2060 第三军医大学学报,2017,39(21) htp://aammt.tmmu.edu.cn 随着生活质量的提高, 非酒精性脂肪肝 (nonalco holicfatyliverdisease,nafld) 的发生率也越来越高, 在正常人群的发生率为 20% [1], 在肥胖人群发生率可高达

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圭己冉
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1 2059 DOI: /j 溶酶体相关膜蛋白 3 过表达促进肝细胞脂质沉积宋铃榆 1,2, 廖晓玉 2, 郑宏庭 2 1, 杨仕明 ( 重庆, 第三军医大学新桥医院 : 消化内科 1, 内分泌科 2 ) [ 摘要 ] 目的探讨溶酶体相关膜蛋白 3(lysosomeasociatedmembraneprotein3,LAMP3) 对肝细胞脂质代谢的作用方法以肝癌细胞系 Huh7 为研究对象, 利用 qrtpcr 及 Westernblot 法检测游离脂肪酸 (freefatyacids,ffas)0.4mmol/l 处理后肝细胞 LAMP3 表达变化 ; 过表达 LAMP3 后, 分别使用油红染色及甘油三酯检测试剂盒检测肝细胞内脂滴及甘油三酯沉积情况 ; 采用 ATP 及 β 羟基丁酸检测试剂盒检测细胞内 ATP 及 β 羟基丁酸含量变化 ; 过表达 LAMP3, 使用 qrtpcr Westernblot 法检测脂质合成相关基因 PPARγ 与 SCD1 及脂质分解相关基因 CPT1A 与 PGC1α 表达变化结果 FFAs 处理后肝细胞 Huh7 中 LAMP3 表达显著上调 (P<0.05); 过表达 LAMP3 可显著促进肝细胞内脂滴和甘油三酯的沉积 (P<0.05); 过表达 LAMP3 对肝细胞内 ATP 及 β 羟基丁酸含量的影响差异无统计学意义 (P>0.05); 过表达 LAMP3 可促进 PPARγ 及 SCD1 表达 (P<0.05), 但对 CPT1A PGC1α 表达的影响差异无统计学意义 (P>0.05) 结论 LAMP3 可通过调控脂肪合成促进肝细胞内脂质沉积 [ 关键词 ] 溶酶体相关膜蛋白 3, 肝细胞脂质代谢 ; 甘油三酯 ; 油滴 [ 中图法分类号 ] R591.5;R322.47;R341 [ 文献标志码 ] A OverexpresionofLAMP3promoteslipidmetabolism inlivercels SONGLingyu 1,2,LIAOXiaoyu 2,ZHENGHongting 2,YANGShiming 1 ( 1 DepartmentofGastroenterology, 2 Department ofendocrinology,xinqiaohospital,thirdmilitarymedicaluniversity,chongqing,400037,china) [Abstract] Objective Toilustratetheroleoflysosomeasociatedmembraneprotein3(LAMP3)in hepatocelularlipidmetabolism.methods Afterfreefatyacids(FFAs,0.4mmol/L)wereusedtotreat humanhepatocelularcarcinomacellinehuh7,theexpresionoflamp3wasdetectedbyqrtpcr and Westernbloting.Then,oilredstainingwasadoptedtoobservethelipiddropletsintheFFAstreatedHuh7 cels, and intracelular triglyceride level was detected at the same condition. ATP content and βhydroxybutyrateconcentrationweremeasuredbythecorespondingkitsrespectively.finaly,theexpresion oflipogenicmolecules,pparγandscd1,andthoseinvolvedinlipolysis,cpt1aandpgc1α,atmrna andproteinlevelsweredetectedinhuh7celsafterffastreatmentbyqrtpcr andwesternbloting, respectively.results FFAstreatmentresultedintheupregulationofLAMP3inHuh7cels(P<0.05). Thetreatmentalsopromotedthedepositionofintracelularlipiddropletsandtriglyceridesinthecels(P< 005).However,ithadnoefectontheintracelularATPandβhydroxybutyratelevels(P>0.05).FFAs treatmentinducedupregulationoflamp3alsoenhancedtheexpresionofpparγandscd1(p<0.05), thoughshowingnoefectonthelevelsofcpt1aandpgc1α(p>0.05).conclusion LAMP3promotes depositionoflipiddropletsviaregulatingfatsynthesisinlivercels. [Keywords] lysosomeasociatedmembraneprotein3;hepatocelularlipidmetabolism;triglyceride; lipiddroplets SupportedbytheGeneralProgram ofnationalnaturalsciencefoundationofchina( )andthebasicandfrontierresearchprojectofchongqing (CSTC2016jcyjA0093).Corespondingauthor:YANGShiming, shimingyang@yahoo.com;ZHENGHongting, fnf7703@hotmail.com [ 基金项目 ] 国家自然科学基金面上项目 ( ); 重庆市基础与前沿研究计划项目 (CSTC2016jcyjA0093) [ 通信作者 ] 杨仕明, shimingyang@yahoo.com 郑宏庭, fnf7703@hotmail.com [ 优先出版 ] htp://kns.cnki.net/kcms/detail/ r html

2 2060 第三军医大学学报,2017,39(21) htp://aammt.tmmu.edu.cn 随着生活质量的提高, 非酒精性脂肪肝 (nonalco holicfatyliverdisease,nafld) 的发生率也越来越高, 在正常人群的发生率为 20% [1], 在肥胖人群发生率可高达 75% [2], 其主要病理表现为肝细胞内脂质沉积 [3] NAFLD 最终可能引起肝硬化, 甚至肝脏肿瘤 [4-5], 已严重威胁到人类健康肝脏是调控机体脂代谢的重要器官 [6], 参与脂质合成脂质分解脂蛋白合成与分泌等过程, 而肝细胞脂代谢紊乱是导致 NAFLD 发生发展的重要原因 [7] 目前临床对肝脏脂代谢紊乱治疗并未获得良好的效果, 因此, 寻找新的干预措施成为今后研究的关键近年, 研究发现自噬也参与肝脏脂代谢过程, 且发挥着重要作用 [8] 研究证实, 细胞内脂滴与自噬标志分子 LC3 在饥饿状态下共定位于细胞溶酶体, 提示自噬可以介导脂滴运输到溶酶体进行降解 [9] 溶酶体是细胞内自噬完成的主要场所, 其内含有高浓度的酸性水解酶, 用以降解被包裹受损的细胞器蛋白质等大分子物质溶酶体相关膜蛋白家族 (lysosomeasociat edmembraneproteins,lamps) 参与维持溶酶体膜结构的完整性 [10] 小鼠 LAMP2 基因缺陷能减少高脂饮食诱导的肥胖 [11], 说明 LAMP2 在肝细胞脂代谢中具有重要作用此外,LAMP2 已被报道在甲状腺素诱导的肝细胞脂代谢中表达上调 [12] ;LAMP3 是溶酶体相关膜蛋白家族成员之一, 在氨基酸序列及结构上与 LAMP2 非常相似正常情况下,LAMP3 在内皮细胞肺上皮细胞中表达 [13] 近年研究表明,LAMP3 在多种肿瘤中表达升高, 且与肿瘤的不良预后密切相关 [14-15], 但其在脂代谢中的作用并不清楚缺氧诱导的 PERK 信号通路可显著上调 LAMP3 的表达, 而 PERK 信号通路在脂质合成过程中具有重要作用 [16] 这些研究结果提示,LAMP3 在脂质代谢中可能具有重要作用本研究检测高脂处理后肝细胞中 LAMP3 的表达变化, 通过基因过表达手段检测 LAMP3 对肝细胞脂质合成脂质分解水平, 以及脂代谢过程中关键基因表达变化的影响, 以期为肝脏脂代谢紊乱的治疗研究提供实验基础 1 材料与方法 1.1 主要试剂棕榈酸 (P558510G) 油酸 (O10085G) 油红 O (O0625) 苏木精 (H9627) 购于 Sigma 公司, 无脂肪酸 BSA(4197) 购于 CelMaxx 公司,Lipofectamin3000 (L ) 购于 Invitrogen 公司,TRNzol 总 RNA 提取试剂 (DP405) 购于天根生化科技有限公司, 逆转录试剂盒 (RR047A) 及荧光定量 PCR 试剂盒 (RR820A) 购于 TaKaRa 公司, 甘油三酯检测试剂盒 (E ) 购于北京普利莱公司,ATP 检测试剂盒 (S0026B) 购于碧云天公司,β 羟基丁酸检测试剂盒 ( ) 购于默沙克公司,BCA 蛋白浓度测定试剂盒 (P0010) 蛋白裂解液 (P0013B) 购于碧云天生物科技有限公司, 用于免疫印迹的抗体 antilamp3(sc98657) antigapdh (sc47724) 购于 SantaCruz 公司,antiPPARγ(C26H12) 购于 CelSignalingTechnology 公司,antiSCD1(ab19862) 购于 Abcam 公司 1.2 细胞培养人肝癌细胞系 Huh7 购于上海中国科学院细胞库, 用含 10% 胎牛血清的 DMEM(Lifetechnology) 培养于 37,5% CO 2 培养箱内 1.3 游离脂肪酸配制使用 0.1mol/L 氢氧化钠溶液配制 100mmol/L 棕榈酸储存液与 100mmol/L 油酸溶液, 再配制 10% 无脂肪酸 BSA 溶液将棕榈酸与油酸以 1 2 的比例加入 10% BSA 得到 5mmol/L 的游离脂肪酸 (freefaty acids,ffas) 溶液 55 水浴 10min, 冷却至室温后用 0.22μm 针头式滤器过滤,-20 储存 1.4 载体构建与转染 PCR 扩增 LAMP3 基因编码区 1250bp, 并通过酶切位点 NheⅠ 和 BamHⅠ 克隆到过表达载体 pcdna3.1 上 LAMP3 编码区扩增引物 :5 GCTAGCATGCCCCG GCAGCTCAGCGC3,5 GAATTCTTAGATTCTCTGGT ATCCAGA3 构建好的过表达载体 pcdna3.1 LAMP3 由 Sanger 测序鉴定 Huh7 细胞接种于 6 孔板中, 细胞汇合度达 80% 后, 使用试剂 Lipofectamin3000 瞬时转染过表达质粒, 转染剂量为质粒 1μg/ 孔 1.5 荧光定量 PCR(quantitativerealtimePCR,qRT PCR) 采用 TRNzol 试剂提取细胞总 RNA, 通过 Nano Drop2000 检测 RNA 浓度后, 取 1μgmRNA 逆转录为 cdna PCR 反应程序 :95 预变性 3min,95 变性 10s,57 退火 30s,72 延伸 15s, 循环数 40 引物序列见表油红染色称取 0.5g 油红粉末溶于 100mL 异丙醇中, 配制为油红储存液储存液使用前, 以油红水为 3 2 的比例稀释, 再用中性滤纸过滤备用取出处理后的细胞, PBS 洗两遍后使用 4% 多聚甲醛固定 30min; 加入油红染液 500μL, 染色 15min; 再用苏木精复染 60s, PBS 洗去多余染液, 封片,10 光学显微镜下拍照油

2061 红定量时, 在油红染色结束后直接加入 100% 异丙醇溶液溶解脂滴, 用酶标仪 (SpectraMaxi3x) 进行油红量化检测 [ 检测 D(520) 值 ] 表 1 引物序列片段长度基因名引物序列 (5 3 ) 片段大小 (bp) LAMP3 PPARγ SCD1 CPT1A PGC1α GAPDH 上游 GGGAGCCTATTTGACCGTCT 170 下游

3 2061 红定量时, 在油红染色结束后直接加入 100% 异丙醇溶液溶解脂滴, 用酶标仪 (SpectraMaxi3x) 进行油红量化检测 [ 检测 D(520) 值 ] 表 1 引物序列片段长度基因名引物序列 (5 3 ) 片段大小 (bp) LAMP3 PPARγ SCD1 CPT1A PGC1α GAPDH 上游 GGGAGCCTATTTGACCGTCT 170 下游 AGGCTTGAAGTTGGACATCG 上游 CATAAAGTCCTTCCCGCTGA 158 下游 CATAAAGTCCTTCCCGCTGA 上游 GCACCACAGCATATCGCAAG 135 下游 TCCAGAGGAGGTACTACAAACCT 上游 GCACATCGTCGTGTACCATC 160 下游 AATAGGCCTGACGACACCTG 上游 TCCTTTGGGGTCTTTGAGAA 117 下游 GGCACGCAATCCTATTCATT 上游 CTCCTCCTGTTCGACAGTCAGC 130 下游 CCCAATACGACCAAATCCGTT 1.7 甘油三酯 ATP β 羟基丁酸检测甘油三酯检测, 使用裂解液冰上裂解细胞后,70 水浴加热 10min,2000r/min 离心 5min, 取 10μL 上清加入 190μL 工作液后用酶标仪 (550nm) 检测甘油三酯含量 ATP 检测时, 冰上裂解细胞, g 离心 5min, 取 20μL 上清加入 100μL 工作液中, 采用酶标仪测定细胞 ATP 浓度使用人 β 羟基丁酸 ELI SA 试剂盒检测细胞培养上清中 β 羟基丁酸含量 1.8 Westernblot 检测细胞转染质粒 48h 后收集细胞, 使用裂解液于冰上裂解细胞 30min 采用 BCA 法测定蛋白浓度, 按体积加入 5 上样缓冲液,100 水浴加热 5min, 再使用超声细胞破碎仪 (SJIALAB) 超声 2min(10% 超声强度 ) 破碎细胞, g 离心 10min 取上清 Western blot 具体操作如下 : 将提取蛋白进行聚丙烯酰胺凝胶电泳 (80~120V) 后, 转移至 PVDF 膜上, 封闭, 加一抗 (1 500~1 1000)4 孵育过夜, 加二抗 (1 3000) 37 孵育 2h, 显色检测并使用化学发光成像分析系统 (Vilber,FusionFX5S) 采集图片 1.9 统计学方法使用 SPSS13.0 软件分析, 计量资料数据以 x±s 珋表示, 两组间比较采用 t 检验, 检验水准 α= 结果 2.1 高脂处理后肝细胞 LAMP3 表达上调为了观察肝细胞在高脂条件下 LAMP3 在肝细胞中的表达变化, 我们用游离脂肪酸 0.4mmol/L 处理肝癌细胞系 (Huh7)24h, 采用 qrtpcr 及 Westernblot 法检测 Huh7 细胞中 LAMP3 表达变化结果显示高脂处理 Huh7 细胞后,LAMP3 表达显著上调 ( 图 1), 表明 LAMP3 在肝细胞脂代谢中可能具有调节作用 1: 对照组 (10% BSA);2:0.4mmol/LFFAs A:qRTPCR 检测 LAMP3mRNA 表达水平 ;B:Westernblot 检测 LAMP3 蛋白表达水平 a:p<0.05, 与对照组比较图 1 LAMP3 在高脂环境下的表达水平增高 2.2 过表达 LAMP3 促进 FFAs 诱导的肝细胞脂质沉积为了阐明 LAMP3 在肝细胞脂质代谢中的作用, Huh7 细胞分别在正常环境 (10% BSA) 及高脂环境下 (0.4mmol/LFFAs) 外源性过表达 LAMP3, 使用油红染色及甘油三酯试剂盒检测细胞内脂质变化结果显示, 在高脂环境下 (0.4mmol/LFFAs),Huh7 细胞过表达 LAMP324h, 收集细胞,Huh7 细胞中脂滴沉积显著增加 (P<0.05, 图 2A B), 细胞内甘油三酯含量也明显升高 (P<0.05, 图 2C), 说明过表达 LAMP3 促进 FFAs 诱导的肝细胞脂质沉积 2.3 LAMP3 对肝细胞脂质分解无明显作用由于肝细胞脂质沉积可由脂质合成增加和脂质分解减少引起, 所以我们在 Huh7 细胞中 LAMP3 表达后, 检测了脂质分解代谢产物 ATP 和 β 羟基丁酸的含量变化结果显示,Huh7 细胞转染 pcdna3.1 或 pcd NA3.1LAMP36h 后, 加 10% BSA 或 0.4mmol/L FFAs 处理 24h, 细胞中 ATP 和 β 羟基丁酸的含量均无显著变化 ( 图 3), 表明 LAMP3 对肝细胞脂质分解代谢无明显作用, 其过表达引起的细胞脂质沉积主要由脂质合成增加导致

２０６２第三军医大学学报２０１７３９２１ 4567&81! ｐａａｍｍｍｍｕｅｄｕｃｎ -&9:8!1!$;0%&!#$!# $%&% 12 4567&81! -&9:8 >!# $%& 1( ))*+,-..&/ # 13 1( 10 '()*+,$<)*+,)=% '( ))*+,-..&/! 0 2 ( Ａ油红染色检测细胞内脂滴沉积Ｂ油红定量分析Ｃ甘油三酯水平 > 4567&81!

4 ２０６２第三军医大学学报２０１７３９２１ 4567&81! ｐａａｍｍｍｍｕｅｄｕｃｎ -&9:8!1!$;0%&!#$!# $%&% &81! -&9:8 >!# $%& 1( ))*+,-..&/ # 13 1( 10 '()*+,$<)*+,)=% '( ))*+,-..&/! 0 2 ( Ａ油红染色检测细胞内脂滴沉积Ｂ油红定量分析Ｃ甘油三酯水平 > 4567&81! -&9:8!# $%& 1( ))*+,-..&/ $ ａＰ００５与１０ＢＳＡ比较图２ＬＡＭＰ３促进ＦＦＡｓ诱导的肝细胞脂质沉积,65!#7&'()&8$! 3$; <=, 2$ $% &&'()* ++,-!./01,293 *,452 法检测ＰＰＡＲγ和ＳＣＤ１的蛋白表达水平发现过表达ＬＡＭＰ３后二者的蛋白表达水平均显著升高图４Ｆ以上结果表明ＬＡＭＰ３主要调控脂质合成代谢３讨论 #$ 本研究初步探索ＬＡＭＰ３在肝细胞脂质代谢中的 3$ $ 图４ＡＦｑｐｃｒ筛选发现脂合成重要基因ＰＰＡＲγ和ＳＣＤ１的表达升高Ｐ００５图４ＢＣＬＡＭＰ３过表１α的表达对脂肪酸分解代谢重要基因ＣＰＴ１ＡＰＧＣ达无明显调控作用图４ＤＥ为了进一步验证ＬＡＭＰ３对脂合成基因的促进作用采用Ｗｅｓｅｒｎｂｌｏ # $ #$%&'(#%&'(:*)./01,2%3 *,452 3$; <=, $9 &&'()* ++,- ＡＡＴＰ含量Ｂ β 羟基丁酸含量图３ＬＡＭＰ３对肝细胞脂质分解的影响２４过表达ＬＡＭＰ３促进肝细胞脂合成基因表达为了进一步阐明ＬＡＭＰ３在脂质代谢过程中的作用我们在Ｈｕ７细胞过表达ＬＡＭＰ３后用ｑＲＴＰＣＲ检测Ｈｕ７细胞脂质合成与分解代谢过程中重要基因的表达水平变化Ｈｕ７细胞转染ｐｃＤＮＡ３１或ｐｃＤＮＡ３１ＬＡＭＰ３６后加入０４ｍｍｏｌＬＦＦＡｓ处理２４检测结果显示ｐｃＤＮＡ３１ＬＡＭＰ３转染组细胞０１中ＬＡＭＰ３ｍＲＮＡ和蛋白表达水平显著升高Ｐ０调控作用发现在高脂环境下肝细胞ＬＡＭＰ３的表达显著上调而上调ＬＡＭＰ３可促进肝细胞Ｈｕ７内脂质沉积进而发现上调ＬＡＭＰ３可显著促进脂合成基因ＰＰＡＲγ与ＳＣＤ１的表达然而ＬＡＭＰ３上调后Ｈｕ７１７１８细胞中脂质分解代谢产物ＡＴＰ和 β 羟基丁酸的含量无显著变化脂肪分解过程重要基因ＣＰＴ１ＡＰＧＣ１α的表达也无明显变化说明ＬＡＭＰ３可能主要通过促进脂肪合成从而促进肝细胞脂质沉积而对脂质分解代谢无明显影响目前关于ＬＡＭＰ３的研究较为单一主要集中在对肿瘤转移与预后的作用研究１４１９２０本研究发现ＬＡＭＰ３在促进肝细胞脂质合成代谢中具有重要的调控作用为该基因在未来的研究中开拓了新的方向同时也为肝脏脂代谢调控网络的相关研究提供新的思路

2063! 1:pcDNA3.1;2:LAMP3 A:qRTPCR 检测 LAMP3 过表达效率检测 ;B C:qRTPCR 检测脂肪合成代谢基因 PPARγ SCD1 表达 ; D E:qPCR 检查脂肪酸分解代谢基因 CPT1A PGC1α 的表达水平 ;F:Westernblot 检测 LAMP3 PPARγ SCD1 蛋白表达 a:p<0.05,b:p<0.01, 与 pcdna3.

5 2063! 1:pcDNA3.1;2:LAMP3 A:qRTPCR 检测 LAMP3 过表达效率检测 ;B C:qRTPCR 检测脂肪合成代谢基因 PPARγ SCD1 表达 ; D E:qPCR 检查脂肪酸分解代谢基因 CPT1A PGC1α 的表达水平 ;F:Westernblot 检测 LAMP3 PPARγ SCD1 蛋白表达 a:p<0.05,b:p<0.01, 与 pcdna3.1 比较图 4 过表达 LAMP3 促进脂合成相关基因表达本研究发现,LAMP3 上调脂质合成相关基因 (PPARγ 及 SCD1) 的表达其中 PPARγ 属于核受体超家族 PPARs 成员之一, 该家族主要调控糖脂代谢中多种基因的表达及细胞增殖分化等过程 PPARγ 主要调控脂肪细胞分化, 促进脂合成 [21] 研究发现, PPARγ 在 ob/ob 肥胖小鼠肝脏及肥胖 NAFLD 患者肝脏中表达升高 [22-23] PPARγ 基因缺陷的 ob/ob 小鼠肝脏脂滴与甘油三酯均较 AlbCre 转基因 ob/ob PPARγ(fl/fl) 小鼠明显降低 [24], 说明 PPARγ 在肝脏脂质合成中发挥重要作用另外,SCD1 参与单不饱和脂肪酸的合成, 在瘦素基因缺陷的 ob/ob 肥胖小鼠肝脏中 SCD1 表达显著升高,SCD1 基因突变的 ob/ob 小鼠与正常 ob/ob 小鼠相比体质量肝脏甘油三酯低密度脂蛋白均显著降低, 说明 SCD1 在肝脏脂合成中也具有重要调控作用 [25] 实验结果显示上调 LAMP3 能显著促进 PPARγ 与 SCD1 表达, 进一步证实 LAMP3 在调控脂质合成中的重要作用本研究目前未能对 LAMP3 促进肝细胞脂质合成的分子机制进行深入探索在 NAFLD 中, 肝细胞内质网应激也是促进疾病进展的重要因素 [26-27] 内质网应激调控的 PERK 信号通路在肥胖小鼠及肥胖者肝脏中显著激活 [28-29], 另外,PERK 磷酸化水平的升高可促进脂合成重要基因 FASN SCD1 ACL 等的表达, 促进脂质合成 [30] 近年有研究表明缺氧诱导内质网应激的激活可通过 PERK/eIF2a/ATF4 信号通路显著上调 LAMP3 表达 [16,31-32] 因此,LAMP3 促进肝细胞脂质合成的作用可能与内质网应激有关此外,Akt/ mtor 信号通路是促进肝细胞脂质合成的重要途径 [33], 使用雷帕霉素抑制 mtor 信号通路能明显改善高脂饮食诱导的小鼠肝脏脂质沉积 [34] 激活 Akt/ mtor 信号通路可显著促进脂合成基因 PPARγ 与 SCD1 的表达 [35-36], 而本研究发现 LAMP3 过表达在促进肝细胞脂质合成的同时, 也显著上调肝细胞 PPARγ 与 SCD1 表达 ( 图 4F) 那么 LAMP3 促进肝细胞脂质合成的作用是否与 Akt/mTOR 信号通路有关, 后续研究将进一步探讨总之, 本研究发现,LAMP3 基因表达升高可以促进肝细胞脂质合成, 但其具体的调控机制尚需进一步研究参考文献 : [1] WILLAMSCD,STENGELJ,ASIKEM I,etal.Prevalence ofnonalcoholicfatyliverdiseaseandnonalcoholicsteatohepa titisamongalargelymiddleagedpopulationutilizingultra soundandliverbiopsy:aprospectivestudy[j].gastroenter ology,2011,140(1): doi: /j.gastro.

6 2064 第三军医大学学报,2017,39(21) htp://aammt.tmmu.edu.cn [2] SCHREUDERTC,VERWERBJ,VANNIEUWKERKCM, etal.nonalcoholicfatyliverdisease:anoverviewofcurent insightsinpathogenesis,diagnosisandtreatment.worldjour nalofgastroenterology[j].wordjgastroenterol,2008,14 (16): DOI: /wjg [3] FUCHSCD,CLAUDELT,KUMARIP,etal.Absenceof adiposetriglyceridelipaseprotectsfrom hepaticendoplasmic reticulumstresinmice[j].hepatology,2012,56(1): doi: /hep [4] EKSTEDTM,HAGSTROM H,NASR P,etal.Fibrosis stageisthestrongestpredictorfordiseasespecificmortalityin NAFLDafterupto33yearsoffolowup[J].Hepatology, 2015,61(5): DOI: /hep [5] FuT,ZhaoX,EvansRM.Livercancerchecksinwhenbile acidclocksout[j].cancercel,2016,30(6): DOI: /j.ccel [6] WANGS,KAUFMANRJ.Howdoesproteinmisfoldingin theendoplasmicreticulumafectlipidmetabolismintheliver [J].CurOpinLipidol,2014,25(2): DOI: /mol [7]MAC,KESARWALAAH,EGGERTT,etal.NAFLDcau sesselectivecd4(+)tlymphocytelosandpromoteshepa tocarcinogenesis[j].nature,2016,531(7593): DOI: /nature [8]SINGHR,KAUSHIKS,WANGY,etal.Autophagyregu lateslipidmetabolism[j].nature,2009,458(7242): doi: /nature [9] SINHA RA,YOU SH,ZHOU J,etal.Thyroidhormone stimulateshepaticlipidcatabolismviaactivationofautophagy [J].JClinInvesti,2012,122(7): DOI: /JCI [10] JUX,YANY,LIUQ,etal.NeuraminidaseofinfluenzaA virusbindslysosomeasociatedmembraneproteinsdirectly andinduceslysosomerupture[j].jvirol,2015,89(20): DOI: /jvi [11] YASUDAYAMAHARAM,KUMES,YAMAHARAK,et al.lamp2deficiencypreventshighfatdietinducedobese diabetesviaenhancingenergyexpenditure[j]. Biochem BiophysResCommun,2015,465(2): DOI: /j.bbrc [12] TSENGYH,KEPY,LIAOCJ,etal.Chromosome19 openreadingframe80isupregulatedbythyroidhormoneand modulatesautophagyandlipidmetabolism[j].autophagy, 2014,10(1):20-31.DOI: /auto [13] WEICHERTN,KALTENBORN E, HECTOR A, etal. SomeABCA3mutationselevateERstresandinitiateapop tosisoflungepithelialcels[j].respiratoryresearch,2011, 12(1):4.DOI: / [14] LIAOX,CHENY,LIUD,etal.HighexpresionofLAMP3 isanovelbiomarkerofpoorprognosisinpatientswithesoph agealsquamouscelcarcinoma[j].intjmolsci,2015,16 (8): DOI: /ijms [15]KANAOH,ENOMOTOT,KIMURAT,etal.Overexpres sionoflamp3/tsc403/dclamppromotesmetastasisin uterinecervicalcancer[j].cancerres,2005,65(19): DOI: / CAN [16] MUJCICH,NAGELKERKEA,ROUSCHOPKM,etal. HypoxicactivationofthePERK/eIF2alphaarmoftheunfol dedproteinresponsepromotesmetastasisthroughinduction oflamp3[j].clinicalcancerresearch,2013,19(22): DOI: / CCR [17] WANG C,CHIY,LIJ,etal.FAM3A activatespi3k p110alpha/aktsignalingtoamelioratehepaticgluconeogene sisandlipogenesis[j].hepatology,2014,59(5): doi: /hep [18]ARSENIJEVICD,CAJOTJF,FELLAYB,etal.Unine phrectomyinducedlipolysisandlowgradeinflammationare mimickedbyunilateralrenaldenervation[j].frontphysiol, 2016,7:227.DOI: /fphys [19]LUJ,MAH,LIANS,etal.Clinicalsignificanceandprog nosticvalueoftheexpresionoflamp3inoralsquamous celcarcinoma[j].dismarkers,2017,2017: DOI: /2017/ [20] WANGD,CAOX,ZHANGY,etal.LAMP3expresion corelated with poorclinicaloutcome in human ovarian cancer[j]. TumourBiol,2017, 39(3): DOI: / [21]AHMADIANM,SUHJM,HAHN,etal.PPARγsigna lingandmetabolism:thegood,thebadandthefuture[j]. NatMed,2013,19(5): DOI: /nm [22] KANURIG,LANDMANNM,PRIEBSJ,etal.Moderate alcoholconsumptiondiminishesthedevelopmentofnonalco holicfatyliverdisease(nafld)inob/obmice[j].eurj Nutr,2016,55(3): DOI: /s [23] PETTINELLIP,VIDELA LA.UpregulationofPPARγ mrnaexpresionintheliverofobesepatients:anaddition alreinforcinglipogenicmechanism tosrebp1cinduction [J].JClinEndocrinolMetab,2011,96(5): DOI: /jc [24]MATSUSUEK,HALUZIKM,LAMBERTG,etal.Liver specificdisruptionofpparγinleptindeficientmiceim provesfatyliverbutaggravatesdiabeticphenotypes[j].j ClinInvest,2003,111(5): DOI: / JCI

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中草药

中草药致谢李沛赵继敏郑智敏江亚楠等病理生理学教研室老师在实验中给予的指导和帮助狄建彬顾振纶赵笑东钱培刚蒋小岗郭次仪中草药中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 41 卷第 8 期 10 年 8 月 1324 LDL C 非常明显升高 (