<4D F736F F D20B8BDBCFE313320B3A6B3F6D1AAD0D4B4F3B3A6B8CBBEFA4F B8D0C8BED0D4B8B9D0BABCE0B2E2B7BDB0B85F F2E646F63>

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1 附 件 13: 肠 出 血 性 大 肠 杆 菌 O 157 :H 7 感 染 性 腹 泻 监 测 方 案 ( 试 行 ) 一 背 景 肠 出 血 性 大 肠 杆 菌 (EHEC)O157:H7 感 染 性 腹 泻 是 近 年 来 新 发 现 的 危 害 严 重 的 肠 道 传 染 病 它 除 引 起 腹 泻 出 血 性 肠 炎 外, 还 可 发 生 溶 血 性 尿 毒 综 合 症 (HUS) 血 栓 性 血 小 板 减 少 性 紫 癜 (TTP) 等 严 重 的 并 发 征, 后 者 病 情 凶 险, 病 死 率 高 自 1982 年 美 国 首 次 发 现 因 该 致 病 菌 引 起 的 食 物 中 毒 以 来, 肠 出 血 性 大 肠 杆 菌 O157:H7 疫 情 开 始 逐 渐 扩 散 和 蔓 延, 相 继 在 英 国 加 拿 大 日 本 等 多 个 国 家 引 起 腹 泻 暴 发 和 流 行 我 国 自 1997 年 在 一 定 范 围 内 开 展 监 测 工 作 以 来, 已 陆 续 有 十 余 个 省 份 在 市 售 食 品 进 口 食 品 腹 泻 病 患 者 家 畜 家 禽 等 分 离 到 肠 出 血 性 大 肠 杆 菌 O157:H7, 特 别 是 1999 年 我 国 部 分 地 区 发 生 了 肠 出 血 性 大 肠 杆 菌 O157:H7 感 染 性 腹 泻 的 暴 发, 表 明 肠 出 血 性 大 肠 杆 菌 O157:H7 感 染 性 腹 泻 已 逐 渐 成 为 威 胁 人 群 健 康 的 重 要 公 共 卫 生 问 题 为 此,2000 年, 卫 生 部 发 布 了 全 国 肠 出 血 性 大 肠 杆 菌 O157:H7 感 染 性 腹 泻 监 测 方 案 ( 试 行 ), 为 进 一 步 加 强 我 国 重 点 地 区 的 监 测 工 作, 特 制 订 此 方 案 二 监 测 目 的 1 及 时 掌 握 该 病 在 我 国 的 发 病 情 况 ; 2 动 态 观 察 O157:H7 大 肠 杆 菌 的 分 布 特 征 及 流 行 趋 势 三 病 例 定 义 1 疑 似 病 例 (1) 有 鲜 血 便 低 烧 或 不 发 烧 痉 挛 性 腹 痛 的 腹 泻 病 例 ; (2) 腹 泻 若 干 天 后 继 发 少 尿 或 无 尿 等 表 现 的 急 性 肾 功 能 衰 竭 病 例 ; (3) 腹 泻 病 人 粪 便 标 本 O157 抗 原 免 疫 胶 体 金 检 测 阳 性 者 符 合 以 上 条 件 之 一 者, 即 为 疑 似 病 例 ; 2 确 诊 病 例 疑 似 病 例 或 其 他 腹 泻 病 患 者, 具 有 以 下 条 件 之 一 者 即 为 确 诊 病 例 : (1) 从 粪 便 标 本 中 检 出 产 生 志 贺 毒 素 的 肠 出 血 性 大 肠 杆 菌 O157:H7; 或 277

2 经 蛋 白 印 记 试 验 证 实 血 清 标 本 有 与 肠 出 血 性 大 肠 杆 菌 溶 血 素 或 志 贺 毒 素 分 子 量 一 致 的 特 异 性 抗 体 ; (2) 在 流 行 区 内, 经 省 级 专 家 组 确 认, 与 确 诊 病 例 流 行 病 学 密 切 相 关, 并 排 除 其 它 疾 病 的 疑 似 病 例, 为 临 床 符 合 病 例 ; (3) 腹 泻 病 例 的 粪 便 中 分 离 出 不 产 生 志 贺 毒 素 1 或 志 贺 毒 素 2 及 其 变 种 的 肠 出 血 性 大 肠 杆 菌 O157:H7, 亦 为 确 诊 病 例 ( 不 产 毒 ) 四 监 测 内 容 和 方 法 ( 一 ) 全 国 疫 情 监 测 各 地 发 现 肠 出 血 性 大 肠 杆 菌 O157:H7 感 染 性 腹 泻 疑 似 或 确 诊 病 例, 需 及 时 开 展 现 场 调 查 与 处 理 工 作, 按 附 表 1 内 容 对 病 人 进 行 个 案 调 查, 并 完 成 肠 出 血 性 大 肠 杆 菌 感 染 性 腹 泻 病 例 随 访 表 ( 附 表 2) 在 疫 情 处 理 完 结 后 7 天 内, 将 所 有 个 案 调 查 表 数 据 库 传 至 中 国 疾 病 预 防 控 制 中 心 ( 二 ) 监 测 点 监 测 1 监 测 点 选 择 根 据 以 往 监 测 资 料, 选 择 安 徽 江 苏 河 南 及 山 东 等 重 点 地 区, 开 展 肠 出 血 性 大 肠 杆 菌 O 157 :H 7 感 染 性 腹 泻 综 合 监 测 各 监 测 重 点 地 区, 根 据 本 省 防 治 工 作 需 要, 以 县 为 单 位, 每 省 选 择 2 个 监 测 点, 开 展 以 下 监 测 工 作 2 监 测 内 容 (1) 腹 泻 病 人 感 染 情 况 每 省 每 年 检 测 500 份 腹 泻 病 人 粪 便 标 本, 检 测 肠 出 血 性 大 肠 杆 菌 O 157 :H 7 感 染 情 况 其 中 第 三 季 度 检 测 200 份, 其 余 季 度 各 检 测 100 份 采 样 时, 需 填 写 腹 泻 病 人 粪 便 标 本 采 样 登 记 表 ( 见 附 表 4) (2) 动 物 带 菌 情 况 每 省 每 年 检 测 动 物 粪 便 600 份, 监 测 动 物 种 类 以 家 禽 家 畜 为 主, 牛 羊 鸡 猪 作 为 主 要 监 测 动 物, 大 型 养 殖 场 奶 牛 养 殖 场 也 应 列 入 监 测 范 围 之 内 (3) 媒 介 昆 虫 带 菌 情 况 每 省 在 农 村 监 测 点 检 测 苍 蝇 样 本 至 少 100 份, 每 份 样 本 应 捕 捉 苍 蝇 只 (4) 食 品 污 染 情 况 每 省 在 腹 泻 病 高 发 季 节 在 乡 镇 农 贸 市 场 采 集 猪 鸡 牛 羊 等 禽 畜 生 熟 肉 样 各 50 份 进 行 检 测 278

3 各 监 测 点 需 综 合 考 虑 采 样 种 类 和 数 量, 以 保 证 各 监 测 点 监 测 数 据 的 代 表 性 各 监 测 点 开 展 监 测 工 作 时, 要 注 意 收 集 背 景 信 息, 如 人 口 土 地 植 被 主 要 农 作 物 气 象 家 畜 家 禽 饲 养 主 要 种 类 养 殖 场 ( 或 集 体 和 个 体 饲 养 专 业 户 ) 数 量 和 分 布 批 量 购 进 饲 料 来 源 进 口 种 畜 ( 禽 ) 等 资 料, 采 样 时 需 填 写 家 畜 家 禽 肠 出 血 性 大 肠 杆 菌 带 菌 调 查 采 样 登 记 表 ( 附 表 5), 同 时, 要 收 集 当 地 腹 泻 病 人 发 病 信 息 本 监 测 工 作 常 年 开 展, 由 各 省 合 理 分 配 每 月 工 作 量 在 监 测 实 施 过 程 中, 根 据 全 国 疫 情 进 展 情 况, 可 相 应 调 整 监 测 方 案, 并 开 展 有 关 专 题 调 查 3 标 本 采 集 和 检 测 (1) 标 本 的 采 集 和 送 检 要 求 见 附 件 1 (2) 肠 出 血 性 大 肠 杆 菌 O 157 :H 7 检 测 采 用 EC 肉 汤 增 菌 免 疫 磁 珠 吸 附 法 集 菌 ( 或 集 菌 前 加 胶 体 金 免 疫 标 记 卡 筛 选 ) CHROMAGAR- O 157 :H 7 显 色 培 养 基 分 离 的 技 术 程 序, 提 高 大 肠 杆 菌 O 157 :H 7 检 出 率 检 测 获 得 菌 株 以 血 清 凝 集 生 化 试 验 进 行 系 统 鉴 定, 鉴 定 后 的 菌 株 应 用 PCR 方 法 检 测 志 贺 样 毒 素 溶 血 素 进 行 基 因, 以 确 定 分 离 菌 株 的 毒 力 特 性 检 测 方 法 详 见 附 件 2 五 监 测 系 统 组 成 和 职 责 监 测 系 统 由 卫 生 部 各 级 卫 生 行 政 部 门 中 国 疾 病 预 防 控 制 中 心 及 各 级 疾 病 预 防 控 制 机 构 和 相 关 医 疗 机 构 组 成 卫 生 部 负 责 全 国 的 监 测 工 作, 各 级 卫 生 行 政 部 门 负 责 组 织 开 展 本 辖 区 内 监 测 工 作, 并 提 供 所 需 监 测 经 费, 保 证 监 测 工 作 顺 利 开 展 中 国 疾 病 预 防 控 制 中 心 负 责 监 测 方 案 制 订 组 织 考 察 确 定 全 国 监 测 点 布 局 人 员 培 训 技 术 指 导 和 系 统 评 价, 并 加 强 监 测 工 作 实 施 的 检 查 和 质 量 控 制 各 省 疾 病 预 防 控 制 机 构 负 责 具 体 实 施 国 家 对 选 择 的 监 测 点 提 供 部 分 经 费 补 助, 监 测 点 所 在 省 应 给 予 配 套 经 费 支 持 各 有 关 医 疗 机 构 在 当 地 卫 生 行 政 部 门 的 统 一 领 导 下, 配 合 疾 病 预 防 控 制 机 构 的 各 项 监 测 工 作, 协 助 完 成 就 诊 病 例 的 标 本 采 集 和 个 案 调 查 工 作 为 做 好 监 测 工 作, 监 测 省 可 根 据 具 体 情 况 建 立 由 流 行 病 学 临 床 实 验 室 检 验 等 专 业 组 成 的 专 家 组 主 要 负 责 对 初 步 确 诊 的 疑 似 病 例 进 行 最 终 确 诊, 指 导 开 展 病 例 调 查 和 疫 情 处 理 ( 三 ) 统 计 分 析 内 容 和 指 标 279

4 1 病 例 检 索 情 况 : 检 出 率 病 人 年 龄 性 别 职 业 时 间 地 理 分 布 临 床 特 征 等 2 重 点 地 区 动 物 带 菌 情 况 : 检 出 率 3 实 验 室 监 测 结 果 : 菌 株 检 出 数 构 成 毒 力 特 征 六 数 据 收 集 分 析 和 反 馈 ( 一 ) 数 据 收 集 内 容 1 肠 出 血 性 大 肠 杆 菌 感 染 性 腹 泻 病 例 个 案 调 查 表 和 数 据 库 2 肠 出 血 性 大 肠 杆 菌 感 染 性 腹 泻 病 例 随 访 表 和 数 据 库 3 肠 出 血 性 大 肠 杆 菌 感 染 性 腹 泻 监 测 月 报 表 4 腹 泻 病 人 粪 便 样 本 采 样 登 记 表 5 家 畜 家 禽 肠 出 血 性 大 肠 杆 菌 带 菌 调 查 采 样 登 记 表 ( 二 ) 数 据 收 集 流 程 监 测 点 实 施 监 测 内 容, 各 种 数 据 收 集 分 析 以 及 各 种 标 本 的 采 集 县 疾 病 预 防 控 制 中 心 市 疾 病 预 防 控 制 中 心 省 级 疾 病 预 防 控 制 中 心 中 国 疾 病 预 防 控 制 中 心 ( 三 ) 数 据 的 报 告 和 反 馈 监 测 工 作 中 规 定 的 各 类 报 表 均 以 电 子 文 件 形 式 上 报, 月 报 每 月 10 日 前 年 度 工 作 总 结 于 每 年 2 月 10 日 前 逐 级 上 报 至 中 国 疾 病 预 防 控 制 中 心 传 染 病 预 防 控 制 所 中 国 疾 病 预 防 控 制 中 心 每 年 向 各 省 反 馈 监 测 结 果 电 子 信 箱 地 址 :[email protected] 传 真 : 七 监 测 质 量 控 制 ( 一 ) 方 案 的 起 草 和 论 证 卫 生 部 组 织 全 国 相 关 专 家 起 草 监 测 方 案, 并 广 泛 论 证 ( 二 ) 培 训 在 监 测 工 作 开 始 前, 由 中 国 疾 病 预 防 控 制 中 心 组 织 统 一 培 训 280

5 ( 三 ) 考 核 内 容 1 疫 情 报 告 的 及 时 性 完 整 性 和 准 确 性 ; 2 实 验 室 检 测 结 果 的 敏 感 性 和 特 异 性 ; 3 疫 情 调 查 和 处 理 的 及 时 性 ; 4 上 报 资 料 的 合 格 率 菌 种 鉴 定 的 准 确 性 八 附 件 附 表 1 年 肠 出 血 性 大 肠 杆 菌 感 染 性 腹 泻 病 例 个 案 调 查 表 附 表 2 年 肠 出 血 性 大 肠 杆 菌 感 染 性 腹 泻 病 例 随 访 表 附 表 3 年 肠 出 血 性 大 肠 杆 菌 感 染 性 腹 泻 监 测 月 报 表 附 表 4 年 腹 泻 病 人 粪 便 样 本 采 样 登 记 表 附 表 5 年 家 畜 家 禽 肠 出 血 性 大 肠 杆 菌 带 菌 调 查 采 样 登 记 表 附 表 6 年 肠 出 血 性 大 肠 杆 菌 实 验 室 初 步 检 验 记 录 附 件 1 标 本 的 采 集 和 送 检 要 求 附 件 2 粪 便 标 本 肠 出 血 性 大 肠 杆 菌 O157:H7 的 分 离 方 法 281

6 附 表 1 年 肠 出 血 性 大 肠 杆 菌 感 染 性 腹 泻 病 例 个 案 调 查 表 1. 病 例 基 本 情 况 联 系 电 话 : A 病 例 编 号 W1A B 调 查 时 间 年 月 日 W1B / / C 调 查 单 位 1. 村 级 2. 县 级 3. 地 区 级 4. 省 级 W1C D 病 人 姓 名 E 性 别 1. 男 2. 女 W1E F 出 生 日 期 年 月 日 W1F / / G 家 庭 详 细 住 址 W1F H 职 业 W1H 2. 发 病 与 报 告 W1G A 发 病 日 期 年 月 日 W2A / / B 发 病 后 首 次 就 诊 单 位 1. 村 2. 乡 级 2. 县 级 3. 地 区 级 4. 省 级 W2B C 发 病 后 首 次 就 诊 日 期 年 月 日 W2C / / D 本 次 就 诊 日 期 年 月 日 W2C / / E 报 告 日 期 年 月 日 W2D / / F 报 告 单 位 3. 临 床 症 状 和 体 征 B C D E 每 天 腹 泻 次 数 粪 便 性 状 腹 痛 性 质 腹 痛 部 位 1. 乡 级 2. 县 级 3. 地 区 级 4. 省 级 1. <3 次 2. 3~5 次 3. 6~10 次 4. >10 次 9. 无 1. 鲜 血 样 便 2. 血 便 相 混 3. 脓 血 便 4. 黑 便 5. 粘 液 便 6. 米 泔 水 样 便 7. 水 样 便 8. 稀 便 9. 正 常 1. 痉 挛 性 2. 绞 痛 3. 钝 痛 4. 压 痛 5. 无 腹 痛 1. 满 腹 2. 右 上 腹 3. 左 上 腹 4. 右 下 腹 5. 左 下 腹 6. 脐 周 W2E W3B W3C W3D W3E F 恶 心 呕 吐 1. 有 2. 无 9. 不 详 W3F 282

7 G 发 热 1. 有 2. 无 9. 不 详 最 高 体 温 W3G H 少 尿 或 无 尿 1. 有 2. 无 9. 不 详 W3H I 开 始 少 尿 或 无 尿 日 期 年 月 日 W3I / / J 少 尿 或 无 尿 持 续 时 间 天 W3J K 浮 肿 1. 有 2. 无 9. 不 详 W3K L 皮 肤 出 血 点 淤 斑 1. 有 2. 无 9. 不 详 W3L M 皮 肤 出 血 点 淤 斑 部 位 1. 上 肢 2. 下 肢 3. 面 部 4. 腹 部 5. 胸 部 6. 背 部 W3M N 神 经 精 神 症 状 1. 有 2. 无 9. 不 详 W3N O 呼 吸 衰 竭 1. 有 2. 无 9. 不 详 W3O 4. 生 物 化 学 检 验 白 细 胞 计 数 (WBC) 正 常 值 :4~10 109/L W4A 中 性 粒 细 胞 杆 状 核 中 性 粒 细 胞 分 叶 核 血 小 板 计 数 (BPC) 红 细 胞 计 数 (RBC) 正 常 值 :0.01~0.05(1~5 %) 正 常 值 :0.50~0.70(50~ 70 W4B W4B1 正 常 值 :100~ /L W4C 正 常 值 :4.0~ /L W4O 血 清 白 蛋 白 (Albumin) 正 常 值 :35~55g/L W4D 血 尿 素 氮 (BUN) 正 常 值 :1.8~7.1 mmol/l W4E 肌 酐 (Cr) 正 常 值 :53~106 μmol/l W4F β2- 微 球 蛋 白 正 常 值 :0.91~2.2mg/L W4N 尿 蛋 白 未 检 验 W4G 尿 红 细 胞 未 检 验 W4H 粪 便 白 细 胞 未 检 验 W4I 粪 便 红 细 胞 未 检 验 W4J 5. 治 疗 与 转 归 283

8 A 是 否 使 用 抗 生 素 1. 是 2. 否 9. 不 详 W5A B 使 用 抗 生 素 种 类 1. 丁 胺 卡 那 2. 庆 大 霉 素 3. 氟 哌 酸 4. 黄 连 素 5. 青 霉 素 6. 以 上 联 W5B 合 7. 其 它 9. 不 详 B1 给 药 的 方 式 和 途 径 1. 口 服 2. 肌 注 3. 静 脉 W5B1 C 抗 生 素 持 续 时 间 ( 天 ) W5C D 肾 透 析 治 疗 1. 有 2. 无 3. 不 详 W5D E 转 归 1. 痊 愈 2. 未 愈 3. 死 亡 9. 不 详 W5E F 痊 愈 日 期 年 月 日 W5F / / G 死 亡 日 期 年 月 日 W5G / / H 6. 暴 露 因 素 A 主 要 死 因 诊 断 1. 肾 衰 2. 呼 吸 衰 竭 3. 中 枢 系 统 功 能 不 全 4. 心 血 管 系 统 功 能 不 全 5. 消 化 系 统 功 能 不 全 W5H 6. 合 并 多 脏 器 损 害 7. 其 它 9. 不 详 发 病 前 2 周 内 是 否 1. 有 3. 无 9. 不 详 W6A 接 触 过 腹 泻 病 人 B 发 病 前 生 食 水 果 蔬 菜 1. 有 3. 无 9. 不 详 W6B C 吃 未 经 热 处 理 的 肉 类 1. 牛 肉 2. 羊 肉 3. 猪 肉 4. 鸡 肉 5. 其 它 肉 9. 不 详 W6C D 喝 未 煮 沸 的 牛 羊 奶 1. 有 3. 无 9. 不 详 W6D E 喝 生 水 习 惯 1. 有 2. 无 9. 不 详 W6E F 2 周 内 是 否 参 加 过 聚 餐 1. 有 2. 无 9. 不 详 W6F G 其 他 同 聚 餐 者 有 无 腹 泻 1. 有 2. 无 9. 不 详 W6G H I 饮 水 类 型 居 所 环 境 卫 生 状 况 1. 自 来 水 2. 压 井 3. 河 水 4. 湖 水 5. 塘 水 6. 其 它 水 1. 很 好 2. 较 好 3. 一 般 4. 较 差 5. 很 W6I 差 W6H J 家 禽 家 畜 种 类 1. 猪 2. 牛 3. 羊 4. 鸡 5. 鸭 6. 其 它 W6J K 家 禽 家 畜 喂 养 方 式 1. 圈 养 2. 放 养 3. 其 它 W6K 284

9 L 家 禽 家 畜 粪 便 处 理 1. 集 中 堆 放 2. 散 放 4. 其 它 W6L 7. 实 验 室 资 料 A1 粪 便 标 本 采 集 日 期 年 月 日 W7A1 / / B1 标 本 是 否 足 量 合 格 1. 是 3. 否 9. 不 详 W7B1 C1 病 原 体 分 离 结 果 1. O O O26 4. O O O 其 它 W7C1 A2 第 1 份 血 清 采 集 日 期 年 月 日 W7A2 / / B2 血 清 标 本 编 号 C2 血 清 溶 血 素 抗 体 1. 阳 性 2. 阴 性 W7C2 W7B2 A3 第 2 份 血 清 采 集 日 期 年 月 日 W7A3 / / B3 血 清 标 本 编 号 C3 血 清 溶 血 素 抗 体 1. 阳 性 2. 阴 性 W7C3 8. 确 诊 情 况 A B 省 级 实 验 室 诊 断 及 分 1. 确 诊 病 例 2. 临 床 确 诊 病 例 类 3. 排 除 病 例 4. 待 定 病 例 省 级 实 验 室 收 到 标 本 日 期 9. 最 后 诊 断 及 分 类 W7B3 W8A 年 月 日 W8B / / 1. 确 诊 病 例 2. 临 床 确 诊 病 例 3. 排 除 病 例 W9 调 查 者 单 位 : 调 查 者 : 审 查 者 : 调 查 日 期 : 285

10 附 表 2 肠 出 血 性 大 肠 杆 菌 感 染 性 腹 泻 病 例 随 访 表 病 人 ( 接 触 者 ) 姓 名 : 编 号 : 上 次 随 访 以 后 就 诊 单 位 1. 村 2. 乡 级 2. 县 级 3. 地 区 级 4. 省 级 W2B 上 次 随 访 以 后 的 临 床 症 状 和 体 征 每 天 腹 泻 次 数 1. <3 次 2. 3~5 次 3. 6~10 次 W3B 4. >10 次 9. 无 粪 便 性 状 1. 鲜 血 样 便 2. 血 便 相 混 3. 脓 血 便 W3C 4. 黑 便 5. 粘 液 便 6. 米 泔 水 样 便 7. 水 样 便 8. 稀 便 9. 正 常 腹 痛 性 质 1. 痉 挛 性 2. 绞 痛 3. 钝 痛 4. 压 痛 5. 无 腹 痛 W3D 腹 痛 部 位 1. 满 腹 2. 右 上 腹 3. 左 上 腹 4. 右 下 腹 W3E 5. 左 下 腹 6. 脐 周 恶 心 呕 吐 1. 有 2. 无 9. 不 详 W3F 发 热 1. 有 2. 无 9. 不 详 最 高 体 温 W3G 少 尿 或 无 尿 1. 有 2. 无 9. 不 详 W3H 开 始 少 尿 或 无 尿 日 期 年 月 日 W3I / / 少 尿 或 无 尿 持 续 时 间 天 W3J 浮 肿 1. 有 2. 无 9. 不 详 W3K 皮 肤 出 血 点 淤 斑 1. 有 2. 无 9. 不 详 W3L 皮 肤 出 血 点 淤 斑 部 位 1. 上 肢 2. 下 肢 3. 面 部 4. 腹 部 5. 胸 部 6. 背 部 W3M 神 经 精 神 症 状 1. 有 2. 无 9. 不 详 W3N 呼 吸 衰 竭 1. 有 2. 无 9. 不 详 W3O 生 物 化 学 检 验 白 细 胞 计 数 (WBC) 正 常 值 :4~10 109/L W4A 中 性 粒 细 胞 杆 状 核 正 常 值 :0.01~0.05(1~5%) W4B 中 性 粒 细 胞 分 叶 核 正 常 值 :0.50~0.70(50~70%) W4B1 血 小 板 计 数 (BPC) 正 常 值 :100~ /L W4C 红 细 胞 计 数 (RBC) 正 常 值 :4.0~ /L W4O 286

11 血 清 白 蛋 白 (Albumin) 正 常 值 :35~55g/L W4D 血 尿 素 氮 (BUN) 正 常 值 :1.8~7.1 mmol/l W4E 肌 酐 (Cr) 正 常 值 :53~106 μmol/l W4F β2- 微 球 蛋 白 正 常 值 :0.91~2.2mg/L W4N 尿 蛋 白 未 检 测 W4G 尿 红 细 胞 未 检 测 W4H 粪 便 白 细 胞 未 检 测 W4I 粪 便 红 细 胞 未 检 测 W4J 上 次 随 访 以 后 治 疗 情 况 抗 生 素 种 类 1. 丁 胺 2. 庆 大 3. 氟 哌 酸 4. 黄 连 素 5. 青 霉 素 6. 以 上 联 合 7. 其 它 9. 不 详 W5B 抗 生 素 给 药 的 方 式 1. 口 服 2. 肌 注 3. 静 脉 W5B1 抗 生 素 持 续 时 间 ( 天 ) W5C 肾 透 析 治 疗 1. 有 2. 无 3. 不 详 W5D 其 他 治 疗 痊 愈 日 期 年 月 日 W5F / / 死 亡 日 期 年 月 日 W5G / / 主 要 死 因 诊 断 1. 肾 衰 2. 呼 吸 衰 竭 3. 中 枢 系 统 功 能 不 全 W5H 4. 心 血 管 系 统 功 能 不 全 5. 消 化 系 统 功 能 不 全 6. 合 并 多 脏 器 损 害 7. 其 它 9. 不 详 随 访 日 期 : 年 月 日 随 访 人 签 名 : 287

12 附 表 3 肠 出 血 性 大 肠 杆 菌 感 染 性 腹 泻 监 测 月 报 表 监 测 地 区 : 省 ( 自 治 区 直 辖 市 ) 市 ( 区 县 ) 乡 ( 镇 ) 国 家 监 测 点 : 是, 否 样 品 名 称 采 样 份 数 金 标 阳 性 数 O157:H7 检 出 数 腹 泻 病 人 疑 似 病 人 牛 羊 鸡 猪 鸭 水 蝇 蜣 螂 合 计 监 测 时 间 : 年 月 填 表 单 位 : 填 表 日 期 : 288

13 附 表 4 年 腹 泻 病 人 粪 便 样 本 采 样 登 记 表 监 测 地 区 : 省 ( 自 治 区 直 辖 市 ) 市 ( 区 县 ) 乡 ( 镇 ) 国 家 监 测 点 : 是, 否 病 人 编 号 姓 名 性 别 年 龄 家 庭 住 址 发 病 日 期 临 床 症 状 ( 腹 泻 腹 痛 呕 吐 等 ) 发 烧 粪 便 性 状 使 用 抗 生 素 ( 药 名 时 间 ) 采 样 结 果 时 间 O157 Stx1 Stx2 注 :1 本 表 适 用 于 疑 似 病 人 肾 衰 病 人 及 密 切 接 触 者 ; 大 便 标 本 血 标 本 和 尿 标 本 使 用 同 样 编 号 ; 关 联 者 编 号 和 与 病 人 关 系 必 须 填 写, 不 能 遗 漏 2 粪 便 性 状 :1. 鲜 血 样 便 2. 血 便 相 混 3. 脓 血 便 4. 黑 便 5. 粘 液 便 6. 米 泔 水 样 便 7. 水 样 便 8. 稀 便 9. 正 常 便 监 测 时 间 : 年 月 填 表 单 位 : 填 表 日 期 : 289

14 附 表 5 家 畜 家 禽 肠 出 血 性 大 肠 杆 菌 带 菌 调 查 采 样 登 记 表 监 测 地 区 : 省 ( 自 治 区 直 辖 市 ) 市 ( 区 县 ) 乡 ( 镇 ) 国 家 监 测 点 : 是, 否 标 本 编 号 户 主 姓 名 编 号 动 物 名 称 饲 养 时 间 健 康 状 况 动 物 品 种 养 殖 方 式 饲 料 粪 便 处 采 样 结 果 种 类 理 方 式 日 期 进 口 本 地 杂 交 圈 养 散 养 O157 Stx2 Stx1 备 注 填 表 单 位 : 填 表 日 期 : 监 测 时 间 : 年 月 290

15 附 表 6 肠 出 血 性 大 肠 杆 菌 实 验 室 初 步 检 验 记 录 监 测 地 区 : 省 ( 自 治 区 直 辖 市 ) 市 ( 区 县 ) 乡 ( 镇 ) 样 本 编 号 名 称 ( 姓 名 ) 采 样 地 点 采 样 日 期 检 验 日 期 O157 金 标 试 验 磁 珠 法 分 离 / 血 清 凝 集 结 果 菌 落 形 态 K I A M I U 科 玛 嘉 SMAC K/A 气 H 2 S 动 力 靛 基 质 尿 素 初 步 检 验 结 果 备 注 检 测 单 位 : 检 测 者 : 填 表 单 位 ; 填 表 日 期 ; 291

16 附 件 1 标 本 的 采 集 和 送 检 要 求 1. 采 样 送 检 及 菌 株 分 离 1) 病 人 粪 便 标 本 采 集 : 以 采 集 腹 泻 病 人 血 性 水 样 便 为 主 可 用 无 菌 棉 拭 采 集 新 鲜 血 性 大 便, 亦 可 用 棉 拭 子 插 入 直 肠 内 3-5 厘 米 处 采 集 肛 拭 标 本 应 染 有 粪 便 水 样 便 要 采 集 1-3 毫 升, 成 形 便 要 采 集 相 当 于 拇 指 末 节 大 小 的 粪 量 2) 腹 泻 病 人 血 性 水 样 便 标 本 从 采 集 到 送 检 不 得 超 过 24 小 时, 采 集 的 标 本 应 插 入 卡 里 - 布 莱 尔 半 固 体 保 存 培 养 基 中, 立 即 送 实 验 室 接 种 于 培 养 基 培 养 基 要 定 期 调 换, 保 持 培 养 液 新 鲜 3) 水 食 品 环 境 标 本 采 集 后, 应 在 24 小 时 内 送 至 实 验 室 进 行 增 菌 培 养 分 离 4) 样 品 检 验 单 应 填 写 完 整, 与 样 品 一 起 送 实 验 室 样 品 检 验 表 见 附 表 必 须 提 供 与 分 离 菌 株 相 对 应 的 患 者 的 临 床 资 料 和 流 行 病 学 资 料 5) 使 用 免 疫 磁 珠 富 集 技 术 和 山 梨 醇 麦 康 开 琼 脂 或 科 玛 嘉 琼 脂 分 离 肠 出 血 性 大 肠 杆 菌 O157:H7; 按 照 山 梨 醇 不 发 酵 O157:H7 特 异 性 血 清 初 筛 生 化 反 应 鉴 定 和 PCR 鉴 定 的 程 序 进 行 肠 出 血 性 大 肠 杆 菌 O157:H7 的 初 筛 和 鉴 定 ; 初 筛 阳 性 的 菌 落 和 可 疑 菌 落 应 该 保 存 下 来, 交 流 研 所 进 行 分 子 生 物 学 鉴 定 和 分 型 2. 送 交 鉴 定 和 分 型 菌 株 的 要 求 1) 经 过 分 纯 的 没 有 污 染 的 菌 株 ; 分 离 菌 株 应 该 用 甘 油 半 固 体 保 存 ; 2) 与 分 离 菌 株 相 对 应 的 患 者 的 临 床 症 状 和 流 行 病 学 资 料 ; 3) 当 地 的 肠 出 血 性 大 肠 杆 菌 O157:H7 或 EHEC 的 分 离 率 资 料 292

17 附 件 2 粪 便 标 本 肠 出 血 性 大 肠 杆 菌 O157:H7 的 分 离 方 法 包 括 标 本 采 集 和 增 菌 免 疫 磁 珠 富 集 和 培 养 生 化 反 应 血 清 学 和 毒 力 因 子 鉴 定 1. 粪 便 标 本 增 菌 1) 采 集 的 标 本 应 插 入 卡 里 - 布 莱 尔 半 固 体 保 存 培 养 基 中, 立 即 送 实 验 室 接 种 于 增 菌 培 养 基 (EC 肉 汤 +10mg/L 新 生 霉 素 或 Tryptic Soy Broth); 2) 增 菌 培 养 : 增 菌 液 可 用 添 加 10mg/L 新 生 霉 素 的 EC 肉 汤 也 可 用 1/8N 的 HCl+0.5%NaCl 溶 液, 将 标 本 处 理 30 秒 后, 再 用 胰 大 豆 胨 培 养 液 增 菌 2. 免 疫 磁 珠 富 集 方 法 1) 取 下 磁 板, 然 后 将 事 先 编 号 的 1.5ml 离 心 管 置 于 Dynal MPC-M 架 上 ; 2) 重 新 悬 浮 E.coli O157 的 DynaL 磁 珠, 直 到 底 部 的 沉 淀 消 失 吸 取 抗 E.coli O157 磁 珠, 每 管 20ul; 3) 取 1ml 增 菌 培 养 物 的 标 本, 加 入 管 中, 然 后 盖 紧 管, 每 加 一 个 样 品, 都 要 换 新 管 ; 4) 颠 倒 Dyna 架 几 次, 然 后 在 室 温 条 件 下, 置 于 Dynal MX3 样 品 混 合 器 上, 不 断 轻 轻 搅 动, 以 阻 止 磁 珠 沉 淀, 持 续 时 间 10 分 钟 ( 如 果 没 有 混 合 器, 可 人 工 混 合 ); 5) 将 磁 板 插 入 到 Dynal MPC-M 上 颠 倒 支 架 数 次, 以 浓 缩 磁 珠 沉 淀 到 管 壁, 作 用 持 续 3 分 钟 ; 6) 用 配 套 的 开 盖 器 打 开 试 管, 小 心 的 吸 取 悬 浮 液 ( 包 括 残 留 在 管 盖 上 的 液 体 ), 并 弃 掉 ( 请 检 查 影 响 产 物 出 现 的 因 素 ); 7) 将 磁 板 从 Dynal 架 取 下 ; 8) 加 入 1ml 洗 涤 缓 冲 液 (PBS 吐 温 ), 吸 管 不 要 接 触 小 离 心 管, 以 免 造 成 样 品 及 缓 冲 液 的 交 叉 污 染 ; 然 后 盖 上 盖, 将 Dynal MPC-M 架 颠 倒 数 次, 以 重 新 悬 浮 磁 珠 ; 9) 重 复 5-8 的 步 骤 ; 10) 重 复 5-7 的 步 骤 ; 11) 用 100 微 升 冲 洗 缓 冲 液 (PBS- 吐 温 ) 重 新 悬 浮 磁 珠 细 菌 混 合 物 用 一 个 混 合 器 做 短 暂 的 混 匀 此 为 富 集 的 肠 出 血 性 大 肠 杆 菌 O157:H7 的 菌 悬 液 ; 12) 将 上 述 菌 悬 液 划 线 接 种 于 CT- 山 梨 醇 麦 康 凯 (C- 头 孢 菌 素 类 抗 生 素 T- 亚 碲 酸 钾 ) 等 选 择 性 培 养 基 上,37 0 C 培 养 16~24 小 时 3. 生 化 反 应 血 清 学 和 毒 力 因 子 鉴 定 293

18 1) 生 化 反 应 鉴 定 : 将 疑 似 肠 出 血 性 大 肠 杆 菌 O157:H7 的 菌 落 进 生 化 反 应 若 生 化 反 应 特 点 符 合 大 肠 杆 菌 的 鉴 定 标 准, 进 行 血 清 学 鉴 定 2) 血 清 学 鉴 定 : 使 用 O157 和 H7 特 异 性 抗 体, 使 用 玻 片 凝 集 方 法 进 行 鉴 定 血 清 学 鉴 定 为 O157:H7 O157:H- 的 菌 株, 进 行 毒 力 因 子 鉴 定 3) 毒 力 因 子 鉴 定 : 包 括 对 EHEC 特 异 性 溶 血 素 基 因 志 贺 毒 素 1 志 贺 毒 素 2 志 贺 毒 素 1 和 2 的 变 种 EHEC 特 异 性 的 eae 基 因 的 检 测 可 使 用 PCR 方 法 进 行 所 使 用 的 引 物, 必 须 是 国 内 或 国 际 公 认 的 已 经 发 表 的 引 物 在 使 用 PCR 方 法 进 行 鉴 定 时, 在 同 一 次 PCR 试 验 中, 必 须 同 时 包 括 阳 性 对 照 和 阴 性 对 照 只 有 在 阳 性 对 照 和 阴 性 对 照 的 PCR 试 验 经 过 分 别 是 阳 性 和 阴 性 时, 所 检 测 标 本 的 试 验 结 果 才 具 有 诊 断 意 义 肠 出 血 性 大 肠 杆 菌 O157:H7 的 检 验 程 序 粪 便 或 其 它 标 本 增 菌 6 小 时 左 右 磁 珠 浓 缩 山 梨 醇 麦 康 开 培 养 基 培 养 小 时 可 疑 菌 落 革 兰 氏 生 化 血 清 学 毒 力 因 子 染 色 反 应 鉴 定 鉴 定 * 根 据 结 果 判 定 * 有 条 件 的 单 位 可 进 行, 如 用 PCR 检 测 SLT1 SLT2 Hly EAE 的 基 因 294

19 注 1) 培 养 及 增 菌 均 在 37 进 行 ; 2) 山 梨 醇 - 麦 康 凯 培 养 基 中 应 加 入 适 当 的 抑 菌 剂 ; 3) 科 玛 嘉 培 养 基 加 入 亚 碲 酸 钾 后 选 择 效 果 更 好 ; 4) 在 SMAC 中 加 入 下 列 抑 制 剂 的 一 种 均 可 增 加 培 养 基 的 选 择 性 ; a) 亚 碲 酸 钾 2.5mg/l 和 先 锋 霉 素 类 抗 生 素 Cefixime 0.05mg/l; b) 新 生 霉 素 10mg/l; c) 万 古 霉 素 40mg/l; 5) 在 科 玛 嘉 或 S--MAC 平 板 上 挑 选 可 疑 菌 落 与 O157 诊 断 血 清 H7 血 清 或 O157 单 克 隆 抗 体 作 试 探 性 凝 集 试 验, 若 不 凝 集, 但 临 床 表 现 疑 为 EHEC 感 染, 则 应 做 如 下 处 理 因 为 个 别 肠 出 血 性 大 肠 杆 菌 O157:H7 具 有 K 抗 原, 应 在 生 化 反 应 确 定 为 大 肠 杆 菌 后 用 生 理 盐 水 制 备 菌 悬 液, 并 100 水 浴 加 热 分 钟 再 与 O157 诊 断 血 清 或 O157 单 克 隆 抗 体 做 凝 集 试 验 6) 当 生 化 反 应 和 血 清 学 反 应 结 果 均 与 肠 出 血 性 大 肠 杆 菌 O157:H7 符 合 时, 才 能 确 认 为 肠 出 血 性 大 肠 杆 菌 O157:H7 7) 目 前 许 多 国 家 使 用 的 O157 和 H7 特 异 性 抗 体 与 及 少 数 细 菌 具 有 不 同 程 度 的 交 叉 反 应, 如 美 国 法 国 还 有 我 国 自 己 生 产 的 试 剂 都 与 弗 劳 地 枸 橼 酸 杆 菌 有 交 叉 反 应, 因 此, 用 生 化 试 验 确 定 为 大 肠 杆 菌 是 必 须 的, 最 为 重 要 的 是 硫 化 氢 试 验 绝 大 多 数 肠 出 血 性 大 肠 杆 菌 菌 株 在 24 小 时 内 不 的 发 酵 D- 山 梨 醇 但 是, 也 报 道 了 一 些 能 够 快 速 发 酵 D- 山 梨 醇 的 菌 株 8) 典 型 大 肠 杆 菌 的 主 要 生 化 反 应 结 果 如 下 : a) 动 力 试 验 葡 萄 糖 麦 芽 糖 甘 露 醇 蔗 糖 硫 化 氢 尿 素 试 验 /- - - b) 靛 基 质 甲 基 红 V-P 试 验 枸 橼 酸 盐 苯 丙 氨 酸 脱 氨 酶 c) 赖 氨 酸 脱 羧 酶 鸟 氨 酸 脱 羧 酶 氧 化 酶 氰 化 钾 +/- +/