期李慧英等壳聚糖对肉仔鸡血清花生四烯酸含量磷脂酶活性及小肠胞内磷脂酶表达的影响别在基础日粮中添加和的壳聚糖配制而成试验所用壳聚糖购于山东济南海德贝海洋生物工程有限公司脱乙酰度为基础日粮以玉米和豆粕为主要原料参照中国肉鸡饲养标准按照不同的生长发育阶段配制基础日粮组成及营养水

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自应
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1 动物营养学报壳聚糖对肉仔鸡血清花生四烯酸含量磷脂酶活性及小肠胞内磷脂酶表达的影响李慧英史彬林闫素梅冯永淼郭晓宇内蒙古农业大学动物科学与医学学院呼和浩特摘要本试验旨在研究日粮中添加不同水平壳聚糖对肉仔鸡血清花生四烯酸含量磷脂酶活性及小肠胞内磷脂酶表达的影响试验选择日龄健康爱拔益加肉仔鸡只公母各占随机分为个处理每个处理个重复每个重复只鸡对照组饲喂基础日粮其他种试验日粮分别在基础日粮中添加和的壳聚糖配制而成试验期结果表明肉仔鸡血清花生四烯酸含量磷脂酶活性及十二指肠空肠回肠的胞内磷脂酶表达均随日粮壳聚糖添加量的增加呈显著二次曲线增加其中以和壳聚糖组较高但当日粮壳聚糖添加量为时则有不同程度的降低由此可知壳聚糖对肉仔鸡免疫功能的影响可能与磷脂酶的活性及小肠胞内磷脂酶的表达发生改变有关关键词壳聚糖肉仔鸡花生四烯酸磷脂酶胞内磷脂酶研究和开发天然绿色的抗生素替代品已成为国内外研究的热点之一壳聚糖即氨基脱氧 ) 葡萄糖是甲壳素脱乙酰基的产物属于天然来源的碱性多糖主要来自海生动物如虾蟹等的外壳已有研究表明壳聚糖不能为动物消化吸收但壳聚糖及其衍生物作为饲料添加剂能改善动物生产性能增强机体免疫能力具有抗菌抗病毒作用且安全无毒对环境无公害被认为是一! 种新型的饲料添加剂前期的试验研究发现壳聚糖可显著提高肉仔鸡的抗体滴度吞噬指数和淋巴细胞转化率添加壳聚糖使肉仔鸡血液中辅助性 * 细胞细胞毒性 * 细胞 +), +), 值有所增加并随添加剂量增加呈一次线性或二次曲线上升趋势磷脂酶因家族成员的多样性结构间的差异及基因表达上的特异性而具有多种生物学作用细胞膜磷脂在催化作用下可以释放花生四烯酸 #/#&$$#$ 在环氧化酶和脂氧化酶作用下产生前列腺素 " 白细胞三烯 1.*1 等一系列激素类物质这些物质在生物体内起着重要作用其中和.*1 具有重要的免疫调节作用胞内磷脂酶和其他没有同源性是唯一一个已明确对位的具有优先选择性的已有报道认为壳聚糖可通过激活促进巨噬细胞的释放 #$ 等研究发现壳聚糖能刺激犬多形核细胞合成.*1 和由此推测壳聚糖对动物免疫机能的促进效果可能与的活性增强有关但目前关于壳聚糖对动物机体免疫功能影响的机理研究尤其是分子机制的试验研究鲜见报道鉴此本试验旨在通过研究日粮添加不同水平的壳聚糖对肉仔鸡血清含量活性及小肠表达的影响从途径探讨壳聚糖对肉仔鸡免疫功能的影响机制材料与方法试验动物分组试验选择日龄健康爱拔益加肉仔鸡只公母各占随机分为个处理每个处理个重复每个重复只鸡各组鸡初始体重经方差检验差异不显著对照组饲喂基础日粮根据前人和前期的研究结果其他种试验日粮分收稿日期基金项目国家自然科学基金项目编号!! 作者简介李慧英女内蒙古清水河人博士研究生主要从事动物营养与免疫及分子生物学研究 "#$%%$&'$$!$# 通讯作者史彬林教授博士硕士生导师 "#$%($%$&$#&

2 期李慧英等壳聚糖对肉仔鸡血清花生四烯酸含量磷脂酶活性及小肠胞内磷脂酶表达的影响别在基础日粮中添加和的壳聚糖配制而成试验所用壳聚糖购于山东济南海德贝海洋生物工程有限公司脱乙酰度为基础日粮以玉米和豆粕为主要原料参照中国肉鸡饲养标准按照不同的生长发育阶段配制基础日粮组成及营养水平见表表基础日粮组成及营养水平风干基础 *#(%+$2$#'2/$2%3%4(##%$2 项目 52 原料 5/$2 #$//(#$ 日龄玉米 +/ 豆粕 (##%!! 豆油 (#$%!! 石粉.$2 磷酸氢钙 +#6-7 食盐 #+%!! 蛋氨酸 82 赖氨酸.! 胆碱 +&%$ 微量元素预混剂 8$/#%/$9 维生素预混剂 :$2#$/$9 合计 *2#% 营养水平 '2/$2%3% 代谢能 8" 8; 粗蛋白质 +-! 钙 +#! 有效磷 - 赖氨酸. 蛋氨酸 82! 每千克基础日粮中含有 -/3$/$%/#4(##% $2 8 +' 5! :!5:)5:"5: :1 :1 :1 :1 烟酸 $#$!" 泛酸!#22&$#$ 叶酸 4%$#$ 生物素 ($2$ 胆碱 &%$ 饲养管理肉鸡采用涂塑肉鸡笼饲养试验期自动控温自由饮水样品制备分别于和日龄于每重复中随机抽取只鸡翅静脉采血. 于普通采血管中在下离心!/$ 制备血清冷冻保存备用然后宰杀于冰浴上迅速剪取十二指肠空肠和回肠组织用生理盐水冲洗内容物分装于. "/4 管中放入液氮中快速冷冻后转入低温冰箱冻存用于的提取活性采用放射免疫分析法测定试剂盒购自北京华英生物技术研究所采用酶联免疫分析法测定试剂盒购自美国 ) 公司组织总提取及反转录取肉鸡小肠组织按总提取试剂盒 $ #2*### )! 中国大连说明进行总提取总用无酶水溶解经琼脂糖凝胶电泳分析检测总完整情况于保存备用因所获总含量太低紫外分光光度计不能准确测量反转录前直接将. 的加入到反转录体系中合成 ) 反应体系为. 其中 -/$/$2 *8 1'4/.-/$/$2 *8 *" <8$9.*### )!7%$* -/$/ %..# / %.. 于 -+ 仪进行反转录反应条件为! $ 实时荧光定量 -+ 根据跨内含子原则进行引物设计以避免基因组污染干扰引物由上海生工生物工程技术服务有限公司合成!!!( 01# 登录号 8! 上游 = **!= 下游 =0* *000**0*0!= 肌动蛋白 #2$( 01# 登录号 8 上游 = *0++!= 下游 =0*+++*+++00*++!= 采用 >1 0/5 荧光染料法进行实时定量 -+ 扩增的检测 -+ 反应体系为. 其中 >1 /$9 "? *#@ *8. *### )). 上游引物 %.. 下游引物 % 于实时定量 -+ 仪美国 8;7-*5+7 分别进行和肌动蛋白的 -+ 反应扩增条件为预变性 $ 变性退火! 延伸个循环后延伸 $ 反应过程中以水替代 ) 为阴性对照 -. 相对表达量采用 +2 进行计算 +2A+2 +2 肌动蛋白 -+ 产物经单一熔解曲线峰进行确定并取.-+ 产物经琼脂糖凝胶电泳 :$ 确定扩增产物片段大小后送交上海生工进行序列测定

3 动物营养学报卷试验数据处理试验数据采用 52$2'2 软件回归分析程序进行统计对不同壳聚糖梯度的日粮处理效应进行一次线性和二次回归分析以作为差异显著性标准结果壳聚糖对肉仔鸡血清含量及活性的影响由表的回归分析统计结果可知在试验各期肉仔鸡血清中含量随日粮中壳聚糖添加量的增加呈现显著二次曲线增加其中以和壳聚糖组较高当日粮中壳聚糖添加量提高到时血清含量都有不同程度的降低随日粮中壳聚糖添加量的增加血清活性在试验第天呈现二次曲线增加趋势 A 在试验第天和第天呈现显著二次曲线增加其中以和壳聚糖组较高当日粮中壳聚糖添加量提高到时血清活性呈下降趋势项目 52.. 表壳聚糖对肉仔鸡血清含量及活性的影响 *#(%"4424$44/2%3%4&$2#$$222##2$3$2$/'4(/$%/ 日龄壳聚糖水平.3%4&$2# 标准误 "8 线性.$#/ 值 3#%' 二次 B'#/#2$!!!!!!!!!!!!!!!!!! 壳聚糖对肉仔鸡十二指肠空肠回肠表达的影响由表! 可知在试验各期随日粮中壳聚糖添加量的增加肉仔鸡十二指肠与空肠的表达均呈显著二次曲线增加其中以和壳聚糖组较高当日粮中壳聚糖添加量增加到时十二指肠与空肠 -. 表达均有不同程度的降低随日粮中壳聚糖添加量的增加肉仔鸡回肠表达在试验第天和第天呈现显著二次曲线增加在试验第天呈现二次曲线增加趋势 A 其中以和壳聚糖组较高当日粮中壳聚糖添加量为时回肠表达有不同程度的降低趋势项目 52 十二指肠 )'' 空肠 ;C'' 回肠 5%' 表壳聚糖对肉仔鸡十二指肠空肠回肠表达的影响 *#(%!"4424$44/2%3%4&$2#$$2 9/$$'' CC''#$%'4(/$%/ +2 日龄壳聚糖水平.3%4&$2# 标准误值 3#%' "8 线性.$#/ 二次 B'#/#2$!!!!!!!!!!!

4 期李慧英等壳聚糖对肉仔鸡血清花生四烯酸含量磷脂酶活性及小肠胞内磷脂酶表达的影响讨论在生物体内广泛分布定位在细胞的胞质内在单核巨噬细胞中含量丰富亦存在于其他细胞中和其他不具有序列上的同源性是唯一一个已明确对位的具有优先选择性的目前关于的研究主要集中在哺乳动物 1$# 等研究发现壳聚糖可通过激活鼠促进巨噬细胞的释放当壳聚糖水平质量体积分数低于时鼠巨噬细胞外无释放在范围内随着壳聚糖水平提高膜磷脂向细胞外释放的量增加而在以上则无显著变化在环氧化酶和脂氧化酶作用下产生.*1 等一系列激素类物质这些物质在生物体内起着重要作用其中和.*1 具有重要的免疫调节作用 #$ 等研究发现壳聚糖能刺激犬多形核细胞合成.*1 和一些研究结果也指出当机体出现异常状况或病变时机体免疫系统启动血清水平均有不同程度的升高说明血清水平可以作为衡量机体免疫功能的指标本试验研究显示肉仔鸡血清含量及活性十二指肠空肠回肠表达均随日粮中壳聚糖添加量的增加呈显著二次曲线增加其中以和壳聚糖组较高当日粮壳聚糖添加量为时肉仔鸡血清含量及活性十二指肠空肠回肠 -. 表达都有不同程度的降低趋势以上试验结果提示壳聚糖对肉仔鸡免疫功能的影响有一定的剂量依赖关系适量添加可刺激肉仔鸡的免疫机能而高剂量添加对肉仔鸡免疫功能有抑制作用这与前期研究得出的结果相吻合根据这些试验结果也可推测壳聚糖对肉仔鸡免疫机能的影响机制可能与壳聚糖可调控肉仔鸡的表达与活性影响巨噬细胞的释放进而引起血清含量发生改变有关但目前关于该领域的研究报道极为罕见确切的结果还有待于通过对与.*1 等进行进一步的研究后加以确定此外关于壳聚糖可调控肉仔鸡的表达及活性的机制研究报道也极少有资料报道壳聚糖可增强小鼠的巨噬细胞产生淋巴因子白细胞介素和白细胞介素白细胞介素与其特异受体结合后通过某些调节蛋白作用激活胞膜上或胞浆内的多种磷脂酶但其确切的结果有待于进一步探讨结论随日粮中壳聚糖添加量的增加肉仔鸡血清含量及活性十二指肠空肠与回肠的表达均呈现显著二次曲线增加且以添加和时效果较好当日粮壳聚糖添加量为时有不同程度的降低参考文献 0#%#&/+ 88'$;6%$D$;0#% %#&/ ) )+&%2/%/'2$ (%'## #&$2#$ $#2(&#$&%2/% #(/2$#($%#$#4#29/2$$/#2; ;'/#%4'2/$2$$!! 张学峰壳聚糖新型饲料添加剂 ; 吉林畜牧兽医!! 宁维颖甲壳素与壳聚糖在家禽饲料中的应用 ; 山东家禽! 史彬林李德发朴香淑壳聚糖对肉仔鸡生长性能和免疫功能的影响 ; 中国畜牧杂志金晓史彬林李慧英方丽惠张彩芬郭晓宇陈志刚壳聚糖对肉仔鸡外周血 * 淋巴细胞亚群的影响 ; 饲料工业李晓玫李彪白细胞介素细胞信号转导机制研究现状 ; 生理科学研究进展 1$#5)1#%$;1%2/#) 8+#2##..##+)$"+&$2#$'& &%$##2$3#2$##/#&$$#$ ($%$ <#2$$ -!) #/&#;"1.2/ #$>7#2>*####*&$##> 8$#$+&$2$#&$2#2$'%#2#$% /&'%#/%2/%#%'2/$ 1 # /2#%#$";;'/#%41$$#%8#2/$ #%#/& &$2* )#/#C1 "44249/$ 2#%2/#22&'$9/$ *-+ ; ;'/#%4 1$&$#%# 1$&$#% 82& #4/;//2$0$2#/)-&&%$# #$#2/4#%$(2#2$'/29$$ 2 ##/%322/$('2$2'//#2$ &#/#2/$2$4 %<&$/$#;'/ $.2/!

5 动物营养学报卷郝秀华陈玲豚鼠血 * 含量在哮喘发病及其耳针防治过程中的变化 ; 标记免疫分析与临床!! 肖仁飞刘军麟李祥福李良友苏先狮病毒性肝炎患者血清活性.* 水平及其临床意义 ; 海南医学院学报! 廖璞王淑琴康格非乳腺癌患者血清磷脂酶活性变化的研究 ; 医学研究生学报! 张建新瞿建国程国祚李龙王旭青急性坏死性胰腺炎模型大鼠肠血流量及血清磷脂酶白介素的变化 ; 基础医学与临床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编辑何丽霞

福建农业学报材料与方法试验菌株引物主要仪器主要试剂细菌培养模板的制备反应条件扩增产物的检测特异性试验敏感性试验分离菌株检测产物的克隆及序列测定结果与分析

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