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小阙
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1 HEREDITAS (Beijing) 2010 年 ISSN 胡萝卜 (Daucus carota L.) 中主要胡萝卜素和番茄红素含量的 QTL 分析欧承刚, 邓波涛, 鲍生有, 赵志伟, 胡鸿, 庄飞云, 茅淑敏中国农业科学院蔬菜花卉研究所, 农业部园艺作物遗传改良重点开放实验室, 北京摘要 : 以高胡萝卜素自交系 P50006 和 HCM A.C. 为亲本构建的 F 2 群体为作图群体, 对胡萝卜中 α- 胡萝卜素 β- 胡萝卜素总胡萝卜素和番茄红素含量进行 QTL 定位及遗传分析结果表明,α β- 胡萝卜素总胡萝卜素和番茄红素含量的广义遗传力分别为和 0.93 遗传图谱包含 91 个 SRAP(Sequence-related amplified polymorphism) 标记, 分布于 9 个连锁群, 总长度 cm, 标记间平均距离 5.5 cm 除 α- 胡萝卜素含量外,β- 胡萝卜素总胡萝卜素和番茄红素含量分别检测到 1 个主效 QTL, 均为加性遗传效应, 分别解释表型变异为 12.79% 12.87% 和 14.61% 此外,β- 胡萝卜素和番茄红素含量还分别检测到 1 对上位性 QTL, 最大遗传效应分别为显性加性互作和显性显性互作, 分别解释表型变异为 15.1% 和 6.5% 文章中与 QTL 连锁的分子标记可用于高胡萝卜素番茄红素的种质筛选和聚合育种关键词 : 胡萝卜 ; 胡萝卜素 ; 番茄红素 ;QTL 分析 QTL mapping for contents of main carotenes and lycopene in carrot (Daucus carota L.) OU Cheng-Gang, DENG Bo-Tao, BAO Sheng-You, ZHAO Zhi-Wei, HU Hong, ZHUANG Fei-Yun, MAO Shu-Min Key Laboratory of Horticultural Crops Genetic Improvement, Ministry of Agriculture, Institute of Vegetables and Flowers, Chinese Academy of Agricultural Science, Beijing , China Abstract: An F 2 population derived from two carrot inbred lines, P50006 and HCM A.C. with high carotene accumulation, was developed and used to map and analyze quantitative trait locus (QTL) associated with the accumulation of α and β-carotene, total carotene and lycopene. Broad-sense heritabilities of these traits were 0.75, 0.50, 0.31, and 0.93, respectively. A genetic map with 91 SRAP (Sequence-related amplified polymorphism) markers was developed, which spanned cm in 9 linkage groups with a mean marker interval of 5.5 cm. Mixed-model-based composite interval mapping was performed to analyze QTL and epistasis effects. One major QTL each for β-carotene, total carotene and lycopene accumulation were detected which can explain 12.79%, 12.87%, and 14.61% of total phenotypic variations, respectively. Additive genetic variance was primarily responsible for genetic variability in all three major QTL. In addition, a pair of epistasis QTL for β-carotene and lycopene accumulation was detected, which were able to explain 15.1% and 6.5% of total phenotypic variation, respectively. The dominant additive and dominant dominant interaction variance were primary epistasis effect for β-carotene and lycopene. These SRAP markers linked to QTL could be used in selection or QTL pyramiding for high carotene and lycopene content in carrot breeding. Keywords: carrot; carotene; lycopene; QTL mapping 收稿日期 : ; 修回日期 : 基金项目 : 国家科技支撑项目 ( 编号 :2006BAD13B06), 农业部 948 项目 ( 编号 :2006-G13), 中央级公益性科研院所基本科研业务费专项 ( 编号 : ) 和公益性行业 ( 农业 ) 科研专项 ( 编号 : ) 资助 1

2 作者简介 : 欧承刚 (1979-), 男, 硕士, 助理研究员, 研究方向 : 胡萝卜遗传育种 Tel: ; ochengg@126.com 通讯作者 : 庄飞云 (1975-), 男, 博士, 副研究员, 研究方向 : 胡萝卜遗传育种 Tel: ; fy_zhuang@caas.net.cn 据世界卫生组织统计, 全世界有 118 个国家每年有 25~50 万儿童因为维生素 A 缺乏症而导致失明, 甚至夭折 [1], 迫切需要通过饮食增加人体维生素 A 源的摄入在众多蔬菜作物中, 以胡萝卜含有胡萝卜素为最高, 在美国, 人体摄入的维生素 A 中有 30% 源于胡萝卜 [2] 番茄红素是胡萝卜中另一类对人体有益的类胡萝卜素, 有预防前列腺疾病等功效 [3] 胡萝卜肉质根的颜色与其所富集的类胡萝卜素种类和数量相关, 受 Y Y 2 和 L 等基因控制, 其中 Y 2 基因可以抑制胡萝卜素的合成,L 基因促进番茄红素合成 [4~7] Santos 和 Simon [8] 利用低胡萝卜素品种 Brasilia 与高胡萝卜素品种 HCM A.C. 杂交构建 F 2 群体, 对类胡萝卜素合成路径中的产物进行 QTL 分析, 检测到个 QTL, 分别与 ζ- 胡萝卜素 α- 胡萝卜素 β- 胡萝卜素番茄红素八氢番茄红素合成相关, 主效 QTL 可解释的表型变异分别为 13.0% 10.2% 13.0% 7.2% [9] 10.2% 随后 Just 等将已知的 24 个编码类胡萝卜素生物合成酶基因中的 22 个定位在遗传图谱上, 其中那些与主效 QTL 相关联的酶基因可能是控制胡萝卜中类胡萝卜素合成的候选基因但关于高胡萝卜素含量材料之间的遗传研究尚未见报道本研究以高胡萝卜素含量亲本 P50006 和 HCM A.C. 配制的 F 2 群体为试材, 旨在探讨胡萝卜中 α β- 胡萝卜素总胡萝卜素和番茄红素等主要类胡萝卜素合成相关的 QTL 及其效应, 为筛选高 β- 胡萝卜素含量的优异种质以及培育高胡萝卜素新组合新品种提供依据 1 材料和方法 1.1 胡萝卜群体构建及性状测定以自交系 P50006 和 HCM A.C. 为亲本, 采用人工去雄杂交的方法, 构建 F 2 代群体 HCM A.C. 为美国威斯康辛大学 Philipp W. Simon 教授提供,P50006 为中国农业科学院蔬菜花卉研究所经过多年选育的高胡萝卜素自交系材料 2007 年 7 月下旬在中国农业科学院蔬菜花卉研究所试验农场, 将亲本和 F 2 代群体播种于露地, 按照常规方法进行田间管理,11 月中旬采收肉质根分别取亲本 5~10 株,F 2 群体 178 株, 将肉质根切片后真 [10] 空冷冻干燥 48 h, 每单株肉质根取干重 0.5 g, 采用 HPLC 法测定肉质根中 α β- 胡萝卜素和番茄红素的含量, 总胡萝卜素含量 = α- 胡萝卜素 + β- 胡萝卜素 1.2 SRAP 标记分析 [11] 从 F 2 群体中随机选取 140 个单株用于 QTL 分析, 参照 Boiteux 等方法, 取经过真空冷冻干燥后的新鲜嫩叶提取基因组 DNA 参照 Li 和 Quiros [12] 的方法设计 SRAP 引物和反应体系反应体系为 10 μl:1 μl 10 PCR buffer,0.9 μl Mg 2+ (25 mmol/l),0.8 μl dntp (2.5 mmol/l), 前引物和后引物各 0.6 μl (5 pmol/l),1 U Taq 酶,3 μl 模板 DNA (10 ng/μl), 不足部分用 ddh 2 O 扩增程序为:94 3 min;94 1 min, 35 1 min,72 1 min,5 个循环 ;94 1 min,50 1 min,72 1 min,35 个循环 ; 最后再 min, 4 保存 PCR 产物每管中加入 3 μl 上样缓冲液 (40% 蔗糖溶液 0.025% 溴酚蓝 ), 采用 6% 非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳, 恒压 160 V, 电泳时间 2 h 30 min 1.3 数据整理和 QTL 分析 [13] α β- 胡萝卜素总胡萝卜素和番茄红素含量用 SPSS 15.0 软件进行正态分布检测, 参照徐云碧等方法计算各性状的遗传力 SRAP 分子标记采用 JoinMap 4.0 软件构建遗传图谱,LOD 值为 3.0 到 8.0, 最大重组率为系统默认值 (0.45), 采用 Kosambi 函数计算遗传距离利用 QTLNetwork 2.0 软件, 采用基于混合线性模型的复合区间作图法 (Mixed-model-based composite interval mapping,mcim) 进行 QTL 分析以及上位性效应检测, 以 1 cm 的步长对全基因组进行 QTL 扫描, 利用置换测验 (Permutation test) 进行次重复, 估算全基因组范围内 P<0.05 的显著性阈值, 以此判断 QTL 的存在, 并以显著性最高位置作为 QTL 位置, 计算每个 QTL 的互作效应和可解释的表型变异值 [14] QTL 命名以性状英文缩写, 附属连锁群号及 QTL 顺序号表示 2 结果与分析 2.1 α β- 胡萝卜素总胡萝卜素和番茄红素含量的表型变异及遗传力分析 2

3 在 F 2 群体中,α- 胡萝卜素含量平均值与双亲值接近, 单株含量最高达 mg/kg( 干重 ) β- 胡萝卜素总胡萝卜素和番茄红素含量平均值均超过双亲值, 其中单株 β- 胡萝卜素含量最高达 mg/kg( 干重 ), 总胡萝卜素含量达 mg/kg( 干重 ), 番茄红素含量达 59.4 mg/kg( 干重 ) 正态分布检验表明 α β- 胡萝卜素总胡萝卜素和番茄红素含量在 F 2 群体中分离显著, 均表现出数量性状连续性分布的遗传特征其中,α β- 胡萝卜素和总胡萝卜素的峰度和偏度均接近于 0, 属于典型的正态分布 ; 番茄红素的偏度大于 2, 偏离正态分布, 这可能与群体中许多单株 (21.3%) 的番茄红素含量为 0 有关 ( 表 1) α β- 胡萝卜素总胡萝卜素和番茄红素含量的广义遗传力分别为和 0.93, 其中 α β- 胡萝卜素和番茄红素的广义遗传力均大于 0.50, 表明该性状在后代中的表型变异主要受亲本遗传效应的影响表 1 亲本及 F 2 群体间 α β- 胡萝卜素总胡萝卜素和番茄红素含量的变异 (mg/kg( 干重 )) 性状亲本平均值 F 2 群体 P50006 HCM A.C. 平均值最低值最高值峰度偏度 α- 胡萝卜素 403.0± ± ± β- 胡萝卜素 686.8± ± ± 总胡萝卜素 ± ± ± 番茄红素 0.4± ± ± SRAP 标记图谱构建用经过筛选的 82 对 SRAP 引物组合进行分析, 共扩增出 196 个多态性标记, 平均每个引物扩增多态性标记 2.4 个总共有 91 个标记分配到 9 个连锁群, 图谱总长度为 cm, 图谱平均间距为 5.5 cm( 图 1) 最长连锁群 LG1 上分布了 56 个标记, 跨度为 cm; 其他连锁群上分布标记为 3~9 个, 跨度 22.3 cm ~ 79.6 cm 2.3 主效 QTL 定位与分析利用置换测验 (Permutation test) 估算各性状全基因组范围内的显著性阈值, 除 α- 胡萝卜素外, 其他各性状分别检测到 1 个主效 QTL( 表 2) 与 β- 胡萝卜素和总胡萝卜素相关的 QTL 均位于连锁群 LG1 的标记 Me4/GA 上, 均以加性效应为主, 显著性区间范围为 61.5 ~ 63.0 cm 与 β- 胡萝卜素相关 QTL(bet1-1) 的加性效应为正值, 可解释表型变异为 12.79%, 说明后代该座位表现 P50006 基因型时, 会增加 β- 胡萝卜素含量与总胡萝卜素相关 QTL(Tca1-1) 的加性效应为负值, 可解释表型变异为 12.87%, 说明后代该座位表现 P50006 基因型时, 会降低总胡萝卜素含量与番茄红素相关的 QTL 位于连锁群 LG1 的标记 CuMe11/Em4-550 附近, 显著性区间范围为 79.8 ~ 81.7 cm, 加性效应为正值, 可解释表型变异为 14.61%, 说明后代该座位为亲本 HCM A.C. 基因型时, 增加番茄红素含量表 2 β- 胡萝卜素总胡萝卜素和番茄红素含量相关的主效 QTL 性状 QTL 连锁群图谱位置 (cm) a 标记间距 (cm) 范围 (cm) 加性效应 H 2 (a) b 显性效应 H 2 (d) b β- 胡萝卜素 bet Me4/GA 总胡萝卜素 Tca Me4/GA 番茄红素 lyc CuMe11/ Em 注 : a 标记为距 QTL 峰值距离最近的分子标记 ; b H 2 (a) 和 H 2 (d) 分别表示加性效应和显性效应可解释的表型变异 3

4 LG1 LG2 LG CuMe8/Em CoMe7/Em4-160 CuMe11/Em4-220 Me4/Em PM8/CoEm CoMe8/Em5-95 Me4/Em CoMe9/OD3-300 BMe12/K2-200 CuMe7/CoEm Me8/Em CuMe11/Em4-280 CuMe8/Em BMe10/CuEm BMe7/CoEm Te1/Em7-380 CuMe11/Em4-600 Me2/CoEm CoMe7/Em8-175 PM8/Em6-250 PM8/Em6-390 DC1/CoEm8-140 PM8/Em6-420 Te1/Em9-350 CuMe6/K2-150 Me4/GA Me1/Em4-170 BMe12/Em9-210 CuMe7/CoEm PM8/CoEm9-95 DC1/CoEm7-450 Me2/K2-800 DC1/CoEm7-270 Me1/Em4-320 BMe10/CuEm Me2/Em9-700 Me2/K2-250 Me2/Em9-650 PM8/Em6-230 Me2/CoEm Me6/GA DC1/Em6-420 Me8/Em Me6/K5-180 CuMe11/Em4-550 Te1/Em7-240 Me2/CoEm Me6/CoEm7-380 CuMe8/BEm CuMe6/K2-160 CuMe8/Em9-120 CuMe8/Em7-170 CuMe8/Em3-370 Me6/K5-380 Me7/CoEm bet1-2 bet1-1 Tca1-1 bet1-3 lyc1-1 lyc BMe10/CuEm Me5/SA BMe13/SA BMe10/CuEm LG4 0.0 DC1/CoEm lyc DC1/CoEm CuMe8/Em Me2/Em DC1/CoEm Me2/K BMe10/Em BMe11/Em Me2/Em9-420 LG6 0.0 Me6/CoEm CuMe10/CuEm PM8/Em Me7/Em3R PM8/CoEm LG9 0.0 CoMe9/Em Me5/CoEm Me8/Em Me4/Em LG5 0.0 CuMe11/BEm Te1/Em PM8/CoEm CoMe7/Em CoMe8/Em9-250 LG7 0.0 Me4/OD BMe9/CoEm Me2/Em9-160 LG8 0.0 BMe12/Em CuMe7/CoEm DC1/CoEm DC1/Em CuMe7/CoEm Me1/BEm β- 胡萝卜素主效 QTL β- 胡萝卜素上位性 QTL 总胡萝卜素主效 QTL 番茄红素主效 QTL 番茄红素上位性 QTL 显性加性互作加性加性互作显性显性互作图 1 与 β- 胡萝卜素总胡萝卜素和番茄红素含量相关的 QTL 在连锁图中的分布各连锁群左侧为连锁群长度 (cm), 右侧为标记座位名称 4

5 2.4 上位性 QTL 的检测在 β- 胡萝卜素和番茄红素中分别检测到 1 对具有上位性效应的 QTL( 表 3) β- 胡萝卜素的上位性 QTL 为 bet1-2 和 bet1-3, 位于连锁群 LG1 上, 以显性加性互作效应可解释的表型变异 (15.1%) 最大, 且大于 bet1-1 的加性效应 (12.79%), 说明在后代 β- 胡萝卜素的遗传中, 显性加性互作效应大于加性效应番茄红素的上位性 QTL 为 lyc1-2 和 lyc4-1, 分别位于连锁群 LG1 和 LG4 上, 以加性加性和显性显性互作效应为主, 其可解释的表型变异分别为 5.21% 和 6.50% 表 3 β- 胡萝卜素和番茄红素含量相关的上位性 QTL 分析性状 QTLi a 标记间距 (cm) 图谱位置 (cm) QTLj a 标记间距 (cm) 图谱位置 (cm) AA b H 2 (aa) c AD b H 2 (ad) c DA b H 2 (da) c DD b H 2 (dd) c β- 胡萝卜素 bet1-2 CuMe7/ CoEm bet1-3 DC1/ Em 番茄红素 lyc1-2 CuMe6/ K lyc4-1 DC1/ CoEm a i 和 j 被检测的两个 QTL; b AA AD DA DD 分别表示两个 QTL 间的加性加性互作效应加性显性互作效应显性加性互作效应显性显性互作效应 ; c H 2 (aa) H 2 (ad) H 2 (da) H 2 (dd) 分别表示 AA AD DA DD 的表型贡献率 3 讨论本研究通过对高胡萝卜素材料间杂交 F 2 代群体的 QTL 定位分析, 在 β- 胡萝卜素总胡萝卜素和番茄红素含量中分别检测到 1 个加性主效 QTL 此外,β- 胡萝卜素和番茄红素含量还分别检测到 1 对上位性 QTL, 但 QTL 总数少于 Santos 和 Simon [8] 的结果这可能与本研究采用单一 SRAP 标记构建的遗传图谱饱和度不高有关, 需要进一步利用生物信息学技术增加标记的种类和数量, 如 SSR SNP 类胡萝卜素合成酶基因 [9] [15] DcMarster 转座子等, 丰富胡萝卜遗传连锁图的饱和度, 从而提高与胡萝卜素和番茄红素含量相关 QTL 分析的准确性本研究发现控制 β- 胡萝卜素的 bet1-1 和控制总胡萝卜素的 Tca1-1 均位于相同的标记 (Me4/GA18-250) 和区间范围内, 可解释的表型变异分别为 12.79% 和 12.87% 类似的结果在 Santos 和 Simon [8] 的研究中也有报道, 控制 α β ζ- 胡萝卜素和番茄红素的多个 QTL 聚集在连锁群上一个 2 cm 的区间内, 这些 QTL 最多可解释 13% 的表型变异产生这种现象的一个原因是, 总胡萝卜素包括 α- 胡萝卜素 β- 胡萝卜素 ζ- 胡萝卜素等, 其中 β- 胡萝卜素是总胡萝卜素最主要的组成部分 ( 约占总胡萝卜素含量的 2/3), 所以控制 β- 胡萝卜素含量的 QTL 有可能同时影响总胡萝卜素含量 ; 另一个原因是, 在类胡萝卜素生物合成路径中八氢番茄红素是 α- 胡萝卜素 β- 胡萝卜素和 ζ- 胡萝卜素共同的前体物质, 而八氢番茄红素合成酶是抑制白色胡萝卜中类胡萝卜素合成的关键因素, 同时影响着 α- 胡萝卜素和 β- 胡萝卜素的生物合成 [16], 所以在遗传过程中胡萝卜中的各种胡萝卜素可能受一个共同基因控制, 因此本研究中控制 β- 胡萝卜素和总胡萝卜素含量的 QTL 定位于相同的位置上性状遗传存在等位基因间的互作和非等位基因间的互作, 上位性效应为非等位基因间的互作效应 [17], [18, 水稻研究显示上位性效应在数量性状遗传中具有十分重要的作用 19] 本研究利用基于混合线性模型的 [20] QTL 分析方法对胡萝卜中胡萝卜素含量的 QTL 进行上位性分析, 并检测到两对上位性 QTL,bet1-2 和 bet1-3 控制 β- 胡萝卜素的合成,lyc1-2 和 lyc4-1 控制番茄红素的合成虽然这两对座位本身不具有加性效应或显性效应, 但均参与了上位性效应, 因此这些座位可能是通过对其他非等位基因座位的修饰而起作用, 5

6 从而对性状遗传产生一定贡献 [21] 这也可能是导致 F 2 代群体的 α β- 胡萝卜素总胡萝卜素和番茄红素含量的平均值大于双亲, 其中 β- 胡萝卜素显著高于双亲平均值 2 倍还多由于基因的加性效应和基因间的互作效应可以被选择所固定, 所以在育种实践中对于特定的育种目标, 既要遗传变异丰富, 也要求基础群体具有较高的平均水平 [22] 因此, 本研究在一个具有超亲特性的分离群体中进行 QTL 分析, 更易检测到与高胡萝卜素含量紧密连锁的分子标记, 进而有望利用这些标记进行辅助选择参考文献 (References): [1] WHO. World Health Organization: Global prevalence of vitamin A deficiency. Micronutrient Deficiency Information System, MDIS Working Paper No [2] Simon PW. Genetic improvement of vegetable carotene content. In: Bills DD, Kung SD, eds. Biotechnology and nutrition: Proc. Third Int. Symp. Butterworth-Heinemann, Boston, 1992, [3] Giovannucci E, Ascherio A, Rimm EB, Stampfer MJ, Colditz GA, Willett WC. Intake of carotenoids and retinol in relation to risk of prostate cancer. J Natl Cancer Inst, 1995, 87(23): [4] Buishand JG, Gabelman WH. Investigations of color and carotenoid content in phloem and xylem of carrot roots (Daucus carota L.). Euphytica, 1979, 28(3): [5] Buishand JG, Gabelman WH. Studies on the inheritance of root color and carotenoid content in red yellow and red white crosses of carrot, Daucus carota L. Euphytica, 1980, 29(2): [6] Bradeen JM, Simon PW. Conversion of an AFLP fragment linked to the carrot Y2 locus to a simple, codominant, PCR-based marker form. Theor Appl Genet, 1998, 97(5-6): [7] Simon PW. Domestication, historical development, and modern breeding of carrot. Plant Breed Rev, 2000, 19: [8] Santos CAF, Simon PW. QTL analyses reveal clustered loci for accumulation of major provitamin A carotenes and lycopene in carrot roots. Mol Genet Genomics, 2002, 268(1): [9] Just BJ, Santos CAF, Fonseca MEN, Boiteux LS, Oloizia BB, Simon PW. Carotenoid biosynthesis structural genes in carrot (Daucus carota): isolation, sequence-characterization, single nucleotide polymorphism (SNP) markers and genome mapping. Theor Appl Genet, 2007, 114(4): [10] Santos CAF, Simon PW. Heritabilities and minimum gene number estimates of carrot carotenoids. Euphytica, 2006, 151(1): [11] Boiteux LS, Fonseca MEN, Simon PW. Effects of plant tissue and DNA purification methods on randomly amplified polymorphic DNA-based genetic fingerprinting analysis in carrot. J Am Soc Hort Sci, 1999, 124(1): [12] Li G, Quiros CF. Sequence-related amplified polymorphism (SRAP), a new marker system based on a simple PCR reaction: its application to mapping and gene tagging in Brassica. Theor Appl Genet, 2001, 103(2): [13] 徐云碧, 朱立煌. 分子数量遗传学. 北京 : 中国农业出版社, 1994, [14] Yang J, Zhu J. Methods for predicting superior genotypes under multiple environments based on QTL effects. Theor Appl Genet, 2005, 110(7): [15] Grzebelus D, Jagosz B, Simon PW. The DcMaster transposon display maps polymorphic insertion sites in the carrot (Daucus carota L.) genome. Gene, 2007, 390(1-2): [16] Santos CAF, Senalik D, Simon PW. Path analysis suggests phytoene accumulation is the key step limiting the carotenoid pathway in white carrot roots. Genet Mol Biol, 2005, 28(2): [17] 朱军. 遗传模型分析方法. 北京 : 中国农业出版社 [18] Zhang WP, Shen XY, Wu P, Hu B, Liao XY. QTLs and epistasis for seminal root length under a different water supply in rice (Oryza sativa L.). Theor Appl Genet, 2001, 103(1): [19] Cao G Q, Zhu J, He CX, Gao YM, Yan JQ, Wu P. Impacts of epistasis and QTL environment interaction for developmental behavior of plant height in rice (Oryza sativa L.). Theor Appl Genet, 2001, 103(1): [20] Wang DL, Zhu J, Li ZK, Paterson AH. Mapping QTLs with epistatic effects and QTL environment interaction by mixed linear model approaches. Theor Appl Genet, 1999, 99(7-8): [21] 曹立勇, 朱军, 任立飞, 赵松涛, 颜启传. 水稻幼苗活力相关性状的 QTL 定位和上位性分析. 作物学报, 2002, 28(6): 6

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AFLP % 1. 1 DNA 5 RAPD DNA 0. 1g % ~ ph 6 10 DNA 9 40μl TE SSR STS 20ng /L

AFLP % 1. 1 DNA 5 RAPD DNA 0. 1g % ~ ph 6 10 DNA 9 40μl TE SSR STS 20ng /L 2012 13 2 201-206 Journal of Plant Genetic Resources / 071001 41 SSR 21 SSR 41 52 2 ~ 4 2. 5 Shannon 0. 21 ~ 1. 40 0. 73 5. 54 3 7 9 13. 16% ~ 186. 49% 5. 48 6 11 SSR Genetic Diversity of Peanut Arachis