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1 谱析高效液相色谱仪操作说明

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3 请在初次运行或系统中的部件改动时进行泵和检测器的配置, 以后尽量不要改动 5 点击 控制采集, 点击启动, 仪器进入自检界面, 自检成功后, 出现的界面如下 ; 6 检查溶剂滤头是否在输液瓶液面以下

4 7 在泵主机上打开放空阀, 单击 仪器 泵 冲洗, 冲洗结 束, 排完气泡后, 关闭放空阀 8 打开泵开关, 如图标所示,( 凸轮动画开始运动, 表示泵被打开 ) 9 点击 仪器 泵 设置, 出现下面界面 : 先用纯甲醇或纯乙腈以 1mL/min 的流速冲洗色谱柱, 然后视做样所用的 流动相而定下步的冲洗操作 ( 做样用流动相若为有机溶剂和水, 则直接换成流动相, 若做样用流动相为有机溶剂和缓冲盐, 则需要用 10% 的甲醇水或乙腈水过渡冲洗半小时 ) 10 客户按照所用方法或标准的要求设置泵和检测器的参数 点击 仪器 泵 / 检测器 设置, 设置泵的流速或梯度参数 检测器的参数 : 设置好后, 点击 设置

5 11 设置好泵和检测器的参数后, 用流动相冲洗一直至基线平直系统平 衡好后, 点击 控制 进样信息, 出现如下对话框 : 请输入样品名, 以便在后续 输出报告 中显示 填写好后便可进样采集数据 ( 二 ) 数据采集方法编辑

6 若实验操作时, 所用的标准方法涉及的色谱条件比较复杂, 每次设置泵和检测器参数需要很长时间, 此时可以事先把这个仪器方法设好保存, 用时只要直接调用即可 编辑一个新的数据采集方法步骤如下 1 点击 方法 编辑方法, 显示如下界面, 方法名称自己输入, 保存路径设置准确, 以便于下次直接调用 2 点击下一步, 进入泵信息设置界面, 若采用的为梯度条件, 则把 启 用梯度表格 前面的方框勾选上, 然后设置梯度条件

7 3 点击下一步, 进入进样器的设置界面, 若没有自动进样器, 直接点 击下一步进入柱温箱设置, 然后再点下一步, 进入检测器参数设置界面,

8 设置检测器波长, 运行时间 若波长采用的是时间程序, 则在启用时间表格前面 方框选上, 然后设置标准方法中要求的参数 4 点击下一步设置积分参数, 如下 5 初始积分事件设置完毕后, 点击下一步进入方法建立的最后一个界 面方法建立完毕

9 不应用本方法 : 保存于系统中, 待用 应用本方法 : 将本方法设置为当前方法, 此后的每一次运行均采用本方法的设置条件 综上五个步骤, 一套完整的仪器方法建立完毕, 可以进行数据采集工作了 ( 三 ) 数据分析方法编辑在主界面选择数据分析, 点击启动, 进入数据分析界面 :

10 A 积分 1 点击 文件 打开数据, 打开待处理的目标文件, 点击 积分 界面, 进入数据积分操作界面 2 点击 积分 积分事件表, 可修改左边的初始积分事件, 也可 利用右边的快捷工具进行修改峰积分操作 如积分结果不理想, 则修改相应的积分参数或利用右边的快捷工具条 修改积分, 直到满意为止

11 B 校正实际工作中, 为避免偶然误差, 一般采用多点校正法 下面介绍用 LCWIN 软件进行多点校正的操作步骤 1 峰积分操作设置好后, 点击 校正界面, 进入数据校正分析界面 2 点击对应标样的谱图界面,

12 点击 校正 新建校正任务, 出现下面界面 : 输入标准物含量, 校正级别一般是默认的, 第一次新建校正级别是 1, 以 后会逐加, 不需要再修改 3 点击另一标样谱图, 进入对应谱图界面 点击 校正 新增校正 任务, 出现界面如下 校正级别自动更换为 2, 输入此标准物的浓度 系统就会在当前校正表中按照所列化合物自动加入相应行 如果还要再加入新的校正级别, 您可以重复上面步骤 本例中在加入两个新的校正级别后, 校正表会变为如下状态 注 : 由于校正级别与数据点一一对应, 所以请务必不要将不同数据点所对应的数据文件设为同一级别 工作站会根据所选择的校正曲线类型进行多点拟和, 得出相应校正曲线 您 可以在校正曲线区得到校正曲线方程和拟和参数, 校正曲线方程还会填入校正表 中的校正因子栏 校正方程中峰面积是自变量 X, 含量则是峰面积的函数 Y

13 4 点击 方法 defalt.cdm 另存为, 可将此校正方法另存在你指定的文件夹里, 以便于下次直接引用 C 定量计算当对标准样品的校正结束后, 我们就可以利用校正得出的定性和定量依据进行定性和定量计算 LCWIN 提供的定量计算方法有六种 : 归一法 校正归一法 外标法 百分比外标法 内标法 百分比内标法, 常用的有归一法 外标法和内标法 1 外标校正定量计算法操作步骤 : 在文件菜单中打开待分析的样品谱图, 在方法菜单中打开之前建立的校正标 准方法, 点击 校正界面, 点击 校正 定量参数, 输入样品的称量 量,

14 点击 校正 分析当前谱图, 选择外标法, 点击确定, 在定量结果表中即可直接得出各化合物的含量及百分比含量 2 内标校正定量计算法操作步骤内标法的校正操作步骤与外标法一致, 只是在建校正任务时, 在内标标记一 栏方框内勾选上, 填写上内标物的含量, 分析当前谱图时选择内标法, 其余操作 步骤同外标法 3 归一化法定量计算操作步骤 归一法计算时, 只需在上面的积分操作完毕后, 直接点击 校正 下的 分析当前谱图, 选择 归一法, 点击 确定, 即可在定量结果表中得出各个化合物的百分比含量 4 报告输出定量计算完毕后可以进行报告输出 输出报告只需选择菜单中 报告 输出报告 即可 点击后会出现如下对话框 : 在相应的文件夹里调出之前建立的报告模版和输出方式后即可进行报告输出 关于报告模板的建立步骤将在下面仔细介绍 ( 四 ) 报告模板编辑在主界面点击 报告编辑 启动, 进入报告模板编辑界面,

15 可点击 视图 编辑 仪器方法 分析方法 分析结果 在栏目区单击选中想要编辑的报告组件, 在选项区中编辑对应的组件模板 您想在输出报告中显示什么只要在选项区选择不在报告中隐藏即可, 即不要勾选 在报告中隐藏 前面的方框 直至修改到您满意为止, 然后点击 方法 模板另存为, 选择合适的文件保存之前已经建立好的报告模板 ( 五 ) 关机 采样结束后, 要将整个液相色谱系统冲洗干净 若流动相为有机溶剂和纯水, 可直接用纯甲醇或纯乙腈冲洗直至基线平直 ; 若流动相为有机溶剂和缓冲盐, 则 一定要先用 10% 甲醇水或乙腈水冲洗约 1 小时, 再用纯甲醇或乙腈冲洗直至基线 平直 即可关液相主机, 关电脑, 切断电源

16 注意事项 : 1. 样品在进样前最好预先经 0.45um 或孔径更小的滤头过滤 溶剂为水就用水系滤头, 溶剂为有机就用有机系滤头 待基线走稳后, 进样 进样时, 样品在 load 状态打进定量环, 然后搬到 inject 进样 注 : 搬动进样阀时应尽量速度快 20ul 的定量环若要满环进样必须进 3-5 倍的样品量, 才能保证进样精度, 若要部分定量不要超过 10ul 的进样量 进样针不用时要清洗干净, 高浓度到低浓度进样时要注意洗针, 防止残留 2. 使用完毕后, 要将柱子和系统冲洗干净, 最后将柱子和检测器流通池保存在要求的溶剂中 注意在此过程中, 不互溶溶剂之间的过渡 ( 此项尤为重要 ) 3. 关于流动相 1) 必须使用色谱纯的有机溶剂, 超纯水, 高纯度 ( 至少为分析纯 ) 的酸及盐 2) 缓冲液配制时一定要充分溶解保证没有析出结晶 3) 流动相必须要进行过滤及脱气 4) 流动相不要使用塑料容器 4. 关于色谱柱 1) 注意各种柱子使用的 PH 值范围是不同的, 应引起重视 不要使用超出色谱柱 PH 范围外的流动相, 否则会损坏柱填料及柱子性能 2) 若在正常使用过程中发现工作站中显示的压力超过 3500PSI 请联系普 析通用工程师 3) 另外请注意以下几点 : a) 样品最好用 0.45um 及孔径更小的膜过滤 ; b) 柱使用后必须冲洗干净 ; c) 柱子安装时注意柱子的安装方向, 接口处不要留有空隙 ; d) 注意不同柱需用不同的试剂来保存,C18 反相柱保存在甲醇或乙腈中 ; e) 柱子须轻拿轻放 ; f) 长时间不用应冲干净后拆下两头封紧存放 5. 关于冲洗系统

17 1) 实验结束后为了保护仪器及柱子都应进行必要的冲洗 2) 有机溶剂和水的体系 ( 不含缓冲盐 ): 实验结束后, 直接用 100% 甲醇进行冲洗直到基线稳定 第二天开机后可直接用流动相平衡系统, 待基线稳定后进样分析 3) 缓冲盐溶液体系 : 实验结束后, 先用 10% 的甲醇水溶液冲洗系统至少半个小时, 充分溶解系统中的缓冲盐, 再用 100% 甲醇进行冲洗直到基线稳定 第二天开机后, 必须先用 10% 的甲醇水溶液冲洗系统至少半个小时, 再用流动相平衡系统, 待基线稳定后进样分析 6. 关于紫外检测器 1) 如果时间长不用检测器可以关掉光源灯, 仅在 4 小时以上不用时才需 关灯, 频繁开关灯也会影响灯寿命 2) 不要让缓冲液长期滞留在流通池内, 因此每次分析完必须冲洗系统, 保存在纯甲醇中 7. 关于样品 ( 包括标样 ) 制备的要求 1) 必须能溶解于流动相如样品的溶剂不是流动相, 一定要用流动相试溶解度, 以免在进样时样品在流动相中析出, 堵塞管路和色谱柱 2) 必要时请过滤样品

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