台灣獸醫誌 Taiwan Vet J 36 (1): 31-37, 20082010 年台灣豬場假性狂犬病抗體盛行率調查 31 2008 年台灣豬場假性狂犬病抗體盛行率調查 楊程堯王珮玲 * 楊平政 台灣動物科技研究所動物醫學組苗栗縣竹南鎮 350 苗栗縣竹南鎮科東二路 52 號 ( 收稿日期 :98 年 5 月 26 日 接受日期 :98 年 10 月 13 日 ) 摘要假性狂犬病 (pseudorabies; PR) 在台灣仍然是豬隻重要疾病, 本研究在 2008 年調查全國 23 個縣市, 隨機抽樣 247 個豬場共 3,698 個血清樣本, 利用 ELISA 法檢測豬隻血清中假性狂犬病病 ge 蛋白抗體, 以評估 PR 之牧場盛行率 在 247 個檢測豬場中有 102 個豬場為 ge 抗體陽性, 總牧場盛行率為 41.3% 各縣市牧場盛行率不一, 最高為 100%, 有 4 個縣市, 分別是基隆市 台北市 台中市和連江縣 ; 牧場盛行率最低為 0%, 有 5 個縣市, 分別是新竹市 南投縣 台南市 澎湖縣和金門縣 此次調查的 247 個豬場中有 34 個豬場使用 ge 缺損疫苗, 其中 19 個豬場為 ge 抗體陽性, 顯示這些豬場免疫 ge 缺損疫苗後仍遭受 PR 野外病 株感染 ; 使用全病 疫苗有 21 個豬場,gE 抗體陽性的豬場有 12 場 調查豬場中有 188 場不使用疫苗, 佔調查豬場數的 76%, 這 188 個豬場的牧場盛行率為 37.7% 與 1994 年調查時盛行率高達 96% 比較, 國內 PR 之盛行率已降低許多, 且多數豬場不使用 PR 疫苗防疫仍可維持無 PR 感染, 顯示我國 PR 流行病學已大不相同, 值得持續追蹤調查 [ 楊程堯 王珮玲 * 楊平政 2008 年台灣豬場假性狂犬病抗體盛行率調查 台灣獸醫誌 36 (1):31-37,2010 * 通訊作者 TEL: 037-585-777,FAX:035-585 665,E-mail:pcy01@mail.atit.org.tw] 緒 言 假性狂犬病之病原為假性狂犬病病 (pseudor abies virus; PRV), 屬於皰疹病 科 (Herpesviridae) 阿爾法皰疹病 亞科 (Alphherpesvirinae) PRV 可感染豬 牛 羊 鼠等動物, 但是豬是唯一的保 宿主 [8] 幼齡豬隻感染 PRV 後, 死亡率可高達 100%, 懷孕母豬感染 PRV 可造成流 死產或延遲分娩, 也是發生繁殖障礙的主要原因之一 [1] 自 1970 年代開始, 假性狂犬病已成為全球養豬產業的問題, 造成重大經濟損失並導致養豬產業轉型 [8] 過去 50 年來, 養豬產業因國際貿易需求日增, 規模越來越擴大, 養豬地點更加集中, 因此 PRV 感染仍可造成部分地區的重大經濟損失 由於 PRV 傳播迅速, 控制 PRV 最好的方法是 清除病原與疫苗免疫, 隨著減 疫苗 不活化疫苗與基因缺損疫苗的開發與使用, 除了持續性感染之外, 本病已可獲得有效控制 [3,16] 配合使用基因缺損疫苗 ( 例如 ge 缺損疫苗 ) 輔以酵素連接免疫吸附法 (ELISA), 檢測豬場中是否存在感染野外病 株時所產生的 ge 抗體, 藉此移除抗體陽性豬隻, 此法已確認為有效清除 PRV 的方法 [8,15] 1980 年代歐洲國家, 即應用標記疫苗 (marker vaccine) 免疫, 配合大規模的血清學監控和抗體陽性豬隻立即淘汰屠宰的方式, 有效控制 PRV 感染和降低盛行率 [3,12], 並成為 PRV-free 的國家 [17], 美國商業化養豬場也藉由類似策略在 2002 年達成 PR-free 狀態,2007 年再針對家豬進行全國性的調查, 確定美國持續是 PR-free 國家 [13] 台灣在 1971 年首次報告豬隻假性狂犬病例,
32 楊程堯 等 迅即傳染到全省各地,PRV 抗體盛行率在 1972 年調查時陽性為 2.1%, 到 1991 年已升高到 65.5% [4] 最近一次 PR 大規模調查在 1992-1993 年進行, 針對一貫作業養豬場進行 PR 抗體盛行率調查, 當時的牧場盛行率 (herd prevalence) 為 96%, 生長肥育豬群的場內盛行率平均為 46% [14] 自 1992 迄今十餘年間, 養豬產業歷經口蹄疫洗禮 [5], 以及 PRV 各式疫苗的開發與使用,PRV 疫情狀況已大不相同 為了解目前國內豬場 PRV 抗體盛行率, 本研究利用口蹄疫監控採樣豬場所採集之血清樣本, 檢驗血清中之 ge 抗體, 以了解目前國內 PRV 抗體盛行率, 作為流行病學之參考 材料與方法 逢機抽樣豬場與檢體採集本試驗使用之血清樣本分讓自本所執行 2008 年豬隻口蹄疫監控計畫採集之血清樣本, 豬場數量選擇依循世界動物衛生組織 (OIE) 之規範, 每年需逢機抽樣監測 299 戶偶蹄類動物牧場 [7], 豬場選擇依全國各縣市養豬戶數比率進行分層逢機取樣, 由各縣市動物防疫所至選定的豬場逢機採集豬隻血清樣本, 每一豬場之樣本數依照 95% 之機率至少可自 20% 之感染豬群中檢測出一個陽性檢體的原則 [11], 設定每場採集 14 頭豬隻血清樣本, 如豬場的待檢豬隻頭數不足 14 頭者則全部採血 採樣豬隻的月齡設定在 5 月齡以上至上市前的肉豬, 採樣時間為 2008 年 7 月到 9 月 檢體處理與抗體檢測 血液檢體以無菌真空採血 管收集, 離心後取出血清置於試管中, 並在試管上標示檢體名稱, 保存於 4 豬隻血清以冷藏方式運送到本所流行病學實驗室, 保存於 -20 備用 抗體檢測利用 SERELISA PRV g1 Ab Mono Blocking kit (SYNBIOTICS corporation) 試劑組進行檢測, 依據該試劑檢測標準判定 PRV ge 抗體檢測結果 [17] 豬場資料蒐集利用電話訪談各採樣豬場人員, 以了解採樣豬場中 PRV 疫苗使用情形與疫苗類別 統計分析檢測結果整理後以卡方檢定 (Chisquare test) 與費雪精確檢定 (Fisher s exact test) 進行分析, 以評估各區牧場盛行率與不同使用疫苗狀況下的關係 結 果 本次試驗選定之豬場, 依照 20% 之盛行率下具有 95% 之檢出機率進行採樣, 每個豬場以隨機採集至少為 14 個血液樣本, 符合資格的豬場有 247 個場, 共檢測 3,698 個樣本 在 247 個豬場中有 102 個豬場為 ge 抗體陽性,145 個豬場為 ge 抗體陰性, 總牧場盛行率為 41.3% (Table 1) 依照縣市別檢視抗體陽性率,PRV ge 抗體陽性率最高為 100%, 有 4 個縣市 : 基隆市 (1/1) 台北市 (1/1) 台中市 (1/1) 連江縣 (1/1); 抗體陽性率最低為 0%, 有 5 個縣市 : 新竹市 (0/1) 南投縣 (0/5) 台南市 (0/1) 澎湖縣 (0/2) 金門縣 (0/4) 以縣市別 Serological surveillance of swine pseudorabies by ge ELISA in different geographic regions of Taiwan Geographic region* No. of sero- positive herds/ No. of herds tested Herd prevalence, % 95% Confidence interval, % North 14/32 43.8 26.6-61.0 Central 38/84 45.2 34.6-55.8 South 45/110 40.9 31.7-50.1 East 4/14 28.6 4.9-52.3 Off-shore islands 1/7 14.3 0-40.2 Overall 102/247 41.3 35.2-47.4 *North: Keelung City, Taipei County, Taipei City, Taoyuan County, Hsinchu County, and Hsinchu City. Central: Miaoli County, Taichung City, Taichung County, Nantou County, Changhua County, and Yunlin County. South: Chiayi County, Tainan County, Tainan City, Kaohsiung County, and Pingtung County. East: Yilan County, Hualien County, and Taitung County. Off-shore islands: Penghu County, Kinmen County, and Lienchiang County.
2008 年台灣豬場假性狂犬病抗體盛行率調查 33 Prevalence distribution of swine pseudorabies by ge ELISA in counties and cities of Taiwan 區分牧場盛行率, 繪製盛行率分布圖 (Fig. 1), 可見 2 個區域呈現由高而低的階梯式分布 另依豬場所在位置分成北 中 南 東與離島等五個區域, 分別比較 ge 抗體之牧場盛行率 : 結果顯示本島北 中 南區的盛行率相當一致, 介於 40.9%- 45.2% 之間, 東岸與離島地區略低, 分別為 28.6% 與 14.3% (Table 1), 經統計分析, 各區牧場盛行率之差異未達統計學顯著的程度 (P > 0.05) 依照各豬場使用疫苗狀況分類, 在 247 個豬場中, 不使用 PR 疫苗有 188 場, 使用 ge 缺損疫苗有 34 場, 使用全病 疫苗有 21 場, 使用疫苗但未能確認疫苗種類有 4 場 (Table 2), 顯示目前使用 PR 疫苗之豬場僅有 59 場, 佔所有調查豬場數量之 23.9% 但因豬場人員回答問卷時, 均未敘明疫苗使用於母豬或仔豬, 因此無法顯示疫苗使用於母豬或仔豬之比例 在此分類下, 不使用 PR 疫苗豬場,PR 抗體牧場盛行率為 37.8%, 使用 ge 缺損疫苗之豬場, 牧場盛行率為 55.9%, 使用全病 疫苗豬場, 牧場盛行率為 57.1% (Table 3) 依照 Table 1 分區標準, 將不使用疫苗之 188 個豬場同樣分成北 中 南 東區與離島進行比較 (Table 4), 牧場盛行率以南區最低, 僅有 31.3%, 其他區則介於 40%-46.7% 之間, 離島由於均不使用疫苗, 牧場盛行率維持 14.3%, 各區牧場盛行率之差異也未達統計學顯著的程度 (P > 0.05) 將不使用疫苗之豬場, 依牧場內盛行率 (P) 由低至高分為 P =0 0<P 20 20 < P 40 40 < P 60 60 < P 80 P >80 等六個等級, 比較各分區之場內盛行率 (Table 5) 各分區抗體陰性 (P =0) 的豬場數目最多, 有 117 場, 佔不使用 PR 疫苗豬場的 62%, 其次為盛行率超過 80% (P >80) 的豬場有 43 場 (23%) 但盛行率介於 20% 到 80% 的豬場合計只有 13 場, 比例不到 7%, 與盛行率 20% 以下之陽性豬場比例類似 討 論 本試驗使用之 PRV g1 試劑係檢測豬血清中由 PRV ge 蛋白誘發產生的抗體, 豬隻感染 PRV 或免疫全病 疫苗時, 均可檢測到此抗體, 只免疫 ge 缺損疫苗但未感染 PRV 野外 的豬則不會產生此抗體, 但免疫 ge 缺損疫苗後如感染 PRV 仍可檢測 Geographic region Vaccination status of tested herds in different geographic regions of Taiwan No. of unvaccinated herds No. of herds vaccinated with PRV ge(-) vaccine No. of herds vaccinated with PRV ge(+) vaccine No. of herds vaccinated with unknown brand of PRV vaccine North 31 1 0 0 32 Central 60 9 12 3 84 South 80 20 9 1 110 East 10 4 0 0 14 Off-shore islands 7 0 0 0 7 Total 188 34 21 4 247 Total
34 楊程堯 等 Vaccination status and pseudorabies herd prevalence in tested herds Vaccination status No. of sero-positive herds/ No. of herds tested Herd prevalence*, % 95% Confidence interval, % Unvaccinated 71/188 37.8 a 30.9-44.7 Vaccinated with PRV ge(-) vaccine 19/34 55.9 b 39.2-72.6 Vaccinated with PRV ge(+) vaccine 12/21 57.1 b 35.9-78.3 Vaccinated but brand unknown 0/4 0 Total 102/247 40.9 31.7-50.1 *: Herd prevalence with different superscripts differs significantly ( < 0.05). Serological surveillance of swine pseudorabies by ge ELISA from unvaccinated herds in different geographic regions of Taiwan Geographic region No. of sero-positive herds/ No. of herds tested Herd prevalence, % 95% Confidence interval, % North 13/31 41.9 24.5 59.3 Central 28/60 46.7 34.1 59.3 South 25/80 31.3 21.1 41.5 East 4/10 40.0 9.6 70.4 Off-shore islands 1/7 14.3 0 40.2 Total 71/188 37.8 30.9 44.7 Within-herd prevalence The within-herd prevalence distribution of unvaccinated herds in different geographic regions North Central South East Off-shore islands Total % P>80 8 18 15 1 1 43 22.9 60 < P 80 1 1 1 0 0 3 1.6 40 < P 60 0 1 3 1 0 5 2.7 20 < P 40 0 3 2 0 0 5 2.7 0<P 20 4 5 4 2 0 15 8.0 P=0 18 32 55 6 6 117 62.2 Total 31 60 80 10 7 188 100 到 ge 抗體 因此利用本法檢測到 ge 抗體陽性的豬隻, 除了免疫全病 疫苗之外, 應為野外病 感染所產生, 對於不使用疫苗的豬場, 牧場盛行率可視為實際的豬場感染率 近年來各國對於 PRV 抗體盛行率的研究, 調查對象多為野豬族群 [6,9], 對於養豬產業的相關調查較少 [2,10], 本研究為近年來針對養豬場進行 PRV 盛行率之少數報告之一 在 247 個採樣豬場中有 102 個豬場為 ge 抗體陽性, 總牧場盛行率為 41.3% 1990 年代比利時進行 PR 清除計畫前所進行之全國性調查, 自逢機抽樣的 720 個豬場中採集年輕母豬血清進行抗體檢測, 其總牧場盛行率為 44%, 與本研究的結果相當 [2] 本次研究調查發現在 247 個調查豬場中有 188 場不使用 PR 疫苗,
2008 年台灣豬場假性狂犬病抗體盛行率調查 35 佔所有調查豬場 76%, 這些豬場的抗體牧場盛行率為 37.8% (Table 3), 可視為目前國內養豬場的自然感染率 由 PR 牧場盛行率與地理位置相互關係看來 (Fig.1),PR 牧場盛行率在自北部與中部兩個高盛行率區域向外梯度降低, 北部為台北市和基隆市兩個盛行率最高的區域, 向外到台北縣和桃園縣, 再到宜蘭縣與新竹縣漸次下降 中部為自台中市向外到台中縣, 再到苗栗縣和彰化縣漸次降低 但因台北市 基隆市與台中市的採樣豬場僅有一場, 但若將台北市 基隆市與鄰近台北縣合併計算, 或將台中縣市合併計算, 仍屬於高盛行率地區 此外, 另外兩個盛行率較高的地區則位於雲林縣和屏東縣, 此兩縣均為養豬大縣, 養豬密度高也可能是造成高盛行率的原因 檢視各分區使用疫苗情形, 各地分區使用疫苗習慣有所差異 (Table 2), 離島和北區傾向不使用 PR 疫苗, 中區 南區和東區使用 PR 疫苗比例相當一致, 使用率介於 27.2% 28.6% 但此三區使用疫苗喜好則不大相同 : 東區則全部使用 ge 缺損疫苗, 中區使用 ge 缺損疫苗和全病 疫苗的比例相當, 南區傾向使用 ge 缺損疫苗, 比例達 69% (20/29) 在不使用 PR 疫苗情形下,gE 抗體牧場盛行率為 37.8% (Table 3) 但使用 ge 缺損疫苗之豬場, 若無野外病 感染,gE 抗體盛行率應很低, 但本次調查盛行率達 55.9%, 顯示超過半數豬場使用疫苗後仍感染 PRV, 這些豬場未來持續使用 ge 缺損疫苗進行免疫, 並利用 ge 抗體檢測結果篩選豬隻, 可藉此清除 PR 感染 使用全病 疫苗免疫的豬場, 理應達到 100% 或超過 80% 之抗體陽性率, 但實際上僅有 12 個豬場 (57.1%) 呈現 ge 抗體陽性, 另外 9 場檢測結果均為陰性 出現此結果的可能原因包括豬場提供錯誤的免疫資料 疫苗保存不當導致疫苗無效或免疫動物數量不足 另一個可能原因是免疫動物對象, 因本次採樣對象都是上市前的肉豬, 若豬場只免疫母豬, 在豬場內無 PRV 感染的情況下, 肉豬在移行抗體消失後, 如未受到 PRV 野外 感染可能呈現 ge 抗體陰性 選取不使用 PR 疫苗的豬場進行場內盛行率分析, 比較各分區豬場 PRV 的實際感染情形 (Table 5) 顯示各分區 P =0 豬場比例最高, 有 117 場 (62.2%),P > 80% 的豬場次之, 有 43 場 (23%), 呈現雙峰現象 在不使用疫苗的豬場中檢測到 ge 抗體, 該豬場可視為曾遭受 PRV 感染, 這些豬場共有 71 場, 其中 43 個豬場之場內盛行率超過 80%, 另外 15 個豬場牧場盛行率在 20% 以下, 且這 15 個豬場送檢的 14 個血清樣本中大多僅有 1 個檢體呈現陽性反應 可見這些未曾免疫 PRV 疫苗的豬場, 感染 PRV 後很快抗體陽性率超過 80%, 或者維持少量豬隻感染情形, 可能原因是目前環境中的 PRV 力不高, 感染速度慢或在豬場中僅能少量分佈 這些盛行率低於 20% 的豬場, 持續追蹤如果依然保持低豬場內陽性率, 輔以淘汰 ge 抗體陽性豬或隔離早期離乳等疾病清除策略, 成為 PRV 清淨場的機會很大 本試驗利用 PRV ge 抗體檢測, 以期了解目前國內豬場之 ge 抗體盛行率及其分佈, 顯見目前國內 PRV 感染情形已經不像 1994 年調查時那樣普遍, 且已有不少豬場在不使用疫苗情況下維持 PR free 的狀態 但因本年度僅檢測 ge 抗體, 僅能了解野外病 株感染豬場以及全病 免疫豬場所造成的影響, 未來如輔以其他檢體和檢測內容, 將可進一步提供更多 PRV 流行病學資料 致 謝 本計畫承蒙行政院農業委員會動植物防疫檢疫局 97 管理 -1.1- 動防 01(1) 計畫經費支持, 謹致謝忱 參考文獻 1. 吳家彰 莊秀琪 彭郁棠 張清華 鍾文彬 豬樹狀突細胞受豬假性狂犬病病 感染後其表現型及功能的改變 台灣獸醫誌,34:239-247,2008 2. Boelaert F, Deluyker H, Maes D, Godfroid J, Raskin A, Varewijck H, Pensaert M, Nauwynck H, Castryck F, Miry C, Robijns JM, Hoet B, Segers E, Van Vlaenderen I, Robert A, Koenen F. Prevalence of herds with young sows seropositive to pseudorabies (Aujeszky's disease) in northern Belgium. Prev Vet Med 41: 239-255, 1999. 3. Bouma A. Determination of the effectiveness of pseudorabies marker vaccines in experiments and field trials. Biologicals 33: 241-245, 2005. 4. Chang CP, Tsai SS. A serological survey of swine pseudorabies among finishing pigs in Taiwan from 1987 to 1991. J Clin Soc Vet Sci 19: 19-25, 1993. 5. Huang CC, Jong MH, Lin SY. Characteristics of foot and mouth disease virus in Taiwan. J Vet Med Sci 62: 677-679, 2000. 6. Lari A, Lorenzi D, Nigrelli D, Brocchi E, Faccini S, Poli A. Pseudorabies virus in European wild boar from central Italy. J Wildl Dis 42: 319-324, 2006. 7. OIE Terrestrial Animal Health Code, Appendix 3.8.7 Guideline for the surveillance of foot and mouth
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2008 年台灣豬場假性狂犬病抗體盛行率調查 37 Serological Survey of Pseudorabies among Swine Herds in 2008 in Taiwan Cheng-Yao YANG, Pei-Ling WANG, * Ping-Cheng YANG (Received: May 26, 2009. Accepted: October 13, 2009) [Yang CY, Wang PL,* Yang PC. Serological survey of Pseudorabies among swine herds in 2008 in Taiwan. Taiwan Vet J 36 (1): 31-37, 2010. * Corresponding author TEL: 886-37-585-777, FAX: 886-37-585-665, E-mail: pcy01@mail.atit.org.tw]