Breeze 2 GPC 操作指南
1 Breeze 2 软件登录 双击桌面 Breeze 2 快捷图标, 即出现以下界面, 随即跳出 Breeze 2 登录界面, 输入相应的用户名 ( 默认为 breeze), 点击确定, 即跳出选择项目和系统选择项目和系统界面,
选择本次样品分析数据要存放的项目项目和所要使用的色谱系统,( 新建项目 : 参见 8.1 章节创建项目 ; 色谱系统 : 安装好仪器和软件后, 工程师已为用户创建相应的色谱系统 ) 然后点击确定, 即进入 Breeze 2 操作界面, 其主要部分见下图,
2 泵的流速设置 完成泵头排气泡 (Prime 泵 ) 之后, 在 Breeze 2 软件泵控制面板中点击图标, 即出现改变流量改变流量界面, 在流量 A 处输入要设置的流速, 点击应用应用或确定, 缓慢升至所需流速 ( 保持每分钟 0.1ml/min 增量或更慢 ), 也可以使用变化率变化率功能, 设置所需流速及升至该流速所需时间, 点击应用应用或确定, 让泵自动将流速缓慢升至所需流速
3 创建方法组 3.1 创建仪器方法在命令栏中点击查看方法查看方法按钮, 然后点击仪器仪器方法方法分按钮 : 1) 点击 PCM/15 泵图标, 设置泵相关参数 : 选中流量流量标签, 设置分析样品所需泵的流速流速及泵的高压高压限制 ( 超过该压力泵会自动停流速, 以保护色谱柱 ) 注 :Waters GPC 色谱柱为压力敏感型色谱柱, 每根规格为 7.8*300mm 的 GPC 色谱柱最高耐压为 500psi, 如果三根相同规格的 GPC 色谱柱连用时, 系统最高压力不能超过 1500psi 2) 点击 W717 图标, 设置自动进样器参数 : 这里不需要设置任何参数 ( 若为 7725i 手动进样器, 则跳过该步骤 )
3) 点击 W410 图标, 设置 2414 检测器参数 : 点击通用通用标签, 在灵敏性灵敏性下拉列表中选择合适的灵敏性参数, 该参数会影响色谱峰响应, 一般选择 8 16 32 64, 也可以根据峰响应调节该参数 点击温度温度标签, 设置内部加热器内部加热器和外部加热器 1 的温度, 勾选启用内部温度, 设置内部温度 (2414 检测器内部温度, 一般设 35 或 40, 最高到 55 ); 勾选启用外部温度 1, 设置外部温度 1( 与 2414 相连柱温箱温度, 一般设 35 或 40, 最高到 150 )
所有色谱组件的参数设置完成后, 点击文件文件菜单, 在下拉菜单中点击另存为, 跳出如下界面, 在名称名称栏输入仪器方法名, 然后点保存, 保存所新建的仪器方法 3.2 创建方法组在查看方法查看方法按钮下, 点击方法组方法组分按钮, 在仪器方法仪器方法下拉列表中选择刚创建的仪器方法, 保留缺省处理方法缺省处理方法和缺省报告方法缺省报告方法为空白 点击文件文件菜单, 下拉菜单中选中另存为, 跳出保存方法组的对话框, 给方法组命名后保存方法组, 方法组名默认与仪器方法名相同
4 运行样品 4.1 平衡系统 / 监视基线点击采集栏中平衡系统 / 监视基线图标, 即跳出如下界面, 选择所使用的仪器方法, 点击平衡 / 监视器, 仪器参数设置完成后, 在采集栏最 右边的实时色谱图区域实时色谱图区域即可观察到基线, 待基线稳定, 点击后, 即可进样, 运行样品 停止基线监视 4.2 单针进样 ( 适合使用手动进样器用户 ) 点击采集栏中单进样按钮, 即跳出定义定义单进样单进样参数参数界面, 设置以下参数 : 样品名 : 输入易于辨别和记忆的样品名 功能 : 若进 GPC 标样选窄分布标准进样, 进 GPC 未知样选宽分布进样 方法组 : 选择样品分析所用的样品组, 如果还没有相应方法组, 可以点击创建方法组按钮建立 样品瓶位 : 若为自动进样器, 须设置好相应的样品瓶位 ; 若为手动进样器, 该值可设为 1-96 间任意瓶位, 无实际意义 进样体积 : 一般 GPC 进样为 50 或 100ul 运行时间 : 可根据所用色谱柱总保留体积 Vt 设置,Waters 7.8*300mm GPC 色谱柱的 Vt 约为 12ml, 若所用流速为 1ml/min,3 根色谱柱联用, 则运行时间大概要 36min, 可设 40min
设置完以上参数后, 若为自动进样器, 点击进样进样按钮后, 自动进样器开始进样, 随即运行样品 若为手动进样器, 将进样器手柄扳到 Load 位置, 点击进样进样按钮, 当状态栏显示单进样 正在设置后, 即显示单进样 等待进样 ( 会出现进样动态画面 ), 将吸取有 50ul 或 100ul 样品的微量进样针插入进样口, 将样品推入 LOOP 环, 随即将进样器手柄扳到 Inject 位置, 样品开始运行 4.3 样品组进样 ( 适合使用自动进样器用户 ) 在命令栏单击运行样品运行样品按钮, 然后选中样品队样品队列分按钮, 即出现样品表, 选中标签 级别级别及标记参数标记参数列, 点右键, 选择隐藏列, 将其隐藏 如果要保存隐藏以上各列后的样品表, 点击文件, 选中保存参数保存参数
4.3.1 创建样品组在样品表输入各样品的样品瓶号样品瓶号 进样体积进样体积 进样数进样数 ( 同一样品连续进样次数 ) 样品名称 运行时间, 从下拉列表中选择相应功能 ( 一般标样选择窄分布标准进样或未知样选择宽分布未知进样 ) 方法组方法组及处理 ( 一般选正常 ) 如下表, 4.3.2 运行样品组待系统稳定后, 在采集栏中点击运行样品组图标, 出现运行样品组界面, 输入样品组名, 如果样品组已保存, 样品组名默认与样品组方法名一致
输入样品组名称后, 点击运行运行 样品组会自动转到运行样品运行样品标签界面 如果要中断当前进样, 在采集栏中点击中断按钮, 即停止数据采集
5 数据处理 5.1 查看数据 1) 点击命令栏中查询数据查询数据按钮, 再点击通道通道标签, 即可找到相关样品信息, 如果查询不到相关样品信息, 可点击更新更新按钮, 更新数据显示 2) 如果以样品组方式进样, 也可以点击样品组样品组标签, 选中相应的样品组名称, 右键选择查看相关, 然后选择通道, 使通道里只显示该样品组的通道数据信息, 其它通道信息暂不显示 见上图
在通道通道标签下, 选中要查看的样品信息, 右键点击查看查看 命令栏中查看数据查看数据按钮自动选中, 相应样品的色谱图即显示出来 5.2 建立 GPC 拟合校正曲线 5.2.1 输入标样 Mp 分子量在命令栏中点击查询数据查询数据按钮, 点击通道通道标签, 选中参与建立校正曲线的所有标样, 右键点击改变样品 ;
随即跳出修改样品界面, 核对样品类型样品类型列, 如果标样的样品类型显示不是窄分布标样, 点击从下拉列表中选择窄分布标准样窄分布标准样 确保所有标样的样品类型均为窄分布标准进样后, 点击菜单编辑, 选择量 ( 或者点击快捷图标 ),
随即跳出组分编辑器, 在组分编辑器底部选中当前当前标签, 在分子量分子量列按分子量从大到小输入标样 PS1 中各组分的 Mp 分子量 然后点击下一个下一个按钮, 标样 PS2 被选中, 在组分编辑器底部选中当前当前标签, 在分子量列按分子量从大到小按分子量从大到小输入标样 PS2 中各组分的 Mp 分子量
使用下一个 ( 或上一个 ) 按钮依次将所有标样的分子量输入后, 点击确定, 组 份编辑器界面随即消失, 在修改样品界面点击保存图标 的信息, 然后关闭修改样品界面, 保存所输入或修改 5.2.2 建立处理方法在命令栏中点击查询数据查询数据按钮, 选择通道通道标签, 选中参与建立校正曲线的所有标样, 右键查看 ; 然后点击色谱图重叠色谱图重叠图标, 使所有标样色谱图重叠以确定积分区域 ( 如 16.1 29.9min),
左键点击含有最小峰高的标样 ( 该标样色谱图线条变黑色 ), 再点击色谱图重叠 图标, 关闭色谱图重叠功能, 只显示选中的标样的色谱图 点击处理参数向导处理参数向导图标, 即跳出 GPC 处理方法向导,
选中新建处理方法, 点击确定, 即跳出积分区域积分区域界面 ; 输入积分区域的开始开始和结束结束时间 ( 该区域由所有标样色谱图重叠所有标样色谱图重叠后确定 ), 然后点击下一步, 跳出峰宽及阈值峰宽及阈值界面 ;
保留该界面的默认峰宽峰宽和阈值, 点击下一步, 跳出剔除剔除峰界面 ; 为了剔除最后两个多余的杂峰, 可以单击左键选中峰高最小的峰 ( 选中后色谱峰变红 ), 并勾选最小高度最小高度选项, 最小高度值则自动设置为选中峰的 95% 峰高值, 然后单击下一步, 跳出校正校正界面 ;
确保选择相关相关校正 三阶三阶或五阶五阶校正拟合方式及输入分析使用流速, 单击下一步, 跳出色谱柱组色谱柱组界面 ; 输入色谱柱组的总空体积 (V0) 及总保留时间 (Vt), 通常情况下,V0 及 Vt 的值可设为积分区域开始及结束时间点与所用分析流速的乘积积分区域开始及结束时间点与所用分析流速的乘积 注 : 一根 Waters 7.8*300mm 规格 GPC 色谱柱的 V0 约为 6ml,Vt 约为 12ml 设好 V0 与 Vt 后, 点击下一步, 跳出处理方法名处理方法名界面 ;
命名处理方法名处理方法名后, 点击完成完成 建立处理方法完成 5.2.3 处理窄分布标样, 建立校正曲线创建处理方法后, 当前标样色谱图已被积分 校正处理, 见下图, 点击下一个 2D 通道 快捷按钮, 查看下一个标样色谱图, 然后依次点击积分 和校正快捷图标 ;
通过积分积分 校正校正及浏览下一个或上一个 2D 通道确保将所有标样已处理 然后点击校正曲线快捷图标, 查看校正拟合曲线 ; 确保 R 2 或 R 至少为 0.99 后, 点击文件 保存 全部, 保存结果及校正曲线 ;
5.2.4 处理宽分布未知样数据, 计算未知样的相对分子量在命令栏中点击查询数据查询数据按钮, 点击通道通道标签, 选中要处理的宽分布未知样, 右键查看 ; 在未知样查看 界面, 点击文件 打开 处理方法 ;
跳出打开处理方法打开处理方法界面, 选中刚建立的带有校正曲线的处理方法名称, 点击打开 ; 打开相应的处理方法后, 在当前未知样查看色谱图查看色谱图界面, 依次点击积分 和定 量快捷图标, 定量出未知样的相对分子量 ;
然后点击浏览浏览上一个 或下一个 2D 通道, 查看其它未知样, 然后依次点击 积分 定量 快捷图标, 处理所有的未知样 如果缺省的宽分布未知样积分参数不合适, 可以在查看色谱图界面积分参数栏, 重新设置积分参数, 重新积分 定量 ; 如果对未知样定量结果满意, 点击菜单文件 保存 全部, 将结果全部保存
5.2 查看结果点击命令栏查询数据, 然后点击结果结果标签, 按着 Ctrl 或 Shift 键选中要查看的结果, 右键点击查看, 即出现查看结果主窗口,
6 预览 / 保存报告 点击命令栏查询数据, 然后点击结果结果标签, 按着 Ctrl 或 Shift 键选中要查看的结果, 右键点击预览, 即出现打开报告方法打开报告方法界面,
选中使用以下报告方使用以下报告方法选项, 在下拉列表中选择相应的报告方法, 对于宽分布未知样结果, 可以选择宽分布未知样相对, 点击确定, 即跳出报告的预览界面, 如果报告不止一页, 可以点击上一页 / 下一页快捷图标来查看报告的内容 ; 如果同时选中几个结果预览报告, 可以点击上一个 / 下一个报告快捷图标查看每个结果的报告 ; 如果对报告比较满意, 点击保存快捷图标, 将报告保存为 PDF 文件
7 管理项目 点击管理管理菜单, 在子菜单中点击项目, 即出现管理项目管理项目界面, 7.1 创建项目在如上管理项目界面点击创建项目, 即跳出新项目向导 复制所选项所选项界面,
在下拉列表中选中要从中复制方法的项目, 缺省为 Defaults, 然后点击下一步, 输入新建项目的项目名项目名称及项目注释项目注释 ( 也可缺省为空白 ), 点击完成, 新项目即出现在项目表中
7.2 备份项目在管理项目界面选中要备份的一个或多个项目 ( 如 Defaults), 点击备份项目, 即出现项目项目备份备份向导 输入注释界面,
在备份注释备份注释空白处输入相应的注释, 点击下一步, 即出现项目备份向导 选择目的地界面, 一般选择第二个选项, 点击浏览浏览按钮, 即出现浏览文件夹浏览文件夹界面,
选中备份文件的存放路径 ( 如桌面 ), 点击确定, 即显示出相应的存放路径, 点击下一步, 即开始项目备份, 显示项目备份向导 备份显示界面,
备份完成后即显示如下界面, 点击下一步, 即显示项目备份向导 - 完成界面,
点击完成, 备份操作即完成 7.3 还原项目要操作已备份出的项目数据, 需将其再还原至 Breeze2 软件中 在管理项目界面, 点击还原项目, 即出现还原项目向导 启动软件界面,
点击浏览浏览按钮, 选择要还原的项目文件 ( 如 Defaults), 点击确定, 即出现下面界面,
点击下一步, 即显示还原项目向导 项目详细资料界面, 输入还原后的项目名称, 点击下一步, 即出现还原项目向导 还原显示界面,
点击完成, 还原的项目 Defauts1 即显示在管理项目表中 7.4 删除项目在管理项目界面, 按着 Ctrl 或 Shift 选中要删除的一个或者几个项目, 点击删除项目,
即跳出确认删除确认删除界面, 点击是, 即将所选项目从软件中删除
8 管理系统 点击管理管理菜单, 在下拉菜单中选择系统, 即跳出管理系统管理系统界面,
8.1 系统在线 / 离线切换 ( 一般适用于有多个检测器用户 ) 8.1.1 将目前在线的色谱系统处于离线状态双击桌面 Breeze2 快捷图标, 输入相应的用户名 ( 默认为 breeze), 点击确定, 即跳出选择项目和系统选择项目和系统界面, 选择相应的项目及 * 没有系统 *, 进入 Breeze2 软件系统 在如上管理系统管理系统界面中, 选择目前在线的系统 ( 如 1525_717_2414), 点击系统属性按钮, 即出现色谱系统属性界面, 点击在线在线选择框, 将 去掉, 点击确定, 即出现如下系统离线系统离线确认信息界面, 点击确定, 原来在线的系统即顺利离线
8.1.2 将需要使用使用的色谱色谱系统系统处于处于在线状态选中要使用的色谱系统, 点击系统属性, 即出现色谱系统属性色谱系统属性界面, 点击在线在线选择框, 确保在线勾选, 点击确定, 即出现以下系统上线系统上线确认信息界面,
点击确定确定即将要使用的系统顺利上线 8.2 系统 / 项目切换点击管理菜单, 在下拉菜单中选择改变系统 / 项目, 即出现改变项目 / 系统界面, 选择要切换的项目 / 系统名, 点击确定确定即可