300 检验医学 2016 年 4 月第 31 卷第 4 期 Laboratory Medicine,April 2016,Vol. 31,No. 4 and the specificity was 92.1%. Conclusions IDA has certain effect on HbA 1

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1 299 文章编号 : (2016) 中图分类号 :R446.1 文献标志码 :A DOI : /j.issn 毛细管电泳法糖化血红蛋白检测系统在缺铁性贫血患者中的应用 徐安平, 纪玲, 陈卫东, 夏勇, 喻晶, 周宇, 李璐 ( 北京大学深圳医院检验科, 北京 ) 摘要 : 目的探讨缺铁性贫血 (IDA) 对糖化血红蛋白 (HbA 1c ) 检测的影响以及毛细管电泳法检测 HbA 2 在 IDA 中的应用 方法收集 IDA 确诊患者 79 例, 以 79 名血常规和铁蛋白均正常者作为对照组 分别检测 2 个组的空腹血糖 糖化血清蛋白 铁蛋白 HbA 1c 及 HbA 2 采用 2 种方案研究 IDA 对 HbA 1c 检测的影响 :(1) 检测对照组和 IDA 组 HbA 1c, 分析 IDA 对 HbA 1c 结果的影响 ;(2) 采用毛细管电泳法检测 HbA 2, 比较 IDA 患者治疗前后各项血液学指标 [ 包括血红蛋白 (Hb) 红细胞平均体积 (MCV) 平均红细胞血红蛋白含量 (MCH)] 及铁蛋白 HbA 1c HbA 2 的差异 分析毛细管电泳法检测对照组和 IDA 组的 HbA 2 结果, 通过受试者工作特征 (ROC) 曲线建立毛细管电泳法 HbA 2 筛查 IDA 的临界值 结果对照组和 IDA 组空腹血糖和糖化血清蛋白差异均无统计学意义 (P 均 >0.05), 而铁蛋白和 HbA 1c 结果差异均有统计学意义 (P<0.05) IDA 组治疗前后 Hb MCV MCH 铁蛋白 HbA 1c 及 HbA 2 结果差异均有统计学意义 (P<0.01) 毛细管电泳法 HbA 2 筛查 IDA 的临界值为 2.25%, 敏感性为 93.4%, 特异性为 92.1% 结论 IDA 对 HbA 1c 的检测会产生一定的影响 毛细管电泳法在检测 HbA 1c 的同时还能提供 HbA 2 结果, 可用于筛查 IDA 关键词 : 糖化血红蛋白 ; 血红蛋白 A 2 ; 毛细管电泳法 ; 缺铁性贫血 Capillary electrophoresis for glycated hemoglobin A 1c determination in patients with iron deficiency anemia XU Anping, JI Ling,CHEN Weidong,XIA Yong,YU Jing,ZHOU Yu,LI Lu. (Department of Clinical Laboratory,Shenzhen Hospital,Peking University,Beijing ,China) Abstract:Objective To investigate the influence of iron deficiency anemia (IDA)on glycated hemoglobin A 1c (HbA 1c )determination and the application of capillary electrophoresis in the determination of hemoglobin A 2 (HbA 2 )for the diagnosis of IDA. Methods A total of 79 patients with IDA were enrolled,and 79 subjects with normal blood routine test results and ferritin were enrolled as control group. Fasting blood glucose,glycated serum protein,ferritin,hba 1c and HbA 2 were determined. Using 2 plans,the influence of IDA on HbA 1c determination was evaluated.(1)the influence of IDA on the results of HbA 1c determination was evaluated.(2)hba 2 was determined by capillary electrophoresis,and the differences of hemoglobin(hb),mean corpuscular volume(mcv),mean corpuscular hemoglobin(mch),ferritin,hba 1c and HbA 2 before and after treatment were compared. The HbA 2 results in control and IDA groups by capillary electrophoresis were analyzed. The cut-off values of HbA 2 by capillary electrophoresis for IDA were assessed by receiver operating characteristic (ROC)curve. Results Fasting blood glucose and glycated serum protein showed no statistical significance between control and IDA groups(p>0.05). Ferritin and HbA 1c showed statistical significance between control and IDA groups(p<0.05). In IDA group,hb, MCV,MCH,ferritin,HbA 1c and HbA 2 had statistical significance between before and after treatment(p<0.01). When the cut-off value of HbA 2 by capillary electrophoresis for IDA screen was 2.25%,the sensitivity was 93.4%, 基金项目 : 深圳市科技计划创新项目 (JCYJ ) 作者简介 : 徐安平, 男,1978 年生, 硕士, 副主任技师, 主要从事生物化学检验工作 通讯作者 : 纪玲, 联系电话 :

2 300 检验医学 2016 年 4 月第 31 卷第 4 期 Laboratory Medicine,April 2016,Vol. 31,No. 4 and the specificity was 92.1%. Conclusions IDA has certain effect on HbA 1c determination. Capillary electrophoresis can determine HbA 1c and HbA 2 simultaneously,which can be used into IDA screen. Key words:glycated hemoglobin A 1c ;Hemoglobin A 2 ;Capillary electrophoresis;iron deficiency anemia 糖化血红蛋白 (glycated hemoglobin A 1c, HbA 1c ) 在糖尿病诊疗中的应用越来越受到关注, 但其检测方法和影响因素繁多 [1-2] HbA 1c 反映了红细胞生命周期内的平均血糖水平, 任何影响红细胞生命周期的因素都可导致 HbA 1c 结果不能反映正常的平均血糖水平 [3-4] 据世界卫生组织调查, 中国地区学龄前儿童 孕妇和非孕育龄女性中的贫血流行率分别约为 20.0%~39.9% 20.0%~39.9% 和 5.0%~19.9%, 而缺铁性贫血 (iron deficiency anemia,ida) 在各种原因造成的贫血中所占比例最高 [5] 既往研究表明 IDA 会导致红细胞生命周期的延长 [6-7], 但对于 HbA 1c 的影响程度存在争议 [8] 我们探讨了 IDA 对 HbA 1c 检测的影响, 同时建立了毛细管电泳法检测 HbA 2 用于筛查 IDA 的临界值 材料和方法一 研究对象选取 2015 年 1 至 3 月北京大学深圳医院确诊的 IDA 患者 79 例, 其中男 5 例 女 74 例, 年龄 (37.6±10.1) 岁 ; 筛选条件 : 血常规呈小细胞低色素性贫血, 铁蛋白 <10 ng/ml( 参考区间 :4.63~ ng/ml) 以空腹血糖和性别作为匹配条件, 年龄尽量匹配, 收集 79 名正常者作为对照组, 其中男 5 例 女 74 例, 年龄 (35.1±11.7) 岁 ; 筛选条件 : 血常规正常, 铁蛋白正常 所有对象排除怀孕 肾脏疾病 地中海贫血及其他血红蛋白 (hemoglobin,hb) 病,Hb 浓度为 64~159 g/l, 所有样本均采用稀释模式上样 根据厂家声明, 在此范围内的 Hb 浓度均不影响本研究中 2 种检测系统检测 HbA 1c 二 样本收集所有对象采集血液后分成 2 管,1 管为分离胶促凝管, 用于分离血清, 检测糖化血清蛋白和空腹血糖 ; 另 1 管采用乙二胺四乙酸二钾抗凝, 进行 HbA 1c 和地中海贫血基因检测 三 仪器与试剂 HbA 1c 分别采用 Capillarys 2 Flex Piercing HbA 1c 检测系统 ( 毛细管电泳法, 法国 Sebia 公司 ) VARIANT Ⅱ TURBO 2.0 HbA 1c 分析仪 [ 高效液相色谱法 (high performance liquid chromatography,hplc)] 及各自的配套试剂 校准品和质控品检测 空腹血糖采用 BECKMAN- COULTER 全自动生化分析仪及配套试剂检测 糖化血清蛋白采用 ROCHE COBAS 及配套试剂检测 铁蛋白采用雅培及配套试剂检测 Hb 浓度 红细胞平均体积 (mean corpuscular volume,mcv) 平均红细胞血红蛋白含量 (mean corpuscular hemoglobin,mch) 采用 Sesmex XN 900 血液分析仪及配套试剂检测 α 及 β- 地中海贫血基因检测试剂盒 ( 深圳益生堂生物企业有限公司 ) 所有检测项目室内质控均在控 三 方法 1. 研究 IDA 对 HbA 1c 检测影响的 2 种方案 (1) 对照组和 IDA 组结果比较 : 分别采用毛细管电泳法和 HPLC 检测对照组和 IDA 组 HbA 1c, 分析 IDA 对 HbA 1c 结果的影响 ;(2)IDA 患者治疗前 后的差异 : 选取治疗 2 个月后回医院复查的 33 例患者, 比较治疗前后 Hb MCV MCH 铁蛋白 HbA 1c 及 HbA 2 结果的差异 2. 建立毛细管电泳法筛查 IDA 的 HbA 2 临界值采用毛细管电泳法分别检测 IDA 组和对照组 HbA 2, 其结果分别作为阳性组和阴性组, 采用受试者工作特征 (receiver operating characteristic,roc) 曲线计算毛细管电泳法 HbA 2 筛查 IDA 的临界值 四 统计学方法采用 SPSS 19.0 软件进行统计分析 所有数据均呈正态分布, 以 x±s 表示, 组间差异采用独立样本 t 检验 以 P<0.05 为差异有统计学意义 结果一 对照组和 IDA 组各项指标的比较对照组和 IDA 组空腹血糖和糖化血清蛋白差异均无统计学意义 (P 均 >0.05), 而铁蛋白和 HbA 1c 差异均有统计学意义 (P 均 <0.05) 见表 1

3 301 组别 例数 空腹血糖 (mmol/l) 表 1 对照组和 IDA 组各项指标的比较 糖化血清蛋白 (μmol/l) 铁蛋白 (ng/ml) HbA 2 (%) 毛细管电泳法 HbA 1c (%) (x±s) HPLC HbA 1c(%) 对照组 ± ± ± ± ± ±0.30 IDA 组 ± ± ±1.60 * 1.83±0.26 * 5.06±0.40 * 4.95±0.38 * 注 : 与对照组比较,*P<0.05 二 IDA 组治疗前后各项指标的比较 I D A 组治疗前后 H b M C V M C H 铁蛋白 HbA 1c 及 HbA 2 结果差异均有统计学意义 (P<0.01), 见表 2 治疗前后毛细管电泳法 HbA 1c 及 HbA 2 图谱见图 1 三 毛细管电泳法 HbA 2 筛查 IDA 的临界值 ROC 曲线分析显示, 当 HbA 2 筛查 IDA 的临界值为 % 时,R O C 曲线下面积为 0.986, 敏感性为 93.4%, 特异性为 92.1% 见图 2 组别例数 Hb(g/L) MCV(fL)MCH(Pg) 表 2 IDA 组治疗前后各项指标的比较 铁蛋白 (ng/ml) HbA 2(%) 毛细管电泳法 HbA 1c (%) HPLC HbA 1c (%) 治疗前 ± ± ± ± ± ± ±0.45 治疗后 ±10.20 * 82.5±4.80 * 25.4±2.30 * 12.00±6.96 * 2.14±0.10 * 4.56±0.37 * 4.59±0.40 * 注 : 与治疗前比较,*P<0.01 HbA 0 HbA 0 HbA 1c 其他 HbA HbA 2 HbA1c 其他 HbA HbA 组分 HbA1c 其他 HbA Hb A 0 Hb A 2 % mmol/mol Cal.% 组分 % mmol/mol Cal.% HbA1c 其他 HbA Hb A Hb A (a) (b) 注 :(a) 治疗前 ;(b) 治疗后 图 1 同一样本治疗前 后毛细管电泳法 HbA 1c 及 HbA 2 图谱 1.0 讨 论 敏感度 特异性 图 2 毛细管电泳法 HbA2 筛查 IDA 的 ROC 曲线 HbA 1c 是人体血液中葡萄糖与 Hbβ 链 N 末端缬氨酸残基以共价键结合的稳定的化合物, 是血糖长期水平监控的金标准 近年来,HbA 1c 在国外已被推荐为糖尿病诊断标准 [9-10] HbA 1c 检测主要受到 3 方面因素影响 :(1) 检测方法学影响, 主要表现在某些 Hb 变异体对检测方法的影响 [4] ;(2) 糖化率影响, 如 Hb 变异体和 HbA 糖化率不一致, 可导致结果偏差, 特别是对亲和层

4 302 检验医学 2016 年 4 月第 31 卷第 4 期 Laboratory Medicine,April 2016,Vol. 31,No. 4 析法会产生较为明显的影响 [11-12] ;(3) 红细胞生命周期改变导致 HbA 1c 结果异常, 包括各种贫血引起的红细胞寿命改变, 如溶血性贫血会引起红 细胞寿命减低,IDA 会引起红细胞寿命延长 [6-7] 既往研究认为,IDA 引起 HbA 1c 结果增高的原因主要有 2 点 : 一是铁代谢异常引起 Hb 结构改变, 从而导致糖化率的改变 ; 二是 IDA 导 致的红细胞寿命延长引起 HbA 1c 结果增高 COBANA 等 [15] 和 SHANTHI 等 [16] [13-14] 对比了对照 组和 IDA 组的 HbA 1c 结果, 发现 IDA 组 HbA 1c 结果明显高于对照组 因此, 他们认为 IDA 严重影响了 HbA 1c 的检测 但也有大数据研究则 发现 IDA 对于 HbA 1c 结果影响并不显著 [8] 由 此可见, 不同的研究结果存在差异 本研究通过严格匹配的对照组和 IDA 组的结果对比, 发现糖化血清蛋白结果差异无统计学意义 (P>0.05), 而 HbA 1c 结果差异有统计学意义 (P<0.05) 因此, 本研究认为 IDA 对 HbA 1c 检测有影响 但 IDA 患者治疗前后 HbA 1c 结果差异亦有统计学意义 (P<0.01) 2 种方案得出的结果有差异, 原因可能是 :(1)HbA 1c 结果和铁缺乏程度有关, 铁缺乏程度越高可能对 HbA 1c 结果影响越大 ; (2) 可能是由于治疗前后的时间跨度导致 HbA 1c 水平发生了改变 综合来看,IDA 确实能引起 HbA 1c 结果升高 HbA 2 是筛查地中海贫血的重要指标 [17], HbA 2 (α2δ2) 在正常成人体内约占 Hb 总量的 2.5%~3.5% 胎儿出生 6 个月后, 随着 δ 链的生成,HbA 2 趋于正常成人水平 HbA 2 分离可通过高效液相离子交换层析法或蛋白电泳法 [18] HbA 2 影响因素较多, 引起 HbA 2 升高主要有 β- 地中海贫血 巨幼红细胞性贫血 人类免疫缺陷病毒感染治疗 HbS 合并地中海贫血 某些 Hb 变异体等 ; 引起 HbA 2 降低主要有 α- 地中 海贫血 IDA α 链和 δ 链变异体等 [19] 由此可 见, 除 α- 地中海贫血外,IDA 是引起 HbA 2 降低的最常见的影响因素 [19-20] 因此, 在地中海贫血低流行地区,HbA 2 可作为 IDA 的筛查指标 本 研究结果显示, 毛细管电泳法在检测 HbA 1c 的同时, 还能提供 HbA 2 结果 ( 图 1) IDA 经治疗后 HbA 2 水平明显升高 ( 表 2) ROC 曲线分析显示 HbA 2 用于筛查 IDA 的临界值为 2.25%, 此时 ROC 曲线下面积为 0.986, 敏感性为 93.4%, 特异性为 92.1% 综上所述,IDA 能对 HbA 1c 检测产生一定影响 毛细管电泳法在检测 HbA 1c 的同时还能提供 HbA 2 结果, 在地中海贫血低流行地区可用于筛查 IDA 参考文献 [1] JI L,YU J,ZHOU Y,et al. Erroneous HbA1c measurements in the presence of β-thalassemia and common Chinese hemoglobin variants[j]. Clin Chem Lab Med,2015,53(9): [2] 李卿, 刘文彬, 金中淦, 等. 毛细管电泳法检测糖化血红蛋白的分析性能评估 [J]. 检验医学,2015, 30(2): [3] SACKS DB,BRUNS DE,GOLDSTEIN DE,et al. Guidelines and recommendations for laboratory analysis in the diagnosis and management of diabetes mellitus[j]. Clin Chem,2002,48(3): [4] LITTLE RR,ROHLFING CL,HANSON S,et al. Effects of hemoglobin(hb)e and HbD traits on measurements of glycated Hb (HbA1c)by 23 methods[j]. Clin Chem,2008,54(8): [5] M C L E A N E,C O G S W E L L M,E G L I I,e t al.worldwide prevalence of anaemia,who Vitamin and Mineral Nutrition Information System, [J]. Public Health Nutr,2009,12(4): [6] COBAN E,OZDOGAN M,TIMURAGAOGLU A. Effect of iron deficiency anemia on the levels of hemoglobin A1c in nondiabetic patients[j]. Acta Haematol,2004,112(3): [7] KOGA M,MORITA S,SAITO H,et al. Association of erythrocyte indices with glycated haemoglobin in

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