比较微透镜取出术后和小切口微透镜取出术后的早期眼表改变及炎症介质变化

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1 比 较 FLEx 和 SMILE 术 后 早 期 眼 表 改 变 及 炎 症 介 质 变 化 项 目 编 号 赞 助 人 钟 兴 武, MD, PhD ( 中 山 大 学 中 山 眼 科 中 心 海 南 省 眼 科 医 院 ) 资 金 来 源 中 国 国 家 自 然 科 学 基 金 项 目 ( ) 广 东 省 科 技 计 划 项 目 (2013B ) 项 目 负 责 人 钟 兴 武, MD, PhD 电 话 :+86(757) 传 真 : +86(757) zhongxwu@mail.sysu.edu.cn 主 要 研 究 人 员 钟 兴 武,MD, PhD 张 弛,MD 批 准 : 项 目 负 责 人 或 者 资 助 人 签 名 日 期

2 研 究 方 案 大 纲 题 目 比 较 FLEx 和 SMILE 术 后 的 早 期 眼 表 改 变 及 炎 症 介 质 变 化 资 助 人 钟 兴 武, MD, PhD 中 山 大 学 中 山 眼 科 中 心 海 南 省 眼 科 医 院 资 金 来 源 中 国 国 家 自 然 科 学 基 金 项 目 ( ) 广 东 省 科 技 计 划 项 目 (2013B ) 研 究 原 理 飞 秒 基 质 透 镜 切 除 术 (FLEx) 和 小 切 口 角 膜 微 透 镜 取 出 术 (SMILE) 都 是 第 一 次 采 用 一 体 化 飞 秒 激 光 系 统 来 执 行 屈 光 微 透 镜 取 出 的 程 序 FLEx 是 应 用 飞 秒 激 光 制 作 角 膜 瓣 后 ( 类 似 于 LASIK), 取 出 透 镜 式 片 状 角 膜 组 织 而 SMILE 是 真 正 做 到 无 角 膜 瓣 切 削 过 程, 只 需 2-4mm 的 小 切 口, 使 其 切 削 的 透 镜 从 小 切 口 取 出 多 种 病 因 常 导 致 眼 表 功 能 破 坏, 包 括 屈 光 手 术 中 所 涉 及 的 角 膜 瓣 制 作 和 基 质 消 融 技 术, 如 : 泪 膜 功 能 破 坏, 角 膜 感 觉 神 经 损 伤 和 术 后 炎 症 反 应 FLEx 和 SMILE 中 都 采 用 屈 光 透 镜 取 出 术 来 代 替 以 前 的 角 膜 基 质 消 融 术 FLEx 仍 需 要 制 作 角 膜 上 皮 基 质 瓣, 而 SMILE 仅 需 一 个 小 切 口 取 出 切 削 透 镜 因 此, 我 们 假 设 相 较 于 FLEx,SMILE 能 减 少 病 人 的 眼 表 功 能 异 常 的 症 状 和 炎 症 反 应 我 们 在 接 受 了 FLEx 或 SMILE 手 术 的 病 人 中 进 行 了 前 瞻 性 临 床 研 究 来 证 实 我 们 的 设 想 通 过 术 后 的 眼 表 参 数 的 测 量 和 炎 症 介 质 反 应 程 度 来 评 估 比 较 两 组 病 人 的 情 况 研 究 设 计 前 瞻 性 非 随 机 性 研 究 主 要 研 究 目 标 对 于 两 组 病 人 的 术 前 及 术 后 测 定 中 央 角 膜 的 敏 感 性 变 化, 基 础 泪 液 分 泌 实 验 I(Schirmer I test,sit), 无 创 新 泪 膜 破 裂 时 间 (noninvasive tear breakup time,ni-tbut), 泪 液 凹 面 高 度, 角 膜 荧 光 素 染 色, 眼 表 疾 病 指 数 (ocular surface disease index,osdi) 和 泪 液 中 相 关 细 胞 因 子 浓 度 的 测 定, 包 括 细 胞 白 介 素 - 1α(interleukin-1α,IL-1α), 肿 瘤 坏 死 因 子 -α(tumor necrosis factor-α,tnf-α), 神 经 生 长 因 子 (nerve growth factor,ngf), 干 扰 素 -γ(interferon-γ, IFN-γ), 转 化 生 长 因 子 -β1(transforming growth factor-β1, TGF-β1) 和 基 质 金 属 蛋 白 酶 -9(matrix metalloproteinase-9, MMP-9) 次 要 研 究 目 标 研 究 炎 性 介 质 和 眼 表 变 化 之 间 的 相 关 性 研 究 对 象 共 41 个 病 人

3 纳 入 标 准 1. 年 满 18 岁 (18 岁 -25 岁 ); 2. 角 膜 厚 度 大 于 500µm, 并 且 计 算 剩 余 角 膜 基 质 床 厚 度 大 于 300µm; 3. 术 前 散 光 屈 光 介 于 D 至 D 之 间 ; 4. 术 前 角 膜 地 形 图 规 则, 角 膜 曲 率 介 于 41.0 D 至 46.0 D 之 间 ; 5. 最 佳 矫 正 视 力 为 20/20 或 者 更 好, 至 少 术 前 24 个 月 至 今 具 有 稳 定 的 屈 光 不 正 ( 屈 光 度 数 变 化 小 于 0.5D) 排 除 标 准 1. 具 有 手 术 禁 忌 的 全 身 系 统 性 疾 病 ( 如 糖 尿 病, 青 光 眼 和 系 统 性 胶 原 血 管 病 变 等 ); 2. 角 膜 异 常 或 角 膜 病 变 ; 3. 具 人 工 泪 液 使 用 史 ; 4. 过 去 1 年 有 隐 形 眼 镜 佩 戴 史 分 组 观 察 时 间 统 计 方 法 1 组 :FLEx 的 手 术 病 人 2 组 :SMILE 的 手 术 病 人 研 究 持 续 观 察 2 个 月 筛 选 时 间 :2-4 周 治 疗 时 间 :1 天 随 访 时 间 : 第 1 天, 第 1 周, 第 1 个 月 ( 总 共 1 月 ) 研 究 时 间 预 计 为 9 个 月 数 据 分 析 采 用 SPSS 19.0 软 件 (SPSS, Chicago, IL, USA) 用 配 对 T 检 验 或 者 Wilcoxon 检 验 检 测 两 组 病 人 术 前 术 后 的 组 内 差 异 性, 单 样 本 T 检 验 或 Mann-Whitney U 检 验 检 测 两 组 病 人 的 组 间 差 异 性 Pearson 检 验 或 Spearman 等 级 相 关 检 验 检 测 泪 液 炎 症 介 质 及 眼 表 相 关 参 数 的 相 关 性 P<0.05 具 有 统 计 学 意 义 数 据 均 采 用 x±sd 表 示 1 研 究 背 景 使 用 飞 秒 激 光 的 屈 光 手 术 已 成 为 目 前 最 先 进 的 技 术 而 具 有 突 破 性 进 展 的 是 以 德 国 蔡 司 全 飞 秒 激 光 (VisuMax) 为 原 型 的 操 作 系 统, 使 用 飞 秒 激 光 矫 正 近 视 和 近 视 性 散 光 此 操 作 系 统 是 第 一 个 一 体 化 的 飞 秒 激 光 系 统, 用 于 屈 光 微 透 镜 取 出 术 (ReLEx) 飞 秒 基 质 透 镜 切 除 术 (FLEx) 和 小 切 口 角 膜 微 透 镜 取 出 术 (SMILE) FLEx 需 要 用 飞 秒 激 光 制 作 角 膜 瓣 后 ( 类 似 于 LASIK), 取 出 透 镜 式 片 状 角 膜 组 织 而 SMILE 是 真 正 做 到 无 角 膜 瓣 切 削 过 程, 只 需 2-4mm 的 小 切 口, 使 其 切 削 的 透 镜 从 小 切 口 取 出

4 通 常 认 为 在 屈 光 手 术 时 发 生 的 眼 表 功 能 破 坏 与 干 眼 的 发 生 与 密 切 联 系 有 多 种 原 因 导 致 眼 表 功 能 紊 乱, 包 括 屈 光 手 术 中 角 膜 瓣 的 制 作 和 基 质 消 融 技 术 角 膜 神 经 损 伤 被 认 为 是 干 眼 的 主 要 原 因, 由 于 中 断 了 感 觉 传 入 神 经, 瞬 目 反 射 减 弱, 增 加 了 泪 液 蒸 发, 最 后 导 致 泪 膜 功 能 不 稳 定 此 外, 术 后 炎 性 介 质 反 应 也 是 导 致 眼 表 功 能 破 坏 的 重 要 因 素 已 有 大 量 的 研 究 表 明 许 多 细 胞 因 子 也 对 眼 屈 光 手 术 后 的 眼 表 功 能 存 在 影 响, 如 趋 化 因 子 和 生 长 因 子 可 调 节 角 膜 伤 口 愈 合 细 胞 迁 移 及 细 胞 凋 亡 等 2 研 究 原 理 操 作 系 统 是 第 一 个 一 体 化 的 飞 秒 激 光 系 统, 用 于 屈 光 微 透 镜 取 出 术 (ReLEx) 飞 秒 基 质 透 镜 切 除 术 (FLEx) 和 小 切 口 角 膜 微 透 镜 取 出 术 (SMILE) FLEx 需 要 用 飞 秒 激 光 制 作 角 膜 瓣 后 ( 类 似 于 LASIK), 取 出 透 镜 式 片 状 角 膜 组 织 而 SMILE 是 真 正 做 到 无 角 膜 瓣 切 削 过 程, 只 需 2-4mm 的 小 切 口, 使 其 切 削 的 透 镜 从 小 切 口 取 出 多 种 病 因 常 导 致 眼 表 功 能 破 坏, 包 括 屈 光 手 术 中 所 涉 及 的 角 膜 皮 瓣 制 作 和 基 质 消 融 技 术, 例 如 : 泪 膜 功 能 破 坏, 角 膜 感 觉 神 经 损 伤 和 术 后 炎 症 反 应 FLEx 和 SMILE 中 都 采 用 屈 光 透 镜 取 出 术 来 代 替 以 前 的 角 膜 基 质 消 融 术 FLEx 仍 需 要 制 作 角 膜 上 皮 基 质 瓣, 而 SMILE 仅 需 一 个 小 切 口 取 出 切 削 透 镜 因 此, 我 们 假 设 相 较 于 FLEx,SMILE 能 减 少 病 人 的 眼 表 功 能 异 常 的 症 状 和 炎 症 反 应 我 们 在 接 受 了 FLEx 或 SMILE 手 术 的 病 人 中 进 行 了 前 瞻 性 临 床 研 究 来 证 实 我 们 的 设 想 通 过 术 后 的 眼 表 参 数 和 炎 症 介 质 反 应 程 度 来 评 估 比 较 两 组 病 人 的 情 况 2.1 有 利 及 不 利 因 素 下 : 到 目 前 为 止 没 有 任 何 关 于 此 飞 秒 技 术 的 不 良 报 道 与 研 究 相 关 的 风 险 因 素 如 干 眼 的 发 生 屈 光 手 术 后 的 病 人 可 能 会 发 生 干 眼 我 们 研 究 前 会 排 除 已 有 干 眼 症 的 病 人, 以 此 避 免 术 后 发 生 更 加 严 重 的 干 眼 综 合 征 屈 光 度 数 过 矫 正 或 矫 正 不 足

5 研 究 时 会 根 据 病 人 的 屈 光 情 况, 最 佳 视 敏 度 及 具 体 日 常 要 求 来 制 定 合 适 的 手 术 方 案 视 力 回 退 的 风 险 高 度 近 视 的 病 人 相 较 于 中 低 度 近 视 的 病 人 出 现 视 力 回 退 的 风 险 更 高 3 研 究 目 标 3.1 主 要 目 标 对 于 两 组 病 人 的 术 前 及 术 后 测 定 中 央 角 膜 的 敏 感 性 变 化, 基 础 泪 液 分 泌 实 验 I(Schirmer I test,sit), 无 创 新 泪 膜 破 裂 时 间 (noninvasive tear breakup time, NI-TBUT), 泪 液 凹 面 高 度, 角 膜 荧 光 素 染 色, 眼 表 疾 病 指 数 (ocular surface disease index,osdi) 评 估 两 组 病 人 术 前 术 后 泪 液 中 相 关 细 胞 因 子 浓 度 的 测 定, 包 括 细 胞 白 介 素 - 1α(interleukin-1α,IL-1α), 肿 瘤 坏 死 因 子 -α(tumor necrosis factor-α,tnf-α), 神 经 生 长 因 子 (nerve growth factor,ngf), 干 扰 素 -γ(interferon-γ,ifn-γ), 转 化 生 长 因 子 -β1(transforming growth factor-β1,tgf-β1) 和 基 质 金 属 蛋 白 酶 -9 (matrix metalloproteinase-9,mmp-9) 3.2 次 要 目 标 研 究 炎 性 介 质 和 眼 表 变 化 之 间 的 相 关 性 4 研 究 设 计 研 究 采 用 单 样 本 前 瞻 性 非 随 机 性 试 验 41 名 病 人 为 计 划 安 排 他 们 被 分 为 2 组 1 组 接 受 FLEx 手 术, 另 1 组 接 受 SMILE 手 术 手 术 前 及 术 后 第 1 天 第 1 周 第 1 月 的 眼 表 参 数 及 炎 症 介 质 浓 度 均 在 同 一 基 线 标 准 测 定 研 究 对 象 均 符 合 所 有 纳 入 标 准, 无 排 除 标 准 中 情 况 纳 入 标 准 : 1. 年 满 18 岁 (18 岁 -25 岁 ); 2. 角 膜 厚 度 大 于 500µm, 并 且 计 算 剩 余 角 膜 基 质 床 厚 度 大 于 300µm;

6 3. 术 前 散 光 屈 光 介 于 D 至 D 之 间 ; 4. 术 前 角 膜 地 形 图 规 则, 角 膜 曲 率 介 于 41.0 D 至 46.0 D 之 间 ; 5. 最 佳 矫 正 视 力 为 20/20 或 者 更 好, 至 少 术 前 24 个 月 至 今 具 有 稳 定 的 屈 光 不 正 ( 屈 光 度 数 变 化 小 于 0.5D) 排 除 标 准 : 1. 手 术 禁 忌 的 全 身 系 统 性 疾 病 ( 如 糖 尿 病, 青 光 眼 和 系 统 性 胶 原 血 管 病 变 等 ); 2. 角 膜 异 常 或 角 膜 病 变 ; 3. 具 人 工 泪 液 使 用 史 ; 4. 过 去 1 年 有 隐 形 眼 镜 佩 戴 史 5 研 究 对 象 选 取 5.1 研 究 人 群 研 究 对 象 均 符 合 所 有 纳 入 标 准, 无 排 除 标 准 中 情 况 5.2 纳 入 标 准 : 1. 年 满 18 岁 (18 岁 -25 岁 ); 2. 角 膜 厚 度 大 于 500µm, 并 且 计 算 剩 余 角 膜 基 质 床 厚 度 大 于 300µm; 3. 术 前 散 光 屈 光 介 于 D 至 D 之 间 ; 4. 术 前 角 膜 地 形 图 规 则, 角 膜 曲 率 介 于 41.0 D 至 46.0 D 之 间 ; 5. 最 佳 矫 正 视 力 为 20/20 或 者 更 好, 至 少 术 前 24 个 月 至 今 具 有 稳 定 的 屈 光 不 正 ( 屈 光 度 数 变 化 小 于 0.5D) 5.3 排 除 标 准 : 1. 手 术 禁 忌 的 全 身 系 统 性 疾 病 ( 如 糖 尿 病, 青 光 眼 和 系 统 性 胶 原 血 管 病 变 等 ); 2. 角 膜 异 常 或 角 膜 病 变 ; 3. 具 人 工 泪 液 使 用 史 ; 4. 过 去 1 年 有 隐 形 眼 镜 佩 戴 史 6 术 后 药 物 治 疗 术 后 病 人 均 用 0.3% 妥 布 霉 素 地 塞 米 松 滴 眼 液 (TobraDex, Alcon) 0.5% 左 眼 氟 沙 星 眼 液 (Cravit, Santen) 和 玻 璃 酸 钠 眼 液 (HYCOSAN, URSAPHARM

7 Arzneimittel GmbH) 治 疗, 使 用 频 率 均 为 1 天 4 次 (qid),1 周 后 停 用 妥 布 霉 素 地 塞 米 松 滴 眼 液 和 左 眼 氟 沙 星 眼 液, 人 工 泪 液 持 续 用 1 个 月 7 研 究 程 序 和 指 导 所 有 的 病 人 均 签 署 同 意 此 项 研 究 的 协 议 书, 也 按 时 完 成 了 术 后 的 随 访 研 究 中 所 有 的 手 术 都 是 由 具 备 经 验 的 外 科 医 生 ( 钟 兴 武 教 授 ) 在 局 部 麻 醉 下 按 照 标 准 手 术 方 法 实 施 每 个 病 人 随 机 选 取 一 个 眼 作 统 计 分 析 7.1 手 术 方 法 飞 秒 基 质 透 镜 切 除 术 (FLEx) FLEx 手 术 采 用 德 国 蔡 司 全 飞 秒 系 统 (Carl Zeiss Meditec AG, Jena, Germany) 进 行 扫 描 切 割, 频 率 为 500 khz 4 个 飞 秒 切 口 按 照 以 下 顺 序 : 基 质 内 透 镜 后 表 面 ( 内 螺 旋 ), 微 透 镜 侧 切 边 界, 微 透 镜 的 前 表 面 ( 外 螺 旋 ), 最 优 部 位 的 角 膜 瓣 释 放 压 力 吸 入, 使 用 薄 钝 性 的 显 微 刮 刀 掀 开 角 膜 瓣, 用 显 微 镊 取 出 屈 光 微 透 镜, 最 后 小 心 使 角 膜 瓣 复 位 设 计 的 角 膜 瓣 厚 度 具 有 完 好 的 转 轴 和 中 轴 长 度 为 120μm, 弧 度 为 50 角 膜 瓣 半 径 为 7.5μm, 微 透 镜 直 径 为 6.5μm, 光 学 区 半 径 为 6.5μm 微 透 镜 的 点 间 距 和 线 间 距 为 4.5μm, 微 透 镜 侧 切 为 2.0μm 飞 秒 激 光 能 力 为 140nJ 小 切 口 角 膜 微 透 镜 取 出 术 (SMILE) SMILE 手 术 也 是 采 用 德 国 蔡 司 全 飞 秒 系 统 (Carl Zeiss Meditec AG, Jena, Germany) 进 行 扫 描 切 割, 频 率 为 500 khz 与 FLEx 不 同 的 是 手 术 最 后 一 步, 用 小 切 口 代 替 制 作 角 膜 瓣 完 成 前 4 步 切 削 后, 释 放 压 力 吸 入, 使 用 薄 钝 性 的 刮 刀 分 离 前 后 切 削 面, 用 显 微 镊 取 出 屈 光 微 透 镜 光 学 半 径 为 6.5 mm, 前 微 透 镜 表 面 深 达 120 μm 小 切 口 位 于 120 º 位 置, 弧 度 50 º( 切 口 长 度 为 4-5 mm,90 º 角 ) 微 透 镜 的 点 间 距 和 线 间 距 为 4.5μm, 微 透 镜 侧 切 为 2.0μm 小 切 口 为 3mm, 小 切 口 侧 边 为 2mm, 飞 秒 激 光 能 力 为 140nJ 7.2 术 后 治 疗

8 术 后 病 人 均 用 0.3% 妥 布 霉 素 地 塞 米 松 滴 眼 液 (TobraDex, Alcon) 0.5% 左 眼 氟 沙 星 眼 液 (Cravit, Santen) 和 玻 璃 酸 钠 眼 液 (HYCOSAN, URSAPHARM Arzneimittel GmbH) 治 疗, 使 用 频 率 均 为 1 天 4 次 (qid),1 周 后 停 用 妥 布 霉 素 地 塞 米 松 滴 眼 液 和 左 眼 氟 沙 星 眼 液, 人 工 泪 液 持 续 用 1 个 月 7.3 临 床 评 估 中 央 角 膜 敏 感 度 (Corneal Central Sensitivity,CCS) 用 Cochet-Bonnet esthesiometer (Luneau, Paris, France) 测 量 中 央 角 膜 敏 感 度 该 仪 器 包 括 的 尼 龙 丝 长 度 为 60mm, 直 径 0.12mm 这 个 仪 器 垂 直 于 角 膜 表 面 测 量, 可 以 接 触 到 中 央 角 膜 表 面 如 果 病 人 感 觉 到 尼 龙 丝, 则 判 断 为 阳 性 反 应 用 不 用 长 度 的 尼 龙 丝 测 量, 每 次 重 复 3 次 尼 龙 丝 长 度 从 60mm 以 5mm 往 下 递 减 至 少 两 次 出 现 阳 性 反 应 才 判 断 为 阳 性 反 应 最 长 的 尼 龙 丝 测 量 阳 性 结 果 为 角 膜 阈 值 测 量 结 果 采 用 统 一 标 准, 在 1 周 1 月 测 量, 为 避 免 术 后 角 膜 损 伤, 术 后 1 天 不 测 量 泪 液 分 泌 试 验 (Schirmer I Test,SIT) 泪 液 分 泌 实 验 在 无 麻 醉 下 进 行 用 30mm 泪 液 测 试 条 (Jingming,Tianjin, China) 放 入 下 睑 穹 窿 内 侧 1/3 放 入 测 试 条 后, 闭 眼 5min 湿 润 程 度 根 据 制 造 商 提 供 的 说 明 进 行 测 量 计 量 范 围 为 0-30mm, 程 度 越 低 说 明 泪 液 分 泌 越 有 可 能 异 常 测 量 结 果 采 用 统 一 标 准, 在 术 后 1 天 1 周 1 月 进 行 角 膜 荧 光 染 色 (Corneal Fluorescein Staining,FL) 能 观 察 到 角 膜 上 下 鼻 颞 侧 的 染 色 点 状 角 膜 病 变 (Superficial punctate keratopathy,spk) 在 每 个 象 限 的 分 为 0-3 分 :0 分 为 无 染 色 ;1 分 为 小 于 5 个 染 色 点 ;2 分 为 大 于 5 个 小 于 10 个 染 色 点 ;3 分 为 大 于 10 个 染 色 或 出 现 丝 状 染 色 四 个 象 限 的 得 分 相 加 为 每 眼 的 总 分 测 量 结 果 采 用 统 一 标 准, 在 1 周 1 月 测 量, 为 避 免 术 后 角 膜 损 伤, 术 后 1 天 不 测 量 无 创 性 测 量 泪 膜 破 裂 时 间 (Noninvasive Tear Breakup Time,NI-BUT)

9 测 量 时 的 暗 室 环 境 由 四 个 红 外 二 极 管 成 双 设 置 于 Keratograph 5 (Oculus, Wetzlar, Germany) 上 激 发 形 成 选 择 环 状 光 线 投 射 在 角 膜 上 开 始 测 量 前, 受 试 者 先 眨 眼 3 次, 再 保 持 开 眼 密 切 观 察 光 线 出 现 缺 损 变 形 的 时 间, 并 录 像 记 录 测 量 结 果 采 用 统 一 标 准, 在 1 周 1 月 测 量, 为 避 免 术 后 角 膜 损 伤, 术 后 1 天 不 测 量 泪 河 高 度 测 量 (Tear Meniscus Height,TMH) 研 究 对 象 在 测 试 前 眨 眼 数 次, 泪 河 高 度 图 像 由 Keratograph 5(Oculus, Wetzlar, Germany) 拍 照 高 度 从 泪 河 中 心 的 最 低 点 边 缘 测 量 测 量 重 复 3 次 取 平 均 值 测 量 结 果 采 用 统 一 标 准, 在 术 后 1 天 1 周 1 月 进 行 眼 表 疾 病 指 数 (Ocular Surface Disease Index,OSDI) OSDI 问 卷 是 用 来 量 化 干 眼 症 状 的 问 卷 根 据 干 眼 症 状 提 问, 病 人 是 否 经 历 过 干 眼 的 症 状 等 OSDI 问 卷 包 含 3 部 分 : 眼 部 症 状 相 关 的 视 力 问 题 环 境 因 素 每 个 问 题 都 有 评 分,0-4 分 不 等,0 分 为 无 症 状,4 分 为 有 明 显 症 状 回 答 所 有 问 题 会 产 生 分 不 等, 分 数 越 高 说 明 干 眼 症 状 更 明 显 干 眼 的 症 状 如 眼 干 灼 热 感 异 物 感 眼 痛 畏 光 和 视 力 波 动 等 测 量 结 果 采 用 统 一 标 准, 在 术 后 1 天 1 周 1 月 进 行 7.4 临 床 检 验 科 检 测 泪 液 收 集 使 用 一 次 性 的 5ml 微 细 管 (Microcaps 5 ml; Drummond Scientific, Broomall, PA) 收 集 非 刺 激 性 产 生 的 泪 液 所 收 集 的 泪 液 从 角 膜 下 缘 收 集, 不 能 刺 激 到 角 膜 结 膜 或 睑 缘 收 集 20µl 样 本 后 转 移 到 0.5ml 的 微 管 中, 储 存 于 -80 C 备 用 炎 症 介 质 检 测 根 据 制 造 商 说 明 用 Quantibody Human Inflammation Array I kit (RayBiotech, Inc. Norcross, GA) 检 测 所 收 集 的 泪 液 中 细 胞 白 介 素 - 1α(interleukin-1α,IL-1α), 肿 瘤 坏 死 因 子 -α(tumor necrosis factor-α,tnf-α), 神 经 生 长 因 子 (nerve growth factor,ngf), 干 扰 素 -γ(interferon-γ,ifn-γ), 转 化 生 长 因 子 -β1(transforming

10 growth factor-β1,tgf-β1) 和 基 质 金 属 蛋 白 酶 -9(matrix metalloproteinase-9, MMP-9) 的 表 达 一 抗 孵 育 2 小 时 后, 生 物 素 耦 连 的 二 抗 孵 育 1 小 时 再 与 Cy3 标 记 过 氧 化 酶 孵 育 1 小 时, 用 GenePix 4000B (Bio-Rad Laboratories, Hercules, CA) 检 测 表 达,Quantibody Q-Analyzer 软 件 (RayBiotech, Inc. Norcross, GA) 分 析 结 果 浓 度 根 据 制 造 商 提 供 的 标 准 曲 线 生 成 量 化 标 准 8. 不 良 情 况 报 告 直 接 向 钟 兴 武 教 授 报 告 医 疗 安 全 问 题 电 话 :+86(757) 终 止 或 更 改 实 验 项 目 9.1 研 究 对 象 可 随 时 退 出 研 究, 同 时, 赞 助 人 或 研 究 者 再 认 为 研 究 对 象 不 符 合 研 究 项 目 时 也 可 终 止 对 研 究 对 象 的 观 察 所 有 研 究 对 象 随 时 可 因 任 何 理 由 退 出 研 究 观 察 项 目 支 持 研 究 者 在 研 究 中 尝 试 合 理 的 新 方 案, 会 详 细 记 录 在 案 9.2 研 究 对 象 中 途 退 出 研 究 后, 结 果 不 计 入 实 验 研 究 10. 违 反 协 议 当 研 究 对 象 未 能 遵 守 研 究 协 议 要 求, 影 响 纳 入 排 除 标 准 研 究 内 容 及 目 标 时 则 按 违 反 研 究 协 议 记 录 违 反 协 议 内 容 包 括 : 1 不 满 足 纳 入 或 满 足 排 除 标 准 ; 2 使 用 违 禁 药 品 11. 研 究 管 理, 涉 及 伦 理 及 监 管 此 项 研 究 将 依 据 赫 尔 辛 基 真 言 采 取 保 密 措 施 所 有 实 验 室 标 本 评 分 表 格 实 验 报 告 及 记 录 等 均 采 用 编 码 或 首 字 母 资 料 将 保 存 在 文 件 柜 中 上 锁 保 存, 同 时 将 研 究 对 象 的 姓 名 与 身 份 证 件 号 码 分 开 保 存 未 取 得 研 究 对 象 许 可 前, 研 究 内 容 不 会 对 外 发 布 研 究 人 员 也 必 需 遵 守 相 关 隐 私 的 法 律 法 规

11 14.1 伦 理 委 员 会 研 究 相 关 的 协 议 书 将 有 当 地 单 位 的 伦 理 委 员 会 审 查 批 准 严 重 违 反 伦 理 委 员 会 的 规 定 政 策 将 会 受 到 研 究 制 约, 同 时 也 需 向 伦 理 委 员 会 上 报 研 究 进 度 研 究 人 员 需 遵 守 伦 理 委 员 会 的 相 关 规 定 变 更 研 究 计 划 执 行 前 需 重 新 递 交 书 面 申 请, 并 通 过 伦 理 委 员 会 审 查, 除 变 更 后 勤 管 理 方 面 以 外 伦 理 委 员 会 将 更 新 研 究 项 目 申 请 出 现 严 重 意 外 情 况 或 不 良 反 应 时 应 按 照 伦 理 委 员 会 的 相 关 政 策 处 理, 收 集 研 究 不 良 影 响 的 新 信 息, 直 到 研 究 完 成 前, 每 年 度 需 重 新 申 请 审 核 研 究 项 目 14.2 计 划 修 正 变 更 研 究 计 划 执 行 前 需 重 新 递 交 书 面 申 请, 并 通 过 伦 理 委 员 会 审 查, 除 非 必 需 立 即 消 除 病 人 的 安 全 隐 患 14.3 知 情 同 意 书 按 照 赫 尔 辛 基 宣 言 和 地 方 相 关 法 律 法 规 途 经 取 得 研 究 对 象 的 知 情 同 意 书 知 情 同 意 书 必 需 由 研 究 资 助 人 和 伦 理 委 员 会 双 方 确 认 批 准 研 究 者 需 向 研 究 资 助 人 提 供 伦 理 委 员 会 审 核 的 知 情 同 意 书 副 本 纳 入 研 究 对 象 时 应 先 签 署 知 情 同 意 书 并 向 研 究 对 象 详 细 说 明 研 究 内 容 并 征 得 同 意

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