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1 1 2 b 3 4 Smith DNA DNA Berg l DNA DNA DNA Cohen DNA E. cloi 5 6

2 hm 2 63% 980hm 2 19% 680hm 2 13% 270hm 2 5% hm hm 2 320hm 2 150hm DNA DNA DNA DNA DNA DNA DNA (Clone) 11 12

3 1. (restriction enzyme) DNA DNA EcoR DNA (palindrome) DNA DNA DNA (blunt ends) EcoRI Escherichia coli Hind Haemophilus influenzae EcoB( B)EcoK( K) (300000) ATPMg ++ EcoRI( )Hind( ) ( 20000~100000) Mg sticky ends)

4 vector. (multiple cloning DNA DNA DNA. sitemcs Polylinker region) DNA. DNA puc DNA DNA 1~2 20~60.. α ( ) 49kb DNA 2/3 DNA DNA 15kb DNA cdna DNA DNA 25% DNA DNA cos 50kb DNA DNA 24

5 shuttle vectors E. coli BAC 100kb DNA (Auto-nomously replicating sequence, ARS) YEp (yeast episoma plasmid)yrp (Bacterial artificial chromosomebac) BAC 50kb DNAF DNABAC (7.4kb) (yeast artificial chromosomeyac) pyac 4 1. YAC URA 3 TRP 1 ( ) 2. (CEN 4 ) 3. (ARS 100~1000kb DNA 1 ) 4. YAC (TEL) YAC (human artificial chromosomehac) (HIS 3 ) pyac 4 pyac4 DNA BamH I EcoR I 6. Amp EcoR I 7. EcoRI DNA Sup 4 trna Ti Ti DNA 1. Ti ( ) (Agrobacterium tumefaciens) (tumor- Inducing, Ti) (grown galltumors) Ti DNA (transfer DNAT-DNA) T-DNA (opine). T-DNALBRBT-DNA. (PT). (opine)

6 2. T-DNA T-DNA. E. coli 25bp (RB) (LB) Ti 200~500kb DNA. (binary vectors). T-DNA 3. V T-DNA DNA T-DNA. (intergrated vectors) DNA 1. DNA DNA DNA DNA DNA DNA 2. DNA + DNA 3. DNA library DNAcDNA cdna. (genomic library) DNA cosmid( ) DNA BAC( )YAC( ) 36

7 . X (flow cytometry) 37 (pulsed field gel electro -phoresis, PFGE) 16. cdna mrna DNA mrna5 A DNA ( ) cdna cdna DNA cdna mrna cdna cdna-dna cdna3 DNA (DNAcDNA ) (Probe) DNAmRNA 41 42

8 3.. DNA RFLP 15kb DNA DNA Southern Southern (1975) DNA DNA Southern Northern Sorthern mrna 46 Western. DNA Sanger(1977) (dideoxynucleotide chain termination) 47

9 Sanger.. BlastDNA Data 49 ORF DNA cdna. PCR ( ) 1. 94~95 DNA (phage display) 3. Taq 72 DNA PCR 25~35 51 PCR (polymerase chain ReactionPCR) DNA Mullis(1986) 2. 50~70 DNA 5kb RAPDAFLP DNA SOE-PCR(sequence overlapped ExtensionSOE) 1. (80 ~100 ) SOE 2. PCR DNA 3. DNA 4. SOE 5. PCR DNA SOE-PCR 53 54

10 (1982) S DNA Ti RBLB DNA (glyphosate) E. coli EPSP 59

11 2. DNA 1. DNA 2. DNA puc 4. DNA ( ) : DNA DNA Polly ( ) (Wilmut Nature 385, 1997) 63 DNA 65

12 1. RFLP.. β GAG DNA GTG) DNA (restriction fragment length PolymorphismsRFLP) RFLP T (allele-specific oligonucleotideaso) PCR PCR ASO 69 (gene therapy) DNA (retro virus DNA) DNA (MLV) retro virus (SCID) SCID (adenosine deaminaseada) 71 72

13 ADA MLV retrovirus DNA (gagpolenv) T ADA T 2000 Fischer SCID (8 11 ) 20 DNA (DNA chips) DNA (2cm ) ( ) cDNAPCR 96cDNA HAT4 mrna 1:1 (CD) EF DNA DNA 160 single nucleotide Polymorphisms SNPs ) RNA cdna 76 (genomics ) 77 78

14 (genome project) DNA Science ~ (1000 /) DNA Nature 10% %

15 DNA 800 (n) 2n 2 2n (clone contig) DNA 0.1Mb~ 1Mb YACBAC DNA (directed shotgun) DNA ( DNA ) DNA (mark). DNA. DNA DNA 3. : DNA 88 DNA DNA (RFLP) RFLP. (simple sequence length polymor-phisms SSLP) SSLP SSLP (variable number of tandem repeatsvntr) (minisatellite) (simple tandem epeatsstrs) (microsatellite) ~4 STR STR VNTR STRPCR STR 300bp VNTR 90

16 . (simple nucleotide polymorphismssnps ) RFLP( ) 2 20 SNPs. 10 SNP DNA DNA SNPs 96 DNA DNA DNA SNPs (186 ) 5264STR( ) X (105 ) Kb F 2 F 3 F 4 (recombinant inbred LinesRIL) (doubled haploidsdh) ( ) 93. DNA DNA. 94 () DNA <50Kb >50KbDNA DNA NotI 8 1/48=1/65536bp 6 1/46=1/4094bp 5 -CG-3 SmaI(5 -CCCGGG-3 ) DNA 78Kb BssHII(5 -GCGCGC-3 ) DNA 390 Kb NotI(5 -GCGGCCGC-3 ) DNA 10 Mb 96

17 . (fluorescent in situ hybridizationfish) DNA DNA DNA psc119.2 B. (sequence tagged sitessts) DNA STS PCR STS. DNA (expressed sequence tagest) cdna SSLP( ) DNA STS 98.DNA (radiation hybrid) 3000~8000 X 100 HAT DNA YACBAC DNA STS : 183kbEST 45 EST EST 8393 RFLP RAPD AFLP YAC

18 RG218 RG437 RG472 RG246 (quantitative trait loci K5 U10 RG532 W1 RG173 Amy1B RG345 QTL) RG381 RZ730 RZ213 RZ123 RZ801 RZ276 RG146 RZ19 RG690 RG810 RG331 RG544 RG171 RG157 RZ318 Pall RZ58 CDO686 Amy1A/C RG95 RG654 RG256 RG520 RG104 RG348 RZ329 RZ892 RG100 RG191 RZ678 RZ574 RZ284 RZ394 prd10a RZ403 RG179 CDO337 RZ337A RZ448 RZ519 Pgi-1 CDO87 RG910 RG418A RZ262 RG190 RG908 RG91 RG449 RG788 RZ565 RZ675 RG163 RZ590 RG214 RG143 RG620 RG556 RZ390 RG313 RZ556 RG403 RG229 RG13 CDO105 RZ649 RZ67 RZ70 RZ (marker-assisted selection MAS) (chromosome walking) (map -based cloning) (post-genomics ) 85% DNA DNA 1. DNA (DNA microarrays)

19 2. (proteomics ) 3. (two hybrid-systems) DNA RNA DNA DNA ( ) DNA RNA DNA ( A) DNA X X A RNA DNA 4. (bioinformatics ) DNA MAS DNA

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