612 Keywords: cultivated Cordyceps sinensis; wild Cordyceps sinensis; Cordyceps hawkesii; hydrolyzed amino acids; free amino acids 冬虫夏草为麦角菌科真菌冬虫夏草菌 Co

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1 611 昝珂 1, 过立农 1, 钱正明 2, 李文佳 2, 郑健 1*, 马双成 1* (1. 中国食品药品检定研究院, 北京 15; 2. 广东东阳光药业有限公司, 东莞 52388) 比较冬虫夏草人工繁育品 野生品与亚香棒虫草中水解和游离氨基酸的含量 采用 氨基酸分析仪测定冬虫夏草人工繁育品 野生品以及亚香棒虫草中 17 种氨基酸的含量 冬虫夏 草人工繁育品的水解氨基酸含量为 %~19.8%, 野生冬虫夏草为 %~21.959%, 亚香棒虫 草为 13.43%~14.933% 冬虫夏草人工繁育品的游离氨基酸含量为 1.767%~2.373%, 野生冬虫夏草为 1.753%~2.521%, 亚香棒虫草为 2.856%~3.197% 冬虫夏草人工繁育品和野生品中氨基酸含量基 本一致, 和亚香棒虫草有显著性差异 本研究为冬虫夏草的鉴别及人工繁育品的进一步开发利用提供科 学依据 冬虫夏草人工繁育品 ; 野生冬虫夏草 ; 亚香棒虫草 ; 水解氨基酸 ; 游离氨基酸 R95 A (218) doi: /j Comparison of Amino Acids in Cultivated Cordyceps Sinensis, Wild Cordyceps Sinensis and Cordyceps Hawkesii Zan Ke 1, Guo Linong 1, Qian Zhengming 2, Li Wenjia 2, Zheng Jian 1*, Ma Shuangcheng 1* (1. National Institutes for Food and Drug Control, Beijing 15, China; 2. Guangdong Sunshine Lake Pharma Co. Ltd., Dongguan 52388, China) Abstract Objective: To compare the contents of hydrolyzed and free amino acids in cultivated Cordyceps sinensis, wild Cordyceps sinensis and Cordyceps Hawkesii. Methods: Seventeen amino acids were measured in cultivated Cordyceps sinensis, wild Cordyceps sinensis and Cordyceps Hawkesii by using automatic amino acid analyzer. Results: The content of hydrolyzed amino acids was respectively %-19.8% in cultivated Cordyceps sinensis, 15.72% % in wild Cordyceps sinensis, and 13.43% % in Cordyceps Hawkesii. The content of free amino acids was respectively 1.767%-2.373% in cultivated Cordyceps sinensis, 1.753%-2.521% in wild Cordyceps sinensis and 2.856%-3.197% in Cordyceps Hawkesii. Conclusion: The content of amino acids in cultivated Cordyceps sinensis was almost the same as that of wild Cordyceps sinensis and was significantly different from that of Cordyceps Hawkesii. This study provides a scientific basis for the identification of Cordyceps sinensis and the further development and utilization of cultivated products. 基金项目 : 中医药行业科研专项 中药饮片质量保障系统研究 ( 一 ) 资助 ( 编号 21572); 十二五国家科技重大专项 ( 编号 214ZX ) 作者简介 : 昝珂 ;Tel:(1) ; 62631@qq.com 通信作者 : 马双成 ;Tel:(1) ; masc@nifdc.org.cn 郑健 ;Tel:(1) ; bjzj825@163.com

2 612 Keywords: cultivated Cordyceps sinensis; wild Cordyceps sinensis; Cordyceps hawkesii; hydrolyzed amino acids; free amino acids 冬虫夏草为麦角菌科真菌冬虫夏草菌 Cordyceps sinensis(berk.)sacc. 寄生在蝙蝠蛾 科昆虫幼虫上的子座和幼虫尸体的干燥复合体, 主要分布在我国青海 西藏 甘肃 云南和四川 等高海拔地区, 是传统的名贵中药材, 在中国有 悠久的药用历史, 具有补肾益肺 止血化痰的功 效 [1-3] 近年来, 冬虫夏草的人工繁育技术获得突 破, 为冬虫夏草野生资源稀缺可持续发展提供了 一条途径 [4-5] 冬虫夏草人工繁育品为近年来才获 产业化成功, 化学成分需要深入比较研究 本研 究组前期对冬虫夏草人工繁育品与野生品核苷类 成分和甾醇类成分进行了系统的比较研究 [6-8] 蛋 白质 多肽和氨基酸是冬虫夏草中滋补强壮和增 强免疫的重要物质基础之一, 并且和辅助治疗神 经系统 消化系统疾病有密切关系, 常被用于冬 虫夏草质量评价研究 [9-12] 但前期冬虫夏草氨基酸 分析均以野生品为主 [1-2], 本文采用氨基酸分析 仪测定冬虫夏草人工繁育品 野生品中 17 种水解 及游离氨基酸含量, 并以混淆品亚香棒虫草为参 照, 进行比较分析, 为冬虫夏草的鉴别以及人工 繁育品的进一步开发利用提供科学依据 L89 型全自动氨基酸分析仪 ( 日立公司 ); XSE 15DU 型十万分之一电子天平 ( 梅特勒 - 托利 多公司 );5424 型高速离心机 ( 艾本德公司 ); KQ-3DV 型超声波清洗器 ( 江苏昆山市超声仪器 有限公司 );Milli-Q 纯水仪 ( 密理博公司 ) 盐酸 苯酚 柠檬酸钠均为分析纯, 茚三酮 溶液 ( 二甲基亚砜 15 ml+ph 值 5.2 乙酸锂溶液 5 ml+ 水合茚三酮 4 g+ 还原茚三酮.12 g) 氨基酸混 合对照品溶液 ( 批号 :AWR3942,Wako 公司 ) 野生冬虫夏草 1~1(YS1~YS1) 采自于西 藏自治区 青海省 四川省 甘肃省 云南省 ; 冬虫夏草人工繁育品 1~1(RG1~RG1) 由广 东东阳光药业有限公司提供 ; 亚香棒虫草 1~4 (YXB1~YXB4) 采自贵州省 试验样品均经中国食品药品检定研究院中 药民族药检定所郑健研究员鉴定 ; 冬虫夏草人工 繁育品和野生品鉴定为麦角菌科真菌冬虫夏草菌 Cordyceps sinensis(berk.)sacc. 寄生在蝙蝠蛾科 昆虫幼虫上的子座和幼虫尸体的干燥复合体 ; 亚香 棒虫草鉴定为麦角菌科真菌亚香棒虫草 Cordyceps hawkesii Gray 寄生在鳞翅目昆虫幼虫的子囊菌, 由虫体和头部长出的子座组成 检测器类型 : 荧光检测器 ; 检测波长 : 57 nm 44 nm; 色谱柱 : 日立钠离子交接树 脂柱 (4.6 mm 6 mm), 柱温 :6 ; 进样体 积 :2 μl; 流动相 : 氨基酸分析仪配套柠檬酸 缓冲液和 EDTA-Na 溶液 ( 日立公司产品 ), 流速.4 ml min -1 ; 柱后反应柱的柱温 :135 水解氨基酸测试 取本品粉末 ( 过四号筛 ) 约.1 g, 精密称定, 置于水解管底部, 加入 6 mol L -1 的盐酸 1 ml, 再 加入新蒸馏的苯酚 3~4 滴, 充氮气后立即封管, 置 于干燥箱内,11 水解 24 h 取出, 放冷后进行 适当倍数稀释, 取 1 ml 水解稀释液于旋转蒸发仪上 蒸干 加 1 ml.2 mol L -1 盐酸溶解样品,1 rpm min -1 离心 15 min, 取上清液, 进样 游离氨基酸测试 取本品粉末 ( 过四号筛 ) 约.1 g, 精密称定, 置于具塞锥形瓶中, 加水 1 ml, 称定重量, 超 声提取 2 min 后, 取出, 放置过夜后, 取上清液 2 ml 于 1 ml 离心管中, 准确加入 2 ml 磺基水杨 酸溶液, 混匀, 放置 1 h, 准确加入 1mL EDTA-Na 溶液和 1mL.2mol L -1 盐酸溶液, 混匀,1 rpm min -1 离心 15 min, 吸取上清液 1 ml, 蒸干, 准确加入 1~5 ml 柠檬酸钠缓冲液溶解, 使氨基酸 浓度处于仪器最佳检测范围内, 进样 样品经酸水解后, 运用氨基酸自动分析仪测 定, 脯氨酸在波长 44 nm 测定, 其余 16 种氨基酸在 57 nm 波长下测定,17 种氨基酸在该分离条件下达

3 613 到很好的分离效果, 混合对照品溶液及供试品溶液色谱图见图 Asp Thr 6.34 Ser Pro Glu Gly Ala Cys Val Met Leu Ile Tyr Phe Lys NH His Arg A Asp 5.92 Thr Ser Glu Pro Gly Cys 11.6 Ala Val Met Ile Leu Tyr 19. Phe Lys NH His Arg B Asp Glu Pro 2.92 Lys NH3 C C Thr Ser Gly Ala Cys Val 14. Met Ile Leu 18.7 Tyr Phe His Arg Pro Lys NH3 D Thr Asp Ser Glu Gly Ala Cys Val Met Ile Leu 18.2 Tyr Phe His Arg

4 Thr Glu Pro NH3 E Asp Ser Gly 11.4 Ala Cys Val Met Ile Leu Tyr Phe Lys His Arg A: 混合对照品 ;B: 冬虫夏草人工繁育品水解氨基酸 ;C: 野生冬虫夏草水解氨基酸 ;D: 亚香棒虫草水解氨基酸 ; E: 冬虫夏草人工繁育品游离氨基酸 ;F: 野生冬虫夏草游离氨基酸 ;G: 亚香棒虫草游离氨基酸 ; Asp: 天冬氨酸 ;Thr: 苏氨酸 ; Ser: 丝氨酸 ;Glu: 谷氨酸 ;Gly: 甘氨酸 ;Ala: 丙氨酸 ; Cys: 胱氨酸 ;Val: 缬氨酸 ; Met: 蛋氨酸 ;Ile: 异亮氨酸 ;Leu: 亮氨酸 ;Tyr: 酪氨酸 ; Phe: 苯丙氨酸 ;Lys: 赖氨酸 ;His: 组氨酸 ;Arg: 精氨酸 ; Pro: 脯氨酸

5 615 采用建立的方法对 1 批冬虫夏草人工繁育品 1 批野生冬虫夏草以及 4 批亚香棒虫草进行了测 定 17 种氨基酸的测定结果见表 1 ~ 表 6 % 种类 RG1 RG2 RG3 RG4 RG5 RG6 RG7 RG8 RG9 RG1 Asp Thr Ser Glu Gly Ala Cys Val Met Ile Leu Tyr Phe Lys His Arg Pro 合计 % 种类 YS1 YS2 YS3 YS4 YS5 YS6 YS7 YS8 YS9 YS1 Asp Thr Ser Glu Gly Ala

6 616 种类 YS1 YS2 YS3 YS4 YS5 YS6 YS7 YS8 YS9 YS1 Cys Val Met Ile Leu Tyr Phe Lys His Arg Pro 合计 % 种类 YXB1 YXB2 YXB3 YXB4 Asp Thr Ser Glu Gly Ala Cys Val Met Ile Leu Tyr Phe Lys His Arg Pro 合计

7 617 % 种类 RG1 RG2 RG3 RG4 RG5 RG6 RG7 RG8 RG9 RG1 Asp Thr Ser Glu Gly Ala Cys Val Met Ile Leu Tyr Phe Lys His Arg Pro 合计 % 种类 YS1 YS2 YS3 YS4 YS5 YS6 YS7 YS8 YS9 YS1 Asp Thr Ser Glu Gly Ala Cys Val Met Ile Leu

8 618 种类 YS1 YS2 YS3 YS4 YS5 YS6 YS7 YS8 YS9 YS1 Tyr Phe Lys His Arg Pro 合计 % YXB1 YXB2 YXB3 YXB4 Asp Thr Ser Glu Gly Ala Cys Val Met Ile Leu Tyr Phe Lys His Arg Pro 合计 根据水解氨基酸测定结果分析 ( 表 1~ 表 3), 冬虫夏草人工繁育品的水解氨基酸含量为 %~ 19.8%, 野生冬虫夏草为 %~21.959%, 亚香棒虫草为 13.43%~14.933% 亚香棒虫草中水解氨基酸含量低于冬虫夏草人工繁育品, 与野生冬虫夏草相比, 总体也偏低 冬虫夏草人工繁育品和野生冬虫夏草中总水解氨基酸含

9 619 量基本一致 亚香棒虫草中组氨酸 (His) 的含量为.286%~.32%, 冬虫夏草人工繁育品为.977%~1.12%, 野生品为.747%~1.411%, 亚香棒虫草明显偏低 亚香棒虫草中脯氨酸 (Pro) 的含量为 1.638%~2.15%, 冬虫夏草人工繁育品为 1.64%~1.491%, 野生品为 1.96%~1.522%, 亚香棒虫草明显偏高, 冬虫夏草人工繁育品与野生品中这 2 种氨基酸含量基本一致 从游离氨基酸测定结果分析 ( 表 4~ 表 6), 冬虫夏草人工繁育品的游离氨基酸含量为 1.767%~2.373%, 野生冬虫夏草为 1.753%~2.521%, 亚香棒虫草为 2.856%~3.197% 亚香棒虫草中游离氨基酸含量范围高于冬虫夏草, 人工繁育品中游离氨基酸的含量处于野生冬虫夏草含量范围内 从单个游离氨基酸含量分析, 亚香棒虫草中甘氨酸 (Gly) 的含量为.1%~.12%, 明显低于冬虫夏草人工繁育品 (.25%~.42%) 和野生品 (.2%~.43%), 但亚香棒虫草中脯氨酸 (Pro) 的含量为 1.46%~1.233%, 明显高于冬虫夏草人工繁育品 (.11%~.143%) 和野生品 (.79%~.154%) 本研究通过氨基酸自动测定仪对 1 批冬虫夏草人工繁育品 1 批野生冬虫夏草及 4 批亚香棒虫草中 17 种水解和游离氨基酸含量进行了测定, 并对结果进行了分析 亚香棒虫草中氨基酸含量与正品比较具有较大的区别, 冬虫夏草人工繁育品与野生品中氨基酸含量基本一致 本研究为冬虫夏草的鉴别及人工繁育品的进一步开发利用提供科学依据 [1] 郭海平, 杨智敏. 冬虫夏草药理作用研究进展 [J]. 中草药,1999,3(3): [2] 戚三涛, 张凤华, 李杨, 等. 冬虫夏草研究概况及展望 [J]. 生物医药,212,15(5): [3] 中国药典 : 一部 [S]. 215:115. [4] 李文佳, 董彩虹, 刘杏忠, 等. 冬虫夏草培植技术研究进展 [J]. 菌物学报,216,35(4):1-13. [5] 李文佳, 张宗耀, 华献春, 等. 冬虫夏草繁育关键技术研究及其产业化应用 [J]. 中国科技成果,217(6): 8. [6] 过立农, 张美, 刘杰, 等. 冬虫夏草人工繁育品与野 生品基于甾醇特征图谱的比较研究 [J]. 中国药事, 217,31(8): [7] 昝珂, 黄莉莉, 过立农, 等. 基于特征图谱及多指标成分含量的冬虫夏草野生与人工繁育品比较研究 [J]. 中国中药杂志,217,42(2): [8] 昝珂, 苏蕊, 刘杰, 等. 冬虫夏草人工繁育品与野生冬虫夏草中腺苷含量的比较研究 [J]. 中国药事,216, 3(6): [9] 严冬, 杨鑫嵎. 西藏不同产地冬虫夏草中氨基酸成分分析及其营养价值评价 [J]. 中国农学通报,214,3 (3): [1] 钱正明, 李春红, 李文庆, 等. 冬虫夏草蛋白图谱及干燥条件对超氧化物歧化酶活性影响 [J]. 菌物学报, 216,35(4): [11] 钱正明, 李文庆, 孙敏甜, 等. 冬虫夏草化学成分分析 [J]. 菌物学报,216,35(4): [12] 王林萍, 余意, 冯成强. 冬虫夏草活性成分及药理作用研究进展 [J]. 中国中医药信息杂志, 214,21 (7): [13] 石岩, 王钢力, 林瑞超. 近红外技术测定冬虫夏草中氨基酸含量 [J]. 药物分析杂志,27,27(1):9-92. [14] 索菲亚, 苏俊, 姜彦成, 等. 新疆虫草与冬虫夏草中甘露醇 多糖和氨基酸的含量比较研究 [J]. 新疆农业科学,28, 45(3): [15] 熊淑玲, 刘波平, 童迎东. 亚香棒虫草和冬虫夏草化学成分的测定与比较 [J]. 江西农业大学学报,1997,19 (2):27-3. [16] 王丽, 宋志峰, 黄璜. HPLC 测定不同产地冬虫夏草中氨基酸的含量 [J]. 中成药,21, 32(6): [17] 张士善, 张丹参, 朱桐君, 等. 冬虫夏草氨基酸成分的药理分析 [J]. 药学学报,1991,26(5): [18] 冯凤英, 于斌, 刘青利, 等. 冬虫夏草氨基酸含量与生态因子的相关性分析 [J]. 西南农业学报,215, 28 (2): [19] 于斌, 冯凤英, 梁留科, 等. 冬虫夏草的生境及其氨基酸含量分析 [J]. 干旱区研究, 212,29(5): [2] 汪家春, 杨睿倩, 李兆兰, 等. 天然冬虫夏草 冬虫夏草菌丝及发酵液游离氨基酸的种类及含量测定 [J]. 解放军药学学报,214,3(3): ( 收稿日期 217 年 1 月 23 日编辑范玉明 )

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i i i ii 1 2 3 4 % N) 5 50.0 AMINO ACID #64 [modified by Administrator] IntAmp_1 nc 40.0 30.0 20.0 10.0 0.0-10.0 1 - ala - 10.483 2 - thr - 11.107 3 - gly - 11.872 4 - val - 13.458 5 - ser - 14.903 6 - pro

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