206 2017 年 8 月第 38 卷第 15 期 DOI:10.3969/j.issn.1005-6521.2017.15.042 食品研究与开发 Food Research And Development 专题论述 新型试纸条在食源性致病菌检测中的应用 张丹 1, 刘兆臣 1, 邴欣 2,*, 杜淑媛 1,* (1. 山东师范大学生命科学学院, 山东济南 250014;2. 山东省产品质量检验研究院, 山东济南 250012) 摘要 : 近年来, 由食源性致病菌引起的食品安全事件频频发生, 其中, 以沙门氏菌 金黄色葡萄球菌 大肠杆菌 单增李斯特菌等致病菌引起的感染尤为常见 目前常用的食源性致病菌检测方法常需借助大型仪器完成, 操作步骤繁琐, 不利于现场检测 因此, 建立一种针对食源性致病菌的快速准确检测方法尤为重要 试纸条检测方法因其便携 灵敏度高 快速高效及成本低等优点, 广泛应用于食源性致病菌的快速检测 针对新型试纸条检测方法进行综述, 阐明了其在食源性致病菌检测中的应用 关键词 : 食源性致病菌 ; 试纸条 ; 检测 Application of New Strip in the Detection of Foodborne Pathogenic Bacteria ZHANG Dan 1, LIU Zhao-chen 1, BING Xin 2,*, DU Shu-yuan 1,* (1. College of Life Science, Shandong Normal University, Jinan 250014, Shandong, China; 2. Shandong Product Quality Inspection Research Institute, Jinan 250012, Shandong, China) Abstract: In recent years, food safety accidents cause by foodborne pathogenic bacteria occurre frequently. Infection caused by Salmonella, Staphyloccocus aureus, Escherichia coli, Listeria monocytogenes and other pathogens is particularly common. In the diagnosis, the commonly used detection methods of foodborne pathogens generally require complex instrumentation, cumbersome operation steps, which is not conducive to on-site testing. Therefore, it is very important to establish a rapid and accurate detection method for foodborne pathogens. Because of the advantages of convenient carrying, high sensitivity, high efficiency, low cost, and so on, the strip test method is widely used in the rapid detection of foodborne pathogens. The new strip test method and its application in the detection field of foodborne pathogens were summarized in this paper. Key words: food-borne pathogenic bacteria; strip method; detection 由食源性致病菌感染引发的食物中毒事件是我国食品安全面临的重大问题, 食源性致病菌传统的检测方法耗时费力, 特异性和灵敏度较低 因此, 建立一种快速高效的检测方法意义重大 免疫层析试纸条法具有操作简单 不需要借助大型仪器及可以在较短时间内得到检测结果的优点, 得到广泛的应用和发展 本文介绍了食源性致病菌的危害及污染现状, 对食源性致病菌的常规检测方法进行概述, 最后以标记材料的不同阐述了新型的试纸条检测方法在食源性致病 基金项目 : 山东省质量技术监督局科研项目 (2016KY06) 作者简介 : 张丹 (1994 ), 女 ( 汉 ), 硕士, 研究方向 : 产品质量安全 * 通信作者 : 炳欣 (1977 ), 男 ( 汉 ), 高级工程师, 博士, 研究方向 : 产品质量安全 ; 杜淑媛 (1988 ), 女 ( 汉 ), 讲师, 博士, 研究方向 : 产品质量安全 菌检测中的应用 1 食源性致病菌的危害及污染现状近年来, 在食品常规抽检和进出口食品的通告中由食源性致病菌引起的不合格食品占有很大的比例, 以致由食源性致病菌引起的食物中毒事件屡屡发生 引起上述问题的食源性致病菌主要包括沙门氏菌 金黄色葡萄球菌 致病性大肠杆菌及单增李斯特菌等 1.1 沙门氏菌沙门氏菌是一种常见的革兰氏阴性肠杆菌科食 [1] 源性致病菌, 主要存在于鸡蛋 家禽和肉类产品中 据数据统计显示, 由沙门氏菌引起的食物中毒在细菌性食物中毒中位居前列 人体感染沙门氏菌后, 常出现胃肠炎 伤寒及副伤寒等症状, 严重者还会出现败
专题论述张丹, 等 : 新型试纸条在食源性致病菌检测中的应用 207 [2] 血症, 威胁人类身体健康 为识别材料, 这些生物活性物质包括抗原 抗体 酶 微 1.2 金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌是革兰氏阳性菌, 无芽孢和鞭 生物 生物组织 核酸及细胞等 通过理化换能器及信号放大装置, 可以把对生物物质的敏感程度转化形成 毛, 大多数无荚膜, 是一种引起人类和动物化脓性感染的常见致病菌 金黄色葡萄球菌广泛存在于自然界中, 空气 水分 灰尘及生物体排泄物中都有可能存在 在全国范围内, 每年由金黄色葡萄球菌引起的食物中 [3] 毒在细菌性食物中毒事件中占有很大的比例 [6] 电信号, 从而实现了对病原微生物的筛查 根据分子识别元件的不同可以将生物传感器分为五大类, 即酶传感器 微生物传感器 细胞传感器 组织传感器和免 [7] 疫传感器 Abdalhai 等开发了一种基于电化学核酸基因组的生物传感器, 可以实现对牛肉中金黄色葡萄球 1.3 大肠杆菌 菌的检测, 检测限可达 1.2 ng/ml 大肠杆菌是一种肠道寄生菌群, 广泛存在于人和动物体的肠道内, 大部分菌对人和动物体都是无害 2.3 免疫检测技术免疫学检测技术是以病原微生物的抗原为特异 的 近年来致病性大肠杆菌在肉制品及奶类制品中常被检测出, 人感染致病性大肠杆菌后常出现腹膜炎及出血性肠炎等症状, 严重者威胁生命健康 性靶标, 通过制备相应的特异性抗体, 利用抗体与抗 [8] 原之间的特异性结合进行检测 免疫学检测方法操作简单, 不需要借助大型仪器, 耗时短, 因此成为目前 1.4 单增李斯特菌 食品检测研究的主流方向 单增李斯特菌是李斯特菌属中致病性最严重的 2.3.1 酶联免疫吸附法 (Enzyme-Linked ImmunoSorbent 一类, 广泛存在于人类的生活环境中, 未经加工的食品原料 已加工成型的食品及发酵乳品都有可能被其污染 人类感染单增李斯特菌主要是由于食用了被污 [4] 染的牛奶 肉类及海产品 人感染后, 会导致呕吐 腹 [5] 泻 流产 脑膜炎 败血症及脑炎 Assay, ELISA) ELISA 法的原理是将抗原或抗体在保持免疫活性的前提下结合到某种固相载体表面, 然后与某种酶结合后形成酶标抗原或抗体, 测定时, 通过形成抗原 - 抗体复合物, 加入酶反应底物后, 底物被酶催化产生有 1.5 其他食源性致病菌除上述 4 种常见的食源性致病菌以外, 志贺氏菌 色产物, 待测抗原的量与固相载体上酶的量呈现一定的比例关系, 可直接根据颜色深浅进行定性或定量分 副溶血性弧菌 溶血性链球菌等也会引起食物中毒事件的发生, 对人体健康造成一定的伤害 析 目前有很多针对 ELISA 法的改良方法, 大致可以分为双抗体夹心法测定抗原及竞争法测定抗原 在实 2 食源性致病菌检测方法概述食源性致病菌主要通过被污染的食物进行传播, 际的样品测定中, 检测大分子抗原与抗体经常使用双抗夹心法, 检测小分子抗原主要应用竞争法 近年来关于 ELISA 法检测食源性致病菌的报道越来越多, 如 食物中毒事件具有发病迅速 发病人群广及季节性等特点, 给社会带来巨大的经济损失, 威胁人类健康, 因此建立一种快速 灵敏的食源性致病菌检测方法是保障人类健康的重要手段 目前针对食源性致病菌的检测方法主要有微生物检测法 生物传感器技术及免疫检测等技术 [9] Brooks 等建立的双抗夹心法可以实现对不同血清型的沙门氏菌进行检测, 方法的敏感性高达 99.9 %, 针 [10] 对沙门氏菌的特异性诊断达 99.6 % 伍燕华等建立了一种对 A B C D E 5 种典型沙门氏菌进行检测的双抗夹心 ELISA 法, 经实验验证对沙门氏菌纯培养液的检测限为 1 10 4 [11] CFU/mL, 而且无交叉反应 Tu 等 2.1 微生物检测法传统的微生物检测方法主要是根据微生物生长 利用 ELISA 法检测巴氏杀菌奶中的单增李斯特菌, 最低检出限为 1 10 4 CFU/mL 繁殖的特性, 利用选择性培养基筛选微生物并分离, 再结合形态学特征和理化特性对病原微生物进行鉴 2.3.2 放射免疫分析 (radioimmuoassay, RIA) 技术 RIA 技术是将放射性同位素检测与抗原抗体的特 [6] 定 传统微生物检测方法适用范围广, 可以用于多种食源性致病菌的检测 但是由于传统的检测方法一般需要 4 d~6 d 的时间, 操作步骤繁琐, 检测时间长, 无法满足当前市场快速检测的需求 异性识别相结合的一种微量检测方法,RIA 技术的创立是医学与生物学领域的一项重大突破 该法普遍用于定量检测某些微量而又具有重要生物活性的物质, [12] 例如激素 维生素和药物等 随着科技的进步, 将磁 2.2 生物传感器技术生物传感器技术以某些具有生物活性的物质作 性微粒取代原来的 PR 分离剂, 应用于 RIA 技术, 可以 [13] 显著缩短免疫反应和分离的时间
2.3.3 荧光免疫分析技术 (Fluorescence immunoassay, FIA) 某些荧光分子如荧光素等在特定的激发波长下, 易被激发至饱和状态从而发出荧光, 这些荧光分子可以在较短的时间内重复激发和测量 1941 年,Cons 和 Kaplan 将荧光素和抗体结合用于检测组织中的抗原, 从而提出 FIA 的概念 近年来, 现代 FIA 技术快速发展, 出现了荧光偏振免疫分析法 (Fluorescence polarization immunoassay, FPIA) 和时间分辨荧光免疫分析 (Time -resolved fluorescence immunoassay, TRFIA) [14] [15] Qi 等将 TRFIA 与免疫纳米磁性捕获的方法相结合, 用于检测大肠杆菌 O157:H7, 灵敏度为 10 3 CFU/mL 2.3.4 免疫层析试纸条法免疫层析技术是由上个世纪八九十年代兴起的一种基于抗原和抗体特异性结合而发展起来的快速诊断技术 它的原理是以微孔膜作为固相载体, 将已知的特异性抗原或抗体固定在膜上作为检测条带, 将标记抗体吸附到玻璃纤维上作为标记物结合垫 加入液体样品以后, 由于毛细血管作用向前移动, 标记物和待测物的复合物由于抗原和抗体的特异性反应会在检测线聚集, 显示红色条带 若待测样品中不含所测物质, 标记抗体和样本会通过检测线继续向前移动 [16] 到达质控线的位置, 显示红色条带 根据颜色反应可以直接判断样品溶液中是否含有待检测物质 免疫层析试纸条法不需要借助大型仪器, 操作步骤简单, 检测成本低廉, 易得到检测结果, 得到广泛的应用与发展 免疫层析法常用胶体金等作为标记物, 近年来又发展了以量子点 磁性纳米材料等作为新型标记物的 [8] 技术, 应用于检测中, 提高了检测的灵敏度 胶体金 免疫层析试纸条构造见图 1 样品垫 208 Fig.1 胶体金垫 图 1 检测线 (T 线 ) 3 新型试纸条检测方法 质控线 (C 线 ) 胶体金免疫层析试纸条构造图 Colloidal gold immunochromatographic test strip 试纸条法检测食源性致病菌, 由于其操作简单 检测快速及价格低廉等特点, 广泛应用于食源性致病 菌的现场快速检测 近年来, 对于试纸条的研究与报道也越来越多, 随着技术的创新与应用, 试纸条检测已经从定性检测逐渐过渡到定量检测 本文以标记材 张丹, 等 : 新型试纸条在食源性致病菌检测中的应用 NC 膜 料的不同阐述了新型的试纸条检测方法 专题论述 3.1 胶体金标记免疫层析技术用胶体金作为标记材料的免疫层析技术目前在 市场上的应用最为广泛, 胶体金的制备比其它标记物要简便, 对操作人员的要求不高, 检测成本较低, 同时应用不同大小的胶体金颗粒标记一个样品, 可以进行多重标记, 实现多种物质的同时检测, 特异性和灵敏度高, 显色鲜艳易于肉眼观测, 适用于现场快速检测 3.1.1 胶体金的概述及性质胶体金是氯金酸在还原剂的作用下, 聚合成具有一定尺寸的金颗粒, 并在静电的作用下成为稳定的胶体状态, 形成带负电的疏水胶溶液, 正是由于静电作 [17] 用才成为稳定的胶体状态, 故称胶体金 由于胶体金 的高电子密度 微粒尺寸 形状和颜色反应等物理性状以及结合物的化学性质, 胶体金标记技术能够特异的标记进而应用于特异性检测 近年来胶体金标记技术已经在生物学研究中广泛使用, 尤其对于一些食品中常见有害成分的检测更是有其独一无二的优势 胶体金免疫层析技术分为竞争法和双抗夹心法, 竞争法常用于检测小分子类物质, 如盐酸克伦特罗及莱克多 [18] 巴胺等兽药残留 双抗夹心法常用于检测细菌及大分子蛋白类物质, 通常形成抗体 - 抗原 - 抗体结构, 目 前广泛应用于沙门氏菌 大肠杆菌及绒毛膜促性腺激 [8,19] 素等物质检测 3.1.2 胶体金免疫层析技术的应用胶体金免疫层析技术操作简单, 方法便捷, 不需要借助大型仪器设备, 通过肉眼可较快得到实验结果, [20] 广泛应用于检测食源性致病菌 1971 年,Faulk 等首次将胶体金作为标记物应用于免疫层析法, 从而开创 [21] 了胶体金免疫层析技术 2005 年邵晨东等自制试纸条用于检测沙门氏菌 Q 9 抗原, 最小检出量为 4 10 5 CFU/ [22] 条 黄岭芳等以单克隆抗体为标记抗体制备的试纸条, 对大肠杆菌 O157:H7 的检出限为 10 4 CFU/mL [23] 2015 年, 赖卫华等在传统的胶体金免疫层析试纸条的方法上进行改进, 通过合成 3 种花状形态的纳米金粒子, 实现了对大肠杆菌 O157:H7 的高灵敏度检测, 最低检出限为 10 3 [24] CFU/mL 王景云等将增敏剂 ( 氯金酸和盐酸羟胺 ) 与传统免疫层析试纸条相结合, 用于检测大肠杆菌 O157:H7, 利用胶体金试纸条读取仪读取结果, 得到信号放大前和信号放大后试纸条的检测 限分别为 4 10 4 CFU/mL 和 5 10 3 CFU/mL, 灵敏度比信号放大前提高了 8 倍 ; 检测时间为 20 min, 方法特异性 [25] 好 Liu 等将免疫磁性微球作为视觉检测探针应用于胶体金免疫层析试纸条, 用竞争法检测猪霍乱沙门氏
专题论述张丹, 等 : 新型试纸条在食源性致病菌检测中的应用 209 菌, 方法灵敏度为 1.2 10 7 CFU/mL, 对 17 种常见的非沙门氏菌菌株和 4 种其它血清型的沙门氏菌无交叉反应, 说明该方法具有良好的敏感性和特异性 胶体金免疫层析方法具有诸多适合快速检测的优点, 该方法在检测植物病虫害 食品安全检测 环境监测等方面被广泛应用, 为快速检测食品中的危害物质提供了可能 但是该方法易出现假阳性和假阴性结果, 目前市面上出售的商品化胶体金免疫层析试纸条的稳定性和灵敏度有待进一步提高 总之, 对该方法的要求是多方面的, 在实现快速简单检测的基础上, 尽量提高该方法的灵敏度和特异性 可以进行快速的检测, 在细胞及生化层面对于食品成 [30] 分, 临床医学等方面进行分析 Xia 等将金磁双功能纳米磁珠作为免疫层析试纸条的新型标记材料, 用于检测样品中的猪霍乱沙门氏菌, 实验证明该方法在食品样品 ( 全脂牛奶 ) 中的灵敏度为 5 10 5 CFU/mL, 与传统胶体金免疫层析技术相比灵敏度提高了 10 倍, 检测 [31] 时间为 20 h 黄震等建立了基于免疫磁分离的荧光微球免疫层析法, 用于检测猪霍乱沙门氏菌, 在 PBS 缓冲液和牛奶中的检出限分别为 1.5 10 5 CFU/mL 和 7.6 10 5 CFU/mL, 与直接采用荧光微球免疫层析法相比较, 检出限分别降低了 10 倍和 200 倍 3.2 石墨烯标记免疫层析技术 3.4 量子点标记免疫层析技术 3.2.1 石墨烯的概述及性质 量子点是由很少数量的原子构成的有 3 个数量级 石墨烯是碳原子以 sp 2 杂化方式通过紧密的排列方式形成的二维蜂窝状的结构, 在特定的电子显微镜下可以看到稳定的六边形形态, 这些都是石墨烯内部 [26] 碳原子的存在状态 正是由于石墨烯的出现和对它性能的研究, 使其受到了广泛的关注 石墨烯是组成其它一些维数碳材料的基本结构单元, 从而可通过折叠形成零维纳米材料富勒烯, 可通过卷曲形成一维纳米材料碳纳米管, 也可以用堆叠的方式形成三维石墨 氧化石墨烯已经被报道作为一种通用的高效荧光 [27] 猝灭剂 大小的新型半导体材料 量子点具有激发光谱宽并且连续 发射光谱窄并且对称 荧光寿命长及光化学信 [32] 号稳定性高等特点, 可显著提高检测方法的灵敏度 [33] 白冰等把纳米免疫磁珠富集和量子点标记技术相结合, 用于同时检测样液中的金黄色葡萄球和福氏志贺氏菌, 对金黄色葡萄球菌的平均捕获效率为 38.82 %, 福氏志贺氏菌的平均捕获效率为 88.73 % 可以实现在两个小时内完成检测过程, 与传统检测方法相比 [34] 较, 明显缩短了检测时间 Bruno 等将高灵敏度的核酸适配体耦合量子点侧向免疫层析试纸条, 用于检测 3.2.2 石墨烯标记免疫层析技术的原理及应用随着科技和技术的发展, 食品的制作方法也不局 大肠杆菌 单增李斯特菌及沙门氏菌, 灵敏度比传统 [35] 胶体金试纸条高 袁列江等自制了检测大肠杆菌 O157: 限于传统的方法, 在这些新型的制作方法中, 对于食品成分的检测技术也要随之更新换代 利用石墨烯对染料的荧光猝灭作用制作免疫层析试纸条, 可以实现对细菌的检测 还可以利用不同的荧光基因来标记不 H7 的量子点免疫层析试纸条, 该试纸条的检测限为 1 10 4 CFU/mL, 可在 5 min 内完成检测结果, 对常见的 8 种食源性致病菌进行检测无交叉反应出现, 方法灵敏度和特异性较好 同 DNA, 通过石墨烯对标记使用的荧光基团的猝灭作用来实现同时检测多种目标分子, 从而达到对食品中 [28] 的某些成分的检测 Eden 等利用石墨烯的荧光猝灭 4 展望总结近年来, 食品安全中毒事件发生的频率越来越 作用, 制备了一种新型免疫层析试纸条用于检测食品中的大肠杆菌, 该方法在标准缓冲液中的检测限为 10 CFU/mL, 在牛奶中的检测限为 100 CFU/mL, 方法灵敏度较高 高, 造成了严重的社会影响 对于市场上食品中潜在危害物质的检测需要一种快速高效且灵敏度高的检测方法, 免疫层析试纸条法以其操作步骤简单 耗时短 灵敏度高等优点得到广泛的应用, 我国基层单位 3.3 磁性纳米材料标记免疫层析技术磁性纳米粒子是一种具有磁性的纳米级别颗粒, 工作人员采用试纸条检测方法可以实现对农贸市场 超市及餐饮企业样本的快速高效筛查 试纸条检测方 由铁 镍等金属氧化物形成的磁性内核和由高分子聚合物组成的包裹磁性内核的部分组成, 是近年来迅速发展起来的应用范围极大的新型纳米材料 它的制备 [29] 方法主要有共沉淀法 微乳液法 热分解法等 由于一系列特殊的性质, 磁性纳米粒子极具应用价值 对于食品中的金属离子 蛋白质以及其它有害物质, 都 法也由最初的定性检测转到定量检测领域 新型纳米材料在免疫层析试纸条中的应用越来越多, 近来的研究报道也出现了对试纸条多元检测方面的内容, 随着科技的进步, 未来免疫层析技术的发展不可限量, 免疫层析试纸条也将实现快速高通量检测, 可以实现在较短的时间内, 尽可能多的检测食品中的危害物质
210 参考文献 : [1] Yang Q, Wang F, Jones K L, et al. Evaluation of loop -mediated isothermal amplification for the rapid, reliable, and robust detection of Salmonella in produce[j]. Food Microbiol, 2015, 46: 485-493 [2] 王毳, 闫磊, 曾庆祝. 沙门氏菌的检测技术与方法 [J]. 现代食品科技, 2007, 23(5): 82-85 [3] 周莉, 王永, 王法云, 等. 食品中金黄色葡萄球菌概况及新型检测技术研究进展 [J]. 中国酿造, 2016,35(2): 1-4 [4] Volokhov D, Rasooly A, Chumakov K, et al. Identification of Listeria species by microarray-based assay[j]. J Clin Microbiol, 2002, 40(12): 4720-4728 [5] den Bakker H C, Cummings C A, Ferreira V, et al. Comparative genomics of the bacterial genus Listeria: Genome evolution is characterized by limited gene acquisition and limited gene loss [J]. BMC Genomics, 2010, 11(1): 688-707 [6] 唐俊妮, 汤承. 食源性病原微生物检测与控制技术研究新进展 [J]. 西南民族大学学报 ( 自然科学版 ), 2016 (2): 139-150 [7] Abdalhai M H, Fernandes A M, Bashari M, et al. Rapid and sensitive detection of foodborne pathogenic bacteria (Staphylococcus aureus) using an electrochemical DNA genomic biosensor and its application in fresh beef[j]. J Agric Food Chem, 2014, 62(52): 12659-12667 [8] 李怀明, 许恒毅, 熊勇华. 免疫层析试纸条技术及其在食源性致病菌检测中应用的研究进展 [J]. 食品科学, 2011, 32(17): 380-383 [9] Brooks B W, Lutze-Wallace C L, Devenish J, et al. Comparison of an antigen-capture enzyme-linked immunosorbent assay with bacterial culture for detection of Salmonella in poultry-hatchery environmental samples[j]. Can J Vet Res, 2014, 78(1): 68-71 [10] 伍燕华, 牛瑞江, 赖卫华, 等. 双抗夹心酶联免疫吸附法检测沙门氏菌 [J]. 食品工业科技, 2014, 35(10): 62-65 [11] Tu Z, Chen Q, Li Y, et al. Identification and characterization of species-specific nanobodies for the detection of Listeria monocytogenes in milk[j]. Anal Biochem, 2016, 493: 1-7 [12] 王丁泉. 放射免疫分析技术的发展现状与展望 [J]. 标记免疫分析与临床, 2012 (4): 249-251 [13] 郑柳. 放射免疫检测技术面临的现状与前景 [J]. 当代医学, 2010 (3): 31-32 [14] 张振亚, 梅兴国. 现代荧光免疫分析技术应用及其新发展 [J]. 生物技术通讯, 2006, 17(4): 677-680 [15] Qi H, Zhong Z, Zhou H X, et al. A rapid and highly sensitive protocol for the detection of Escherichia coli O157:H7 based on immunochromatography assay combined with the enrichment tech - nique of immunomagnetic nanoparticles [J]. Int J Nanomedicine, 2011, 6: 3033-3039 [16] 李超辉. 胶体金免疫层析试纸条定量检测猪尿以及猪肉中的克伦特罗残留 [D]. 南昌 : 南昌大学, 2014 [17] 吴刚, 姜瞻梅, 霍贵成, 等. 胶体金免疫层析技术在食品检测中的应用 [J]. 食品工业科技, 2007, 28(12): 216-218 张丹, 等 : 新型试纸条在食源性致病菌检测中的应用专题论述 [18] 陈耀强. 盐酸克伦特罗 莱克多巴胺兽药残留免疫层析检测方法的研究 [D]. 广州 : 暨南大学, 2010 [19] 付海霞. 免疫层析快速检测技术的研究 [D]. 杭州 : 浙江大学, 2008 [20] Faulk W P, Taylor G M. An immunocolloid method for the electron microscope[j]. Immunochemistry, 1971, 8(11): 1081-1083 [21] 邵景东, 陈飞, 肖国平. O9 群沙门氏菌胶体金检测试剂盒的研制 [J]. 检验检疫学刊, 2005, 15(3): 30-32 [22] 黄岭芳, 段霞, 陈媛, 等. 大肠杆菌 O157:H7 胶体金试纸条研制 [J]. 食品科学, 2010,(24): 355-359 [23] Zhang L, Huang Y, Wang J, et al. Hierarchical Flowerlike Gold Nanoparticles Labeled Immunochromatography Test Strip for Highly Sensitive Detection of Escherichia coli O157:H7[J]. Langmuir, 2015, 31(19): 5537-5544 [24] Wang J Y, Chen M H, Sheng Z C, et al. Development of colloidal gold immunochromatographic signal -amplifying system for ultrasensitive detection of Escherichia coli O157:H7 in milk[j]. Rsc Advances, 2015, 5(76): 62300-62305 [25] Liu D, Yu Z, Huang Y, et al. An Immuno-Magnetic Nanobead Probe Competitive Assay for Rapid Detection of Salmonella choleraesuis [J]. J Nanosci Nanotechnol, 2016, 16(3): 2291-2295 [26] 邹浩琳. 功能化石墨烯与二硫化钼纳米片的制备及其在电化学传感器中的应用 [D]. 重庆 : 西南大学, 2015 [27] Morales -Narvaez E, Merkoci A. Graphene oxide as an optical biosensing platform[j]. Adv Mater, 2012, 24(25): 3298-3308 [28] Morales-Narvaez E, Naghdi T, Zor E, et al. Photoluminescent lateral-flow immunoassay revealed by graphene oxide: highly sensitive paper-based pathogen detection[j]. Anal Chem, 2015, 87(16): 8573-8577 [29] 赵紫来, 卞征云, 陈朗星, 等. 氧化铁磁性纳米粒子的制备 表面修饰及在分离和分析中的应用 [J]. 化学进展, 2006, 18(10): 1288-1297 [30] Xia S, Yu Z, Liu D, et al. Developing a novel immunochromatographic test strip with gold magnetic bifunctional nanobeads (GMBN) for efficient detection of Salmonella choleraesuis in milk[j]. Food Control, 2016, 59(1): 507-512 [31] 黄震, 夏诗琪, 刘道峰, 等. 基于免疫磁分离的荧光微球免疫层析法检测猪霍乱沙门氏菌 [J]. 分析化学, 2017(2): 217-223 [32] Yum K, Na S, Xiang Y, et al. Mechanochemical delivery and dynamic tracking of fluorescent quantum dots in the cytoplasm and nucleus of living cells[j]. Nano Lett, 2009, 9(5): 2193-2198 [33] 白冰, 胡耀华, 李敏通, 等. 量子点免疫标记法同时检测 2 种食源性致病菌 [J]. 中国食品学报, 2016, 16(1): 219-225 [34] Bruno J G. Application of DNA Aptamers and Quantum Dots to Lateral Flow Test Strips for Detection of Foodborne Pathogens with Improved Sensitivity versus Colloidal Gold[J]. Pathogens, 2014, 3(2): 341-355 [35] 袁列江, 李萌立, 王书源, 等. 大肠杆菌 O157:H7 量子点免疫层析试纸条的研制 [J]. 食品与机械, 2015(4): 38-42 收稿日期 :2017-05-08