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1 78 南方医科大学学报 J South Med Univ ;(5) 技术方法金黄色葡萄球菌临床分离株肠毒素基因的调查分析曹虹王敏郑荣李先平王芳蒋云生杨一芬中南大学湘雅二医院检验科肾内科湖南长沙摘要目的检测临床分离的金黄色葡萄球菌 SA 肠毒素基因了解肠毒素基因的携带情况与SA耐药的关系方法采用聚合酶链反应检测 SA meca 基因和肠毒素基因了解肠毒素基因在 SA 中分布的状况并对其进行耐药性分析结果 67 株甲氧西林耐药的 SA MRSA 和 57 株甲氧西林敏感的 SA MSSA 肠毒素基因携带率 % vs 8.5% 无明显差异 χ=. P>.5 肠毒素基因检出率为 9.5% 6 株其中 SEA SEB SEC SED 和 SEF 的检出率分别为 9.5% 6.9% 6.% 5.%和 5.9% 未检测出 SEE 基因同时检出种及种以上的肠毒素基因的菌株有 78 株 67.% 以携带 SEA+SEC SEA+SEF 和 SEA+SEC+ SEF基因为主检出率分别为.6% 7.8%和.8% 与携带一种肠毒素基因的菌株耐药率相比携带多种肠毒素基因的菌株耐药率呈上升趋势其中携带 SEA+SEC+SEF 的菌株对复方新诺明的耐药率为.% 高于单独携带 SEA 8.6% SEA+SEC 8.7% 的耐药率具有统计学差异 P<.5 携带 SEA+SEC+SEF SEA+SEF SEA 的菌株对阿米卡星耐药率分别为.% 77.%和.5% 前两者与携带SEA的菌株相比有显著差异 P<.5 结论临床分离的SA中携带多种肠毒素基因的菌株在耐药率上高于只携带一种肠毒素基因的菌株提示肠毒素在SA耐药中起重要作用关键词金黄色葡萄球菌肠毒素基因耐药性中图分类号 R6.5 文献标志码 A 文章编号 doi:.969/j.issn Investigation of enterotoxin gene in clinical isolates of Staphylococcus aureus CAO Hong, WANG Min, ZHENG Rong, LI Xianping, WANG Fang, JIANG Yunsheng, YANG Yifen Department of Clinical Laboratory, Department of Nephrology, Second Xiangya Hospital of Central South University, Changsha, China Abstract: Objective To detect the enterotoxin genes of Staphylococcus aureus (SA) isolated from clinical specimens and analyze the correlation between enterotoxin genes and drug resistance of SA. Methods The meca gene and exterotoxin genes AF of clinical SA isolates were identified by polymerase chain reaction (PCR), and the genes were sequenced to investigate the correlation of these genes to drug resistance. Results The detection rate of enterotoxin genes was % in 67 methicillinresistant SA (MRSA), showing no significant difference from the rate in 57 methicillinsensitive SA (MSSA) (8.5%, χ=., P>.5). Of the 6 strains carrying enterotoxin genes (9.5% ), the detection rates of SEA, SEB, SEC, SED and SEF were 9.5%, 6.9%, 6.%, 5.%, 5.9% and 9.5%, respectively, and none of the strains were positive for SEE gene. In these strains, 78 (67.%) carried or more enterotoxine genes, and the main genotypes were SEA and SEC (.6%), SEA and SEF (7.8%), and SEA and SEC and SEF (.8% ). Compared with the strains carrying a single enterotoxin gene, those with multiple enterotoxin genes showed a higher drug resistance rate, among which % of the SA strains carrying SEA + SEC + SEF were resistant to SXT, significantly higher than the rates of SA carrying SEA (8.6%) and SEA+SEC (8.7%) (P<.5). The SA strains carrying SEA+ SEC + SEF and SEA + SEF showed significantly higher amikacin resistance rates than SA strain carrying SEA (.%, 77.%,.5%, respectively, P<.5). Conclusion Clinical isolates of SA carrying multiple enterotoxin genes have a higher drug resistance rate than those with a single enterotoxin gene, suggesting the the important role of enterotoxin in multidrug resistance. Key words: staphylococcus aureus; enterotoxin gene; drug resistance 金黄色葡萄球菌 SA 肠毒素是一类结构相关毒力相似抗原性不同的外毒素迄今已发现十几种葡萄球菌肠毒素并定位其基因有研究表明产肠毒素的基因通常与耐药基因处于相同质粒中而以往研究 SA 肠毒素基因与细菌耐药性的关系很少涉及因此我们在检测临床分离的 SA 肠毒素基因同时分析了解肠毒素收稿日期 6 基金项目湖南省自然科学基金 6JJ5 作者简介曹虹硕士主管技师 caohong97@6.com 通讯作者杨一芬电话 yifen@6.com 基因的携带情况与SA耐药的关系材料和方法. 标本来源随机留取株 SA 及作为阴性对照的大肠杆菌铜绿假单胞菌肠球菌分离自中南大学湘雅二医院 6 年 8 月~8 年 5 月门诊和住院患者的血前列腺液痰创面分泌物引流液尿液等标本. 主要仪器和试剂 Microscan W/A 96 全自动微生物鉴定及药敏系统

2 曹虹, 等. 金黄色葡萄球菌临床分离株肠毒素基因的调查分析 79 为美国都灵公司产品 ;PCR 扩增仪和电泳仪为德国 Biometra; 凝胶成像仪为美国伯乐公司产品 ;EB 替代品染料购自北京鼎国生物技术有限公司 ; 细菌 DNA 提取试剂盒 DNA Marker I 和 PCR 试剂购自北京天根生化科技有限公司 ; 其余试剂均为国产分析纯 SEA SEB SEC SED SEE SEF 基因扩增引物由上海生工生物技术有限公司合成, 其余试剂为国产分析纯. 方法.. 细菌鉴定细菌的鉴定采用 Microscan W/A 96 全自动微生物鉴定仪和手工法 ()SA 的鉴定 : 血浆凝固酶阳性, 触酶试验阳性,G + 球菌呈葡萄状排列, 还原硝酸盐,VP 试验阳性, 厌氧分解葡萄糖产酸 ;() 耐甲氧西林 SA(MRSA) 的鉴定 : 应用 meca 基因 PCR 扩增法鉴定 MRSA, 结果判定标准 :PCR 扩增产物经电泳后出现一条 bp 大小的 DNA 片段, 经测序证实为 meca 基因, 判定该菌株即为 MRSA 无 meca 基因为甲氧西林敏感的 SA(MSSA).. 细菌 DNA 的提取将经 Microscan W/A 96 全自动微生物鉴定系统鉴定的 SA 转种于血平皿, 于 7 孵育 6~8 h 挑取 ~ 个菌落置于 ml 裂解液 ( mmol/l TrisHCl,. mmol/l EDTA,% SDS) 再加入 μl mg/ml 蛋白酶 K 及 mg/ml 葡萄球菌溶菌酶 μl, 混匀, 置于 7 水溶 min, 其余步骤接北京天根生化科技有限公司的细菌基因组 DNA 提取试剂盒说明书的第步进行操作.. 扩增引物设计分别从 Genbank 获取 SA SEA SEB SEC SED SEE SEF 和 meca 序列, 然后用 Primer 5. 软件分析和确定引物, 并进行 BLAST 分析序列均由上海生工生物技术有限公司合成, 引物的特性见表表各种肠毒素的基因序列位点与扩增产物预计分子量 Tab. Estimation of the relative molecular mass, locus, and sequence of the amplified products for different enterotoxin genes 肠毒素基因 Genbank 号引物寡核苷酸序列 (5'') 基因位点退火温度 ( ) 扩增产物 (bp) SEA M897 SEA ATTCATTGCCCTAACG ~5 5 SEB M8 SEA SEB TACCACCCGCACATT TGTATGTATGGTGGTGT 7~56 8~ 5 85 SEB TTTATCTCCTGGTGC 7~688 SEC X566 SEC GTCAACCAGACCCTAT 86~ 7 77 SED M85 SEC SED SED GTTCCCATTATCAAAG AAAGAAATGGCTCAAC GAAGGTGCTCTGTGG 6~7 95~ 78~7 9 5 SEE M9 SEE ATAACCGATTGACCG 9~ 8 8 SEE CTTACCGTGGACCCT 656~6 SEF AB855 SEF TCTAAAACGATAAT 6~5 5 6 meca X559 SEF meca TAATTAATTTCTGCTTC GTAGAAATGACTGAACGTCCGATAA 7~7 68~9 5 meca CCAATTCCACATTGTTTCGGTCTAA 577~55.. PCR 扩增和电泳 PCR 扩增反应体系体积为 μl, 其中 Taq PCR Master Mix μl, μmol/l 的上下游引物各 μl, 灭菌 ddh O 7 μl,dna 模板 μl 离心混匀后置 PCR 仪上进行自动化扩增反应反应条件 : 9 预变性 5 min,9 s,5~5 s,7 s~ min, 以上反应经次循环后,7 延伸 min 以 DNA Marker Ⅰ 为相对分子质量标准, 取 5 μl 扩增产物与 μl 上样缓冲液 (6 Loading buffer) 混匀后点样于含核酸染料的的 % 琼脂糖凝胶,5 V 电泳 min 后, 在凝胶成像仪中观察结果并照相..5 耐药性分析对株 SA 做以下 5 种药物耐药性实验, 苯唑西林青霉素头孢唑啉氨苄青素 / 舒巴坦庆大霉素红霉素阿奇霉素克林霉素环丙沙星复方新诺明阿米卡星万古霉素利福平四环素替考拉宁质控菌株为 SA ATCC59 ATCC9 药敏结果参照年 NCCLS 标准判断. 统计学处理所有统计分析均采用 SPSS. 统计软件进行分析,MRSA 与 MSSA 之间耐药率的比较及肠毒素基因携带率的比较用 χ 检验,P<.5 为有统计学差异结果. meca 基因的检测对株 SA 做 PCR 扩增, 其中 67 株扩增产物在凝胶成像仪中观察到一条约 bp 的 DNA 片段以 PCR 扩增产物为模板, 以 PCR 扩增的引物为引物, 委托上海生工生物技术有限公司进行序列测定, 通过测序鉴定并与 NCBI 上 SA 基因库 meca 基因同源性比对, 确定

3 7 南方医科大学学报 (J South Med Univ) 第卷为 MRSA 余 57 株菌株为 MSSA. 株 SA 菌株来源分布情况 67 株 MRSA 主要分布在 ICU(7 株 ) 神经外科 (5 株 ) 和神经内科 (9 株 ), 标本类型以痰为主 ( 株 ), 其次为血液标本 (8 株 ) 而 MSSA 菌株主要来自于泌尿外科 ( 株 ) 皮肤科 ( 株 ) 和骨科 ( 株 ), 标本类型以伤口分泌物 ( 株 ) 血液 (7 株 ) 和前列腺液 ( 株 ) 为主 MRSA 与 MSSA 来源与分布明显不同. SA 肠毒素基因检出类型及分布扩增 SA 肠毒素 SEA~SEF 后测序,Blast 比对发现所测 SEA SEB SEC SED SEF 基因的核苷酸同源性均大于 97%,score 值分别为和 99, 证明扩增产物为目的基因分析菌株发现株 SA 中, 6 株携带 5 种不同的肠毒素基因, 其中包括 SEA SEB SEC() SED 和 SEF, 没有检测到 SEE 基因其中 SEA 基因检出率最高为 9.5%,SEB 检出率为 6.9%, SEC 检出率为 65.5%,SED 检出率为 5.%,SEF 检出率为 5.9% 说明本次收集的 SA 以携带 SEA SEC 和 SEF 基因为主, 而 SEB SED 基因携带菌株数少 MRSA 中携带肠毒素基因菌株为 67 株, 携带率为 %;57 株 MSSA 中携带肠毒素基因菌株为 9 株, 携带率为 85.9%; 经 χ 检验, 两者之间没有显著性差异 (χ =.,P=.65) 携带 SEA SEC SEF 的 MRSA 菌株分别为 6 株,MRSA 中肠毒素基因经 χ 检验在携带率上不管是整体比较还是基因型间两两比较均有统计学差异 (P<.) 在 MSSA 中,SEA 与 SEF,SEC 与 SEF 基因携带率比较有统计学差异 (P<.5), 而 SEA 与 SEC 携带率比较无差异 (P=.) 6 株携带肠毒素基因的 SA 中, 单独携带 SEA 基因的菌株有 8 株, 检出率为.%,SEC 基因的菌株有株, 检出率为 8.6%; 同时携带种或种以上肠毒素基因的菌株占 67.%(78/6) 肠毒素 B D F 基因均未单独存在, 而是与其他的肠毒素基因共存与同一菌株中其中以携带 SEA+SEC 的基因的为主, 占.6%; 同时携带 SEA+SEF+SEC 的菌株次之, 有 6 株, 占.8% MRSA 和 MSSA 中检出肠毒素基因情况 ( 表 ) 表 6 株携带肠毒素基因 SA 中肠毒素基因检出类型及检出率 Tab. Enterotoxin genotype and their detection rates in 6 SA strains with different drug resistant profiles 肠毒素基因类型 A C AB AC AF DC ABC ABF ACD ADF ACF ACDF ABCF SAO(6 株 ) MRSA(67 株 ) MSSA(9 株 ) 携带 SEA SEC SEF 基因型菌株之间及含多种肠毒素基因组合型菌株耐药率分析各基因型除对替考拉宁万古霉素敏感外, 对其他抗生素均具有不同程度的耐药, 耐药率为.5% ~ % 从表可看出, 含 SEA SEC SEF 基因型菌株的耐药率比较相近, 经 χ 检验无显著性差异对复方新诺明的耐药分析发现, 携带 SEA+SEC+SEF 的菌株的耐药率为.%, 高于单独携带 SEA(8.6%) SEA+SEC (8.7%) 的耐药率, 具有统计学差异 (P<.5) 携带 SEA+SEC+SEF SEA+SEF SEA 的菌株对阿米卡星耐药率分别为.% 77.% 和.5%, 前两者与携带 SEA 的菌株相比有显著差异 (P<.5) 携带 SEA+SEC+ SEF SEA+SEF 与携带 SEA 基因的菌株相比, 整体耐药呈上升趋势讨论不同类型的肠毒素基因在 SA 中的分布状况的研 [5] [] 究日益受到重视李红玉等从 6 株 SA 中检测到 7 株携带肠毒素菌株, 主要以 SEA SEB SEC 为主, 同 [] 时携带种或种以上肠毒素的占.8% 王营等在 7 株 SA 检出含有肠毒素基因 67 株, 总检出率达 7.97% 本次实验对收集的临床分离的株 SA 肠毒素进行检测, 肠毒素携带率高达 9.5%, 而 MRSA 菌株肠毒素基因携带率与 MSSA 菌株携带率 (% vs

4 曹虹, 等. 金黄色葡萄球菌临床分离株肠毒素基因的调查分析 7 表 SEA SEC SEF 基因型及肠毒素基因组合型耐药率 Tab. Enterotoxin genotypes of the SA isolates and drug resistance profiles (%) 菌株携带的肠毒素基因的类型抗生素 A(n=8) AC(n=9) AF(n=9) ACF(n=6) 肠毒素在菌株中的携带情况 A(n=5) C(n=76) F(n=) 苯唑西林青霉素头孢唑林氨苄青霉素 / 舒巴坦庆大霉素红霉素阿奇霉素克林霉素环丙沙星复方新诺明阿米卡星万古霉素利福平四环素替考拉宁 85.9%) 相比无显著差异其中 SEA 基因检出率为 9.5%, 其次为 SEC(65.5%) 研究表明, 食物中毒时以 SEA SED 型常见,SEB SEC 型次之, 涉及到 E 毒素的发生率最低, 各肠毒素毒力不一,A 型毒素毒力较强,D 型较弱 [6] 本次实验以 SEA 基因的检出率最高, 说明 SEA 不论在由 SA 引起的食物中毒或院内感染中均占有重要地位 SEF(TSST) 最早发现于 987 年, 该毒素在美国引起的病死率为 % 编码 SEF 的基因位于染色体上, 非产毒株无此基因 [7] 而 [89] SEF 检出率为 5.9%, 与国内外研究结果有较大的差异, 提示 SEF 基因的表达有地域差异性同时从结果可知, 同一株 SA 可以检测到种或种以上肠毒素基因型, 且不同基因型的检出率与菌株有一定的关联度各肠毒素型之间关系最为密切的是 SEA 与 [] SEC, 呈现出一定的连锁关系与程智等结果相近, 他们在对 9 株金黄色葡萄球菌食物中毒分离株进行研究发现同时携带 SEA 和 SEC 菌株有株 [] Akindden 等发现患乳房炎奶牛产的牛奶中分离的肠 [] 毒素基因 SED 和 SEJ 基因总是同时出现, 李琳等研究结果表明 SEK 和 SEQ 的检出呈完全的连锁关系细菌表型分型和基因分型对追踪 MRSA 的传染 [] 源控制 MRSA 的传播有重要作用 Nishi 等采用 mechvr 基因型和肠毒素基因型相结合, 发现两种基因型结合起来有助于提高 MRSA 分型的可靠本次实验对于 6 株含有肠毒素基因的 SA 进行基因分型, 其中以单独携带 SEA 基因的菌株和携带两种肠毒素基因 SEA+SEC,SEA+SEF, 以及携带种肠毒素基因 SEA+SEC+SEF 的菌株为主将上述种菌株做 5 种药物的耐药实验, 在复方新诺明和阿米卡星两种药物耐药率上, 携带 SEA 的菌株与携带种基因的菌株相比, 有显著性差异 (P 均 <.) 在对复方新诺明的耐药率上, 携带种肠毒素基因 SEA+SEC 的菌株与携带种肠毒素基因 SEA+SEC+SEF 的菌株相比, 有显著性差异 (P<.5) 在阿米卡星的耐药率上, 携带种肠毒素 SEA 基因与携带种肠毒素 SEA + SEF 基因的菌株相比, 有显著性差异 (P<.5) 这提示携带有肠毒素 SEF 基因的菌株在复方新诺明和阿米卡星种药物上比只携带有 SEA 或 SEC 基因的菌株耐药率高, 而且携带种或种肠毒素基因的菌株耐药率大于只携带种肠毒素基因的菌株 SA 的耐药性是由染色体和质粒共同控制的, 有报道显示由 SA 质粒介导的耐药基因占 6.6%, 由染色体编码的占 9.% [], 这说明质粒在决定细菌的耐药性上起主要作用, 耐药基因位于质粒上, 使耐药性既通过垂直传播, 又能通过转导转化等方式在不同菌株检水平传播 SA 的肠毒素基因大多位于染色体上, 只少数位于质粒上, 例如肠毒素 D, 且与耐药基因处于相同质粒中本次实验检出携带肠毒素 SED 基因菌株少, 而检出携带肠毒素 SEA SEC SEF 基因的菌株, 通过耐药分析发现, 菌株的这种肠毒素基因表型与耐药性之间没有明显的因果关系但由于 SA 的肠毒素有强大的毒力和致病性, 故在进行耐药分析的同时检测肠毒素的产生情况, 把它列入 MRSA 流行病学检测的内容中, 以指导临床更好地治疗和预防 MRSA 引起的院内感染 ( 下转 75 页 )

5 李林海, 等. 西尼罗河病毒前膜蛋白 E 蛋白结构域 Ⅲ 融合蛋白特异性单克隆抗体的制备以及应用分析 75 获得了一种可稳定分泌表达抗 prem/eⅢ 的单克隆抗体, 并对单克隆抗体的生物学性质进行了分析结果显示该单抗具有较高的效价, 且只与 WNV 发生特异反应, 而与 JEV SLEV YFV 和 DENV 等均无交叉反应, 具有较高的特异性对临床感染样本检测显示该抗体具有较高的临床诊断准确性目前针对血清学诊断特异性低的问题, 本研究所获得的单克隆抗体有待进一步开发为临床检测试剂, 用于临床诊断西尼罗河病毒参考文献 : [] Kilpatrick AM. Globalization, land use, and the invasion of West Nile virus[j]. Science,, (65): 7. [] Walsh MG. The role of hydrogeography and climate in the landscape epidemiology of west nile virus in New York state from to [J]. PLoS One,, 7(): e6. [] Decarlo CH, Clark AB, Mcgowan KJ, et al. Factors associated with the risk of West Nile virus among crows in New York State[J]. Zoonoses Public Health,, 58(): 75. [] Ludwig A, BigrasPoulin M, Michel P, et al. Risk factors associated with West Nile virus mortality in American Crow populations in Southern Quebec[J]. J Wildl Dis,, 6(): 958. [5] Hirota J, Nishi H, Matsuda H, et al. Crossreactivity of Japanese encephalitis virusvaccinated horse sera in serodiagnosis of West Nile virus[j]. J Vet Med Sci,, 7(): 697. [6] 高树园, 朱建国. 马西尼罗河病毒病研究进展 [J]. 中国畜牧兽医, 9, 6(): 858. [7] Wang G, Minnis RB, Belant JL, et al. Dry weather induces outbreaks of human West Nile virus infections[j]. BMC Infect Dis,, : 8. [8] Bakonyi T, Hubalek Z, Rudolf I, et al. Novel flavivirus or new lineage of West Nile virus,central Europe[J]. Emerg Infect Dis, 5, (): 5. [9] Nolan MS, Zangeneh A, Khuwaja SA, et al. Proximity of residence to bodies of water and risk for west nile virus infection: a casecontrol study in houston, Texas[J]. J Biomed Biotechnol,, Doi:.55// []Wodak E, Richter S, Bagó Z, et al. Detection and molecular analysis of West Nile virus infections in birds of prey in the eastern part of Austria in 8 and 9[J]. Vet Microbiol,, 9(): []Vazquez Y, PupoAntúnez M, Vazquez SV, et al. Monoclonal antibody to dengue capsid protein: its application in dengue studies [J]. MAbs, 9, (): 576. []Chu JH, Chiang CC, Ng ML. Immunization of flavivirus West Nile recombinant envelope domain III protein induced specific immune response and protection against West Nile virus infection[j]. J Immunol, 7, 78(5): 699. ( 编辑 : 吴锦雅 ) ( 上接 7 页 ) 参考文献 : [] Larkin EA, Carman RJ, Krakauer T, et al. Staphylococcus aureus: the toxic presence of a pathogen extraordinaire[j]. Curr Med Chem, 9, 6(): 9. [] Fraser JD, Proft T. The bacterial superantigen and superantigenlike proteins[j]. Immunol Rev, 8, 5: 6. [] 李红玉, 龙军, 徐霞. 金黄色色葡萄球菌肠毒素的检测及结果分析 [J]. 江西医学检验, 6, : 9. [] 王营, 于宏伟, 郭润芳, 等. 金黄色葡萄球菌肠毒素基因分布的研究 [J]. 河北农业大学学报,, (5): 88. [5] Becker K, Friedrich AW, Lubritz G, et al. Prevalence of genes encoding pyrogenic toxin superantigens and exfoliative toxins among strains of Staphylococcus aureus isolated from blood and nasal specimens[j]. J Clin Microbiol,, (): 9. [6] LawrynowiczPaciorek M, Kochman M, Piekarska K, et al. The distribution of enterotoxin and enterotoxinlike genes in Staphylococcus aureus strains isolated from nasal carriers and food samples[j]. Int J Food Microbiol, 7, 7(): 9. [7] Kreiswirth BN, Lofdahl S, Bethey MJ, et al. The toxic shock syndrome exotoxin structural gene is not detectably transmitted by a prophage[j]. Nature, 98, 5: 79. [8] da Cunha Mde L, Calsolari RA, Júnior JP. Detection of enterotoxin and toxic shock syndrome toxin genes in Staphylococcus, with emphasis on coagulasenegative staphylococci [J]. Microbiol Immunol, 7, 5(): 89. [9] ElGhodban A, Ghenghesh KS, Márialigeti K, et al. PCR detection of toxic shock syndrome toxin of Staphylococcus aureus from Tripoli, Libya[J]. J Med Microbiol, 6, 55(Pt ): 798. [] 陈智, 江元山, 熊燕, 等. 金黄色葡萄球菌食物中毒分离株毒素基因的 PCR 分析 [J]. 中国卫生检验杂志, 9, 9():. []Akineden O, Annermuller C, Hasson AA, et al. Toxin genes and other characteristics of Staphylococcus aureus isolates from milk of cows with mastitis[j]. Clin Diagn Lab Immunol,, 8: [] 李琳, 黄金海, 赵耘, 等. 葡萄球菌肠毒素基因分型 PCR 检测技术的研究 [J]. 食品科学, 8, (7):. []Nishi J, Yoshinaga M, Miyanohara H, et al. Anepidemiologic survey of methicillinresistant staphylococcus aureus by comibined use of mechvr genotyping and toxin genotyping in a university hospital in Japan[J]. Infect Control Hosp Epidermiol,, : 56. [] 樊景春, 白亚娜, 石福艳, 等. 医院金黄色色葡萄球菌耐药及质粒同源性分析 [J]. 中国公共卫生, 8, 7: 867. ( 编辑 : 黄开颜 )

福建农业学报材料与方法试验菌株引物主要仪器主要试剂细菌培养模板的制备反应条件扩增产物的检测特异性试验敏感性试验分离菌株检测产物的克隆及序列测定结果与分析

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