
微生物学课件
第十三章 感染与免疫 病原微生物或病原体 感染又称传染, 是机体与病原体在 定条件下相互作用而引起的病理过程, 一方面, 病原体人侵机体, 损害宿主的细胞和组织 ; 另一方面, 机体运用种种免疫防御功能, 力图杀灭 中和 排除病原体及其毒性产物 通常认为病原体 宿主和环境是决定传染结局的三个因素 生物体能够辨认自我与非自我, 对非我做出反应以保持自身稳定的功能. 称为免疫 免疫是生物在长期进化过程中逐渐发展起来的防御感染和维护机体完整的重要手段
一 根据所给图表，回答下列问题。
临床免疫学检验专项练习答案 一 单选题 1. 答案 D 解析:IgA 是参与粘膜部位免疫的主要抗体, 在局部抗感染中发挥重要作用 2. 答案 A 解析:B 细胞参与体液免疫, 具有抗原呈递功能 3. 答案 D 解析 : 自身免疫指机体免疫系统受某些内因 外因或遗传等因素作用, 产生针对自身正常或变性的组织 器官 细胞 蛋白质或酶类等自身抗原发生的免疫应答反应, 出现自身抗体或自身致敏淋巴细胞的现象,
11. ESSENTIALS OF IMMUNOLOGY
11. ESSENTIALS OF IMMUNOLOGY 11.1 Harmful Microbial Interactions with Humans (Infection) 11.1.1 Routes of infection 11.1.2 Virulence and Pathogenicity 11.2 Immunity 11.2.1 Cells and organs of the immune
H N H CH 2 要 C要 COOH NH 2 H HN CH 2 要 C要 COOH N NH 2 R 1 O R 2 H 2 N 要 C 要 C 要 OH+H 要 N 要 C 要 COOH -H 2O R 1 O R 2 H 2 N 要 C 要 C 要 N 要 C 要 COOH H H H 氨基酸 H 肽键 H H 氧分压高 Hb-Fe 2+ +O 2 Hb-Fe 2+ -O 2
124 河南农业科学第 42 卷, (HPS) ;PRRSV PCV2, [4] PRRSV CSFV ;20, PRRSV,CSFV [5-9],, 1.2 主要试剂和仪器 Real-timePCR PRRSV CSFV PCV2, 3 RotorGene, RG-3000; ND-1000 Na
![124 河南农业科学第 42 卷, (HPS) ;PRRSV PCV2, [4] PRRSV CSFV ;20, PRRSV,CSFV [5-9],, 1.2 主要试剂和仪器 Real-timePCR PRRSV CSFV PCV2, 3 RotorGene, RG-3000; ND-1000 Na](/thumbs/91/105785327.jpg "124 河南农业科学第 42 卷, (HPS) ;PRRSV PCV2, [4] PRRSV CSFV ;20, PRRSV,CSFV [5-9],, 1.2 主要试剂和仪器 Real-timePCR PRRSV CSFV PCV2, 3 RotorGene, RG-3000; ND-1000 Na")
河南农业科学,2013,42(2):123-127 JournalofHenanAgriculturalSciences PCR PRRSV CSFV PCV2,, (, 450011) : 根据 TaqMan 复合荧光探针设计原则, 应用 Primer5.0 和 Oligo6.0 软件设计检测猪繁殖 与呼吸综合征病毒 (PRRSV) 猪瘟病毒 (CSFV) 和猪圆环病毒 2 型 (PCV2) 的特异性引物和探针,
张红丽 等 部分功能域基因的原核表达与分析 第６期 发表序列 ＡＹ８１９６５０ 同源性为 １００ 与国外 １０ 株 同源性为 ９８畅 ８ 有 １３ 个碱基发生了突 变 其中 ４ 个是有意义的突变 这 ４ 个有意义的 突变分别为第 ２５７ 位 Ｔ Ｃ 第 ５０５ 位 Ａ Ｃ 第 ９０８ 位 Ａ Ｇ 第 １０１２ 位 Ｇ Ｃ 图 ４ 这些差异可 能是捻转血矛线虫株间存在地域差异所致 ２畅 ５ ＨＰＳ 原核表达与鉴定
食 品 与 生 物 技 术 学 报 第 卷 列入我国 的植物多酚黄酮抗氧剂 防治高血脂和心血管疾病
第 卷第 期 年 月 食品与生物技术学报 植物多酚黄酮抗氧化剂与人体健康 尤新 中国食品添加剂和配料生产应用工业协会 北京 主要综述了对植物多酚黄酮类物质的生物活性和安全性 其内容包括 茶多酚 甘草黄酮 竹叶黄酮 大豆异黄酮以及从各种鲜果提取物的功能成分 如葡萄提取物 杨梅提取物 橄榄提取 物 乌饭树果提取物等 介绍了植物多酚黄酮的国际市场信息及相关的研究机构和生产单位 多酚 黄酮 健康 食 品 与
一 课程简介. 医学免疫学是研究人体免疫系统的结构和功能的科学, 是医学科学中一门重要的基础课程 本课程的任务在于使学生理解和掌握人体免疫系统的结构和功能, 以及免疫功能异常所致的病理过程和疾病发生发展的机制, 为学习其他基础医学和临床医学课程奠定必要的基础 要求学生通过理论学习和实验操作, 理解和
广州医科大学 本科课程学习大纲 课程名 : 医学免疫学 课程课时 : 53 学分 : 2.5 开课单位 : 病原生物学教研室 广州医科大学教务处编印 二〇一六年九月 一 课程简介. 医学免疫学是研究人体免疫系统的结构和功能的科学, 是医学科学中一门重要的基础课程 本课程的任务在于使学生理解和掌握人体免疫系统的结构和功能, 以及免疫功能异常所致的病理过程和疾病发生发展的机制, 为学习其他基础医学和临床医学课程奠定必要的基础
GeologicalScienceandTechnologyInformation Vol.37 No.5 Sep doi: /j.cnki.dzkq ,,,. [J].,2018,37(5): a,b a,b a,
![GeologicalScienceandTechnologyInformation Vol.37 No.5 Sep doi: /j.cnki.dzkq ,,,. [J].,2018,37(5): a,b a,b a,](/thumbs/97/134206629.jpg "GeologicalScienceandTechnologyInformation Vol.37 No.5 Sep doi: /j.cnki.dzkq ,,,. [J].,2018,37(5): a,b a,b a,")
37 5 2018 9 GeologicalScienceandTechnologyInformation Vol.37 No.5 Sep. 2018 doi:10.19509/j.cnki.dzkq.2018.0528. [J]. 201837(5):206-21. ab ab ab ab ( )a. ;b. 3007) : : ph Ec SO 2- HCO 3 - As / / : ; ; ;
儿科学 儿科学 儿科学 儿科学 儿科学 儿科学 ( 专业学位 ) 儿科学 ( 专业学位 ) 儿科学 ( 专业学位 ) 儿科学 ( 专业学位 ) 儿科学 ( 专业学位 ) 耳鼻咽喉科学 ( 专业学位 ) 非定向 全国统考
2017 年医学院 ( 含转化院 遗传所 ) 硕士研究生上线考生名单 准考证号 报考专业 外语政治 业务 1 业务 2 总分 报考类别 考试方式 备注 103357000912484 72 72 242 0 386 非定向 全国统考 103357000912003 71 72 242 0 385 非定向 全国统考 103357000911503 77 73 234 0 384 非定向 全国统考 103357000911098
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2017 年医学院 ( 含转化院 遗传所 ) 硕士研究生入学考成绩 准考证号 报考专业 外语政治业务 1 业务 2 总成绩 备注 病理学与病理生理学 病理学与病理生理学
2017 年医学院 ( 含转化院 遗传所 ) 硕士研究生入学考成绩 准考证号 报考专业 外语政治业务 1 业务 2 总成绩 备注 103357000912484 病理学与病理生理学 72 72 242 0 386 103357000912003 病理学与病理生理学 71 72 242 0 385 103357000911503 病理学与病理生理学 77 73 234 0 384 103357000911098
考生编号政治政治分外语外语分科目 1 科目 1 分科目 2 科目 2 分总分专业代码专业名称考试方式报名号 思想政治理论缺考英语一 45 生物综合 38 生理学缺考 药理学全国统考 思想政治理论
100019008910001 思想政治理论缺考英语一 45 生物综合 38 生理学缺考 83 078006 药理学全国统考 110190172 100019008910002 思想政治理论 61 英语一缺考药学综合 ( 缺考生理学 51 112 078006 药理学全国统考 110199187 100019008910003 思想政治理论缺考英语一缺考生物综合缺考 生物化学与分子生物学 缺考 --
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课程名称临床免疫学检验授课对象 ( 年级 专业 ) 医学检验专业 12 级 教师姓名黎锦专业技术职称主管技师 授课时间 教学目的与要求 授课学时数 4 授课方式实验课 免疫凝集反应实验 一 掌握直接凝集试验 间接凝集试验 血凝试验的基本原理 实验方法 结果
授课时间 2015-09-15 授课学时数 4 授课方式 实验课 酶联免疫吸附实验 一 掌握酶联免疫吸附试验检测乙肝表面抗原的基本原理 操作方法和结果判断 教学目的与要求 二 熟悉不同 ELISA 反应方式的基本原理及结果判断 三 了解 ELISA 的条件摸索 1.ELISA 检测乙肝表面抗原的基本原理 反应方式 试剂组成 试验条件和试验 影响因素 ; 2. 试验试剂 ( 包括试验样品 ) 和器材
标题
DOI:10.724/SP.J.1096.2010.00000 管式磁性微粒子化学发光免疫分析法测定人尿液中的雌三醇 郑国金 1,4 方卢秋 2,4 李振甲 应希堂 林金明 * 4 1 ( 楚雄医药高等专科学校化学教研室, 楚雄 675000) 2 ( 长江师范学院化学化工学院, 重庆 408100) ( 北京科美东雅生物技术有限公司, 北京 100094) 4 ( 清华大学化学系, 北京 100084)
γ α β
γ α β X γ γ 1845 1898 α β 1900 γ 1910-12 curie 1911 P & M Curie, 1898 α Rutherford, 1899 β (Rutherford, 1899) γ (Villard, 1900) Sir Godfrey N. Hounsfield Dr. Allan M. Cormack CT 1979 Magnetic
幻灯片 1
碧云天 Western Blot 检测服务介绍 Western Blot Services by Beyotime 碧云天网站 微信公众号 碧云天生物技术 /Beyotime Biotechnology 订购热线 :400-168-3301 或 800-8283301 技术咨询 :info@beyotime.com 技术服务 :service@beyotime.com 网址 :http://www.beyotime.com
免疫多项检测用质控品-水平1
R A ND X 多项液相蛋白检测用质控品 货号 : PS2684 批号 : 500LPC 包装 : 3 x 1 ml 效期 : 2019-05 产品描述本品为多项液相蛋白检测用质控品, 又称液相复合特定蛋白质控品, 适用于体外诊断中临床生化或免疫系统的特定蛋白检测的质量控制, 朗道供应三种浓度水平 ( 水平 1:PS2682; 水平 2:PS2683; 水平 3:PS2684) 表中提供了所有分析物的靶值和范围
ELISA1
ELISA1 ELISA 知识讲座之一 免疫检测的基础知识 ELISA 是一种免疫测定 免疫测定 (immunoassay,ia) 是应用免疫学技术测定 标本的方法 在临床检验中主要通过抗原抗体反应检测体液中的抗体或抗原性物质 1.1 抗原抗原是能在机体中引起特异性免疫应答的物质 抗原进入机体后, 可刺激机体产生抗体和引起细胞免疫 在免疫测定中, 抗原是指能与抗体结合的物质 能在机体中引起抗体产生的抗原多为分子量大于
怀孕多久会有反应,身体会分泌出一种简称叫hcg的(人绒毛膜促性腺激素)
怀 孕 多 久 会 有 反 应, 身 体 会 分 泌 出 一 种 简 称 叫 hcg 的 ( 人 绒 毛 膜 促 性 腺 激 素 ) www.yzszfgjj.com http://www.yzszfgjj.com 怀 孕 多 久 会 有 反 应, 身 体 会 分 泌 出 一 种 简 称 叫 hcg 的 ( 人 绒 毛 膜 促 性 腺 激 素 ) 其 中 还 可 见 有 节 律 的 胎 心 搏 动
细菌类
胶 体 金 的 制 备 及 其 应 用 胶 体 金 溶 液 是 指 分 散 相 粒 子 直 径 在 l 150 nm 之 间 的 金 溶 胶, 属 于 多 相 不 均 匀 体 系, 颜 色 呈 桔 红 色 到 紫 红 色. 胶 体 金 作 为 标 记 物 用 于 免 疫 组 织 化 学 始 于 1971 年,Faulk 等 应 用 电 镜 免 疫 胶 体 金 染 色 法 (IGS) 观 察 沙 门
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上海交通大学医学院 Shanghai Jiao Tong University School of Medicine 疾病学基础 免疫学 教学大纲 护理专业四年制 免疫学教研室 2007 年 11 月 上篇 第八章免疫学基础 掌握 : 1. 免疫 固有免疫应答 适应性免疫应答的概念 2. 免疫系统的组成及基本功能熟悉 : 淋巴细胞再循环的概念及生理意义了解 : 1. 不适宜的免疫应答与疾病关系 了解免疫学的应用
干细胞和再生医学 科学学位 免考 免考 非定向 干细胞和再生医学 科学学位 免考 85 非定向 干细胞和再生医学 科学学位 免考 69 非定向 护理学 科学学位 免考 免考 非定向 护理学 科学学位
2018 年秋季报考博士上线考生名单 序号 准考证号 报考专业名称 学位类型外语成绩专业基础课成绩报考类别 备注 1 180371 病理学与病理生理学 科学学位 免考 免考 非定向 2 180393 病理学与病理生理学 科学学位 免考 免考 非定向 3 180427 病理学与病理生理学 科学学位 免考 免考 非定向 4 180436 病理学与病理生理学 科学学位 免考 免考 非定向 5 180474
ELISA手册完稿2011.doc
概述...1 ELISA 的种类及原理...1 直接 ELISA...2 间接 ELISA...3 夹心 ELISA...4 竞争抑制 ELISA...7 ELISA 实验的操作...10 将抗原或抗体吸附到固相载体上...10 封闭...12 加入待检样品以及后续试剂...12 温育...12 洗涤去掉游离未结合的反应物...13 加入酶检测底物...13 结果的判读...13 ELISA 实验常用试剂详解...13
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6 5 温度下若 0.00l/kg 的 l 溶液的平均活度为 γ ±, 相同浓度的 S 溶液的平 均活度为 r ±, 则 γ ±, >γ ±, γ ±, <4D6963726F736F667420576F7264202D203130332D322DA57CA7DEA447B14D2DBDC3A5CDBB50C540B27AC3FEB14DA440B8D5C344>
103- 衛 生 與 護 理 類 專 業 科 目 ( 一 ) 1. 有 關 原 始 生 物 起 源 的 演 化 大 方 向 中, 下 列 何 者 正 確? (A) 由 好 氧 厭 氧 (B) 由 構 造 複 雜 構 造 簡 單 (C) 由 異 營 自 營 (D) 由 多 細 胞 單 細 胞. 植 物 的 莖 頂 及 根 尖 細 胞 利 用 能 量 進 行 細 胞 分 裂, 與 下 列 何 種 生 命
卢书成 韩明莲 祝世娜 王效东 牡丹江医学院 建立一种灵敏度高 特异性强的成骨细胞内雌激素受体检测方法 探讨不同月龄雌性 大鼠 成骨细胞内雌激素受体表达规律 以此拟描述不同年龄人类女性个体成骨细胞内雌激素受体表达的生理曲 线 以不同月龄雌性 大鼠为标本 二次酶消化法收集成骨细胞并培养 倒置相差显微镜观察成骨细胞形态 钙钴法碱性磷酸酶染色 上清液碱性磷酸酶 及骨钙素 检测对成骨细胞进行鉴定 应 用流式细胞仪对不同月龄雌性
12 (autophagy),imagej,,, 3 [1-4] (self-eating) Transwelinvasion, 20μmol L -1 LY A549 [5] PI3K/AKT 24h,PBS, [6-8],, ml -1 ( ) 600μL
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( )2017 57 5JournalofNanchangUniversity(MedicalSciences)2017,Vol.57No.5 11 LY294002, (, 330006) : LY294002 PI3K/AKT 0 10 15 20 25 30μmol L -1 LY294002(LY294002 ) A549,PBS CCK8 LY294002 A549 ; Westernblot
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第十一章 感染与免疫 免疫 (immunity) immunity): 生物体能够辩认自我与非自我, 对非我做出反应以保持自身稳定的功能 传统的免疫概念 : 机体抵抗病原微生物的能力, 即抗传染免疫 第一节 一 传染与传染病 感染的一般概念 疾病 非传染性疾病传染性疾病 传染病 : 由有生命力的病原体引起的疾病, 与由其它致病因素引起的疾病在本质上是有区别的 病原微生物, 或病原体 : 寄生于生物
结果与讨论
金青哲 谢 峰 丁志华 施峰华 王兴国 利用碳同位素比值法进行花生油和玉米油掺合物的检测研究 用气相色谱仪获得 转化途径 的玉米油和 转化途径的花生油的脂肪酸组成 再用气相色谱 燃烧 同位素比值质谱仪确定三种主要脂肪 酸 的 值 利用所测得的数据 构建了玉米油与花生油混合油中主要脂肪酸的 值 混合比例的标准曲线 结果表明 玉米油与花生油的 值差异很大 应用试验中将花生油与一种未知的其他植物油进行掺和
第 期 等 乙腈 碳酸氢钠溶液混合物电嫁接叔丁氧羟基 乙二胺 7B7! " # $% # &'#! "% #!! #& (& )&# &#&# #*$% + %!, # $% "( ( # ( # "! #-.& #% & (& %" & %& & #& (& & )&# &#& # & "%&/
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幻灯片 1
碧云天免疫荧光技术服务 Immunofluorescence by Beyotime 碧云天网站 微信公众号 碧云天生物技术 /Beyotime Biotechnology 订购热线 :400-168-3301 或 800-8283301 技术咨询 :info@beyotime.com 技术服务 :service@beyotime.com 网址 :http://www.beyotime.com 碧云天免疫荧光技术服务概述
王宏丽 陈风雷 陈 涛 胡雪梅 李 智 辛 莹 第 4期 王宏 丽等: 海藻酸钠 /壳聚糖缓释微球的制备及性能 471 描电镜形貌如图 4( a) 所示. 图 4( a) 表明, 实验所得 海藻酸钠载药微球的球形度较好, 微球球径大多在 载药微球样品的激光粒度分布如图 5所示. SA / DDP 微球图 5( a)的中粒径 D 50为 21. 0 m, 大部分分 10~ 50 m 之间, 分散性较好.
没有幻灯片标题
第 12 章 感染与免疫 山东大学生命科学学院 吴志红 感染 (infection), 又称传染, 是机体与 病原体在一定条件下相互作用而引起的病理 过程 免疫 (immunity), 生物体能够辩认自我与非 自我, 对非我做出反应以保持自身稳定的功 能, 称为免疫 病原体入侵机体, 损害宿主的细胞和组织 机体的种种免疫防御功能, 力图杀灭 中和 排除病原体及其毒性产物 两者力量的强弱和增减 感染过程的发展和结局
Microsoft Word 赵凯-二校 出4154
6 10 Vol. 6 No. 10 2015 10 Journal of Food Safety and Quality Oct., 2015 赵 1, 凯 2, 贾彦博 3*, 王啸 2, 丁枫芸 2, 肖海龙 3, 黄建萍 3 (1., 310058; 2., 310019; 3., 310022) 摘要 : 目的 ELISA 方法, Balb/c 4, ELISA,,, ELISA 结果,
浙 江大 学 学 报 农业与生命科学版 ５０ ０ 第３６卷 Ａ 烟草 ＢＹ ２ 细胞原生质体 Ｂ 烟草 ＢＹ ２ 细胞原生质体活力染色结果 Ｃ 蚕豆叶肉细胞原生质体 Ｄ 蚕豆叶肉细胞原 生质体活力染色结果 ｂａｒ ２５ μ ｍ Ｅ 烟草 ＢＹ ２ 细胞原生质体中微丝骨架的分布 Ｆ 图 Ｅ 在透射光下的成像 Ｇ 蚕豆叶肉 细胞原生质体中微丝骨架的分布 Ｈ 图 Ｇ 在透射光下的成像 ｂａｒ １０ μ ｍ
>500 5 第二部分 : 蛋白质的印迹和检测蛋白质的印迹和检测包括五个步骤 : 转膜 封闭 孵育一抗 孵育二抗 蛋白检测 ( 显色 ) 和分析 1. 转膜蛋白质印迹首先是要将电泳后分离的蛋白质从凝胶中转移到固相载体 ( 膜 ) 上, 即转膜 最常用的固相载体 ( 膜 ) 主要是硝酸纤维素 (NC)
WB 实验基本原理 免疫印迹检测法 (Western blotting), 又称蛋白质印迹, 是分子生物学 生物化学和免疫遗传学等生命科学研究中常用的的一种实验方法, 其基本原理是通过 SDS- 聚丙烯酰胺凝胶电泳区分待测样品不同的组分, 再在电流的作用下, 使蛋白质从凝胶转移至固相载体 ( 膜 ) 上, 通过特异性抗体作为探针, 对靶抗原蛋白质进行检测, 通过分析特异性反应的位置和强度获得特定蛋白质在所分析的细胞或
高 云 钟良军 张源明 周晓欢 梁 平 徐 隽 探讨兔牙周炎对动脉粥样硬化炎性因子的影响及抗生素对其的作用 将 只雄性新西兰大白兔随机分为 组 组为对照组 组为牙周炎组 组为动脉粥样硬化组 组为牙周炎 动脉粥样硬化组 组为干预组 牙周炎 动脉粥样硬化 替硝唑组 各组分别按照实验设计进行相应干预处理 周末处死动物 检测牙周指标 血清中总胆固醇 三酰甘油 高密度脂蛋白胆固醇 低密度脂蛋白胆固醇 反应蛋白
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227 ELISA 刘 沙 洲 1,2, 桑 小 雪 1, 欧 阳 华 学 3, 雷 绍 荣 3, 白 林 含 1, * (1. 四 川 大 学 生 命 科 学 学 院, 四 川 成 都 610065;2. 成 都 市 食 品 药 品 检 测 中 心, 四 川 成 都 610045; 3. 四 川 省 农 业 科 学 院 分 析 测 试 中 心, 四 川 成 都 610066) 目 的 : 比 较
免疫学部分复习笔记.doc
免疫学部分复习笔记 一 传染与免疫 1. 决定传染结局的因素 :( 1 ) 病原体 ( 包括毒力 数量和侵入门径 );( 2 ) 宿主的免疫力 ;( 3 ) 环境因素 2. 侵袭力 : 病原菌突破宿主防线, 并能于宿主体内定居 繁殖 扩散的能力, 称为侵袭力 3. 外毒素 (exotoxin): 病原细菌, 主要是一些革兰氏阳性菌, 在生长过程中合成并分泌到胞外的毒素, 如破伤风痉挛毒素 白喉毒素等
第 期 牛文翰等 模板辅助合成氮掺杂的多孔碳基氧还原电催化剂的研究进展!"#$ %&' ' () * +,,,,,,( *,( - -, ( '+, *, -,,, +, ',,. /, ',,+, " $ 2 * ' /+ / / / (+ 5 (/(
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医学免疫学 课程教学大纲课程编号 : 课程名称 : 医学免疫学英文名称 :Medical Immunology 课程类型 : 专业基础课总学时 :72 讲课学时 :54 实验学时 :18 学分 :3 适用对象 : 医学专业先修课程 : 解剖学 组织学 生物学 生理学 生物化学与分子生
医学免疫学 课程教学大纲课程编号 :0900008 课程名称 : 医学免疫学英文名称 :Medical Immunology 课程类型 : 专业基础课总学时 :7 讲课学时 :54 实验学时 :18 学分 :3 适用对象 : 医学专业先修课程 : 解剖学 组织学 生物学 生理学 生物化学与分子生物学 医学遗传学及细胞生物学 一 课程简介医学免疫学是生命科学的前沿学科, 是紧密联系实际的应用学科, 是当今发展最快的学科之一
总论：
By endeneon@bdwm, Thursday, June 02, 2005 Page 1 of 6 总论 : 免疫学 : 免疫系统及其应答原理为主要研究对象的医学生物学科学 Jenner 发现天花疫苗的意义 免疫系统 : 不作为重点 免疫细胞 : NK 细胞及其杀伤机制, 杀伤受体及抑制受体 杀伤抑制受体 (killer inhibitor receptor, KIR); 此类受体的胞膜外区能识别表达与自身组织细胞胞膜的
材料 方法 载体构建 转基因植株的获得
生物技术通报 唐宏琨 曾洪梅 杨秀芬 邱德文 通过根癌农杆菌 介导转化法 将含有激发子基因 的植物表达载体 转化三生烟 获得了转基因烟草植株 用 检测确认了阳性转化株 用 杂交 和 杂交进一步证实了 基因的整合 转录和表达 对 代转基因阳性株进行 接种试验 结果显示 与非转基 因对照相比 表达 的烟草叶片枯斑数量减少 表明蛋白激发子基因 的表达提高了转基因烟草对 的抗性 激发子 基因 烟草 转化 材料
材料 方法
生物技术通报 张发洲 杨慧兰 为了构建单纯疱疹病毒 型 感染细胞多肽 真核表达质粒 应用 技术从 株 的基因组中扩增 基因 并连接至真核表达载体 对阳性克隆进行菌落 酶切和测序鉴定后 成功构建了重 组质粒 用 转染试剂盒将重组质粒 转染至 细胞中 并用 及 检测其表达情况 结果显示 基因在 细胞中得到正确表达 真核表达质粒 的构建成功 为进 一步研究 对宿主细胞的影响奠定了基础 单纯疱疹病毒 型 感染细胞多肽
第一篇基本实验 i 前 言 医学教育的终极目标是培养有社会主义觉悟 基础理论扎实 实践能力强的医学人才 实验教学是整个医学教育过程的重要组成部分, 是培养合格医学人才的一个重要环节, 它与课堂理论教学具有同等重要的意义 传统的实验教学方法多侧重于演示性和验证性实验, 这些实验内容很难适应人才培养的要
第一篇基本实验 i 前 言 医学教育的终极目标是培养有社会主义觉悟 基础理论扎实 实践能力强的医学人才 实验教学是整个医学教育过程的重要组成部分, 是培养合格医学人才的一个重要环节, 它与课堂理论教学具有同等重要的意义 传统的实验教学方法多侧重于演示性和验证性实验, 这些实验内容很难适应人才培养的要求, 而综合性 设计性实验能激发学生的创新意识, 培养学生的创新能力 综合应用能力, 使学生初步掌握科学研究的思维方式
刘陈立 邵宗泽 以柴油为惟一碳源 从胜利油田黄河码头和厦门储油码头两个海水样品中富集得到两组柴 油降解菌 共 株细菌 株真菌 它们对柴油都有降解能力 鉴定结果表明这 株细菌 中有 株摩加夫芽孢杆菌 株施氏假单胞菌 株腊样芽孢杆菌 株反硝化产碱杆菌 株阿氏葡萄球菌 株食烷菌和 株类似很小海旋菌的未知新菌 其中 对柴油的降解能力最强 已 报道的食烷菌属中其他种的同源性最高 为 表明它是该属中的一个新种