Δ UPLC-MS/MS 法 同 时 测 定 沙 参 麦 冬 汤 中 9 种 成 分 的 含 量 1* 吴 茵, 王 蕊 2, 任 炳 楠 1, 孙 源 1, 刘 勇 1 1, 张 黎 媛 (1. 河 北 省 人 民 医 院 药 学 部, 石 家 庄 050051;2. 河 北 中 医 学 院 中 医 诊 断 教 研 室, 石 家 庄 050071) 中 图 分 类 号 R917 文 献 标 志 码 A 文 章 编 号 1001-0408(2016)09-1240-05 DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2016.09.28 摘 要 目 的 : 建 立 同 时 测 定 沙 参 麦 冬 汤 中 甲 基 麦 冬 二 氢 高 异 黄 酮 A 含 量 的 方 法 方 法 : 采 用 超 高 效 液 相 色 谱 - 串 联 质 谱 法 色 谱 柱 为 Phenomenex Kinetex C 18, 流 动 相 为 乙 腈 -0.1% 甲 酸 ( 梯 度 洗 脱 ), 流 速 为 ml/min, 柱 温 为 25, 进 样 器 温 度 为 10, 平 衡 时 间 为 2 min, 进 样 量 为 5 μl 离 子 化 模 式 为 电 喷 雾 电 离, 源 喷 射 电 压 分 别 为 5 500 V -4 500 V, 雾 化 气 压 力 为 4.14 10 5 Pa, 加 热 气 压 力 为 4.48 10 5 Pa, 帘 气 压 力 为 1.72 10 5 Pa, 离 子 源 温 度 为 650, 工 作 模 式 为 多 反 应 监 测 模 式 结 果 : 甘 草 酸 铵 和 的 检 测 质 量 浓 度 线 性 范 围 分 别 为 1.75~700 5.00~1 997 0.95~380 1.75~700 2.00~800 7.00~2 799 2.38~950 8~151 0.43~171 ng/ml(r 为 0.999 2 0.999 7 0.999 0 0.999 1 0.999 8 0.999 3 0.999 5 0.999 7 0.999 0); 精 密 度 稳 定 性 重 复 性 试 验 的 RSD 3.0%; 加 样 回 收 率 分 别 为 98.76%~107.60% 92.57% ~105.80% 92.30% ~103.10% 93.20% ~108.10% 94.62% ~99.20% 95.08% ~104.80% 95.71% ~104.80% 94.54%~105.50% 94.50%~103.00%,RSD 分 别 为 1.7% 2.9% 2.1% 3.0% 1.2% 2.6% 1.9% 2.3% 1.6%(n=6) 结 论 : 该 方 法 快 速 简 便 准 确 可 靠, 适 用 于 同 时 测 定 沙 参 麦 冬 汤 中 9 种 成 分 的 含 量 关 键 词 超 高 效 液 相 色 谱 - 串 联 质 谱 法 ; 沙 参 麦 冬 汤 ; 定 量 ; 多 反 应 监 测 模 式 Simultaneous Determination of 9 Ingredients in Shasheng Maidong Decoction by UPLC-MS/MS WU Yin 1,WANG Rui 2,REN Bingnan 1,SUN Yuan 1,LIU Yong 1,ZHANG Liyuan 1 (1.Dept. of Pharmacy,Hebei People s Hospital,Shijiazhuang 050051,China;2.Dept. of TCM Diagnosis,Hebei University of Chinese Medicine,Shijiazhuang 050071,China) ABSTRACT OBJECTIVE:To establish a method for the contents determination of rutin,liquiritin,psoralen,xanthotoxin,bergapten,ammonium glycyrrhetate,ophiopogonin D,methylophiopogonanone A and methylophiopogonanone B in Shasheng maidong decoction. METHODS:UPLC-MS/MS was conducted. The column of UPLC was Phenomenex Kenetix C 18 with mobile phase of acetonitrile solution -0.1% formic acid(gradient elution)at a flow rate of ml/min,the column temperature was 25,injector temperature was 10,equilibrium time was 2 min and the injection volume was 5 μl. Ionization mode was electrospray ionization with spray voltage of 5 500 V and -4 500 V,atomizing air pressure was 4.14 10 5 Pa,heater pressure was 4.48 10 5 Pa,curtain air was 1.72 10 5 Pa,and the ion source temperature was 650,the work mode was multiple reaction monitoring mode. RE- SULTS:The linear range was 1.75-700 ng/ml(r=0.999 2)for rutin,5.00-1 997 ng/ml(r=0.999 7)for liquiritin,0.95-380 ng/ml (r=0.999 0)forpsoralen,1.75-700 ng/ml(r=0.999 1)for xanthotoxin,2.00-800 ng/ml(r=0.999 8)for bergapten,7.00-2 799 ng/ml (r=0.999 3) for ammonium glycyrrhetate,2.38-950 ng/ml (r=0.999 5) for ophiopogonin D,8-151 ng/ml (r=0.999 7) for methylophiopogonanone A,and 0.43-171 ng/ml(r=0.999 0)for methylophiopogonanone B;RSDs of precision,stability and reproducibility tests were no more than 3.0%;recoveries were 98.76%-107.60%(RSD=1.7%),92.57%-105.80%(RSD=2.9%), 92.30%-103.10%(RSD=2.1%),93.20%-108.10%(RSD=3.0%),94.62%-99.20%(RSD=1.2%),95.08%-104.80%(RSD=2.6%), 95.71%-104.80%(RSD=1.9%),94.54%-105.50%(RSD=2.3%)and 94.50%-103.00%(RSD=1.6%),respectively(n=6). CON- CLUSIONS:The method is rapid,simple,accurate and reliable,and suitable for 9 ingredients in Shasheng maidong decoction. KEYWORDS UPLC-MS/MS;Shasheng maidong decoction;quantification;multiple reaction monitoring model [ 2 ] 陆 超, 吴 磊, 钱 芳, 等. 胃 瘤 安 合 剂 的 质 量 标 准 研 究 [J]. 中 国 药 房,2015,26(3):396. [ 3 ] 国 家 药 典 委 员 会. 中 华 人 民 共 和 国 药 典 : 一 部 [S].2015 年 版. 北 京 : 中 国 医 药 科 技 出 版 社,2015:103 302 303 352. [ 4 ] 朱 田 密, 胡 晓 雪, 陈 树 和, 等. 痔 科 消 炎 止 痛 洗 剂 质 量 标 准 Δ 基 金 项 目 : 河 北 省 医 学 科 学 研 究 重 点 课 题 计 划 (No.ZL201403 40); 河 北 省 中 医 药 类 科 研 计 划 课 题 (No.2014152) * 主 管 药 师, 博 士 研 究 方 向 : 中 药 质 量 控 制 及 体 内 药 动 学 电 话 :0311-85988998 E-mail:wuyin82@163.com 的 建 立 [J]. 中 国 药 师 杂 志,2015,18(8):1 391. [ 5 ] 胡 娟, 吴 志 生, 黄 美 霞, 等. 中 药 复 方 制 剂 质 量 控 制 中 含 量 测 定 指 标 的 选 择 思 路 [J]. 福 建 中 医 学 院 学 报,2008,18 (3):71. [ 6 ] 钱 芳, 周 晓 雯.HPLC 法 测 定 清 肠 化 湿 颗 粒 中 盐 酸 小 檗 碱 的 含 量 [J]. 中 医 药 导 报,2015,21(6):51. [ 7 ] 金 丽, 周 建 丽, 张 晓 丹, 等. 复 方 呋 喃 西 林 滴 鼻 液 质 量 标 准 提 高 研 究 [J]. 解 放 军 药 学 学 报,2015,31(1):61. ( 收 稿 日 期 :2015-08-05 修 回 日 期 :2015-10-19) ( 编 辑 : 张 静 ) 1240
沙 参 麦 冬 汤 源 于 温 病 学 代 表 著 作 温 病 条 辨, 是 清 代 名 医 吴 鞠 通 为 治 疗 温 病 后 期 燥 伤 肺 胃 阴 液 而 创 立 该 方 由 北 沙 参 麦 冬 甘 草 桑 叶 玉 竹 白 扁 豆 天 花 粉 组 成, 是 清 养 肺 胃, 生 津 润 燥 的 代 表 方 剂, 为 清 金 保 肺 的 要 药 现 代 药 理 学 研 究 表 明, 沙 参 麦 冬 汤 有 抗 炎 [1] 抗 肿 瘤 [2-3] 调 节 免 疫 功 能 的 作 用 [4-5], 临 床 常 用 于 治 疗 呼 吸 系 统 疾 病 且 疗 效 显 著 目 前, 国 内 外 学 者 对 沙 参 麦 冬 汤 进 行 了 多 层 面 研 究 [6-10], 主 要 包 括 有 效 成 分 的 活 性 研 究 临 床 观 察 药 效 学 以 及 复 方 配 伍 研 究, 但 尚 未 见 有 对 该 汤 剂 的 多 组 分 进 行 定 量 分 析 和 质 量 控 制 的 报 道 因 此, 笔 者 采 用 超 高 效 液 相 色 谱 - 串 联 质 谱 (UPLC-MS/MS) 法 建 立 了 同 时 测 定 沙 参 麦 冬 汤 中 甘 草 苷 和 9 种 主 要 有 效 成 分 含 量 的 方 法 1 材 料 1.1 仪 器 与 软 件 AB Sciex QTRAPTM 5500 型 串 联 四 极 杆 线 性 离 子 阱 质 谱 仪, 含 有 电 喷 雾 离 子 化 源 和 三 重 四 极 杆 线 性 离 子 肼 串 联 质 量 分 析 器 ( 美 国 应 用 生 物 系 统 公 司 );LC-30A 型 UPLC 仪, 配 有 30AD 型 二 元 高 压 梯 度 泵 CTO30A 型 柱 温 箱 SIL30AC 型 自 动 进 样 器 ( 日 本 岛 津 公 司 );Analyst 1.6.1 数 据 采 集 软 件 ( 美 国 应 用 生 物 系 统 公 司 );BP211D 型 十 万 分 之 一 分 析 天 平 [ 北 京 赛 多 利 斯 科 学 仪 器 ( 北 京 ) 有 限 公 司 ];LG16-B 型 高 速 离 心 机 ( 北 京 雷 勃 尔 离 心 机 有 限 公 司 ) 1.2 试 剂 对 照 品 ( 批 号 :110809-200503) 对 照 品 ( 批 号 :111610-201005) 对 照 品 ( 批 号 :110739-200613) 均 购 自 中 国 食 品 药 品 检 定 研 究 院, 纯 度 均 >98%; 对 照 品 ( 批 号 :20140521) 对 照 品 ( 批 号 :20140514) 对 照 品 ( 批 号 :110731-200614) 对 照 品 ( 批 号 :20140305) 对 照 品 ( 批 号 : 20140617) 对 照 品 ( 批 号 : 20140612) 均 购 自 南 京 春 秋 生 物 科 技 有 限 公 司, 纯 度 均 > 98%; 甲 醇 乙 腈 甲 酸 为 色 谱 纯, 水 为 娃 哈 哈 纯 净 水 1.3 药 材 北 沙 参 ( 批 号 :15061801, 产 地 : 河 北 ) 麦 冬 ( 批 号 : 141102cp132 150701cp132, 产 地 : 四 川 ) 玉 竹 ( 批 号 : 14110501, 产 地 : 湖 南 ) 天 花 粉 ( 批 号 :141102cp033, 产 地 : 河 北 ) 白 扁 豆 ( 批 号 :20140108, 产 地 : 河 北 ) 桑 叶 ( 批 号 : 14002109, 产 地 : 河 北 ) 甘 草 ( 批 号 :14100901, 产 地 : 内 蒙 古 ) 等 药 材 均 购 自 国 药 乐 仁 堂 石 家 庄 药 材 有 限 公 司, 均 经 河 北 省 人 民 医 院 陈 太 平 主 任 中 药 师 鉴 定 为 北 沙 参 Glehnia littoralis Fr. Schmidt ex Miq. 麦 冬 Ophiopogon japonicus(l.f) Ker- Gawl 玉 竹 Polygonatum odoratum(mill.) Druce 天 花 粉 Trichosanthes Radix 白 扁 豆 Dolichos lablab L. 桑 叶 Morus alba L. 甘 草 Glycyrrhizae Radix et Rhizoma., 均 符 合 2015 年 版 中 国 药 典 ( 一 部 ) 的 药 品 标 准 2 方 法 与 结 果 2.1 液 - 质 条 件 2.1.1 液 相 条 件 色 谱 柱 :Phenomenex kinetex C 18(50 mm 3 mm,2.6 μm); 流 动 相 : 乙 腈 (A)- 0.1% 甲 酸 (B), 梯 度 洗 脱 ( 洗 脱 程 序 见 表 1); 流 速 : ml/min, 柱 温 :25 ; 进 样 器 温 度 : 10 ; 平 衡 时 间 :2 min; 进 样 量 :5 μl 2.1.2 质 谱 条 件 离 子 化 模 式 : 电 喷 雾 电 离 ; 源 喷 射 电 压 : 时 间,min 0~7 7~7.1 7.1~9 5 500V -4 500 V; 雾 化 气 压 力 :4.14 10 5 Pa; 加 热 气 压 力 : 4.48 10 5 Pa; 帘 气 压 力 :1.72 10 5 Pa; 离 子 源 温 度 :650 ; 工 作 模 式 : 多 反 应 监 测 模 式 (MRM), 正 负 离 子 同 时 监 测 甘 草 苷 和 甲 基 麦 冬 二 氢 高 异 黄 酮 B 采 用 负 离 子 模 式 (ESI - ) 监 测 ; 佛 手 苷 内 酯 和 采 用 正 离 子 模 式 (ESI + ) 监 测 9 种 待 测 成 分 的 保 留 时 间 (t R) 监 测 离 子 对 解 簇 电 压 (DP) 和 碰 撞 能 量 (CE) 见 表 2; 二 级 质 谱 图 见 图 1 表 2 保 留 时 间 与 主 要 质 谱 参 数 Tab 2 Retention time and main mass parameters Tab 1 A,% 15~75 75~15 15~15 表 1 梯 度 洗 脱 程 序 Gradient elution procedure tr,min 1.86 1.92 3.59 3.78 4.18 4.12 5.25 6.24 6.37 B,% 75~15 15~75 75~75 监 测 离 子 对,m/z 609.1 300.2 417.1 255.0 187.1 131.1 217.1 202.0 217.1 202.0 822.4 351.1 855.8 287.3 341.1 178.0 327.1 178.0 DP,V 100 130 130 100-90 -90 流 速,ml/min CE,eV -54-28 33 27 27-56 25-40 -34 2.2 溶 液 的 制 备 2.2.1 混 合 对 照 品 溶 液 分 别 精 密 称 取 补 骨 脂 素 甲 基 麦 冬 二 氢 高 异 黄 酮 A 和 对 照 品 14.01 19.97 15.20 14.02 16.03 27.99 19.00 15.03 17.04 mg, 分 别 置 于 100 ml 量 瓶 中, 加 甲 醇 溶 解 并 定 容, 摇 匀 ; 再 用 甲 醇 稀 释 得 质 量 浓 度 分 别 为 14.01 39.94 7.60 14.00 16.03 55.98 19.00 3.01 3.41 /ml 的 各 对 照 品 贮 备 液 精 密 量 取 上 述 各 对 照 品 贮 备 液 ml, 置 于 10 ml 量 瓶 中, 加 50% 乙 腈 定 容, 摇 匀, 制 成 每 1 ml 中 含 佛 手 苷 内 酯 甲 基 麦 冬 二 氢 高 异 黄 酮 B 700 1 997 380 700 800 2 799 950 151 171 ng 的 混 合 对 照 品 溶 液 2.2.2 供 试 品 溶 液 按 处 方 比 例 1/3 的 量 ( 北 沙 参 3 g 麦 冬 3 g 玉 竹 2 g 桑 叶 1.5 g 扁 豆 1.5 g 花 粉 1.5 g 甘 草 1 g) 准 确 称 取 各 味 药 材, 混 合 后 加 140 ml 水 回 流 提 取 20 min, 滤 过 提 取 液 ; 药 渣 再 加 110 ml 水 提 取 15 min, 再 次 滤 过 提 取 液 ; 合 并 2 次 水 提 取 液, 即 得 沙 参 麦 冬 汤 的 供 试 品 贮 备 液 平 行 制 备 3 个 批 次 ( 批 号 分 别 为 20150711 20150713 20150715) 作 为 样 品 溶 液 于 4 冰 箱 冷 藏, 备 用 精 密 吸 取 各 样 品 溶 液 1 ml, 置 于 10 ml 量 瓶 中, 加 水 定 容, 以 半 径 为 10 cm 12 000 r/min 离 心 10 min, 再 经 0.22 μm 微 孔 滤 膜 滤 过, 取 续 滤 液, 即 得 2.3 线 性 关 系 考 察 将 2.2.1 项 下 混 合 对 照 品 溶 液 按 以 下 步 骤 逐 倍 稀 释, 依 次 制 得 6 个 系 列 浓 度 的 混 合 对 照 品 溶 液 :1 精 密 量 取 2.2.1 项 下 混 合 对 照 品 溶 液 5 ml, 置 于 10 ml 量 瓶 中, 加 50% 乙 腈 稀 释 至 刻 度, 作 为 1 号 混 合 对 照 品 溶 液 ;2 精 密 量 取 1 号 混 合 对 照 品 溶 液 5 ml, 置 于 10 ml 量 瓶 中, 加 50% 乙 腈 稀 释 至 刻 度, 作 为 2 号 混 合 对 照 品 溶 液 ;3 精 密 量 取 2 号 混 合 对 照 溶 液 2 ml, 置 于 10 ml 量 瓶 中, 加 50% 乙 腈 稀 释 至 刻 度, 作 为 3 号 混 合 对 照 品 溶 中 国 药 房 2016 年 第 27 卷 第 9 期 China Pharmacy 2016 Vol. 27 No. 9 1241
m/z m/z A 图 1 B 液 ;4 精 密 量 取 3 号 混 合 对 照 品 溶 液 2 ml, 置 于 10 ml 量 瓶 中, 加 50% 乙 腈 稀 释 至 刻 度, 作 为 4 号 混 合 对 照 品 溶 液 ;5 精 密 量 取 4 号 混 合 对 照 品 溶 液 2.5 ml, 置 于 10 ml 量 瓶 中, 加 50% 乙 腈 稀 释 至 刻 度, 作 为 5 号 混 合 对 照 品 溶 液 ;6 精 密 量 取 2.2.1 项 下 混 合 对 照 品 溶 液 适 量, 作 为 6 号 混 合 对 照 品 溶 液 按 2.1 项 下 试 验 条 件 进 样 测 定, 记 录 峰 面 积, 以 补 骨 脂 提 取 离 子 流 色 谱 图 C A. 各 分 析 物 质 谱 特 征 离 子 图 ;B. 对 照 品 溶 液 ;C. 供 试 品 溶 液 ;1. ;2. ;3. ;4. ;5. ;6. ;7. 麦 冬 皂 苷 D;8. ;9. Fig 1 Extracted ion chromatogram A.MS characteristic ion chromatograms of analytes;b.reference substance solution ;C. sample solution;1. rutin;2.liquiritin;3.psoralen;4. xanthotoxin;5. bergapten;6.ammonium glycyrrhetate;7.ophiopogonin D;8. methylophiopogonanone A;9.methylophiopogonanone B 素 甲 基 麦 冬 二 氢 高 异 黄 酮 A 的 质 量 浓 度 (x,ng/ml) 为 横 坐 标 峰 面 积 (y) 为 纵 坐 标 进 行 线 性 回 归, 回 归 方 程 和 线 性 范 围 见 表 3 Tab 3 表 3 回 归 方 程 和 线 性 范 围 Linear regression equations and Linear ranges 线 性 回 归 方 程 y=3.45 10 4 x+1.01 10 4 y=3.04 10 3 x+3.71 10 3 y=5.6 10 5 x+1.04 10 4 y=1.4 10 4 x+1.21 10 3 y=2.38 10 4 x+5.66 10 3 y=484x-1.21 10 3 y=2.01 10 3 x-687 y=7.19 10 3 x+2.93 10 3 y=7.41 10 3 x+518 2.4 检 测 限 与 定 量 限 考 察 线 性 范 围,ng/ml 1.75~700 5.00~1 997 0.95~380 1.75~700 2.00~800 7.00~2 799 2.38~950 8~151 0.43~171 γ 0.999 2 0.999 7 0.999 0 0.999 1 0.999 8 0.999 3 0.999 5 0.999 7 0.999 0 取 2.2.1 项 下 混 合 对 照 品 溶 液 适 量, 等 倍 逐 步 稀 释, 按 2.1 项 下 试 验 条 件 连 续 进 样 测 定 6 次, 记 录 峰 面 积 当 信 噪 比 为 3 1 时, 得 检 测 限 (LOD); 当 信 噪 比 为 10:1 时, 得 定 量 限 (LOQ), 结 果 见 表 4 Tab 4 表 4 检 测 限 与 定 量 限 测 定 结 果 Determination results of quantitation limit anddetection limit 2.5 精 密 度 试 验 LOD,ng/ml 0.44 0.63 0.24 0.44 0 1.40 0.48 0.05 0.07 LOQ,ng/ml 0.88 1.67 0.64 1.58 1.20 3.50 1.58 0.19 0.21 按 2.2.1 项 下 方 法 制 备 花 椒 毒 素 甲 基 麦 冬 二 氢 高 异 黄 酮 A 和 质 量 浓 度 分 别 为 7.00 19.97 3.80 7.00 8.00 27.99 9.50 1.51 1.71 ng/ml 的 混 合 对 照 品 溶 液, 再 按 2.1 项 下 试 验 条 件 进 样 测 定, 记 录 峰 面 积 结 果, 芦 丁 麦 冬 皂 苷 D 和 峰 面 积 的 RSD 分 别 为 1.3% 1.5% 2.2% 1.7% 2.6% 2.8% 2.9% 1.1% 0.8%(n=6), 表 明 仪 器 精 密 度 良 好 2.6 稳 定 性 试 验 取 同 一 供 试 品 溶 液 ( 批 号 :20150711) 适 量, 分 别 于 室 温 (25 ) 放 置 0 2 4 6 8 h 时 按 2.1 项 下 试 验 条 件 进 样 测 定, 记 录 峰 面 积 结 果, 佛 手 苷 内 酯 和 甲 基 麦 冬 二 氢 高 异 黄 酮 B 峰 面 积 的 RSD 分 别 为 3.0% 2.4% 1.9% 2.2% 2.6% 2.6% 2.1% 2.2% 1.5%(n=5), 表 明 供 试 品 溶 液 在 8 h 内 稳 定 性 良 好 2.7 重 复 性 试 验 精 密 量 取 同 一 供 试 品 溶 液 ( 批 号 :20150711) 适 量, 共 6 份, 1242
按 2.1 项 下 试 验 条 件 进 样 测 定, 记 录 峰 面 积 结 果, 甘 草 苷 麦 冬 皂 苷 D 和 的 平 均 含 量 分 别 为 0.954 17.92 0.013 7 0.033 2 0.424 23.16 0.045 6 0.024 2 0.083 /ml,rsd 分 别 为 1.4% 1.9% 2.8% 2.2% 2.3% 1.7% 2.5% 2.6% 2.2%(n=6), 表 明 本 方 法 重 复 性 良 好 2.8 加 样 回 收 率 试 验 取 已 知 含 量 的 沙 参 麦 冬 汤 ( 批 号 :20150711)6 份, 每 份 精 密 吸 取 ml, 分 别 精 密 加 入 等 体 积 的 2.2.1 项 下 混 合 对 照 品 溶 液, 按 2.2.2 项 下 方 法 制 备 供 试 品 溶 液, 再 按 2.1 项 下 试 验 条 件 进 样 测 定 并 计 算 加 样 回 收 率, 结 果 见 表 5 待 测 成 分 表 5 Tab 5 取 样 量, ml 加 样 回 收 率 试 验 结 果 (n=6) Results of recovery tests(n=6) 样 品 含 量, 加 入 量, 测 得 量, 0.4750 0.946 2 0.957 7 0.975 9 0.968 3 0.988 1 0.950 3 17.420 0 17.350 0 17.330 0 17.290 0 18.480 0 17.390 0 0.013 0 0.013 2 0.013 1 0.013 6 0.012 9 0.013 3 50 0 加 样 回 收 率,% 98.76 101.20 105.00 103.40 107.60 99.62 94.02 93.24 93.02 92.57 105.80 93.69 93.84 96.92 95.38 103.10 92.30 98.46 105.00 平 均 加 样 回 收 率,% 102.60 95.39 96.30 102.20 RSD, % 1.7 2.9 2.1 3.0 待 测 成 分 续 表 5 Continued tab 5 取 样 量, 加 入 量, 测 得 量, ml 样 品 含 量, 0.1750 0.2250 0.0210 48 4 29 3 39 2 55 4 47 7 0.428 0 0.434 7 0.425 1 0.435 4 0.426 3 0.432 2 24.130 0 24.150 0 23.010 0 24.130 0 23.020 0 22.990 0 0.044 6 0.043 6 0.042 9 0.044 7 0.044 8 0.044 5 0.022 6 0.022 7 0.022 5 0.023 6 0.023 5 0.023 7 0.081 4 0.083 2 0.080 8 0.082 3 0.079 8 0.082 9 加 样 回 收 率,% 104.10 93.20 98.86 108.10 103.70 95.91 98.89 94.62 99.20 95.16 97.78 103.70 104.80 95.25 104.60 95.33 95.08 103.80 99.04 95.71 104.30 104.80 103.30 95.45 96.36 94.54 104.50 103.60 105.50 98.50 103.00 97.00 100.75 94.50 102.25 平 均 加 样 回 收 率,% 96.93 99.79 101.80 99.99 99.33 RSD, % 1.2 2.6 1.9 2.3 1.6 2.9 样 品 含 量 测 定 取 3 批 样 品 溶 液 适 量, 按 2.2.2 项 下 方 法 制 备 供 试 品 溶 液, 平 行 3 份, 再 按 2.1 项 下 试 验 条 件 进 样 测 定 并 计 算 样 品 含 量, 结 果 见 表 6 Tab 6 表 6 样 品 含 量 测 定 结 果 (n=3,/ml) Results of contentsdetermination of samples(n=3,/ml) 批 号 20150711 20150713 20150715 0.954 2 0.956 1 0.928 4 17.92 17.65 17.80 0.013 8 0.013 5 0.011 1 32 4 09 2 0.286 8 0.424 4 0.489 3 52 7 23.16 23.14 26.78 0.045 6 0.032 4 0.046 8 0.024 2 0.028 0 0.017 8 0.084 0 0.079 8 0.080 8 3 讨 论 3.1 液 相 条 件 的 选 择 和 为 同 分 异 构 体, 可 产 生 相 同 的 二 级 碎 片, 故 采 用 离 子 对 m/z 217.1/202.0 时 可 同 时 监 测 到 花 椒 毒 素 和, 因 此 需 要 调 整 流 动 相 比 例 使 其 达 到 完 全 分 离, 避 免 互 相 影 响 本 试 验 比 较 了 甲 醇 - 水 和 乙 腈 - 水 两 种 流 动 相 组 成 系 统, 后 者 的 分 离 效 果 和 色 谱 峰 型 明 显 好 于 前 者, 故 采 用 乙 腈 - 水 为 流 动 相 本 试 验 还 考 察 了 在 流 动 相 中 添 加 不 同 比 例 的 甲 酸 对 各 的 影 响, 结 果 表 明 在 流 动 相 中 加 入 0.1% 的 甲 酸 可 改 善 各 成 分 峰 形 并 增 加 响 应 值 3.2 离 子 化 模 式 的 选 择 试 验 中 发 现 甲 基 麦 冬 二 氢 高 异 黄 酮 A 和 在 ESI - 下 响 应 较 好, 而 补 骨 脂 素 和 在 ESI + 下 响 应 较 好 故 本 试 验 采 用 正 负 离 子 同 时 监 测 模 式, 在 同 一 分 析 周 期 内 同 时 测 定 9 种 成 分, 既 兼 顾 了 各 成 分 谱 碎 裂 性 质, 又 缩 短 了 分 析 时 间 中 药 制 剂 成 分 复 杂 多 样, 采 用 传 统 分 析 方 法 鉴 定 困 难, 耗 时 长 采 用 LC-MS/MS 法 进 行 中 药 化 学 成 分 分 析, 可 同 时 得 到 分 析 成 分 的 保 留 时 间 分 子 量 以 及 特 征 结 构 碎 片 等 丰 富 信 中 国 药 房 2016 年 第 27 卷 第 9 期 China Pharmacy 2016 Vol. 27 No. 9 1243
[11-13] 息, 具 有 高 效 快 速 和 高 灵 敏 度 的 特 点 目 前, 采 用 各 种 分 [14-17] 析 方 法 对 各 单 味 药 材 有 效 成 分 含 量 测 定 的 文 献 较 多, 但 未 见 有 同 时 测 定 沙 参 麦 冬 汤 有 效 成 分 含 量 的 报 道 本 试 验 首 次 采 用 UPLC-MS/MS 法 对 3 个 批 次 的 沙 参 麦 冬 汤 中 9 个 成 分 进 行 了 含 量 测 定 结 果 表 明, 本 文 所 建 立 的 方 法 快 速 简 便 准 确 可 靠, 适 用 于 同 时 测 定 沙 参 麦 冬 汤 中 补 骨 脂 素 甲 基 麦 冬 二 氢 高 异 黄 酮 A 的 含 量 参 考 文 献 [ 1 ] 周 燕 萍, 邱 明 义, 胡 作 为, 等. 沙 参 麦 冬 汤 对 放 射 性 肺 炎 大 鼠 血 浆 IL-6,TNF-α,TGF-β1 的 影 响 [J]. 中 国 实 验 方 剂 学 杂 志,2014,20(16):165. [ 2 ] 李 世 东, 曾 俞 霖, 刘 茂 芳. 沙 参 麦 冬 汤 对 胃 癌 小 鼠 K-ras 基 因 表 达 的 影 响 [J]. 贵 阳 中 医 学 院 学 报,2014,36(5):133. [ 3 ] 李 新, 刘 茂 军. 沙 参 麦 冬 汤 加 减 联 合 化 疗 治 疗 中 晚 期 非 小 细 胞 肺 癌 [J]. 中 国 实 验 方 剂 学 杂 志,2014,20(20):195. [ 4 ] 张 继 红, 焦 晓 明, 李 儒 新, 等. 沙 参 麦 冬 汤 对 运 动 小 鼠 免 疫 功 能 的 影 响 [J]. 中 国 康 复 医 学 杂 志,2009,24(5):442. [ 5 ] 石 磊, 王 丽 丽, 胡 魁, 等. 沙 参 麦 冬 汤 联 合 化 疗 对 肺 癌 患 者 免 疫 功 能 的 影 响 研 究 [J]. 中 华 中 医 药 学 刊,2015,33(6): 1 363. [ 6 ] 朱 为 民, 肖 寒, 方 乃 青, 等. 加 减 沙 参 麦 冬 汤 联 合 化 疗 对 肺 癌 患 者 免 疫 功 能 的 影 响 [J]. 南 京 中 医 药 大 学 学 报,2011, 27(6):523. [ 7 ] 王 西 涛. 沙 参 麦 冬 汤 加 减 治 疗 慢 性 支 气 管 炎 140 例 疗 效 分 析 [J]. 中 医 临 床 研 究,2014,6(11):100. [ 8 ] 刘 畅, 徐 萌, 赵 建 夫, 等. 沙 参 麦 冬 汤 加 减 对 恶 性 肿 瘤 增 效 减 毒 作 用 的 系 统 评 价 [J]. 中 国 实 验 方 剂 学 杂 志,2014, 20(5):206. [ 9 ] 于 雯 娟, 李 航 森. 沙 参 麦 冬 汤 加 减 联 合 抗 生 素 激 素 治 疗 放 射 性 肺 炎 20 例 疗 效 观 察 [J]. 中 西 医 结 合 研 究,2013,5 (3):151. [10] 肖 寒, 方 乃 青, 申 小 苏. 加 减 沙 参 麦 冬 汤 联 合 化 疗 治 疗 Ⅲ, Ⅳ 期 非 小 细 胞 肺 癌 [J]. 中 国 实 验 方 剂 学 杂 志,2011,17 (24):203. [11] 罗 芬. 液 - 质 联 用 技 术 在 中 药 分 析 中 的 应 用 [J]. 亚 太 传 统 医 药,2014,10(11):52. [12] 苏 靖, 戴 荣 继. 液 质 联 用 技 术 在 中 药 研 究 中 的 应 用 [J]. 生 命 科 学 仪 器,2014,12(2):40. [13] 郭 兴 杰, 安 芳, 林 丽 娜. 液 质 联 用 技 术 与 中 药 现 代 化 [J]. 世 界 科 学 技 术 - 中 医 药 现 代 化,2009,11(1):142. [14] 刘 曼, 孔 德 志, 杨 维, 等. 胶 束 电 动 毛 细 管 电 泳 分 离 测 定 北 沙 参 中 5 种 香 豆 素 类 成 分 分 析 [J]. 中 国 中 药 杂 志,2010, 35(14):1 840. [15] 曾 品 涛, 周 慧, 郑 一 敏, 等.HPLC 法 同 时 测 定 麦 冬 中 3 种 高 异 黄 酮 含 量 [J]. 中 国 中 药 杂 志,2012,37(1):71. [16] 李 克, 吴 龙 琴, 王 曙 东, 等. 双 波 长 -HPLC 法 同 时 测 定 甘 草 中 和 甘 草 酸 含 量 [J]. 现 代 中 药 研 究 与 实 践, 2014,28(2):62. [17] 杨 晶, 刘 嘉 琪, 王 宝 昌, 等. 桑 不 同 药 用 部 位 中 黄 酮 类 成 分 的 定 量 检 测 [J]. 中 国 药 房,2014,25(27):2 550. ( 收 稿 日 期 :2015-10-10 修 回 日 期 :2016-01-18) ( 编 辑 : 刘 柳 ) 王 刚 会 长 希 望 中 国 计 划 生 育 协 会 新 一 届 党 组 积 极 进 取 奋 发 有 为, 推 动 计 划 生 育 协 会 事 业 改 革 发 展 本 刊 讯 2016 年 2 月 23 日, 中 国 计 划 生 育 协 会 会 长 王 刚, 国 家 卫 生 计 生 委 党 组 书 记 主 任 李 斌 出 席 中 国 计 划 生 育 协 会 干 部 大 会 并 作 重 要 讲 话 国 家 卫 生 计 生 委 副 主 任 王 培 安, 中 国 计 生 协 常 务 副 会 长 杨 玉 学 副 会 长 勾 清 明 出 席 会 议 并 作 发 言 王 刚 对 中 国 计 生 协 新 一 届 党 组 提 出 四 点 希 望 : 一 是 切 实 增 强 政 治 意 识 大 局 意 识 核 心 意 识 看 齐 意 识, 坚 决 贯 彻 党 中 央 决 策 部 署, 紧 紧 围 绕 四 个 全 面 战 略 布 局 谋 划 和 推 动 工 作, 准 确 把 握 计 生 协 在 党 和 国 家 全 局 工 作 中 的 职 责 定 位, 坚 持 正 确 政 治 方 向, 始 终 在 思 想 上 政 治 上 行 动 上 同 以 习 近 平 同 志 为 总 书 记 的 党 中 央 保 持 高 度 一 致 二 是 有 效 履 行 职 责 使 命, 充 分 发 挥 群 众 团 体 优 势, 当 好 桥 梁 纽 带, 引 导 广 大 群 众 自 觉 落 实 计 划 生 育 基 本 国 策, 全 心 全 意 服 务 广 大 计 生 群 众, 切 实 保 持 和 增 强 计 生 协 组 织 的 政 治 性 先 进 性 和 群 众 性 三 是 坚 持 问 题 导 向, 加 快 改 革 创 新, 不 断 增 强 计 生 协 组 织 生 机 和 活 力, 不 断 提 高 计 生 协 工 作 科 学 化 水 平 和 实 际 成 效, 努 力 把 计 生 协 建 设 成 具 有 社 会 影 响 力 和 公 信 力 的 群 团 组 织 四 是 严 格 落 实 管 党 治 党 主 体 责 任, 坚 持 党 要 管 党 从 严 治 党, 带 头 学 习 贯 彻 党 章 和 中 国 共 产 党 廉 洁 自 律 准 则 中 国 共 产 党 纪 律 处 分 条 例, 认 真 组 织 开 展 两 学 一 做 学 习 教 育, 着 力 加 强 计 生 协 干 部 队 伍 建 设, 推 进 全 面 从 严 治 党 取 得 新 成 效 李 斌 高 度 评 价 过 去 五 年 计 生 协 在 各 方 面 取 得 的 工 作 成 绩 在 王 刚 会 长 领 导 下, 以 杨 玉 学 同 志 为 党 组 书 记 的 中 国 计 生 协 领 导 班 子, 指 导 各 级 计 生 协 和 9 400 多 万 会 员, 主 动 服 务 党 和 国 家 中 心 工 作, 引 导 落 实 计 划 生 育 国 策, 推 动 完 善 生 育 政 策, 在 推 进 各 级 计 生 协 组 织 建 设 和 队 伍 建 设 打 造 计 生 协 服 务 品 牌 开 展 计 生 协 特 色 活 动 促 进 国 际 交 流 合 作 以 及 加 强 中 国 计 生 协 机 关 建 设 中 都 取 得 了 丰 硕 成 果, 计 生 协 事 业 呈 现 出 提 升 跨 越 的 新 气 象 李 斌 指 出, 王 培 安 同 志 政 治 坚 定, 领 导 经 验 丰 富, 在 地 方 和 国 家 部 委 长 期 担 任 领 导 职 务, 熟 悉 计 划 生 育 业 务 和 基 层 情 况, 由 王 培 安 同 志 兼 任 中 国 计 生 协 党 组 书 记, 既 加 强 了 计 生 协 领 导 班 子, 也 有 利 于 统 筹 协 调 计 划 生 育 工 作 进 一 步 形 成 合 力, 有 利 于 更 好 发 挥 协 会 的 桥 梁 纽 带 作 用 她 希 望 计 生 协 贯 彻 落 实 好 中 央 党 的 群 团 工 作 会 议 精 神, 围 绕 中 心 服 务 大 局, 切 实 保 持 和 增 强 政 治 性 先 进 性 群 众 性 ; 开 拓 创 新 奋 发 有 为, 在 协 助 政 府 实 施 全 面 两 孩 政 策 共 同 做 好 计 划 生 育 工 作 中 充 分 发 挥 生 力 军 作 用 ; 在 协 会 党 组 和 领 导 班 子 领 导 下, 计 生 协 全 体 党 员 干 部 同 心 同 德 团 结 一 致, 认 真 做 好 计 生 协 换 届 工 作, 并 不 断 发 扬 成 绩, 主 动 作 为, 再 创 佳 绩 1244