动 物 营 养 学 报 卷 进行生化培养和菌体革兰氏染色 镜检 用微尺测量菌体长度和宽度 在带摄像的显微镜下拍照 观察纳豆芽孢杆菌液体培养不摇动时的菌液形态 生化培养试验 厌氧试验 将纳豆芽孢杆菌在 (. 琼脂平板上划线 然后将平板放在密闭塑料罐中加厌氧剂 按 6 比例加入焦性没食子酸和无水碳酸钠

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1 动物营养学报 纳豆芽孢杆菌的饲料学特性研究 董尚智 陈远凤 黄燕华 冯定远 珠海市农业科学研究中心 珠海 华南农业大学动物科学院 广州 摘 要 本试验旨在从饲料应用学的角度对纳豆芽孢杆菌的各项特性进行测试 并总结出一套可行的试验方法和结果判断标准 试验通过对纳豆芽孢杆菌的形态和生化培养性质观察 不同温度 酸度 胆盐 人工胃液处理对纳豆芽孢杆菌存活率的影响 常用药物添加剂 微量元素对纳豆芽孢杆菌生长的影响及纳豆芽孢杆菌对几种致病菌和抗营养因子的影响进行了研究 结果表明 纳豆芽孢杆菌对高温 酸性 胆盐和人工胃液有一定的耐受能力 对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌都有较强的抑制作用 并能分解饲料中抗营养因子如半纤维素 植酸盐和果胶 结果提示 纳豆芽孢杆菌是优良的饲用微生物添加剂 关键词 纳豆芽孢杆菌 营养 特性 耐受性 纳豆芽孢杆菌!& ' 是从日本传统食品纳豆中发现并分离出来的芽孢杆菌 是枯草芽孢杆菌的一个亚种 在我国被列入农业部公布允许使用的饲料级微生物添加剂 近年来 国内外对纳豆芽孢杆菌的研究十分活跃 主要集中在菌株筛选 培养 分泌物提取鉴定与动物试验等方面 目前人们对纳豆芽孢杆菌本身的饲料学特性仍知之甚少 尤其是检测方法尚未规范化 不同检测结果缺乏可比性 因此有必要对纳豆芽孢杆菌的饲料学特性做系统性研究 本文从饲料应用学的角度对纳豆芽孢杆菌的各项特性进行测试 并总结出一套可行的检测方法和结果判断标准 为纳豆芽孢杆菌及其制剂在饲料领域的科学应用提供理论依据 材料与方法 试验材料 试验用纳豆芽孢杆菌由珠海市派尔尼生物技术有限公司提供 指示菌 大肠杆菌 沙门氏杆菌及金黄色葡萄球菌由珠海出入境检验检疫局检验检疫技术中心提供 主要仪器设备 荧光相差显微镜 (! )*+,( 型 - 计 国产 ) 型 紫外分光光度计 美国./0 +)1 /(* 自动高压灭菌锅 日本 -,))+) 冷冻离心机 美国./0+)1 /(+/ /&2! 普通光学显微镜 载玻片 盖玻片 微尺 试管 平板 三角瓶 恒温水浴锅 超净工作台 恒温摇床培养箱等均为国产 培养基及主要试剂液体营养肉汤培养基 蛋白胨 牛肉膏 氯化钠 硫酸镁 加蒸馏水至 ( 调 - 为 3(. 固体培养基 蛋白胨 酵母膏 氯化钠 琼脂 加蒸馏水至 ( 调 - 为 3 水解酪蛋白胨 +- 琼脂 为广东环凯微生物科技有限公司生产 批号 索恩利 4'( 培养基 蛋白胨 酚红 3 氯化钠 " 精氨酸盐 磷酸氢二钾 3 琼脂 加蒸馏水至 ( 调 - 为 3 人工胃液配制 取浓盐酸 3( 加蒸馏水至 ( 常温下加胃蛋白酶 混匀 用细菌过滤器过滤即成 胆盐培养基 在液体营养肉汤培养基中添加一定浓度的猪胆盐 分析纯 经高压灭菌制成 革兰氏染 色剂 按常规配制 药敏试验用的药物从兽药添加剂市场购买 羧甲基纤维素 /+/ 为温州东开化工试剂厂生产 批号 木聚糖 葡聚糖 植 酸钙 果胶粗提物分别参照前人方法自制 菌落 菌体和液体培养的形态观察将纳豆芽孢杆菌在 (. 琼脂平板上划线 5 培养 4 进行菌落形态观察 然后挑取典型菌落 收稿日期 基金项目 珠海市科技计划资助项目 作者简介 董尚智 男 广东省新兴县人 高级工程师 硕士 主要从事动物营养与微生态方面的研究!"#$%&' 通讯作者 冯定远 教授!"&#$#&

2 动 物 营 养 学 报 卷 进行生化培养和菌体革兰氏染色 镜检 用微尺测量菌体长度和宽度 在带摄像的显微镜下拍照 观察纳豆芽孢杆菌液体培养不摇动时的菌液形态 生化培养试验 厌氧试验 将纳豆芽孢杆菌在 (. 琼脂平板上划线 然后将平板放在密闭塑料罐中加厌氧剂 按 6 比例加入焦性没食子酸和无水碳酸钠 密闭塑料罐置于 5 恒温箱中培养 4 有菌落生长为阳性 同时设有氧培养做对照 精氨酸水解试验 将索恩利培养基分装在试管中 高度约 将纳豆芽孢杆菌穿刺接种 并用灭菌石蜡油封管 5 恒温箱中培养 4 培 养基转为红色者为阳性 生长曲线测定取液体营养肉汤培养基 ( 装入 ( 三角瓶中 按 7 的接种量加入纳豆芽孢杆菌菌液 混合均匀后 置于 5 恒温摇床培养箱中培养 转速 2!& 于接种后 和 4 无菌条件下分别测定培养液的 - 每组设 个重复 并从各瓶中取培养液 ( 先在分光光度计上用不同波长测定 * 值 确定最大吸收峰时的波长为 & 然后测定各组的 * 值 并记录结果 耐高温能力测定液体营养肉汤培养基按 7 的接种量加入接种纳豆芽孢杆菌后分别置于 和 5 恒温水浴箱中 每个温度梯度设 个重复!& 后取出立即用冷水冷却 冷却后将其置于 5 恒温摇床箱中再培养 和 4 取出测其 * 值 观察和记录生长情况 耐酸性能力测定液体营养肉汤培养基以 - 为 的 8.9 缓冲液为基础 用稀盐酸调节 - 为 分别取纳豆芽孢杆菌菌液 ( 加入 ( 一定 - 的培养基 空白对照用 (37 无菌生理盐水代替培养基 每种 - 设 个重复 置于 5 恒温摇床培养箱中培养!& 再取出测其 * 值 计算不同 - 的 * 值与相应空白对照 * 值之比 以 * 比值反映芽孢杆菌存活率 耐胆盐能力测定在液体营养肉汤培养基中添加猪胆盐分别配制成含量为 的胆盐培养基 接种 7 的纳豆芽孢杆菌 每个浓度设 个重复 置于 5 恒温摇床培养箱中培养 4 取出 测其 * 值 以不含猪胆盐的培养基作对照 计算不同猪胆盐梯度的 * 值与相应空白对照 * 值之比 以 * 比值反映芽孢杆菌存活率 耐人工胃液能力测定取纳豆芽孢杆菌的菌液与人工胃液按体积比 6 稀释混匀 对照组直接用无菌生理盐水与人工胃液作同样稀释 每组设 个重复 置于恒温摇床培养箱 5 分别培养 和!& 后 取出测其 * 值 计算不同时间 * 值与相应对照 * 值之比 以 * 比值反映芽孢杆菌存活率 药敏试验参照美国国家临床实验室标准委员会 1"$ 推荐的纸片扩散法 0. 法 改进 使用生产上常用的畜禽药物添加剂 按预防用药浓度配成溶液 氟哌酸 ( 环丙沙星 ( 磺胺二甲嘧啶 ( 林可霉素 ( 土霉素 ( 金霉素 ( 阿莫西林 ( 丙酸 ( 丙酸钠 ( 将直径 3 圆形滤纸片浸入药液摇荡 4 取出 阴干后备用 用灭菌棉拭子蘸取纳豆芽孢杆菌的培养液在 +- 琼脂平板表面涂布接种 次 每次旋转 : 室温干燥!& 后 用无菌镊子取出浸过抗生素的纸片 紧贴于培养基表面 每个处理 个重复 然后置于 5 培养箱中培养 4 测定结果 根据抗生素纸片周围抑菌圈直径 包括滤纸片 的大小 按以下标准判断 高敏 抑菌圈直径 中敏 抑菌圈直径 ; 低敏 抑菌圈直径 不敏感或无效 无抑菌圈 微量元素对纳豆芽孢杆菌的影响以生产上常用的畜禽微量元素添加剂 9 - /9 - &9 - +&9-0, 按照仔猪的饲养标准离子浓度 分别用灭菌蒸馏水配成含 (/ 3 ( & (+& 3 (, 3 ( 的溶液备用 其中 很不稳定 要现配现用 用灭菌棉拭子蘸取纳豆芽孢杆菌的培养液在 +- 琼脂平板表面涂布接种 次 每次旋转 : 室温干燥!& 后 用直径为 钢质打孔器在上述平板上打孔 每平板 个孔呈梅花形排列 火焰加热封底 其中一孔加无菌水 作为对照 其余各孔分别加以上微量元素溶液 滴 每个处理 个重复 置于

3 期 董尚智等 纳豆芽孢杆菌的饲料学特性研究 5 培养箱培养 4 测定各孔抑菌圈直径 敏感性判定标准同 3 体外抑菌能力测定测定纳豆芽孢杆菌对致病性大肠杆菌 沙门氏杆菌 金黄色葡萄球菌的体外抑菌能力 用灭菌棉拭子分别蘸取大肠杆菌 沙门氏杆菌 金黄色葡萄球菌培养液在 +- 琼脂平板表面涂布接种 次 每次旋转 : 用直径为 钢质打孔器在上述 +- 平板上打孔 每平板 个孔 火焰加热封底 其中一孔加无菌水作为对照 其余各孔加纳豆芽孢杆菌培养液各 滴 每个处理 个重复 然后置于 5 培养 4 测定各孔抑菌圈直径 敏感性判定标准同 3 对抗营养因子!"#$%"!&' & 的影响用透明圈法观测纳豆芽孢杆菌对纤维素 粉碎 半纤维素 植酸盐 果胶的利用情况 每个处理 个重复 以透明圈与菌落直径之比大小为依据判断芽孢杆菌对抗营养因子的利用率 按以下标准判断 *# *# *# *#; 无透明圈 对纤维素的利用用无菌牙签将纳豆芽孢杆菌点接于含 37 羧甲基纤维素的 (./+/ 培养基上 置于 5 培养箱培养 4 用 37 刚果红染色 4 弃去染料 再用 '"( 的 1 /" 溶液洗涤 4 看菌落周围有无 出现水解圈 测定透明圈与菌落直径 对半纤维素的利用用无菌牙签将纳豆芽孢杆菌点接于含 7 葡聚糖或木聚糖粗提物的 (. 琼脂平板培养基上 置于 5 培养箱培养 4 观察菌落周围有无水解圈 测定透明圈与菌落直径 对植酸盐的利用用无菌牙签将纳豆芽孢杆菌点接于含 37 植酸钙粗提物的 (. 琼脂平板培养基上 置于 5 培养箱培养 4 观察菌落周围有无水解圈 测定透 明圈与菌落直径 对果胶的利用用无菌牙签将纳豆芽孢杆菌点接于含 37 果 胶粗提物的 (. 琼脂平板培养基上 置于 5 培养箱培养 4 在菌落周围加入几滴 7 的十六烷基三甲基溴化铵 /). 静置!& 观察菌落周围 有无水解圈 测定透明圈与菌落直径 数据处理试验数据采用 9899 软件 3 进行统计分析 并使用 *&& 氏法进行多重比较 结果用平均值 + 标准误 9 表示 用 " 进行图表分析 结果与分析 形态观察和生化特性试验菌呈短棒状 单个或两个直线排列 革兰氏阳性 芽孢呈柱形 中间不膨大 芽孢在中间或偏一侧 结果见图 菌落呈圆形或不规则形 表面粗糙起皱 灰白色或米黄色不透明 易扩散生长 易变厚 液体培养有菌膜 不浑浊 有沉淀 结果见表 试验菌在厌氧环境下不生长 在有氧培养下能生长 是需氧菌 不产生精氨酸双水解酶 结果见表 根据试验菌的形态和生化特征 参考 常见细菌系统鉴定手册 和 伯杰氏细菌鉴定手册 中芽孢杆菌属枯草芽孢杆菌的鉴别方法 特征基本符合 结合菌种来源说明 可以确定试验菌株是纳豆芽孢杆菌 遂进行以下系列试验 图 纳豆芽孢杆菌照片 倍油镜头!84'''!& ' '!""&$'!$

4 动 物 营 养 学 报 卷 表 试验菌的群体特征 "<2'2$'!& ' 菌落特征.2!"'"'&2$ 液体培养 (!=!#"2 菌落直径光学透明度是否产生色素菌膜项目,$ 质地边缘形状浑浊沉淀 /'"'&!" >442 /"' + 2!" #$4 2!#! 82!!!'& #!2 2&$2&!& 2& 特征 2$ 皱折锯齿不 表 试验菌的鉴别特征 ",#&!!!'&2$'!& ' 项目,$ 特征 2$ 菌体长度 #"&4 菌体宽度 #?!#4 厌氧培养 )&2'!"2 精氨酸水解 -#2'"$!$' 2!&!& 革兰氏反映 <2 2" 芽孢形状 $$4 芽孢位置 $'$!!'& < 柱形 不膨大中生 端生 生长曲线如图 曲线所示 纳豆芽孢杆菌在生长期间的培养液 - 均呈上升趋势 在培养 4 后 培养液的 - 已经超过 最高达到 在 4 前变化较快 4 后趋于平缓 如图 所示 纳豆芽孢杆菌的生物量生长曲线没有延缓期 而是直接进入对数生长期 在 4 达到最大值 此后进入生长稳定期约 4 就迅速进入衰亡期 耐高温能力如图 曲线所示 纳豆芽孢杆菌具有一定的耐高温能力 其培养液在经过 5!& 处理后 菌液的 * 值在 和 4 时有上升趋势 生物量在增加说明菌体在经过 5 以下高温处理后仍能生长 而培养液在经过 5!& 处理后 菌液的 * 值在 和 4 时有下降趋势 说明菌体经过 5 高温处理后生长受到抑制 但在短时间内能基本保持其活菌浓度 图 纳豆芽孢杆菌的生物量曲线!.!' $2@'!& ' 图 纳豆芽孢杆菌培养液 曲线!-2@'!& ' 图 纳豆芽孢杆菌耐高温能力!)!"!'!& ''& 222$!$&

5 期 董尚智等 纳豆芽孢杆菌的饲料学特性研究 耐酸性能力如图 曲线所示 纳豆芽孢杆菌的存活率随 - 升高呈上升趋势 纳豆芽孢杆菌经过 - 处理后存活率较低 在 - 为 时出现低谷 - 为 时存活率达到高峰 由图 可知 人工胃液处理!& 内纳豆芽孢杆菌仍可生长 从!& 段 随着人工胃液处理时间的延长纳豆芽孢杆菌存活率呈线性下降趋势 %;3'3 ;3 而对照组比较稳定 图 纳豆芽孢杆菌在不同 的存活率!92@!@"2'!& '!&#!2&- 耐胆盐与人工胃液能力由图 可知 随着猪胆盐浓度的升高 纳豆芽孢杆菌存活率随猪胆盐浓度的升高呈二次项关系 %;&' 3'3 ;3 图 纳豆芽孢杆菌在人工胃液中的存活率!92@!@"2'!& '!& 2!!!" $2!%! 药敏性由表 可知 纳豆芽孢杆菌对预防量的药物添加剂喹诺酮类 氟哌酸 环丙沙星 高度敏感 对磺胺类 磺胺二甲基嘧啶 耐药 对林可胺类 林可霉素 中度敏感 对四环素类 土霉素 金霉素 低度敏感或耐药 对半合成青霉素类 阿莫西林 高度敏感 对防霉剂 丙酸 丙酸钠 不敏感 图 纳豆芽孢杆菌在胆盐中的存活率!92@!@"2'!& '!&!"$" 表 药敏试验结果 "$"$'$$!!"!$ 药物 *2$ 抑菌圈直径,&4!!!'&A'&#!2 敏感性 9&$!!@! 氟哌酸 1'2"'!& 高敏 环丙沙星 /!2'"'!& 高敏 磺胺二甲基嘧啶 9" 4A!& 不敏感 林可霉素 (!&'!& 中敏 土霉素 22!& 不敏感 金霉素 )2'!& 低敏 阿莫西林 )'!!"!& 高敏 丙酸 82'!'&!!# 不敏感 丙酸钠 9'#!2'!'& 不敏感

6 动 物 营 养 学 报 卷 微量元素对纳豆芽孢杆菌的影响由表 可知 纳豆芽孢杆菌对饲料常用的微量元素 按照仔猪饲养标准的离子浓度有不同的敏感 度 其中对 / 高度敏感 而对 & 中度敏感 对 +&, 有较好的耐受能力 表 微量元素对纳豆芽孢杆菌的影响 "$'2"&$'&!& ' 微量元素 2"&$ 抑菌圈直径,&4!!!'&A'&#!2 敏感性 9&$!!@! 不敏感 / 高敏 & 中敏 +& 不敏感, 不敏感 体外抑菌效果由表 可知 纳豆芽孢杆菌培养物对大肠杆菌 和金黄色葡萄球菌都有较强的抑制作用 而对沙门氏杆菌没有抑制作用 表 纳豆芽孢杆菌体外抑菌的结果 "$"$' &!2!"'&!& ' 指示菌.2! '!&$2!'&$ 抑菌圈直径,&4!!!'&A'&#!2 敏感性 9&$!!@! 大肠杆菌 &! 高敏 沙门氏杆菌 不敏感 金黄色葡萄球菌 %!!! 高敏 对抗营养因子的影响由表 可知 纳豆芽孢杆菌对纤维素 半纤维素 植酸盐 果胶等饲料中的抗营养因子有一定的分 解能力 尤其是对半纤维素类的木聚糖 葡聚糖分解能力最强 其次是分解植酸盐和果胶 而对纤维素的分解能力较差 表 纳豆芽孢杆菌对抗营养因子的影响 "$')1$'&!& ' 抗营养因子 )1$ 水解圈直径比 -#2'"$!$4&4#!2!2"*# 分解能力 *''$!!'&! 羟甲基纤维素 /+/ 木聚糖 B"& 葡聚糖 <"& 植酸钙 84/ 果胶 8!& 讨 论 生化特性和形态观察纳豆芽孢杆菌采用.8 培养基在最佳生长条 件下进行培养时发现 在 4 处于生长的延滞期 而本试验发现纳豆芽孢杆菌的生物量生长曲线没有延缓期就直接进入对数生长期 差异可能与检测方法不同或菌株的特异性有关 有待进一步研究 纳豆芽孢杆菌是需氧菌 作为直接饲喂的添加剂进入动物体内生长 消耗消化道内氧气形成厌氧 环境 同时也抑制其他需氧菌的生长 有利于维护动物肠道微生态平衡 纳豆芽孢杆菌的抗逆能力本试验发现 纳豆芽孢杆菌菌体耐!& 处理 的临界温度在 5 左右 杨晓斌等研究了 株纳豆芽孢杆菌对 5 下处理!& 仍能有 7 左右存活 但 5 以后损失增加 通常添加在饲料中的芽孢杆菌制剂都处于芽孢休眠状态 抵抗饲料高温制粒逆境能力会大大加强 一般动物肠道的 - 为 及 两个范围 芽孢杆菌对 - 有较强

7 期 董尚智等 纳豆芽孢杆菌的饲料学特性研究 的耐受性是它进入肠道后增值和发挥作用的前提条件 本研究发现 纳豆芽孢杆菌在 - 范围内 耐受性稍弱 结果与报道相似 杨晓斌等的试验也证实纳豆芽孢杆菌菌株对 -33 存活率可达 7 以上 在 -33 范围内损失过半 芽孢杆菌能否抵抗胆盐和人工胃液的考验是它进入肠道后的第二重关卡 按照 37 胆盐浓度作为筛选耐胆盐菌株标准判断 本试验表明纳豆芽孢 杆菌属于耐胆盐菌株 杨郁等发现纳豆芽孢杆菌在人工胃液中 4 的生存率普遍在 7 以上 结果与本研究相似 根据纳豆芽孢杆菌的抗逆性表现判断 可以作为口服型益生菌 药物和微量元素对纳豆芽孢杆菌的影响本试验只测定了纳豆芽孢杆菌对预防量的常用药物添加剂和符合饲养标准浓度的微量元素离子的敏感性 并不代表其最高耐受能力 在实际应用中 饲料中添加益生菌的同时还经常使用抗生素等药物 这些药物的存在可能对益生菌株产生影响 杨 晓斌等的试验表明 在抗生素的不同剂量下 纳豆芽孢杆菌对阿散酸 土霉素 杆菌肽锌 金霉素 喹乙醇 抗敌素和痢特灵等都仅表现为低敏 总体上表现对抗生素都有很好的耐受性 饲料中使用浓度过高的铜盐会对纳豆芽孢杆菌的活性产生影响 芽孢杆菌在猪预混料中 # 损失达 7 以上是与 / 浓度有关 本试验结果显示纳豆芽孢杆菌对 / 高度敏感 与上述结果一致 此外本试验结果还显示纳豆芽孢杆菌对 & 中度敏感 纳豆芽孢杆菌体外抑菌能力前人研究表明 纳豆芽孢杆菌对金黄色葡萄球菌 大肠杆菌 的抑制作用明显 而对沙门氏杆菌的抑制作用不明显 而有些纳豆菌株代谢产物具有较好的抗菌活性 包括对沙门氏杆菌 这与本试验结果相一致 也有研究发现纳豆芽孢杆菌能分泌抗菌蛋白直接杀灭包括大肠杆菌 沙门氏杆 菌 志贺氏菌 金黄色葡萄球菌等多种致病菌 由此可见 芽孢杆菌对致病菌的作用不尽相同 效果可能与菌株特性有关 纳豆芽孢杆菌对抗营养因子的利用能力抗营养因子广泛存在于植物源饲料 通常每种植物含有多种抗营养因子 纤维素的持水力可减少可溶性非淀粉多糖 &'&$24 '"$42!#$ 198 的溶解 降低粘性 缩短食糜通过消化道的时间 维持肠道微生物群系和微生态环境 但不溶性 198 在影响食糜通过时间的同时 也影响肠道的活动性 对消化酶有物理屏障作用 会降低营养物质的 消化率 同时由于纤维素的吸附作用 消化酶活性也受到抑制 因而会降低养分的消化率 本试验以平板培养方法探讨了芽孢杆菌对抗营养因子的分解能力 方法简单可行 成本较低 值得推广 结 论 纳豆芽孢杆菌对高温 酸性 胆盐和人工胃液有一定的耐受能力 对常见的致病性大肠杆菌和金黄色葡萄球菌都有较强的抑制作用 对饲料中半纤维素有较强的分解能力 并能分解植酸盐和果胶 纳豆芽孢杆菌在饲料中使用时必须控制铜和锌离子的浓度 避免同时添加林可霉素 氟哌酸 环丙沙星 阿莫西林等抗生素 致谢 纳豆芽孢杆菌是优良的饲用微生物添加剂 本试验的顺利开展得到黎明 喻国辉和左建军先生的大力支持 在此一并表示感谢 参考文献 满丽莉 张丽萍 纳豆激酶高产菌株的筛选鉴定及特性研究 农产品加工 杨艳燕 李顺意 高 尚 闫达中 陈 勇 豆豉中纳豆芽孢杆菌的筛选和纳豆激酶的初步分离 沈阳医科大学学报 钟青萍 佘世望 梁胜媛 纳豆菌产生抗菌物质的培养条件的优化 生物学杂志 陈 兵 缪志伟 朱凤香 仔猪日粮中添加纳豆芽孢杆菌的效果试验 浙江畜牧兽医 东秀珠 蔡妙英 常见细菌系统鉴定手册 北京 科学出版社 黄运红 龙中儿 李素珍 木聚糖酶高产微生物的筛选和鉴定 江西师范大学学报 张开诚 啤酒酵母中 * 葡聚糖提取与理化性能分析 饲料工业 张 剑 李梦琴 王 睿 小麦麸皮提取植酸钙的工艺研究 粮食与饲料工业 曾凡芝 从柚子皮中提取果胶的研究 实验室研究与探索 安回凤 不同药敏试验方法对 株乳源葡萄球菌监测结果的比较 中国畜牧兽医 洪 芳 田 宇 徐 极端嗜热厌氧纤维素分解菌基因文库的构建及其内切葡聚糖酶基因片段的克隆 四川大学学报 杨 辉 廖 威 梁海秋 葡聚糖酶高产菌株的分离鉴定及其培养基优化的研究 广西大学学报 增

8 动 物 营 养 学 报 卷 汪世华 胡开辉 林文雄 植酸酶产生菌的选育及固态产酶条件研究 应用生态学报 张健红 李 寅 刘 和 一株碱性果胶酶高产细菌的分离 系统发育分析和产酶条件的初步优化 应用与环境生物学报 布坎南 吉本斯 1 伯杰氏细菌鉴定手册 第 版 北京 中国科学出版社 陈丽花 陈有容 齐凤兰 纳豆芽孢杆菌的功能及其应用 食品工业 杨晓斌 谢拥葵 韦燕鹏 益生菌纳豆芽孢杆菌的筛选 广州食品工业科技 增 黄占旺 魏 萍 刘海林 纳豆菌生物学特性研究 江西农业大学学报 来航线 杨保伟 丘学礼 株芽孢杆菌的初步分离鉴定与拮抗试验 西北农业大学学报 杨 郁 张丽靖 天知诚吾 纳豆菌和乳酸菌的耐酸性比较研究 食品研究与开发 刘来停 蔡风英 周 薇 微量元素对饲料中益生素活性的影响 粮食与饲料工业 贾力敏 陈晓蔚 江 晓 纳豆菌对致病者生长抑制作用的初步研究 中国公共卫生 黄占旺 黄 庆 纳豆菌的分离与抗菌特性研究 食品科技 钟青萍 谢俊杰 佘世望 纳豆菌抗菌作用的研究 食品研究与开发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责任编辑 菅景颖

第 期 黄雪莲等 响应面优化绿色木霉菌培养基 材料与方法 菌种 仪器与试剂 菌种的活化 单因素试验 响应面优化试验 优化工艺的验证 数据处理 结果与分析

第 期 黄雪莲等 响应面优化绿色木霉菌培养基 材料与方法 菌种 仪器与试剂 菌种的活化 单因素试验 响应面优化试验 优化工艺的验证 数据处理 结果与分析 第 卷第 期 年 月 食品与生物技术学报 响应面优化绿色木霉菌培养基 黄雪莲 于新 仲恺农业工程学院轻工食品学院 广东广州 利用响应面分析法对绿色木霉菌的培养基进行优化 通过测量不同营养条件下绿色木霉 菌落生长直径研究其生物学特性 在单因素实验的基础上 选定葡萄糖添加量 丙氨酸添加量和磷酸二氢钾添加量 个因素进行中心组合实验 建立二次回归方程 并应用响应面分析法进行优化 结果表明 绿色木霉菌最佳培养基为葡萄糖

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