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韬示
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1 中国药理学通报ＣｈＰｈｍＢｕＤ网络出版时间网络出版地址ｈｐｍＲｈｍ阳离子阿奇霉素微类脂体体内外相关性曾梅钟萌冯悦罗见春张奇娆张景? 重庆医科大学药学院药物高校工程研究中心重庆西南医科大学附属医院药剂科四川泸州西南医科大学附属医院核医学科四川泸州要进行房室模型拟合直接用数学方法以真实的实文献标志码Ａ文章编号验数据计算体内输入函数Ｒ随着以缓释控释制中国图书分类号ＲＲＲＲＲ剂为主的给药系统的普及ＷＮ法和反卷摘要目的采用ＷＮ法和反卷积分法评价阳离积分法的应用较为广泛本研究同时以Ｗ子阿奇霉素微类脂体ｈｍｍＡＣＭＮＳ的体外释放与体内吸收的相关性方法采用动态膜透析法研究ＡＣＭＮＳ的体外释放行为高效液相色谱法测定大鼠单剂量灌胃ＡＣＭＮＳ和阿奇霉素ＡＭ后的血药浓Ｎ法和反卷积分法分别从室模型拟合和数学模型的角度对ＡＣＭＮＳ的体内外相关性进行了双重研究为ＡＣＭＮＳ的体外释放行为预测药物体内吸度通过一室模型ＷＮ法和反卷积分法评价ＡＣ收特征和变化规律提供一定的科学依据ＭＮＳ的体内外相关性结果以体内吸收百分数Ｆ和输材料入函数Ｒ分别与体外累积释放率Ｘ建立的线性方程分别药品与试剂阿奇霉素上海现代制药股份为ＦＸＲＸ有限公司阿奇霉素对照品效价ＵＰ结论中国食品药品检定研究所胆固醇广州天马精细ＡＣＭＮＳ的体外释放与体内吸收之间没有相关性上海申宇医药化工有限公司化工厂吐温十八胺上海南翔试剂有限公司甲醇乙腈异丙关键词阿奇霉素微类脂体药代动力学ＷＮ法反卷积分法体内外相关性阿奇霉素ｈＡＭ是新一代氮杂内酯类抗生素临床上主要用于呼吸道皮肤和软组织感染但是其口服治疗往往伴有腹痛腹泻恶心呕吐等胃肠道不良反应因此制备的阳离子阿奇霉素微类脂体ｈｍｍＡＣＭＮＳ是具有脂质体相似特征的泡囊结构用于口服递送系统后可持续释放和改善ＡＭ的药代动力学过程提高生物利用度降低药物毒副作用具有很高的潜在应用价值ＷＮ法是用于评价一室模型药物吸收动力学的经典方法该法简单既不要求以静脉给药做参比也不需要对吸收的机制与动力学模式进行限制反卷积分法Ｄｖｕ不需醇为色谱纯其余试剂均为分析纯实验用水为超纯水仪器安捷伦型高效液相色谱仪美国Ａ公司ＵＶＶＩＳ型紫外可见分光光度仪Ｔ日本岛津公司分析电子天秤瑞士Ｍ公司激光粒度仪英国Ｍｖ公司ＱＬ型旋涡混合器海门市其林贝尔仪器制造有限公司ＴＧＬＢ型高速台式离心机江苏省金坛市大地自动化仪器厂ＸＳＰＸ型生物显微镜宜春金浩科技有限公司ＭＱ型超纯水系统美国Ｍｐ公司动物只健康ＳＤ大鼠各半体质量重庆医科大学实验动物中心提供动物合格证号ＳＣＸＫ渝方法ＡＣＭＮＳ的制备采用薄膜蒸发冷冻法制收稿日期修回日期基金项目重庆市基础与前沿研究计划重点项目ＮｙＢＸ女硕士生研究方向药物新剂型与新作者简介曾梅ｍｑｑｍ技术Ｅ备ＡＣＭＮＳ取适量ＡＭ胆固醇十八胺和吐温于ｍｌ圆底烧瓶中加入适量二氯甲烷溶解减压蒸发至烧瓶内壁上形成一层均匀透明薄膜加入含有甘露醇的磷酸缓冲溶液ＰＢＳ和若干张景? 女博士教授博士生导师研究方向玻珠继续水浴并在常压下搅拌分散使薄膜溶胀ｍｑ药物新剂型与新技术通讯作者Ｅ水合得到混悬液混悬液置于冰箱中冷冻ｍ过夜后取出于室温下完全融化反复冻融次可

2 1714 中国药理学通报 ChinesePharmacologicalBuletin 2017Dec;33(12) 得 ACMNS 混悬液, 于 4 冰箱中储存备用 2.2 ACMNS 的粒径分布和 zeta 电位取适量 ACMNS, 用超纯水稀释一定倍数后, 采用显微镜下显微计数法测定其粒径, 马尔文激光粒度仪测定其 zeta 电位 [10] 2.3 ACMNS 的体外释放采用动态膜透析法测定 ACMNS 的体外释放度精密量取等浓度等体积的 ACMNS 和 AM 溶液, 将含药透析袋置于盛有释放介质为 ph6 8PBS 的溶出瓶中, 溶出介质体积为 500mL, 满足漏槽条件温度为 (37±0 5), 转速为 100r min -1, 分别于 h 时间点取 1mL, 立即补加等量同质同温的释放介质平行操作 3 份测定透析袋外液 ACMNS 和 AM 的含量, 计算累积释放百分率 Y, 并绘制释药曲线 2.4 ACMNS 的体内药代动力学动物给药方案及样品采集采用交叉设计单剂量给药方案, 给药剂量为每只大鼠 200mg kg -1 ( 以 AM 计 ) 将 12 只各半的 SD 大鼠随机分为 2 组, 每组 6 只实验前禁食 12h, 全程不禁水一组给予 AM(ig), 另一组给予 ACMNS(ig), 分别于给药 h 后麻醉大鼠, 通过眼底取血采集血样至肝素浸润过的离心管中, 6000r min -1 离心 10min 后, 取上层血浆, 置于 -20 冰箱中保存待测血浆样品的处理方法精密量取血浆样品 300μL, 加入 10μL 内标物罗红霉素 (20mg L -1 ) 80μL0 2mol L -1 的 NaOH 溶液和 2mL 乙醚, 涡旋混匀完毕后,3000r min -1 离心 10min, 提取乙醚层, 于 40 真空干燥后, 加 200μL 甲醇复溶, 涡旋,12000r min -1 离心 10min, 取上清液 40 μl 作为供试品进样分析体内分析方法的建立色谱条件 : 流动相为乙腈异丙醇 0 004mol L -1 的磷酸氢二钠 = (V/V/V), 流速 1mL min -1, 检测波长 210 nm, 柱温 40 色谱柱为大连伊利特 C 18 (250mm 4 6mm,5μm) 标准曲线的绘制 :5 份 100μL 的空白血浆中加入不同浓度的 AM 标准溶液, 配制成系列浓度的血浆样品, 按血浆样品处理方法操作后, 分别以 AM 和内标物的峰面积之比 A 对 AM 浓度 C(mg L -1 ) 进行线性回归, 得到标准曲线精密度考察 : 配制 AM 低中高 3 个质量浓度分别为 mg L -1 的血浆样品, 各浓度平行配制 3 份, 按血浆样品的处理方法,1d 内连续进样检测 5 次, 连续 5d, 考察其日内和日间精密度回收率考察 : 配制 AM 低中高 3 个质量浓度为 mg L -1 的血浆样品, 各浓度平行配制 3 份, 按血浆样品的处理方法, 同时直接测定相应浓度 AM 对照品溶液和内标溶液, 计算绝对回收率和萃取回收率 2.5 Wagner Nelson 法评价体内外相关性将血药浓度数据用 DAS2 1 1 软件进行拟合, 并以 AIC R 2 的大小判断 ACMNS 在大鼠体内药动学房室模 [6,11-12] 型采用 Wagner Nelson 法计算各时间点体内药物吸收百分数, 并与相应时间点体外药物累积释放百分数进行线性回归, 考察其体内外相关性, 计算公式如下 : F a = (X A) = C t+k 0C t t dt (1) (X A ) k 0C t dt 其中,F a 为 t 时药物吸收百分数,X A 为体内吸收的药物总量,Ct 是 t 时体内血药浓度,k 是药物消除的一级速率常数 2.6 反卷积分法评价体内外相关性 C ti = k=i R K AUC t i -t k-1 t i -t k (2) k=1 公式中 AUC 为相邻时间间隔内 ACMNS 药 - 时曲线下面积,C (ti ) 为 ACMNS 各时间点的血药浓度, 将各点数据代入即可求得相邻时间间隔内 ACMNS 的输入函数 R [7,11] 以输入函数 R 对相对应时间点的体外累积释放度进行线性回归, 考察 ACMNS 的体内外相关性 3 结果 3.1 ACMNS 的粒径分布和 zeta 电位经显微计数法测定其粒径为 (5 87±1 17)μm, 马尔文激光粒度仪测定其 zeta 电位为 +(12 5±0 02)mV 3.2 ACMNS 的体外释放 ACMNS 和 AM 的释放曲线如 Fig1 所示, 二者在相同的释放介质 (ph6 8 PBS) 中比较,ACMNS 比原料药 AM 释放的慢, 在前 0 5h 释放了约 24%, 前 2h 释放了约 38%,8h 释放了约 62%,36h 释放了约 77%,240h 基本释放完全,ACMNS 的释放行为得以改善, 具有明显的缓释作用 3.3 ACMNS 的体内药代动力学 AM 体内血浆样品的标准曲线方程为 :A =19 26C-52 69,r= ,n=3,AM 的浓度在 1 0~50 0mg L -1 范围内和内标物罗红霉素的峰面积比有良好的线性关系高中低 3 个浓度的溶液中,AM 的日内精密度 RSD 分别为 4 32% 2 13% 0 94%, 日间精密度 RSD 分别为 3 14% 1 56% 1 12%, 日内和日间精

3 中国药理学通报 ChinesePharmacologicalBuletin 2017Dec;33(12) 1715 密度均良好, 符合生物样品分析方法学要求高中低 3 个浓度的溶液中,AM 的绝对回收率分别为 97 80% 99 51% 98 43%, 萃取回收率分别为 82 31% 88 49% 90 24%, 回收率较高, 说明采用该方法处理 AM 血浆样品合适 F a, 得线性回归方程 F a =3 0524Y ,r= , 根据相关系数临界表 r (2,0 05) =0 9500,r 小于相关系数临界值, 结果表明 ACMNS 体外累计释放百分数与体内吸收百分数间没有相关性 Tab1 ACMNScompartmentpharmacokineticmodelfiting Weights Onecompartmentmodel AIC R 2 Twocompartmentmodel AIC R /C /C Tab2 TheWagner NelsonparametersaboutACMNS Time/h C t /mg L -1 0C t t dt k 0C t t d t F a /% X/% Fig1 ThereleasecureofACMNSandAM invitro ACMNS 和 AM 在大鼠体内血药浓度与时间绘制成的药 - 时曲线如 Fig2 所示,ACMNS 的达峰时间 T max 为 4h 大鼠体内的血药浓度时间数据用 DAS2 1 1 药动学软件进行处理, 得到 ACMNS 的房室模拟, 见 Tab1 根据 R 2 最大,AIC 最小的原 [13] 则选取 ACMNS 的最佳药代动力学模型为一室模型 3.5 反卷积分法评价体内外相关性根据公式 (2) 计算 ACMNS 反卷积分中的输入函数 R, 得到各时间点为 h 时的输入函数 R 值, 见 Tab 3 以体外累积释放率 X 作为自变量, 输入函数 R 为因变量, 得回归方程 R=2 3413X ,r= , 临界值 r (2,0.05) =0 9500,r 小于相关系数临界值, 结果表明,ACMNS 无体内外相关性此结果与 Wagner Nelson 法评价体内外相关性的结果一致 Time/h Tab3 ThedeconvolutionparametersaboutACMNS C t /mg L AUCt i-t k-1-1 t i -t k R X/% /mg h L Fig2 PharmacokineticprofilesofACMNSand AM afterintragastricadministration 3.4 Wagner Nelson 法评价体内外相关性由 Fig 2 可知, 单剂量灌胃 ACMNS 后,4h 后达最大血药浓度, 根据公式 (1) 计算 h 时 ACMNS 的体内吸收分数 F a, 见 Tab2 以 0 5~4h 体外累积释放百分率为自变量 X, 体内吸收百分数为因变量 4 讨论 AM 为脂溶性药物, 口服后引起的胃肠道不良反应可通过改变其剂型而减轻因此, 将其制备成 ACMNS 后, 类脂体泡囊结构包裹的药物需通过一定时间的溶解扩散以及囊材的溶蚀而被体内吸收同时, 有效地减缓了药物的释放速率, 延长了药物在体内有效浓度的时间体内外相关性研究的方法较多, 最常用的是利用模型参数 k 求算出体内吸收分数以吸收分数与相同时间点的体外累积释放率的相关系数的大小来判断体内外的相关性 2015 版中华人民共和国药

4 1716 中国药理学通报 ChinesePharmacologicalBuletin 2017Dec;33(12) 典规定, 对于在体内吸收呈一室模型的药物, 可根据 Wagner Nelson 法计算其吸收百分数本研究通过该法进行 ACMNS 体内外分析, 结果表明 ACMNS 无体内外相关性但是室模型拟合法的不足也在于吸收分数的计算引入了消除速率常数 k 由于缓控释制剂在体内滞留时间较长, 药物从制剂中释放速度较慢, 尾段数据常混杂有吸收相, 对尾段数据分析易产生较大误差反卷积分法不需使用模型而是直接根据实验数据就可以得到关于药物体内动态的情况 [14] 但反卷积分法所需数据量大, 对实验时间点的设置也有要求, 否则只能根据原始数据通过外推法或者内插法计算某些时间点的血药浓度, 因此本文中反卷积分法的相关性系数稍低, 但与 Wagner Nelson 法评价体内外相关性的结果仍一致两种不同类型的方法分别从室模型拟合及数学模型的角度双重验证了 ACMNS 的体外释放与体内吸收之间没有相关性参考文献 : [1] NirmalaM J,MukherjeeA,ChandrasekaranN.Designandfor mulationtechniqueofanoveldrugdeliverysystemforazithromycin anditsanti bacterialactivityagainststaphylococcusaureus[j]. AAPSPharmSciTech,2013,14(3): [2] 胡守伟. 阿奇霉素的不良反应探析 [J]. 中国现代药物应用, 2010,4(8):152. [2] HuSW.Analysisofadversereactionsofazithromycin[J].ChinJ ModDrugAppl,2010,4(8):152. [3] ZhongM,FengY,LiaoH,etal.Azithromycincationicnon leci thoidnano/microparticlesimprovebioavailabilityandtargetingefi ciency[j].pharmres,2014,31(10): [4] MohsenAM,AbouSamraM M,ElShebineySA.Enhancedoral bioavailabilityandsustaineddeliveryofglimepiridevianiosomal encapsulation:in vitrocharacterizationandin vivoevaluation[j]. DrugDevIndPharm,2017,6:1-11. [5] WagnerJG,NelsonE.Kineticanalysisofbloodlevelsandurinary excretionintheabsorptivephaseaftersingledosesofdrug[j].j PharmSci,1964,53: [6] TangM,HuP,HuangS,etal.Developmentofanextended release formulationforapremilastandalevelainvitro invivocorelation studyinbeagledogs[j].chempharmbul,2016,64(11): [7] 蒋秋冬, 吴叶鸣, 张会, 等. 中药挥发油透皮促渗布洛芬的药动学及体内外相关性研究 [J]. 中国中药杂志,2016,41(23): [7] JiangQD,WuYM,ZhangH,etal.Evaluationofpharmacokinet icsandinvitro/invivocorelationofibuprofenwithesentialoils aspenetrationenhancerfolowingtransdermaladministration[j]. ChinJChinMasterMed,2016,41(23): [8] 罗文, 谭群友, 熊华蓉, 等. 普鲁斯的明缓释片体外释放与体内吸收的相关性研究 [J]. 四川大学学报 ( 医学版 ),2013,44 (1):80-3. [8] LuoW,TanQY,XiongH R,etal.Corelationbetweeninvitro andinvivoabsorptionofsustained releasingtabletsofneostigmine bromide[j].jsichuanuniv(medscied),2013,44(1):80-3. [9] BalakrishnanP,ShanmugamS,LeeW S,etal.Formulationandin vitroasesmentofminoxidilniosomesforenhancedskindelivery [J].IntJPharm,2009,377(1-2):1-8. [10] 袁誉铭, 陈学梁, 陈静, 等. 溴吡斯的明新型纳米乳体外释放和大鼠在体胃肠吸收 [J]. 中国药理学通报,2017,33(2): [10]YuanYM,ChenXL,ChenJ,etal.Invirtroreleaseandgastroin testinalabsorptionofnovelpyridostigminebromidenanoemulsion [J].ChinPharmacolBul,2017,33(2): [11] SanakaM,YamamotoT,OsakiY,etal.Asesmentofthegastric emptyingvelocitybythe13c octanoatebreathtest:deconvolution versusawagner Nelsonanalysis[J].JGastroenterol,2006,41 (7): [12] 吴锡凤. 瑞替加滨胃漂浮缓释片的药代动力学及体内外相关性研究 [D]. 合肥 : 安徽中医药大学,2015. [12]WuXF.Pharmacokineticsandinvitro/invivocorelationofreti gabinedihydrochloridestomachfloatingsustained releasetablets [D].Hefei:AnhuiUniversityofChineseMedicine,2015. [13] 刘建平. 生物药剂学与药物动力学 [M]. 第 4 版. 北京 : 人民卫生出版社,2011: [13]LiuJP.BiopharmaceuticalsandPharmacokinetics[M].Fourthe dition.beijing:people smedicalpublishinghouse,2011: [14] 岳鹏. 卷积法在体内外相关性研究中的应用 [J]. 药学学报,2009,44(1): [14]YueP.Applicationofnumericalconvolutioninvivo/invitrocore lationresearch[j].actapharmsin,2009,44(1): Invivoandinvitrocorrelationofazithromycincationicmicronniosomes ZENGMei 1,ZHONGMeng 2,FENGYue 3,LUOJian chun 1,ZHANGQi rao 1,ZHANGJing qing 1 (1.MedicineEngineringResearchCenter,ChongqingMedicalUniversity,Chongqing ,China; 2.DeptofPharmacy,AfiliatedHospitalofSouthwestMedicalUniversity,LuzhouSichuan ,China; 3.DeptofNuclearMedicine,AfiliatedHospitalofSouthwestMedicalUniversity,LuzhouSichuan ,China) Abstract:Aim Toevaluatethecorelationbetweenin vitroreleaseandinvivoabsorptionofazithromycincat ionicmicronniosomes(acmns) bywagner Nelson method anddeconvolutionmethod.methods The

5 invitroreleasebehaviorofacmnswasstudiedbydy namicmembranedialysis.afterasingledoseofintra gastricadministrationwithacmnsandaminrats,the AM concentrationsinplasmaweredeterminedbyhigh performanceliquidchromatography(hplc).wagner Nelsonanddeconvolutionmethodwereusedtoreveal theinvitro/invivocorelation.results Xusedascu mulativeinvitroreleaseandf a astheabsorptionper centage,theregresionequationwasestablished:f a = X ,r=0 8976,andXusedascumu lativeinvitroreleaseandrasinputfunction,there gresionequation wasestablished:r =2 3413X ,r= r<r (2,0.05) =0 9500(P < 0 05).Conclusion Thereisnocorelationbetween invitroreleaseandinvivoabsorptionofacmns. Keywords:azithromycin;micronniosomes;pharma cokinetics; Wagner Nelson method; deconvolution method;invitroandinvivocorelation

图对片剂累积释放度的影响

图对片剂累积释放度的影响岳红坤常明游雅邱树虹王婧乔宇石家庄学院化工学院河北石家庄为筛选盐酸小檗碱胃漂浮片的处方并评价其漂浮和体外释放特性根据辅料性质及制剂质量要求通过单因素实验及正交试验确定影响盐酸小檗碱胃漂浮片性能的主要参数确定了最优处方采用干粉直接压片制得盐酸小檗碱胃漂浮片在人工胃液中考察其漂浮性能及溶出度并用紫外可见分光光度法检测其释药量优选的处方为每片含碳酸氢钠羧甲基淀粉钠聚乙二醇