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機能性食品與臨床應用機能性食品的功能性測試授課老師 : 褚俊傑副教授 ( 生物科技系暨研究所 ) 電子信箱 : jjchuu@mail.stut.edu.tw

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健康食品之申請廠商應本身先確定產品功能及安全性函詢歸屬於那一類健康食品若為中草藥性質, 則轉送至行政院衛生署中醫藥委員會, 判定是否為食品 ( 目前約有 80 多種 ) 依據分類, 執行相關安全性與功能性評估

健康食品之申請 1. 申請廠商基本資料表及健康食品查驗登記表 2. 產品原料成分規格含量表 3. 產品之安全評估報告 4. 產品之保健功效評估報告 5. 保健功效成分鑑定報告及其檢驗方法 6. 保健功效安定性試驗報告 7. 產品製程概要 8. 良好作業規範之證明資料 9. 產品衛生檢驗規格及其檢驗報告 10. 一般營養成分分析報告 11. 相關研究報告文獻資料 12. 產品包裝標籤及說明書 13. 申請者營利事業登記證影本 14. 完整樣品及審查費 15. 磁碟片乙片

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健康食品之申請

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已取得健康食品標章種類骨質保健 (1%) 保肝 (31%) 降血脂 (53%) 整腸 (52%) 我國已取得健康食品標章之種類 ( 截至 101.10.02 共 218 件 ) 資料來源 : 衛生署食品處

已取得健康食品標章調節血脂 (47) 腸胃功能改善 (45) 食用油 :33 47 50 57 67 93 紅麴 :4 40 71 78 兒 ( 茶 ) 素 60 61 84 89 燕麥片 :10 26 81 IgG(2 72), 甲殼素 (29 55), 甘蔗原素 (44 49), 大豆發酵 (82 90), 黃豆 (52), 蒜素 (1), 靈芝 (3), 魚油 (5), EPA(31), 異黃酮 (34), 番茄汁 (38), 小球藻 (66), 胺基酸 (77), peptide(96), 牛奶 (85), 麥芽糊精 (86), 納豆 (92) 乳酸菌 (25 28 30 32 37 39 42 48 53 54 70 79 80 88 99 105 106 111 113 115 22 123 128 129 138 141) 比菲德氏菌 (6 9 13 14 24 27) 益生菌 (16 19 20 21) 寡糖 (12 98), IgG(7), 大豆發酵 (62), 兒茶素 (74), 糊精 (41)

已取得健康食品標章護肝 (16) 免疫調節 (16) 靈芝 (15 35 56), 甘草素 (36), 香菇 (45), 花青素 (46), 人蔘 (59), 芝麻素 (83), 冬蟲夏草 (87), 甘草素, 薑黃素 (97) 靈芝 (3 23 43 91), 蛋白質 (8), 人蔘 (18), 大豆發酵 (64), 黃酮類 (65), IgG(75), 葉綠素 (101) 102 110 116 126 130 137 抗疲勞 (5) 雞精 (63 73), 冬蟲夏草 (68), 人蔘 (100 114) 牙齒保健 (6) 木糖醇 (22 58 94 95 108 135) 調整血糖 (4) 三價鉻 (51), 人蔘 (76), 纖維 (113), 無糖茶 (117) 抗老化靈芝 (69) 改善骨質 (2) 鈣片 (17) 牛乳 (140)

健康食品之功能評估方法健康食品之調節血脂功能評估方法健康食品之胃腸道功能改善評估方法健康食品之護肝功能評估方法 ( 針對化學性肝損傷 ) 健康食品之免疫調節功能評估方法健康食品之抗疲勞功能評估方法健康食品之延緩衰老功能評估方法

健康食品之調節血脂功能評估方法以倉鼠 (Hamster) 為試驗動物每組動物 8 隻, 實驗期 4-8 週實驗飼料含該保健食品之劑量應為換算成廠商所建議消費者之每天攝取量的 1-5 倍之間研究組別分為 1. 控制組 ( 基礎飼料 ) 2. 高油組 ( 飼料含 10% 油脂與 0.2% 膽固醇 ) 2. 正控制組 ( 可調節血脂之物質處理 ) 3. 實驗組 ( 試驗樣品處理 )

健康食品之調節血脂功能評估方法血脂質測定指標 : (1) 血清三酸甘油酯 (TG) 血清總膽固醇 (TC) 高密度脂蛋白膽固醇 (HDL-C) 和低密度脂蛋白膽固醇 (LDL-C) 值 (2) 高油組飼料可含 10% 油脂與 0.2% 膽固醇經飼養適當週數後, 高油組之血脂質會逐漸上升, 若攝取含檢測樣品飼料的實驗組, 其血脂質明顯 (P<0.05) 低於高油組, 則可認定該產品具降低血脂質之功能 (3) 測定 LDL 對氧化之穩定度, 當實驗組之 LDL 被氧化所需之誘發時間 (Lag phase) 比控制組顯著延長 (P<0.05) 時, 則可宣稱攝取該產品可延緩低密度脂蛋白之氧化

保健功效評估報告摘要 : 拫據下列評估試驗取得核准之功效宣稱 :

健康食品之胃腸道功能改善評估方法試驗動物 :6 週大雄性 Sprague Dawley(SD) 每組動物 8 隻, 實驗期至少 5 週採樣 : 餵食期結束後, 以按摩方式收集動物糞便, 或取盲腸 (cecum) 內容物, 加入無菌厭氧稀釋液, 震盪器混合, 進行稀釋及微生物平板塗抹並置入厭氧操作箱中培養

健康食品之胃腸道功能改善評估方法細菌培養基 a. 雙叉桿菌 (Bifidobacteria) 參考培養基 : Bifidobacteria iodoacetate medium 25(BIM-25) b. 產氣莢膜梭菌 (Clostridium perfringens) 參考培養基 : a. Tryptose-sulfite-D cycloserine(tsc) b. agar

健康食品之胃腸道功能改善評估方法試驗動物 : 雄性大小鼠 ( 胃腸運動試驗 ); 雄性大鼠 ( 排便試驗 ) ; 每組動物 8-10 隻, 實驗期至少 5 週胃腸運動試驗 : 小鼠禁食後經口投予試驗物質, 投予試驗物質 30 分鐘後, 經口投予活性炭或放射性物質,30 分鐘後立即脫頸椎犧牲小鼠, 測量幽門至盲腸的長度為小腸總長度, 幽門至活性炭前沿為活性炭推進長度排便試驗 : 糞便量測定時, 大鼠投予藥物後置放於代謝籠, 隔 16-18 小時收集糞便一次, 由糞便乾重與溼重算出含水量百分比若糞便的重量或粒數明顯增加, 以及胃腸運動試驗於實驗組優於對照組者, 則稱之具改善胃腸道運動功能

健康食品之胃腸道功能改善評估方法改善腸內細菌菌相 1. 檢測 1 種益生菌 : Bifidobacterium 2. 檢測 1 種有害 ( 或無益 ) 菌 : Clostridium perfringens 改善胃腸道運動 1. 可促進腸道運動 2. 有助於增加排便量

保健功效評估報告摘要 : 拫據下列評估試驗取得核准之功效宣稱 :

護肝功能評估方法之修訂 (2009/11/3) 針對四氯化碳誘導化學性肝損傷針對常用止痛藥物乙醯胺基苯酚誘導化學性肝炎損傷針對應用硫代乙醯胺 (thioacetamide) 誘導肝纖維化之慢性肝損傷針對應用酒精液態飼糧誘導酒精性脂肪肝

健康食品之護肝功能評估方法 ( 四氯化碳誘導化學性肝損傷 ) 因四氯化碳受肝微粒酵素活化成三氯甲烷自由基, 然後與蛋白質結合導致蛋白質合成受阻, 並引起脂質分解代謝失調, 引起肝細胞內三酸甘油酯蓄積, 另外三氯甲烷自由基形成過氧化物, 導致脂質過氧化而使得肝細胞膜損傷, 造成肝中酵素滲出及細胞病變而壞死以雄性 SD 或 Wistar 大鼠為試驗動物每組動物 10-12 隻, 實驗期 8 週研究組別分為對照組 ( 正常飲食組 ): I.P. 或灌食 olive oil 十 d.d.h2o (P.O.) 肝損傷組 ( 四氯化碳處理組 ): I.P. (40% CCl 4 / olive oil) 或灌食 (20% CCl 4 / olive oil) 十 d.d.h2o (P.O.) 正對照組 (Silymarin 治療組 ): I.P. (40% CCl 4 / olive oil) 或灌食 (20% CCl 4 / olive oil + Silymarin (P.O.) 實驗組 ( 試驗樣品處理組 ) I.P. (40% CCl 4 / olive oil) 或灌食 (20% CCl 4 / olive oil) 十試驗樣品 (P.O.) 實驗組有二種或以上劑量組, 其中之一為人體建議攝取量, 另一組則為人體建議攝取量之 2-5 倍左右 )

健康食品之護肝功能評估方法 ( 四氯化碳誘導化學性肝損傷 ) 所有實驗動物分別於第一週第三週及第六週投予試驗樣品後 2 小時, 以尾部採血方式檢測肝臟的生化功能 :GOT (AST) GPT (ALT) TG Cholesterol 最後於第八週結束時全部犧牲, 採血檢驗肝臟生化功能所有實驗動物於實驗結束犧牲取肝臟標本, 秤重後固定於 10% 的中性福馬林 (Formaline) 液中, 石蠟包埋切片後分別作 HE Masson 染色 ( 膠原纖維肌纖維 ) 來進行病理學觀察各組肝臟分別進行檢測抗氧化成分 Glutathione(GSH) Glutathione reductase (GSH Rd) Glutathione peroxidase (GSH Px) Superoxide dismutase (SOD) Catalase 等酵素活性評估肝臟組織膠原蛋白 (Hydroxyproline) 過度增生及脂質過氧化 (Lipid peroxidation) 程度方面的改善

健康食品之護肝功能評估方法增訂草案 ( 乙醯胺基苯酚誘導化學性肝炎損傷 ) 乙醯胺基苯酚 (N-acetyl-p-aminophenol, APAP), 為常見解熱鎮痛藥物成分, 過量使用會造成肝腎損傷根據美國 1998-2007 年統計, 乙醯胺基苯酚使用過量是急性肝衰竭病患最主要病因本健康食品護肝保健功效之評估方法採用 400 mg/kg bw 劑量之 APAP 誘導雄性 BALB/c 小鼠慢性肝炎損傷之模式, 第一週血液生化值 ALT (GPT) 及 AST (GOT) 之參考值分別為 150-450 IU/L, 且其肝臟組織病理切片符合人類病理進展, 所以此動物實驗模式應可做為

健康食品之護肝功能評估方法增訂草案 ( 硫代乙醯胺誘導肝纖維化之慢性肝損傷 ) 硫代乙醯胺 (thioacetamide; TAA 在大 ( 小 ) 白鼠所誘發肝損傷之病理變化類似人類的肝損傷病變, 因此, 以 TAA 誘發肝纖維化作為化學性肝損傷動物模式 TAA 為高度肝特異性的毒性, 從給予動物到致死有約 3.5 到 7 天的時間可以觀察肝細胞壞死到肝衰竭死亡的病變過程 TAA 進入動物體中經由混和功能氧化酶系統 (mixed function oxidese system) 代謝之產物可破壞肝細胞並造成肝壞死與氧化壓力 (oxidative stress) 若持續進行則會演變成肝纖維化甚至出現節結

健康食品之護肝功能評估方法增訂草案 ( 針對應用酒精液態飼糧誘導酒精性脂肪肝 ) 正常的肝臟中, 脂質所佔重量應低於肝臟總重量之 5% 最常引起脂肪肝的原因有肥胖症飲酒高三酸甘油酯血症血糖代謝異常 ( 如糖尿病 ) 營養缺乏長期接觸傷害肝臟的化學物質或藥物等急性大量酒精的攝入會導致肝細胞損傷, 主要由於粒線體 DNA 耗損及脂質過氧化及而啟動肝細胞凋亡與壞死, 導致還原態麩胱甘肽 (GSH) 耗損, 因而使得肝臟對過氧化傷害的保護功能降低 Lieber-DeCarli Diet 長期餵飼來誘發酒精性肝病變, 應用大鼠餵飼液態飼料 ( 飼料成分依照動物所需總能量所提供之 36% 碳水化合物以酒精取代 ), 結果顯示動物發展為脂肪肝且伴有三酸甘油酯及肝膽固醇脂上升此一誘發酒精性肝病變之實驗動物模式, 已成為主要的脂肪肝誘發動物模式

保健功效評估報告摘要 : 拫據下列評估試驗取得核准之功效宣稱 :

健康食品免疫調節功能評估免疫調節功能評估細胞增生 / 毒性檢測 (PBMC & 免疫細胞株 ) 細胞激素檢測 (mrna & 蛋白質 ) 吞噬細胞活性檢測免疫球蛋白定量檢測自然殺手細胞活性檢測免疫細胞族群比例分析檢測抗腫瘤活性分析細胞增生 / 毒性檢測 ( 腫瘤細胞株 ) 細胞週期細胞凋亡

健康食品之免疫調節功能評估方法非特異性免疫反應 : 包括如中性白血球 (neutrophils) 及單核球 (monocytes) 的吞噬能力或是自然殺手細胞的活性 (natural killer activity), 及其他沒有利用抗原刺激的免疫反應特異性免疫反應 ( 以卵蛋白刺激 ): 在小鼠身上注射特定的抗原, 再進行抗原特異性免疫反應的評估, 其中必須包括如特異性抗體的測定或是抗原特異性的 T 細胞增殖反應和細胞激素的研究

健康食品之免疫調節功能評估方法 ( 動物實驗 ) 常用的 BALB/c 或是 B6 小鼠,6-8 週大, 每組隻數至少 10 隻餵食進行至少 6 週特異性免疫反應脾臟或是淋巴結細胞增殖反應抗體分泌實驗細胞激素分泌實驗脾臟細胞及淋巴結細胞表面標記分析自然殺手細胞活性吞噬細胞活性特異性免疫反應卵白蛋白 (ovalbumin) 誘發的特異性抗體產生 OVA- 特異性的 T 細胞增殖反應 OVA- 特異性的細胞激素製造

健康食品之免疫調節功能評估方法 ( 人體的臨床試驗 ) 經人體試驗委員會通過建議每組至少 30 人特異性免疫反應周邊血液單核球 (peripheral blood mononuclear cells, PBMC) 的反應抗體分泌實驗細胞激素分泌實驗自然殺手細胞活性吞噬細胞活性周邊血液單核球的表面標記分析特異性免疫反應破傷風類毒素 (tetanus toxoid, TT) 或 B 型肝炎表面抗原 (hepatitis B surface antigen, HBsAg) 誘發的特異性抗體產生 TT 或 B 型肝炎表面抗原 - 特異性的 T 細胞增殖反應 TT 或 B 型肝炎表面抗原 - 特異性的細胞激素製造

保健功效評估報告摘要 : 拫據下列評估試驗取得核准之功效宣稱 :

健康食品之抗疲勞功能評估方法評估食品樣本是否具有抗疲勞作用之測定方法廠商除提供與其產品相關之資料與文獻, 以佐證該產品或其部分原料可能具有延緩疲勞或促進疲勞消除之功能外, 必須針對擬以健康食品上市之產品, 進行人體實驗或動物實驗若過去的科學文獻對所提產品的特性瞭解不足時, 應同時進行人體實驗和動物實驗, 以加強證據之可信度本評估方法所建議之檢測項目並非每項都必須進行但欲對產品加以標示或廣告具某項生理機能時, 則必須提出相符且足夠之科學證據來支持通常適當的檢測項目越多, 其證據越明確一人體實驗必須委託國內外大學食品營養醫藥運動科學等相關系所研究機構醫學中心執行, 需有醫師參與, 並遵循衛生單位對人體實驗有關之相關規定人數 12 人, 受試者必須為健康之成年人 (20-40 歲 ) 且於實驗前一週不得飲用酒精及服用營養補充劑或其他藥物實驗採交叉 (cross over) 設計, 每位受試者必須分別食用受試食品和對照食品, 採自體比較的方式進行耐力運動能力測定以一般醫學或生理學認可之方法執行運動能力測試, 選擇固定強度與時間或運動至力竭之耐力運動能力其中一項執行, 生化值之測定方法必須是學術界醫學單位所採用普遍認可之方法, 亦可使用市售的生化試劑 (test kits) 直接測定之

健康食品之抗疲勞功能評估方法最大攝氧量 (VO2 max) 測試 1. 於適當位置貼上心電圖電極片, 連接至心電圖機以測量心跳率 2. 跑步運動可採用逐漸增加速度與坡度的方法直至力竭 (exhaustion), 可參考下表所列坡度 (%) 速度 (mph) 持續時間 ( 分鐘 ) 10 1.7 3 12 2.5 3 14 3.4 3 16 4.2 3 18 5.0 3 20 5.5 3 20 6.0 3 3. 於心跳率達每分鐘 170 下時開始採氣至力竭, 收集到之氣體經氣體分析儀算出 VO2 max 運動力竭判定的標準為下列三項條件中有二個達到 : a. 心跳率達到最大心跳率 ( 最大心跳率 =220- 年齡 ) b. 受試者呼吸交換率達 1.1 c. 受試者運動自覺量表達 18 以上運動自覺量表

健康食品之抗疲勞功能評估方法運動能力測定以下四種評估方式得任擇其中之一進行 : 1. 固定強度與時間之耐力運動能力測試延緩運動期間疲勞之評估 : 以 60 % VO2max 以上的強度於跑步機 ( 或腳踏車 ) 進行運動測試至少 30 分鐘運動期間每隔 15 分鐘採氣 1 分鐘及記錄心跳率, 並於運動前運動期間運動後視需要採血促進運動後疲勞消除之評估 : 以 60 % VO2max 以上的強度於跑步機 ( 或腳踏車 ) 進行運動測試至少 30 分鐘, 之後休息於運動後開始記錄心跳率, 並於運動後休息期間視需要採血 2. 運動至力竭之耐力運動能力測定延緩運動期間疲勞之評估 : 以 60 % VO2max 以上的強度或逐步漸增負荷, 於跑步機 ( 或腳踏車 ) 進行運動測試至力竭 ; 記錄運動至力竭之時間運動期間每隔 15 分鐘採氣 1 分鐘及記錄心跳率, 並於運動前運動期間運動後視需要採血促進運動後疲勞消除之評估 : 以 60 % VO2max 以上的強度或逐步漸增負荷, 於跑步機 ( 或腳踏車 ) 進行運動測試至力竭, 之後休息於運動後開始記錄心跳率, 並於運動後休息期間視需要採血

健康食品之抗疲勞功能評估方法評估指標 1. 生理指標以所收集之氣體及測得之心跳率換算氧氣律動 (oxygen pulse); 氧氣律動為氧氣攝取量與心跳率之比值 2. 血液生化指標血液以含抗凝血劑 ( 如 :EDTA) 之收集管收集, 於 3000xg 離心 10 分鐘, 血漿保存於 -70, 以測定血氨 (ammonia) 血乳酸 (lactic acid) 血糖 (glucose) 肌酸激酶 (creatine kinase) 及游離脂肪酸 (free fatty acid) 之數值血液分析 (1) 血氨利用比色測定之原理, 於定量的血漿中加入 bromphenol blue 為呈色劑, 作用後產生藍色化合物, 於 605 nm 波長下測定其吸光度, 再換算得其濃度 (2) 血乳酸利用酵素作用及比色測定之原理, 於定量的血漿中加入 lactate oxidase 反應後, 再加入 4-aminoantipyrine 及 1,7-dihydroxynaphthalene, 經 peroxidase 作用後產生紅色化合物, 於 540 nm 波長下測定其吸光度, 再換算得其濃度

健康食品之抗疲勞功能評估方法 (3) 血糖利用酵素作用及比色測定之原理, 於定量的血漿中加入 glucose oxidase 反應後, 再加入 4-aminoantipyrine 及 1,7-dihydroxynaphthalene, 經 peroxidase 作用後產生紅色化合物, 於 555 nm 波長下測定其吸光度, 再換算得其濃度 (4) 肌酸激酶利用酵素作用及比色測定之原理, 於定量的血漿中加入 creatine phosphate glucose oxidase 反應後, 再加入 4-aminoantipyrine 及 1,7- dihydroxynaphthalene, 經 peroxidase 作用後產生白色化合物, 於 680 nm 波長下測定其吸光度, 再換算得其濃度 (5) 游離脂肪酸利用酵素作用及比色測定之原理, 於定量的血漿中加入 acyl CoA synthetase acyl CoA oxidase 及 peroxidase, 作用後產生紫色化合物, 於 550 nm 波長下測定其吸光度, 再換算得其濃度

健康食品之抗疲勞功能評估方法二動物實驗 ( 一 ) 動物必須來自公立研究機構公私立大學或其他衛生主管機關認可之實驗動物中心 8~10 週齡之雄性小鼠 Wistar 或 SD 大鼠不同批的鼠因飼養環境季節等原因的變化, 體質上會出現差異, 因此實驗組和對照組應採用同一批動物同時進行實驗, 且各鼠之體重應相近每組動物 8 隻實驗飼料含該產品量 ( 重量百分比 ) 至少須有三種以上的劑量組, 其中之一為換算成廠商所建議消費者之每天攝取量的 1~2 倍, 一組為 2~5 倍之間, 另一組則須在 5~10 倍之間實驗組與對照組飼料必須含等量之熱量蛋白質脂肪實驗期之長短及服用時間自行視產品特性而擬定可以一般醫學或生理學認可之方法執行運動能力測試, 選擇游泳或跑步機測試其中之一項執行生化值之測定方法必須是學術界醫學單位所採用普遍認可之方法, 亦可使用市售的生化試劑直接測定之

健康食品之抗疲勞功能評估方法 ( 二 ) 運動能力測定 1. 游泳測試 (1) 實驗前一週, 在餵食 30 分鐘後, 先進行游泳適應 (2) 末次餵食後 30~60 分鐘, 將鼠放入直徑 15 cm 水深 20 cm 水溫 27 1 的玻璃水缸中 ( 可視鼠之大小調整水缸之直徑及水深 ), 強迫鼠進行游泳掙扎, 直到體力消耗殆盡下沉溺死為止, 計算自落水開始至鼻孔沉入水中的死亡時間即為游泳時間也可記錄小鼠入水至頭部全部入水持續 8 秒不能浮出水面為止的時間 (3) 為了縮短試驗時間, 可在鼠背部綁上鉛絲 ( 保險絲 ) 進行負重游泳負重量可依據動物月齡選擇體重的 2~5 %, 如選擇 3 % 負重, 在整個試驗過程中每隻鼠負重都應是自身體重的 3 % 而鼠進食量的多少會影響秤重及游泳時間, 在試驗前應禁食 12~24 小時 < 注意事項 > (1) 因鼠集體游泳時會互相推擠而影響試驗結果, 故以單隻游泳較佳 (2) 水溫對鼠的游泳時間有明顯的影響, 因此要求各組水溫應控制一致, 每一批鼠下水之前都應測量水溫, 如果過低可能引起鼠痙攣, 影響實驗結果, 過高 (30 以上 ) 則游泳時間太長不便操作 (3) 鉛絲纏繞時的鬆緊應適宜 (4) 在整個實驗過程中應使每隻鼠四肢保持運動, 如果鼠漂浮在水面四肢不動, 觀察者可用木棒在其附近攪動

健康食品之抗疲勞功能評估方法 2. 跑步機測試 (1) 實驗前一週, 在餵食 30 分鐘後, 先進行跑步機適應 (2) 末次餵食後 30~60 分鐘, 將 SD 鼠放在跑步機上, 並在跑步機的末端設置電擊區用逐漸增加速度與坡度的方法直至力竭 (exhaustion), 可參考下表 (Bedford et al., 1979) 所列若鼠落入電擊區, 而經過多次電擊仍無法起身往前跑即判定已經力竭, 記錄開始跑步至力竭的跑步時間坡度 (%) 速度 (mph) 持續時間 ( 分 ) 0 8.2 3 5 15.2 3 10 19.3 3 10 26.8 3 12.5 26.8 3 12.5 30.3 3 15 30.3 3 15 35.4 3 15 40.0 3 15 43.8 3

健康食品之抗疲勞功能評估方法 ( 三 ) 生化值測定 1. 血尿素氮試驗末次餵食 30 分鐘後, 在溫度為 30 的水中不負重游泳 90 分鐘, 休息 60 分鐘後採血大鼠採尾血, 小鼠由眼窩採血, 取血漿或血清備用利用比色測定之原理, 於定量的血漿或血清中加入 urase 反應後再加入 ammonia 為呈色劑, 作用後產生紅色化合物, 於 660 nm 波長下測定其吸光度, 再換算得血尿素氮的濃度 2. 肝醣試驗末次餵食 30 分鐘後犧牲動物, 取肝臟, 將肝醣分解為葡萄糖, 測定其濃度 3. 血乳酸試驗末次餵食 30 分鐘後採血, 然後不負重在溫度為 30 的水中游泳 10 分鐘後停止在游泳後及休息 20 分鐘後亦分別採血血液經處理後, 利用酵素作用及比色測定之原理, 於定量的血漿中加入 lactate oxidase 反應後, 再加入 4-aminoantipyrine 及 1,7-dihydroxynaphthalene, 經 peroxidase 作用後產生紅色化合物, 於 540 nm 波長下測定其吸光度, 再換算得乳酸之濃度

保健功效評估報告摘要 : 拫據下列評估試驗取得核准之功效宣稱 :

健康食品之延緩衰老功能評估方法一動物實驗 ( 自發型 ) 生存實驗利用生物的整個生存過程來觀察受試物對壽命的影響 (1) 小鼠生存實驗條件 : 選用小鼠 12 月齡小鼠, 每組 40 隻, 雌雄各半 ; 分組 : 隨機分成 1 個正常對照組和 3 個實驗劑量組, 其中一組為人體每公斤體重每日推薦攝取量, 小鼠擴大 10 倍 ( 必要時得依受試物之特性另定之 ), 作為其中 1 個劑量, 以此為基礎, 另設兩個劑量實驗方法 : 一般用灌胃法, 摻入飼料法或加入飲水法給予受試物, 從 12 月齡開始給予, 直到死亡然後每天統計其死亡鼠數, 直至全部自然死亡比較實驗組與對照組的平均壽命和最高壽命, 畫出其生存曲線圖, 計半數動物死亡的天數 (2) 大鼠生存實驗條件 : 選用大鼠 18 月齡大鼠, 每組 30 隻, 雌雄各半 ; 分組 : 如同小鼠生存實驗, 但其中一組為人體每公斤體重每日推薦攝取量大鼠擴大 5 倍實驗方法 : 如同小鼠生存實驗, 從 18 月齡開始給予, 直到死亡

健康食品之延緩衰老功能評估方法 (3) 果蠅生存實驗條件 : 選用果蠅 Oregen 品系, 雌雄分組, 每個分組雌雄果蠅各 200 隻, 分裝在 10 個培養管內, 每管 20 隻分組 : 需有四種劑量組, 受試物推薦劑量 = 每天每人推薦攝入量 (g)/3000 100 %, 以此濃度為中間劑量, 按 3 倍組距上下各設 1 或 2 個劑量組若受試物處理時使用了普通培養基中未使用的溶劑, 則還應另設 1 個溶劑對照組實驗方法 : 收集羽化後 8 小時內未交配的果蠅進行分組, 用二氧化碳氣體麻醉, 待果蠅完全麻醉後倒出, 雌雄分組, 每個分組雌雄果蠅各 200 隻, 分裝在 10 個培養管內, 每管 20 隻每個劑量組均應準備 2~3 管裝有相同數目果蠅的後備管, 作為遇到特殊情況時的補充成蟲從分窩 2 週後開始並重新給予受試物 ( 雌雄果蠅按培養管分別秤重, 計算平均體重 ) 果蠅放入受試物培養基後實驗即正式開始, 每天定時觀察紀錄果蠅的死亡數, 每 4 天更換一次培養基, 一直觀察到果蠅全部死亡實驗結束, 計算半數死亡天數, 平均壽命和平均最高壽命 ( 每組最後死的 20 隻果蠅的平均存活天數為該組的最高壽命 )

健康食品之延緩衰老功能評估方法二生化實驗 ( 誘導型 ) 1. 動物選擇 : 老齡動物過氧化損傷處理動物或國際認可之老化模型動物任選其一 2. 劑量分組及受試物試驗期間 : 設 1 個空白對照組,1 個模型對照組及 3 個受試物劑量組, 根據人體每日每公斤體重推薦攝取量, 小鼠擴大 10 倍 ( 大鼠擴大 5 倍 ), 必要時得依受試物之特性另定之, 作為其中 1 個劑量, 以此為基礎, 另設 2 個劑量每組大鼠單一性別 8-10 隻, 小鼠單一性別 10-15 隻受試物經口連續至少給予 30 天, 視研究必要可延長實驗期間 3 個劑量組經口給予不同濃度受試物, 模型對照組和空白組給予同體積溶劑 3. 實驗方法 : (1) 老齡動物選用 15 月齡大鼠 12 月齡小鼠, 按血中 MDA 水平分組, 隨機分為 1 個老齡對照組和 3 個受試物劑量組, 另增設 1 個少齡對照組 ( 大鼠 3 月齡, 小鼠 8 週 ),30 天後犧牲動物測氧化指標和生化指標

健康食品之延緩衰老功能評估方法 (2) 過氧化損傷模型動物 (A) D- 半乳糖模型 : a. 原理 :D- 半乳糖供給過量, 大量產生活性氧, 打破了受控於遺傳模式的活性氧產生與消除的平衡狀態, 引起過氧化效應 b. 動物模型方法 : 選 3 月齡健康成年的小鼠, 用 D- 半乳糖 1.2 g/kg.bw 頸背部皮下注射模型, 注射量為 0.1ml/10g.bw, 每日 1 次, 連續 6 週, 取血測 MDA, 按 MDA 水平隨機分組, 如上述之分組方式在給受試物同時, 除空白對照組外, 各組繼續給予 D- 半乳糖 1.2g/kg.bw 頸背部皮下注射, 空白對照組皮下注射生理鹽水,30 天後, 犧牲動物測氧化指標和生化指標 (B) 輻照模型 : a. 原理 : 電離輻射通過直接破壞生物膜中不飽和脂肪酸和間接通過水輻解產生自由基, 引發脂類過氧化 b. 動物模型方法 : 選 18-22 g 健康成年小鼠, 隨機分 5 個組, 如上述之分組方式 30 天後, 除空白對照組外, 各組給予 5-8Gy60Coγ 射線全身一次性照射, 照射後第 3 4 天犧牲動物, 取肝組織 ( 或第 9 10 天犧牲動物, 取睪丸組織 ) 測氧化指標和生化指標

健康食品之延緩衰老功能評估方法 (C) 溴代苯模型 : 選 18-22g 健康成年小鼠, 隨機分 5 個組, 如上述之分組方式 30 天後, 動物禁食過夜, 給受試物 0.5-1 小時後, 除空白對照組外, 各組灌胃 0.3 mol/l 溴代苯油, 灌胃量 0.2 ml/20g.bw, 空白對照組灌胃同體積植物油, 大約 18-22 小時後犧牲動物, 取肝組織測氧化指標和生化指標 (3) 老化模型動物依國際認可老化模型動物之特徵, 選用適當月齡之小鼠, 分 1 個老齡對照組和 3 個受試物劑量組, 另增設 1 個少齡對照組 30 天後, 犧牲動物測氧化指標和生化

保健功效評估報告摘要 : 拫據下列評估試驗取得核准之功效宣稱 :

可能延緩衰老之營養素 1. 抗氧化營養素 1-1 維生素類例如 :β 胡蘿蔔素 (β-carotene) 維生素 C 維生素 E 1-2 礦物質類例如 : 銅 (Cu) 鋅 (Zn) 錳 (Mn) 硒 (Se) 鐵 (Fe) 2. 抗氧化植物性營養素例如 :phytochemicals( 蕃茄紅素柑屬類生物類黃酮酵母萃取物綠茶萃取物花青素無色花青素 ) 3. 其他抗氧化成分例如 : 麩胱甘肽 (Glutathione)