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1 第 34 卷第 12 期 2017 年 12 月 新乡医学院学报 JournalofXinxiangMedicalUniversity Vol.34 No.12 Dec 欁欁 本文引用 : 程晨, 刘丽楠, 王静, 等. 糖尿病大鼠膀胱组织中神经生长因子表达与膀胱结构改变和尿流动力学变化的关系 [J]. 新乡医学院学报,2017,34(12): DOI: /xxyxyxb 糖尿病大鼠膀胱组织中神经生长因子表达与膀胱结构改变和尿流动力学变化的关系 欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁 基础研究 程晨 1, 刘丽楠 2, 王静 1, 安芳 1 3, 靳秋月 (1. 武警后勤学院附属医院干部病房, 天津 ;2. 武警后勤学院附属医院内分泌科, 天津 ;3. 武警后勤学院附属医院生化教研室, 天津 ) 摘要 : 目的研究糖尿病大鼠膀胱组织中神经生长因子 (NGF) 的表达与膀胱结构改变和尿流动力学变化的关系 方法选择 Sprague Dawley 大鼠 63 只随机分为糖尿病组 33 只和对照组 30 只 糖尿病组大鼠尾静脉注射链脲佐菌素 (STZ) 制作糖尿病大鼠模型, 对照组大鼠尾静脉注射等量柠檬酸缓冲液 应用代谢笼检测 2 组大鼠 24h 尿量, Medlab 生物信号采集处理系统检测膀胱功能,Westernblot 法检测大鼠膀胱组织中 NGF 表达, 并利用光学显微镜及透射电镜观察膀胱结构的变化 结果糖尿病大鼠模型制备成功后 周, 糖尿病组大鼠血糖较对照组显著升高, 体质量较对照组显著下降 (P<0.05),24h 尿量较对照组显著增多 (P<0.05); 尿流动力学检查显示, 糖尿病组大鼠膀胱阈容量 残余尿量及膀胱顺应性显著增加, 最大膀胱内压显著降低, 并呈时间依赖性 (P<0.05) Westernblot 结果显示, 糖尿病组大鼠膀胱组织中 NGF 表达较对照组显著下降 (P<0.05), 且随着病程延长,NGF 表达逐渐降低 苏木精 伊红染色结果显示, 光镜下糖尿病组大鼠膀胱平滑肌肥大, 形态多样, 排列紊乱疏松, 可见肌束断裂, 随着病程延长, 变化更加明显 ; 对照组大鼠膀胱平滑肌肌束排列整齐, 形态一致, 肌束间结构紧密 电镜下糖尿病组大鼠膀胱平滑肌细胞的细胞核染色质出现边集, 核周隙不清, 线粒体肿胀 ; 对照组大鼠膀胱细胞核染色质均匀, 核周隙清晰, 线粒体膜无破裂 无肿胀 结论糖尿病大鼠膀胱组织中 NGF 表达下降诱导膀胱出现收缩功能减弱及逼尿肌形态学改变, 并呈现时间依赖性 关键词 : 糖尿病 ; 糖尿病性膀胱病 ; 神经生长因子 ; 尿流动力学中图分类号 :R578.2;R694 文献标志码 :A 文章编号 : (2017) Relationshipbetweentheexpresionofnervegrowthfactorandthechangesofbladderstructureand urodynamicsindiabetesmelitusofrats CHENGChen 1,LIULi nan 2,WANGJing 1,ANFang 1,JINQiu yue 3 (1.DepartmentofCadreWard,theAfiliatedHospitalofLogisticsUniversityofPeople sarmedpoliceforce,tianjin300162, China;2.DepartmentofEndocrinology,theAfiliatedHospitalofLogisticsUniversityofPeople sarmedpoliceforce,tianjin ,China;3.DepartmentofBiochemistry,theAfiliatedHospitalofLogisticsUniversityofPeople sarmedpoliceforce, Tianjin300162,China) Abstract: Objective Toexploretherelationshipbetweentheexpresionofnervegrowthfactor(NGF)inbladdertis sueofsprague Dawleyratswithdiabetesmelitusandthechangesofbladderstructureandurodynamics.Methods Sixty three Sprague Dawleyratswereselectedanddividedintodiabeticgroup(n=33)andcontrolgroup(n=30).Thediabetesmelitus modelwasmadebyinjectingofsteptozotocin(stz)intothetailveinofratsinthediabeticgroup;theratsincontrolgroup wereinjectedthesamevolumeofcitratebufersolution.the24hurinaryvolumewasdetectedbyusingmetaboliccage;the functionofbladderwasdetectedbyusingmedlabbio signalcolectionsystem;theexpresionofngfinthebladdertisueof ratswasdetectedbywesternblot;thebladderstructurewasobservedbyusinglightmicroscopeandtransmisionelectronmi croscope(tem).results Four,eightandtwelveweeksafterthesuccesofdiabeticratmodel,thelevelofbloodglucoseof ratsindiabeticgroupwassignificantlyhigherthanthoseinthecontrolgroup(p<0.05);thebodyweightofratsindiabetic groupwassignificantlylowerthanthatinthecontrolgroup(p<0.05).the24hurinaryvolumeofratsindiabeticgroupwas significantlyincreasedcomparedwithcontrolgroup(p<0 05).Themaximumcapacityofbladderandresidualurinevolume DOI: /xxyxyxb 收稿日期 : 基金项目 : 武警后勤学院附属医院面上项目 ( 编号 :FYM201428) 作者简介 : 程晨 (1972-), 女, 山西晋城人, 博士研究生在读, 副主任医师, 主要从事老年糖尿病诊治及并发症防治 通信作者 : 刘丽楠 (1976-), 女, 黑龙江哈尔滨人, 硕士, 主治医师, 主要从事糖尿病诊断与治疗 ;E mail:liulinandoctor@163.com

2 1054 新乡医学院学报 htp:// 年第 34 卷 ofbladderandelasticityofbladderofratsindiabeticgroupweresignificantlyhigherthanthoseinthecontrolgroup(p< 0 05);themaximum bladderpresureofratsindiabeticgroupwassignificantlylowerthanthatinthecontrolgroup(p< 0 05);andthechangesofalaboveindexesofratsindiabeticgroupweretime dependent(p<0.05).theexpresionofngf inbladdertisuesofratsindiabeticgroupwassignificantlylowerthanthatinthecontrolgroup(p<0.05),andthechangeof NGFexpresionindiabeticgroupwastime dependent(p<0.05).indiabeticgroup,thebladdersmoothmusclewashyper trophic,theorganizationofsmoothmusclewasdiverseandlose,andthemusclebundlefracturewasobserved;incontrolgroup, thebladdersmoothmusclearangedorderly,andtheshapewasconsistent,thestructureoffasciclewascompact.thecondensa tionandmarginationofnuclearchromatinandmitochondriaswelingwereobservedindiabeticgroup;whilethebladdertisues incontrolgroupshowedhomogeneousnuclearandmitochondriawithoutfractureandsweling.conclusion Thedecreaseof theexpresionofngfinbladdertisuesofdiabeticratscandecreasethesystolicfunctionofbladderandchangethemorpholo gyofdetrusorandthesechangesshowatimedependence. Keywords: diabetes;diabeticcystopathy;nervegrowthfactor;urodynamics 糖尿病性膀胱病 (diabeticcystopathy,dc) 又称糖尿病神经源性膀胱 (diabeticneurogenicbladder, DNB), 是糖尿病患者的常见慢性并发症之一, 也是糖尿病周围神经病变在膀胱的表现, 其症状主要表现为排尿量增加 排尿困难及残尿量增多, 甚至出现尿潴留, 晚期可能出现尿路感染 肾积水 肾功能损害 肾衰竭等严重并发症 [1] 随着糖尿病发病率的升高,DC 对人们健康的影响日益显著, 该病虽然不影响患者的寿命, 但严重影响患者的生活质量 [2] 研究发现, 神经生长因子 (nervegrowthfactor,ngf) 在 DC 的发生 发展过程中起重要作用 [3] 本研究通过检测糖尿病大鼠膀胱组织中 NGF 表达水平 尿流动力学改变及膀胱结构变化, 探讨 NGF 及膀胱结构改变在糖尿病膀胱病变发生 发展过程中的作用 1 材料与方法 1.1 实验动物及分组健康清洁级 Sprague Dawley 雄性大鼠 63 只, 体质量 220~260g, 购于中国食品药品检定研究所 [ 许可证号 :SCXK( 京 ) ], 饲养于中国医学科学院生物工程医学研究所动物清洁实验室 适应性喂养 1 周后, 将大鼠随机分为对照组 30 只和糖尿病组 33 只 1.2 仪器与试剂小动物新陈代谢系统 ( 代谢笼 ) 购自美国 Columbus 公司,Medlab 生物信号采集处理系统购自南京美易公司,H2600 型透射电子显微镜 (transmisionelectronmicroscope,tem) 购自日本日立公司, 光学显微镜购自日本 OLYMPUS 公司, 链脲佐菌素 (streptozotocin,stz) 购自美国 Sigma 公司 ; 苏木精 伊红 (hematoxylin eosin,he) 染色试剂盒 放射免疫沉淀法 (radioimmunoprecipitationasay,ripa) 裂解液 磷酸盐缓冲液 (phosphatebuferedsaline, PBS) 增强化学发光 (enhancedchemicallumines cence,ecl) 试剂 二辛可宁酸 (bicinchoninincacid, BCA) 均购自康为世纪生物科技有限公司, 硝酸纤维素膜购自美国 GE 公司, 甘油醛 3 磷酸脱氢酶 (glyc eraldehyde e phosphatedehydrogenase,gapdh) 蛋白抗体购自美国 Abmart 公司,NGFβ 一抗购自英国 Abcam 公司, 辣根过氧化物酶标记的鼠抗兔二抗购自美国 KPL 公司 1.3 动物模型制备糖尿病组大鼠禁食 12h 后, 尾静脉注射 STZ( 枸橼酸钠 - 柠檬酸缓冲液配制, ph4.2~4.5)45mg kg -1, 制造糖尿病大鼠模型, 注射 72h 后使用血糖仪测定尾静脉血糖, 血糖 > 16.7mmol L -1 表示造模成功 对照组大鼠禁食 12h 后尾静脉注射等量的柠檬酸缓冲液 糖尿病组大鼠注射 STZ72h 后有 30 只造模成功, 死亡 2 只, 血糖 <16.7mmol L -1 剔除 1 只, 造模成功率 90.91%(30/33); 对照组 30 只大鼠均未出现死亡 h 尿量测定在造模成功后 周 3 个时间点, 各抽取糖尿病组及对照组中 10 只大鼠, 测体质量后, 分别放至代谢笼内, 收集检测 24h 尿量 1.5 尿流动力学测定收集检测 24h 尿量后, 将该批大鼠给予水合氯醛 (200mg kg -1 ) 腹腔注射使大鼠处于浅麻醉状态, 以免麻醉影响大鼠的排尿功能, 仰卧位固定大鼠, 采用耻骨上缘纵向切口, 充分暴露膀胱, 为避免大鼠腹压影响, 将膀胱置于切口外 使用 4 号留置针分别于膀胱顶部穿刺入膀胱, 连接三通管并用丝线固定, 一个留置针与微量灌注泵相连, 用生理盐水以 0.2mL min -1 的速度进行膀胱灌注, 另一个留置针连接压力换能器, 并通过 Medlab 生物信号采集处理系统进行膀胱压测定, 测定指标包括膀胱阈容量 最大膀胱内压 残余尿量和膀胱顺应性, 膀胱顺应性 = 膀胱阈容量 / 最大膀胱内压 1.6 光学显微镜下观察膀胱组织结构检测尿流动力学后, 处死大鼠, 取其膀胱体部组织, 切成

3 第 12 期程晨, 等 : 糖尿病大鼠膀胱组织中神经生长因子表达与膀胱结构改变和尿流动力学变化的关系 mm 3 组织块, 于体积分数 10% 甲醛溶液中固定, 经脱水 透明 浸润 石蜡包埋 切片后制成 5μm 厚的切片, 再经烤片 脱蜡 HE 染色 脱水 封片等操作后完成制片 在光学显微镜下观察膀胱结构 1.7 TEM 下观察膀胱组织超微结构另取上述处死大鼠的膀胱体部组织, 切成 1mm 3 组织块, 置于体积分数 4% 戊二醛固定, 经过 PBS 溶液漂洗 脱水 切片 柠檬酸铅染色后, 制成 500~700nm 超薄切片, 使用 TEM 观察膀胱组织超微结构 1.8 Westernblot 法检测大鼠膀胱组织中 NGF 表达另取上述处死大鼠的膀胱组织 100mg, 剪碎后置于 RIPA 组织裂解液中使用匀浆器匀浆, 匀浆过程均在冰上操作 将膀胱组织匀浆置于 4 离心机 12000r min -1 离心 20min,BCA 法测定蛋白浓度, 将各组蛋白浓度调至同一水平, 配制质量分数 10% 分离胶及质量分数 4.0% 的浓缩胶, 蛋白加热变性后每孔加入 60μg, 上样后浓缩胶与分离胶分别采用 V 电压进行电泳, 电泳后 200mA 湿转至硝酸纤维素膜上, 体积分数 5% 脱脂牛奶封闭过夜后, 一抗 NGFβ(1 500, 兔多克隆 IgG) 室温孵育 2h, 洗膜, 辣根过氧化物酶标记的鼠抗兔二抗 (1 1000) 室温孵育 1.5h, 洗膜, 新鲜配制 ECL 发光液, 均匀覆盖于膜上, 暗室曝光显影, 使用凝胶成像分析系统分析图像, 以待测蛋白与相应内参的吸光度比值计算相对系数 1.9 统计学处理应用 SPSS19.0 统计软件进行统计分析, 计量资料以均数 ± 标准差 ( x±s) 珋表示,2 组间数据比较采用 t 检验, 多组间数据比较采用方差分析,P<0.05 为差异有统计学意义 2 结果 组大鼠体质量 血糖比较结果见表 1 2 造模前, 对照组大鼠体质量为 (220.0±12.3)g, 糖尿病组大鼠体质量为 (223.0±10.1)g,2 组大鼠造模前体质量比较差异无统计学意义 (P>0.05) 造模成功后 周, 糖尿病组大鼠各时间点的体质量均显著低于对照组, 差异有统计学意义 (P< 0 05) 对照组大鼠的各时间点体质量两两比较差异无统计学意义 (P>0.05), 糖尿病组大鼠各时间点的体质量两两比较呈逐渐下降趋势, 差异有统计学意义 (P<0.05) 造模前, 对照组大鼠血糖为 (6 3±0.7)mmol L -1, 糖尿病组大鼠血糖为 (5.9±0.4)mmol L -1,2 组大鼠造模前血糖比较差异无统计学意义 (P>0.05) 造模成功后 周, 糖尿病组大鼠各时间点的血糖均高于对照组, 差 异有统计学意义 (P<0.05) 对照组 糖尿病组大 鼠各时间点的血糖在组内两两比较差异均无统计学 意义 (P>0.05) 表 1 2 组大鼠各时间点体质量变化 Tab.1 Changesofbodyweightofratsinthetwogroupsat eachtimepoint 体质量 /g 对照组 ± ± ±8.7 糖尿病组 ±36.4 a 253.8±10.2 ab 189.4±13.9 abc 注 : 与对照组比较 a P<0.05; 与 4 周时比较 b P<0.05; 与 8 周时 比较 c P<0.05 表 2 2 组大鼠各时间点血糖变化 Tab.2 Changesofbloodglucoseofratsinthetwogroups ateachtimepoint 血糖 /(mmol L -1 ) 对照组 ± ± ±0.4 糖尿病组 ±1.8 a 19.1±2.3 a 20.6±1.6 a 注 : 与对照组比较 a P< 组大鼠 24h 尿量比较 结果见表 3 造模 成功后 周, 糖尿病组大鼠 24h 尿量均较对 照组对应时间点显著增多, 差异有统计学意义 (P< 0.05); 糖尿病组 对照组大鼠组内各时间点 24h 尿 量比较差异均无统计学意义 (P>0.05) 表 3 2 组大鼠各时间点 24h 尿量变化 Tab.3 Changesof24hurinaryvolumeofratsinthetwo groupsateachtimepoint 24h 尿量 /ml 对照组 ± ± ±2.9 糖尿病组 ±12.0 a 208.8±15.3 a 221.4±13.2 a 注 : 与对照组比较 a P< 组大鼠尿流动力学比较结果见表 4 糖尿病组大鼠造模成功后 周尿流动力学中膀胱阈容量 残余尿量及膀胱顺应性较对照组显著增加, 最大膀胱内压显著降低, 差异均有统计学意义 (P< 0.05), 且糖尿病组大鼠随着病程的延长, 该变化进一步加重, 各时间点之间比较差异均有统计学意义 (P<0.05) 组大鼠膀胱组织中 NGF 表达比较结果见图 1 造模成功后 周, 糖尿病组大鼠膀胱组织 NGF 表达分别为 0.342± ± ±0.050, 较各对应时间点对照组的 0.718± ± ±0.046 均显著降低, 差异有统计学意义 (P<0.05), 且随病程延长, 糖尿病组大鼠膀胱中 NGF 表达水平进一步降低, 差异有统计学意义 (P<0.05)

4 1056 新乡医学院学报 htp:// 年第 34 卷 表 4 2 组大鼠各时间点尿流动力学变化 Tab.4 Changesofurodynamicsofratsinthetwogroupsateachtimepoint ( 珔 x±s) 膀胱阈容量 /ml 最大膀胱内压 /cmh 2 O 残余尿量 /ml 膀胱顺应性 /(ml cmh 2 O -1 ) 对照组 4 周 ± ± ± ± 周 ± ± ± ± 周 ± ± ± ±0.003 糖尿病组 4 周 ±0.6 a 55.0±9.6 a 0.94±0.17 a 0.038±0.003 a 8 周 ±1.1 ab 46.6±12.1 ab 1.96±0.31 ab 0.105±0.005 ab 12 周 ±1.7 abc 35.4±9.2 abc 2.86±0.23 abc 0.201±0.004 abc 注 : 与对照组比较 a P<0.05; 与 4 周时比较 b P<0.05; 与 8 周时比较 c P<0.05;1cmH 2 O=0.098kPa 突起不明显, 细胞间隙内间质均匀并有少量的胶原纤维 ; 糖尿病组大鼠膀胱平滑肌形态不一致, 排列紊乱, 细胞核染色质出现边集, 核周隙不清, 甚至发生核固缩, 线粒体肿胀, 嵴稀疏, 部分细胞线粒体消失, 细胞膜突起明显, 细胞间隙不均匀并有大量的胶原纤维, 且随病程延长, 逐渐加重 图 1 2 组大鼠不同时间点膀胱中 NGF 表达比较 Fig.1 ComparisonofNGFexpresionofratsbetweenthe twogroupsateachtimepoint 组大鼠光学显微镜下膀胱结构变化结果见图 2 对照组大鼠光镜下可见膀胱平滑肌横断及纵行切断的肌束排列整齐, 形态一致, 肌束间结构紧密 ; 糖尿病组大鼠光镜下可见膀胱平滑肌肥大, 形态多样, 排列紊乱疏松, 可见肌束断裂, 肌束间可见炎性细胞,8 12 周时更加明显 A: 对照组 ;B: 糖尿病组 4 周 ;C: 糖尿病组 8 周 :D: 糖尿病组 12 周 图 3 2 组大鼠膀胱超微结构 (TEM, 12000) Fig.3 Ultrastructureofbladderofratsinthetwogroups (TEM, 12000) 3 讨论 A: 对照组 ;B: 糖尿病组 4 周 ;C: 糖尿病组 8 周 :D: 糖尿病组 12 周 图 2 2 组大鼠光镜下膀胱结构 (HE 染色, 40) Fig.2 Bladderstructureofratsunderlightmicroscopein thetwogroups(hestaining, 40) 组大鼠逼尿肌超微结构变化结果见图 3 对照组大鼠膀胱平滑肌肌形态一致, 细胞核染色质均匀, 核周隙清晰, 线粒体膜无破裂无肿胀, 细胞膜 DNB 的发病机制仍未完全明确, 目前认为, 糖尿病周围神经病变在膀胱的临床表现既可以表现出膀胱舒张功能下降, 又可出现逼尿肌功能受损, 即膀胱最大收缩力和持续收缩力下降 DNB 最常见的症状是膀胱感觉功能下降, 膀胱容积增大, 排尿期膀胱收缩力降低, 残余尿量增多, 膀胱顺应性增加, 在疾病晚期更为明显 [4] 研究表明, 膀胱逼尿肌功能损害的主要发病机制包括肌源性损害 神经源性损

5 第 12 期程晨, 等 : 糖尿病大鼠膀胱组织中神经生长因子表达与膀胱结构改变和尿流动力学变化的关系 1057 害及血管源性损害等 [5] 虽然糖尿病周围神经病变机制复杂, 但目前普遍认为 NGF 水平的改变是糖尿病神经病变的主要发病机制之一 NGF 是神经营养因子家族中的一类生长因子, 主要存在于交感神经或部分感觉神经所分布的靶器官内, 如虹膜 心脏 下颌下腺 皮肤 坐骨神经等组织, 此外,NGF 在膀胱 睾丸 肝脏 骨骼肌等组织中也有少量分布 NGF 在神经细胞生长发育中起到重要作用, 对神经具有保护 修复作用, 并参与神经细胞再生 [6] NGF 由 α β γ3 个亚基组成,β 亚基是 NGF 的活性区域,NGF 通过与 2 种受体即高亲和力受体 (TrKA) 和低亲和力受体 (p75) 结合而发挥其生物学作用 [7 8] 关于 NGF 与糖尿病神经病变之间关系的研究表明, 无论是糖尿病患者还是糖尿病动物模型,NGF 在多种组织中特别是膀胱中均表达下降 [9 10] NGF 在膀胱逼尿肌中含量丰富, 对维持神经生长发育和神经功能有重要作用, 本研究利用 STZ 成功诱导糖尿病大鼠模型, 利用 Westernblot 法检测发现, 糖尿病大鼠膀胱组织中 NGF 蛋白表达量显著低于对照组, 并呈时间依赖性显著减少 ; 尿流动力学检查发现, 糖尿病大鼠膀胱最大容量 残余尿量及膀胱顺应性明显增加, 最大膀胱内压显著降低, 并呈时间依赖性 ; 进一步说明膀胱组织中 NGF 表达在维持膀胱功能中起重要作用 随着糖尿病病程进展, 糖尿病患者的膀胱出现一系列形态学改变,DC 早期可见膀胱逼尿肌细胞代偿性肥厚, 间质和胶原增多 [11] 本研究发现, 糖尿病大鼠膀胱逼尿肌肌束排列紊乱, 形态多样, 结构松散, 肌束有断裂, 且随病程的延长上述表现越明显 这种形态学改变必定导致膀胱逼尿肌功能受损, 也与本研究尿动力学观察结果相符 逼尿肌的收缩功能与肌细胞的能量代谢密切相 [12] 关,LEIRIA 等通过对糖尿病大鼠膀胱的超微结构研究发现, 糖尿病大鼠逼尿肌细胞呈肿胀状态, 其间可见炎性细胞, 并随病程延长呈加重趋势, 表现为线粒体内膜破坏, 部分线粒体呈空泡状, 认为这种改变导致了膀胱逼尿肌细胞能量代谢障碍, 出现膀胱功能障碍 本研究通过透射电镜观察糖尿病大鼠膀胱结构发现, 逼尿肌形态多样, 排列紊乱, 细胞膜形成突起, 细胞间间隙不均匀, 有大量胶原纤维, 细胞内线粒体肿胀, 嵴稀疏, 有的细胞线粒体消失, 且这种表现随病程进展逐渐加重 逼尿肌超微结构改变进一步说明膀胱逼尿肌功能损害与逼尿肌能量代谢 改变及肌细胞形态改变关系密切 综上所述, 糖尿病大鼠出现逼尿肌形态学改变 膀胱内 NGF 表达下降及膀胱收缩功能障碍, 并呈时间依赖性, 说明 NGF 表达下降及逼尿肌形态学改变在 DC 的发生 发展中起重要作用 本研究为进一步探索治疗 DC 的新方法提供新的方向 参考文献 : [1] YOONS,KIM J,MUSENG,etal.Prefronto temporalwhitemater microstructuralalterations20yearsafterthediagnosisoftype1di abetesmelitus[j].pediatrdiabetes,2017,35(suppl1):s64 S71. [2] DISTEFANOG,LACESAS,LEONEC,etal.Diagnosticaccuracy oflaser evokedpotentialsindiabeticneuropathy[j].pain,2017, 158(6): [3] JIZH,LIUZJ,LIUZT,etal.Diphenyleneiodonium mitigates bupivacaine inducedsciaticnervedamageinadiabeticneuropathy ratmodelbyatenuatingoxidativestres[j].anesthanalg,2017, 125(2): [4] LINTL,CHENGD,CHENYC,etal.Agingandrecurenturina rytractinfectionsareasociatedwithbladderdysfunctionintype2 diabetes[j].taiwanjobstetgynecol,2012,51(3): [5] 曹萌, 王涛, 陈雪辉, 等. 硫辛酸治疗糖尿病神经源性膀胱疗效观察 [J]. 新乡医学院学报,2014,31(3): [6] LIR,MAJ,WUY,etal.DualdeliveryofNGFandbFGFcoacer vateramelioratesdiabeticperipheralneuropathy via inhibiting schwanncelsapoptosis[j].intjbiolsci,2017,13(5): [7] WEINAJ.Nervegrowthfactor(NGF):apotentialurinarybiomar kerforoveractivebladdersyndrome[j].jurol,2014,192(4): [8] HUODS,ZHANGM,CAIZP,etal.Theroleofnervegrowthfac toringinsenosiderg1 inducedregenerationofinjuredratsciatic nerve[j].jtoxicolenvironhealtha,2015,78(21/22): [9] CHENZW,WANGH P,YUANFM,etal.Releasingofherpes simplexviruscaryingngfinsubarachnoidspacepromotesthe functionalrepairinspinalcordinjuredrats[j].curgenether, 2016,16(4): [10] MAURUCE,GUINET LACOSTEA,FALCOUL,etal.Nocturnal urinarydisordersandmultiplesclerosis:clinicalandurodynamic studyof309patients[j].jurol,2017,197(2): [11] 郭学敬, 郭跃先, 白艳, 等. 糖尿病大鼠治疗后膀胱和腰骶背根神经节中神经生长因子的表达及超微结构研究 [J]. 现代泌尿外科杂志,2012,17(1): [12] LEIRIALO,MONICAFZ,CARVALHOIFD,etal.Functional, morphologicalandmolecularcharacterizationofbladderdysfunc tioninstreptozotocin induceddiabeticmice:evidenceofarolefor L typevoltage operatedca 2+ channels[j].brjpharmacol, 2011,163(6): ( 本文编辑 : 徐刚珍英文编辑 : 孟月 )

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