试 验 材料与仪器 材料 革兰氏阳性菌为金黄色葡萄球菌.. 84 革兰氏阴性菌为大肠杆菌..3 江苏省博达生物卫生技术有限公司 营养肉汤 营养琼脂 北京陆桥技术有限责任公司 磷酸二氢钾 磷酸氢二钠 分析纯 国药集团化学试剂有限公司 纯平纹棉标准贴衬织物 平方米质量为 9 上海市纺织工业技术监督所 仪

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1 年 月 第 期 研究与技术!"#$ 纺织品抗菌性能测试中试验菌活性确定的研究 蒋洁蓉 杨 ' 瑶 王田田 黄 ' 璐 黄启英 江苏省纺织产品质量监督检验研究院 南京 南京师范大学金陵女子学院 南京 摘要 研究了对定时扩增培养后菌液 8 值与纺织品抗菌性能测试中试验菌活性确定相关性 有效地缩减了织物抗菌性能振荡测试法中试验有效性判定所需的试验周期 研究中确定了以扩增培养 0 后的试验菌 8 值作为纺织品抗菌性能测试中试验菌活性的评判指标 结果显示 8 值大于 8 的菌液制备接种菌液 标准空白试验菌增长值 即后续抗菌性能测试试验有效 当 8 值在 8 :4 时 8 值越大 值越大 即后续抗菌性能测试试验结果越准确 关键词 纺织品 抗菌性能 8 值 菌种活性 试验有效性中图分类号 3''' 文献标志码 ''' 文章编号 8''' 引用页码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抗菌纺织品能抑制微生物生长 使织物具有抗菌防臭效果 近年来 抗菌产业发展迅速 各种抗菌产品也纷纷面市 但在中国 纺织品抗菌检测项目较其他传统的纺织品检测项目而言 开展的时间短 检测的机构少 且各单位对各项标准的理解存在分歧 同时 由于微生物的培养 实验人员的操 收稿日期 &88 修回日期 & 基金项目 江苏省质量技术监督局科技项目?& 作者简介 蒋洁蓉 34 女 博士 高级工程师 主要从事纺织品安全性和功能性检测研究 通信作者 黄启英 高级工程师 0D!+!G & 作 标准判定的基准也存在异动因素 因此 目前国内检测机构间及各检测机构内不同实验人员间检测结果不一致 在一定程度上制约了抗菌纺织品产业的发展 在各抗菌纺织品的性能检测方法中广为采用的是振荡法 该方法是动态测试法 测试原理是抗菌试样与菌液振荡反应 检测样品与菌液接触前后的抗菌性 该检测方法对试样的形状和吸水性要求都不高 且对于粉末状 液体状 羽绒羽毛及不规则形状织物等都能使用 因此 本文选取振荡法进行研究 通过确立试验菌株的培养条件这一关键环节 为进一步建立振荡法检测抗菌纺织品的标准化实验流程奠定基础

2 试 验 材料与仪器 材料 革兰氏阳性菌为金黄色葡萄球菌.. 84 革兰氏阴性菌为大肠杆菌..3 江苏省博达生物卫生技术有限公司 营养肉汤 营养琼脂 北京陆桥技术有限责任公司 磷酸二氢钾 磷酸氢二钠 分析纯 国药集团化学试剂有限公司 纯平纹棉标准贴衬织物 平方米质量为 9 上海市纺织工业技术监督所 仪器 4 净化工作台 苏州工业园区三兴净化科技有限公司 高压灭菌锅 日本 % 公司 $& 烘箱 德国宾德公司 * 生化培养箱 上海一恒科技有限公司 5. 恒温振荡培养箱 太仓实验设备厂 8 核酸蛋白测定仪 $22(-), 公司 E"/+ 菌落计数器 台湾.?$ 方 法 ' 试剂配制按照 598 抗菌针织品 中相关条款配制下列试剂 营养肉汤的配制 牛肉浸膏 蛋白胨 氯化钾 去离子水 最终定容 * 灭菌后 2 值为 84 营养琼脂培的配制 牛肉浸膏 蛋白胨 氯化钾 琼脂粉 去离子水 最终定容 * 灭菌后 2 值为 84 "9*B 磷酸盐 缓冲液的配制 磷酸氢二钠 4& 磷酸二氢钾 8 去离子水 最终定容 * 灭菌后 2 值为 :& 温度 & : 保存备用 ' 标准空白样的制备准备符合 EB9844 纺织品色牢度试验标准贴衬织物第 部分 棉和粘胶纤维 要求的棉标准贴衬织物 至于沸水中高温蒸煮 :&! 浴比 室温下用大量蒸馏水洗涤 次 每次 :! 在通风处自然悬挂晾干 制成 = 大小的碎片 称取 作为一份试样 用小纸片包好 # 灭菌! 备用 经处理的棉织物不含杂质 无油污且具有良好的外观吸水性 ' 菌种活化与扩培菌液 8 值测定活化 菌种用甘油冻存 8 按照 59 第 卷 年 月 第 期 8 抗菌针织品 中相关条款进行菌种活化 甘油冻存菌种转种于营养肉汤于 培养 4 :& 0 划转平板培养 & :&4 0 在冰箱中保存不超过 - 取营养肉汤 * 放入 * 三角瓶中 用接种环从已培养的平皿中挑取单个菌落接种于营养肉汤培养基中 )9! 振荡培养 4 0 菌液浓度达到 = 3 : = 3.9* 扩培菌液 8 值的测定 按照 的比例 取上述活化菌液 * 于 * 营养肉汤培养基中 4 )9! 振荡培养 分别于培养的 & 0 时取菌液用比浊法测定菌液浓度 8 值 记录数值 精确到 每个时间点重复测定 & 次 同时 取不同时间间隔菌液经 B 缓冲液适当稀释后涂布 培养 & : &4 0 计数 &' 接种菌液的准备大肠杆菌接种液 取经 0 扩培后 8 值大于 8 的大肠杆菌菌液 * 用 B 缓冲液进行 = 倍稀释 充分混匀 金黄色葡萄球菌接种液 取经 0 扩培后 8 值大于 8 的金黄色葡萄球菌菌液 * 用营养肉汤进行 = 倍稀释 再用 B 缓冲液进行 = 倍稀释 充分混匀 此接种菌液中含有微量的营养肉汤 经稀释后的接菌液中活菌数目约为 = : & =.9* 即用 大肠杆菌取下限 金黄色葡萄球菌取上限 ' 试验有效性测试 接触时活菌数 在装有 *B 缓冲液的 个 * 的锥形瓶中各加入备用标准空白试样 然后各加入接种菌液 * 盖上瓶盖室温振荡! 后 个锥形瓶各取混匀的试液 * 经 次 倍稀释后各取 * 于营养琼脂培养基上涂布 每个稀释度制作两个平板作为平行样 倒置平板 培养 & :&4 0 计数 此为 接触时活菌数 接触 4 0 后活菌数 经 接触取样后的标准空白试样锥形瓶进行封口后 & )9! 振荡 4 0 振荡培养结束后 个锥形瓶各取混匀的试液 * 经 & 次 倍稀释后各取 * 于营养琼脂培养基上涂布 每个稀释度制作两个平板作为平行样 倒置平板 培养 & :&4 0 计数 此为接触 4 0 后活菌数

3 年 月 第 期 选择菌落数在 :. 的合适稀释度的平板计数 若最小稀释倍数平板中的菌落 C 则按实际数量记录 若无菌落生长 则菌落数记为 C 两个平行平板的菌落数相差应在 以内 否则此数据无效 应重作试验 通过标准空白试样细菌增长值 的计算判定试验的有效性 即 试验菌活性较强 试验有效 <" " 其中 是试验菌与标准空白试样经 4 0 接触后 个锥形瓶中试验菌活菌浓度的平均值.9* 是试验菌与标准空白试样 接触后 个锥形瓶中试验菌活菌浓度的平均值.9* 结果与讨论 菌种生长曲线与菌活性确定大肠杆菌生长曲线 大肠杆菌!"#$ 扩培 8 值测试记录结果见表 以扩培时间为横坐标 & 次重复试验所得平均 8 值为纵坐标作该试验条件下!"#$ 的生长曲线 结果见图 如图 所示 经扩增培养 0 后!"#$ 8 值达到 8 左右 处于生长对数期 表 扩培时间与大肠杆菌 8 值 6%%"!2"!1! 1")(!(@ 8,!"#$ 扩培时 8 间 90 试验 试验 试验 试验 & 平均值 4 & 4 & & & & & &4 8 & 8 8 & '' 金黄色葡萄球菌生长曲线 金黄色葡萄球菌 %&'% 扩培 8 值测试记录结果见表 以扩培时间为横坐标 & 次重复试验所得 8 值的平均值为纵坐标作该试验条件下 %&'% 的生长曲线 结果见图 如图 所示 经扩增培养 0 后 %&'%8 达到 8 左右 表 扩培与金黄色葡萄球菌 8 值 6%%"!2"!1! 1")(!(@ 8 "(, %&'% 扩培时 8 间 90 试验 试验 试验 试验 & 平均值 8 & & & & & '' 该试验条件下所得扩增培养生长曲线显示!"#$ 和 %&'% 经过 : 0 扩增培养后 试验菌 8 值达到 8 左右 细菌进入对数期生长期 此时 细胞数目以几何级数增加 其对数与时间呈直线关系 生长速率常数最大 即代时最短 细胞进行平衡生长 菌体大小 形态 生理特征等比较一致 代谢最旺盛 有相关文献报道抗生素作用对该时期的细菌效果最佳 4 因此 该试验条件下 以扩增培养 : 0 后试验菌 8 值的大小作为细菌生长是否进入对数期判定的依据 从而确保接种液中的细菌细胞处于细胞对数期 统一细胞生理状态 由此减小不同试验中不同批次的试验菌生理状态差异 即活性差异带来的测试结果的不稳定性和不可比性 此外 以扩增培养 : 0 后的试验菌 8 值初步确认试验菌细胞的活性 即 在该试验条件下 经扩增培养 0 图!"#$ 和 %&'% 扩培生长曲线,"0()0 1)(,!"#$) %&'%,() "!2"!1! 1")( 后 试验菌 8 值小于 则表明试验菌活性不够 需重新活化试验菌 从而缩减进一步通过有效性判定试验确定试验菌活性的试验时间 4

4 同时 平板计数结果显示经 : 0 扩增培养后 * 试验菌菌液中的活菌数达到 4.!"#$ 和 %&'% 经过 0 扩增培养后 菌液单位活菌数分别达到 = 4 = 4.9* 经 次稀释后即可达到接种液菌液浓度要求 即.9* 试验有效性判定 取上述 0 扩增培养后 8 值达到 8 以上的菌液制备接种菌液进行试验有效性判定测试 多次重复试验结果表明 该条件下的!"#$ 和 % &'% 标准空白试验菌增长值 试验有效 见图 此外 在 8 :48 值与增长值 存在一定的正相关 即 8 值越大 值越大 由图 比较可知 4 0 培养后 %&'% 的试验菌增长值较!"#$ 略小 分析原因 优化条件下 %&'% 的代时通常为 :! 而!"#$ 的代时通常为! 3 但两种测试用菌都能满足试验有效性判定的要求 即试验菌增长值 由此也验证了较!"#$ 在 %&'% 试验接种菌的准备中应适当地增加营养肉汤量和接菌数量 即不同于!"#$ 的 次 B 缓冲液 倍稀释 %&'% 采用先 次营养肉汤 倍稀释然后 次 B 缓冲液 倍稀释 且稀释后的接菌液中活菌数目确保在标准要求 = : 图 扩增菌液 8 值与试验菌活性值,"0(1)("! ((( 8 "(,"!2"!1! 1")("! - 1!!+"(,(1()! 3 第 卷 年 月 第 期 & =.9* 的上限 由此可有效实现试验菌增长值 确保试验的有效性 结 论 本文对纺织品抗菌性能测试中试验菌种活性确定进行了探讨性研究 试验结果表明 在标准规定的二步预培养后 试验菌通过 0 左右的扩增培养 可使试验菌处于生长的对数期 以此时的试验菌作为接种菌 通过 8 值初步判定试验菌的活性 从而有效确保后期试验的有效性和测试结果的精确度 同时 研究表明经扩增培养后 8 值在 8 :4 的细菌 后期标准空白试验菌增长值 满足试验有效性判定 同时 标准空白试验增长值 与 8 值存在一定的相关性 即 8 值越大 值越大 研究表明试验菌活性的确定是抗菌检测方法中的关键步骤 试验菌活性的一致性是试验结果具有可比性和重演性的基础 高效 准确的活性确定步骤是试验结果快速 准确的关键保障 进一步深入 全面的探讨和研究将最终实现抗菌测试技术达到与中国抗菌纺织品产业发展相称的程度 参考文献 商成杰 邹承淑 李君文 国内外织物抗菌卫生整理的进展 纺织科学研究 & E.0(6!( 5.0(0 * ( (1( -(("2(!!!1)!",!!0!,(/!"(0(- )-(/!"( 1!(1(- (()10& 计芬芬 顾珍 谭玉静 等 纺织品抗菌性能的改良振荡法测定 印染 4&& (,( E 50( 6! ("!1()!" ("!,(/!"(!0!2)(- 0#(,"# (0- +(!!!0!4&& 刘晨 王爱兵 计芬芬 关于纺织品抗菌性判定的思考 印染 84&4 *.0( E!! (,(-(,("!, 1()!)(2("(1+,)(/!"( +(!!!0! 84&4 & 计芬芬 刘晨 顾珍 抗菌纺织品测试方法的比较及标准化问题探讨 印染 &8 (,( *.0( E 50(.2)! - -)-!!,(!(0-,!!1)!"(/!"( +(!!!0!&8 全国纺织品标准化技术委员会针织品分会 59 8 抗菌针织品 北京 中国标准出版社 8.0!!"(/!"( -)-!! (10!1".!((9?!() 1!(( 59 8!1()!"?!() B(!6! -)-)(,.0!8

5 年 月 第 期 8 刘晨 计芬芬 顾珍 等 纤维及其制品抗菌性能的动态测试 测试与标准 &&8 *.0( (,( E 50( ("+!1(,)!!1)!"1!!+,,!()-!2)-1%()! - (!&&8 王升智 高波 周智慧 等 重组大肠杆菌 生长曲线的测定 黑龙江畜牧兽医 科技版 3834 E 0(0! E B 5 50!0! (" 0( -(()!!,)0 1)(,))(1)1(-!"#$ (!"6!!" 1!(1( 周黎明 彭昆 王浴生 喹诺酮类抗生素抗菌后效作用 综述 四川生理科学杂志 334& 5*!! $E? E0(!!!1 (,(1,D!"(!!!1 ()!() )",!10 0+!"!1" 1!(1(334& 3?0(E)0,1()!"22"! $B9* 3 && (/#,1()!"+ (9)0G0" 丝绸 参考文献撰写规范 '' 来稿涉及的参考文献需提供中英文对照 请按 EB9 & 文后参考文献著录规则 标准著录 并在正文中标出相应序号 举例如下 专著 序号 主要责任者 题名 其他题名信息 文献类型标志 其他责任者 任选 版本项 出版地 出版者 出版年 引文页码 例 霍斯尼? 谷物科学与工艺学原理 % 李庆龙 译 版 北京 中国食品出版社 343?E)! 1!(1(- ;(10"+)!1!2"( %)"(- +*!"@()! B(!6!.0!(( - )( 343 EE%0(."();+0)0. ) 1((1(!21(()!(" %*- 0(*!))+1!! 33 专著中的析出文献 序号 析出文献主要责任者 析出文献题名 文献类型标志 析出其他责任者 99 专著主要责任者 专著题名 其他题目信息 版本项 出版地 出版者 出版年 析出的页码 引用日期 例 白书农 植物开花研究 % 99 李承森 植物科学进展 北京 高等教育出版社 334 &88 B 0 (()10 "()!" % 99*.0((-1(! "1!(1(B(!6!!0()$-1! )( 334 &88 连续出版物 期刊 报纸 中的析出文献 序号 析出文献主要责任者 析出文献题名 文献类型标志 连续出版物题名 其他题名信息 年 卷 期 页码 例 张旭 张通和 易钟珍 等 采用磁过滤 %$@@ 源制备 *. 膜的研究 北京师范大学学报 自然科学版 4& &4&4 5E 5E 0( 500( ("*.,!"2)(2)(- +,!"()(- %$@@+( )",B(!6! )"!()!+ )" 1!(1( 4& &4&4 闵云霄 中国服装国际化瓶颈待破 中国企业 报 & % /!0(!()!"!!,.0!((1"0! "((1# ()#(.0!$()2)!((2() & & 专利文献 序号 专利申请者或所有者 专利题名 专利国别 专利号 文献类型标志 公告日期或公开日期 例 姜锡洲 一种温热外敷药的制备方法 中国 E!0(0-,)(-!1!(,)(/()"2 2"!1!.0! 电子文献 序号 主要责任者 题名 其他题名信息 文献类型标志 9 文献载体标志 出版地 出版者 出版年 更新或修改日期 引用日期 获取和访问路径 例 萧钰 出版业信息化迈入快车道 $B9* 3&0 21)(-()19(9 330 "!0!!-)+!,)!! (()!! 0(,"( $B9*3 &0 2 1)(-()19( 标准文献 序号 析出文献主要责任者 标准编号标准名称 99 专著主要责任者 专著题名 其他题目信息 版本项 出版地 出版者 出版年 析出的页码 例 国家标准局信息分类编码研究所 EB 世界各国和地区名称代码 99 全国文献工作标准化技术委员会 文献工作国家标准汇编 北京 中国标准出版社 (()10!(,,)!."!,!1! -.-! (B)(,-)-EB (,)0((2)( (!,(,.)!(- (! 99.0!!" (10!1".!((, -)-!!,)1(!!" -)-!!,) 1(! B(!6!.0! -)- )(

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