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全探田
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1 108 乳业科学与技术 2010 年第 3 期 ( 总第 142 期 ) 低聚果糖调节人体肠道菌群功能的研究 1, 杭锋 2, 伍剑锋 3 1,, 王荫榆 2 1, 2*, 郭本恒 (1 光明乳业股份有限公司技术中心, 上海 ;2 乳业生物技术国家重点实验室, 上海 ;3 江门量子高科生物工程有限公司, 广东江门 ) 摘要 : 为了研究低聚果糖调节人体肠道菌群的功能和效果, 采用卫生部保健食品检验与评价技术规范调节肠道菌群功能检验方法进行检验, 并将体检指标全部合格的 120 例成年志愿者随机分为试食组和空白对照组, 试食组每天分别服用含量大于等于 55 % 的低聚果糖 6 ml, 空白组则采用果葡糖浆作为安慰剂, 连续 30 d, 比较摄食前后两组肠道菌群的变化情况试验结果表明, 试食组试验后较试验前粪便中双歧杆菌数量增加 5.8 % (P<0.01), 乳酸杆菌增加 0.4 % (P>0.05), 产气荚膜梭菌数量减少 8.6 % (P<0.01), 拟杆菌数量增加 1.0 % (P<0.01), 肠杆菌和肠球菌分别增加 0.4 % 和 0.8 % (P<0.05); 与对照组相比, 试验后试食组双歧杆菌增加 4.2 % (P<0.01), 乳酸杆菌减少 21 % (P>0.05), 产气荚膜梭菌减少 7.2 % (P<0.01), 拟杆菌减少 0.4 % (P>0.05), 而肠杆菌和肠球菌数量无明显变化 (P>0.05) 因此, 每日摄食 3.3 g 的低聚果糖亦具有调节人体肠道菌群, 激活益生菌增殖并抑制有害菌的作用关键词 : 低聚果糖 ; 肠道菌群 ; 双歧杆菌中图分类号 :Q 文献标识码 :A 文章编号 : (2010) Study on the Regulation Effects of FOS on Human Intestinal Flora Hang Feng 1, Wu Jianfeng 2, Wang Yinyu 1, Guo Benheng 1* (1 Technology Center, Bright Dairy & Food Co., Ltd., Shanghai , China; 2 State Key Laboratory of Dairy Biotechnology, Shanghai , China; 3 Jiangmen Quantum Hi-Tech Biological Engineering Co., Ltd., Jiangmen of Guangdong , China) Abstract: The examination method of intestinal flora function regulation in the Technical Standards for Testing & Assessment of Health Food issued by the Ministry of Health PR., China was adopted, in order to evaluate the regulation effects of Fructooligosaccharides (FOS) on human intestinal flora. One hundred and twenty volunteers passed physical examination were randomly divided into test group and control group. The test group was given 6 ml FOS with content not less than 55 % per day for 30 days, whereas the control group was given fructose-glucose syrup as placebo. The changes of intestinal flora were compared between the two groups mentioned above. The results show that Bifidobacterium, Lactobacilli, bacteroids, Enterobacteriaceae and Enterococci increase 5.8 % (P<0.01), 0.4 % (P>0.05), 1.0 % (P<0.01), 0.4 % (P<0.05) and 0.8 % (P<0.05), respectively, whereas Clostridium Perfringens decrease 8.6 % (P<0.01) in test group after 30 days FOS administration. Comparing to the control group, Bifidobacterium increase 4.2% (P<0.01), while Lactobacilli, Clostridium Perfringens and bacteroids decrease 21 % (P>0.05), 7.2 % (P<0.01) and 0.4 % (P>0.05), respectively, furthermore, Enterobacteriaceae and Enterococci do not change obviously in test group after 30 days FOS administration. Therefore, the administration of FOS 3.3 gram per day also can regulate human intestinal flora, promote the growth of probiotics and inhibit phathogens. Key words: fructooligosaccharides, intestinal flora, bifidobacterium 低聚果糖 (Fructooligosaccharides, FOS) 作为一种能促进双歧杆菌生长的益生元, 其功能已得到广泛的认同 [1-4] 但国内对于其人体功能性的研究尚不多见, 张帆等研究了人体连续试食 20 ml 含量为 55 % 的低聚果糖具有显著的促进肠道双歧杆收稿日期 : ; 作者简介 : 杭锋, 男, 工程师, 研究方向为食品生物技术 ; * 通讯作者 : 郭本恒 ; 基金项目 : 国家高技术研究发展计划 (863 计划 )(No. 2007AA10Z353), 国家十一五科技支撑计划 (No. 2006BAD04A14) 菌和乳杆菌的增殖并抑制有害菌的功效 [5] 然而, 低聚果糖在较低剂量时的功效作用如何尚不可知为此, 该文采用卫生部保健食品检验与评价技术规范中调节肠道菌群功能的检验方法 [6], 评价每日试食 6 ml 含量为 55 % 的低聚果糖对人体肠道菌群的影响, 以期为产品配方设计中低聚果糖的添加量提供一定的参考依据 1 材料与方法 1.1 受试样品 OLIGO TM 低聚果糖 60 L( 由江门量子高科生

2 杭锋等 : 低聚果糖调节人体肠道菌群功能的研究 109 物工程有限公司提供 ) 常温阴凉干燥处保存, 保存期 12 个月, 供试验用 1.2 受试对象及分组纳入者标准一个月内未患过胃肠疾病者一个月内未服用过抗生素者排除者标准合并有心脑血管消化道肝肾等严重疾病及内分泌疾病, 精神病患者 ; 年龄在 65 岁以上者, 妊娠或哺乳期妇女, 过敏体质及对本保健食品过敏者 ; 停服受试样品或中途加服其它药物, 无法判断功效或资料不全者 ; 短期内服用与受试功能有关的物品, 影响到对结果的判断者试验设计分组及试食方法采用自身和组间两种对照设计 120 例健康试食者, 随机分为 2 组, 每组各 60 例, 试食组每日服用低聚果糖一袋 (6 ml/ 袋 ), 对照组服用果葡糖浆一袋 (6 ml/ 袋 ),2 组均停用其他益生菌制剂不改变原来的饮食习惯受试样品给予时间 30 h 试食组受试物前和试验结束 24 h 后, 无菌采取受试者粪便进行培养, 检验肠道 6 种菌群的变化筛除 20 不合格受试对象, 共有试验组对照组各 50 人, 病例脱离率 % 1.3 仪器与试剂 MEK-6318 型血球计数仪 ( 日本光电工业株式会社 ),MID-IRON 尿十项分析仪 ( 德国 ),H-500 荧光分光光度计 ( 日本岛津公司 ), 日立 7600 全自动生化分析仪 ( 日本日立公司 ),Heraeus 细菌培养箱 ( 德国 Heraeus 公司 ),Heraeus 厌氧菌培养箱 ( 德国 Heraeus 公司 ),BX61 显微镜 ( 日本 Olympus 公司 );TH-CB-402 超净台 ( 美国 LABCONCO 公司 ), 电子天平 ( 瑞士梅特勒托利表 1 菌落计数用培养基与培养条件 Table 1 the medium and culture condition for colony enumeration 多有限公司 ) 1.4 观察指标安全性指标一般状况 : 包括精神睡眠饮食大小便血压和心率等血尿便常规检查 : 红细胞计数白细胞计数血红蛋白尿常规和便常规检查生化指标测定 : 血清肝肾功能 ( 谷丙转氨酶 ALT, 肌酐 CRE) 腹部 B 超, 心电图,x 线胸部透视膳食调查 : 于试验开始结束前进行 3 天的询问法膳食调查, 观察饮食因素对试验结果的影响不良反应观察功效性指标症状观察详细询问病史, 观察主要临床症状 : 食欲不振体倦眩晕心慌气短等功效性指标双歧杆菌乳酸杆菌产气荚膜梭菌肠杆菌肠球菌和拟杆菌肠道菌群检验方法收集受试者 1.5 h 以内的新鲜粪便于便盒中, 立即送检称取 l g 粪便标本置于带玻璃珠的干燥灭菌试管中, 加灭菌稀释液,10 倍稀释, 震荡 1 分钟, 再依次进行 10 倍梯度稀释, 选择合适的稀释度, 分别吸取 0.1 ml 的菌体稀释液并用各自选择性培养基进行浇注并培养, 见表 1 培养基组成按保健食品检验与评价技术规范 (2003 版 ) 中功能学评价检验方法之调节肠道菌群功能检验方法提供的培养基配方 [6] 菌种培养基培养条件温度 / 时间 /h 条件双歧杆菌 BBL 琼脂厌氧乳酸杆菌 LBs 琼脂有氧产气荚膜梭菌 TSC 琼脂厌氧肠杆菌 EMB 琼脂有氧肠球菌叠氮钠 - 结晶紫 - 七叶苷琼脂有氧拟杆菌改良 GAM 琼脂厌氧 1.5 数据处理和结果判断数据处理采用统计软件 SPSS 12.0 计算分析数据凡自身对照资料采用配对 t 检验, 两组均数比较采用成组 t 检验, 后者需进行方差齐性检验, 对非正态分布或方差不齐的数据进行适当的变量转换, 待满

3 110 乳业科学与技术 2010 年第 3 期 ( 总第 142 期 ) 足正态方差齐性后, 用转换的数据进行 t 检验 ; 若球菌拟杆菌无明显变化 ;2 双歧杆菌和 / 或乳杆转换数据仍不能满足正态方差齐性要求, 改用 t 菌 ( 或其他益生菌 ) 明显增加, 梭菌减少或无明检验或秩和检验 ; 但变异系数太大 ( 如 CV 大于显变化, 肠杆菌和 / 或肠球菌拟杆菌明显增加, 50 %) 的资料应用秩和检验功效指标用 X 2 检验但增加的幅度低于双歧杆菌乳杆菌 ( 或其他益结果判断生菌 ) 增加的幅度 [6] 比较试验前后自身及组间双歧杆菌乳酸杆 2 结果与讨论菌产气荚膜梭菌肠球菌肠杆菌和拟杆菌的 2.1 安全性指标变化情况, 试验组试验前后自身比较差异有显著共观察 100 例低聚果糖组 50 例, 男女性分性, 或试验后试验组与对照组组间比较差异有显别为 23 例和 27 例, 年龄 20~60 岁, 平均年龄著性且试验组试验前后自身比较差异有显著性, (42.9±8.5) 岁 ; 对照组 50 例, 男女性分别为 14 符合以下任 1 项, 可以判定该受试样品试验结果例和 36 例, 年龄 20~61 岁, 平均年龄 (40.8±9.1) 阳性 1 双歧杆菌和 / 或乳杆菌 ( 或其他益生菌 ) 岁试验前后, 两组部分安全性指标结果见表 2 明显增加, 梭菌减少或无明显变化, 肠杆菌肠和表 3 表 2 试食前后血压和心率变化 ( x ±SD) Table 2 the changes of blood pressure and heart rate before and after FOS administration ( x ±SD) 组别时间收缩压 /mmhg 舒张压 /mmhg 心率试食组 50 对照组 50 试验前 114±17 77±11 76±8 试验后 115±16 76±11 75±8 试验前 117±11 76±7 74±7 试验后 116±11 76±8 74±7 表 3 试食前后生理生化指标变化 ( x ±SD) Table 3 the changes of physiological and biochemical index before and after FOS administration ( x ±SD) 项目试食组对照组试食前试食后试食前试食后 ALT/(u L -1 ) ± ± ± ±9.71 CRE/(µmol L -1 ) ± ± ± ±13.44 GLU/(mmol L -1 ) ± ± ± ±0.67 TC/(mmol L -1 ) ± ± ± ±0.78 TG/(mmol L -1 ) ± ± ± ±0.58 RBC/( L -1 ) ± ± ± ±0.43 WBC/( 10 9 L -1 ) ± ± ± ±1.76 HGB/(g L -1 ) ±21 141±21 141± 尿常规 50 正常正常正常正常便常规 50 正常正常正常正常试食组与对照组试验前后精神睡眠饮食大小便正常 ( 数据未给出 ); 血压心率基本正常且无明显变化 ( 见表 2); 血尿便常规检查及肝肾功能检查基本正常且无明显变化 ( 见表 3); 腹部 B 超, 心电图,X 线胸部透视基本正常 ( 数据未给出 ) 服用受试物后, 部分受试者的排便状况有所改善, 无其他不良反应说明两组具有可比性, 受试样品对受试者无不良影响 2.2 改善肠道菌群功效由表 4 可见, 与试验前相比, 试食组试验后自身比较粪便中双歧杆菌明显增加 5.8 % (P<0.01), 乳杆菌增加 0.4 %(P>0.05); 产气荚膜梭菌的数量明显减少 8.6 %(P<0.01); 肠杆菌和肠球菌分别增加 0.4 %(P<0.05) 和 0.8 % (P<0.05), 拟杆菌明显增加 1.0 %(P<0.01), 但肠杆菌肠球菌和拟杆菌增加的幅度明显低于双歧杆菌增加的幅度试验组试验前后自身比较差异性说明摄食含量不小于 55 % 的低聚果糖 6 ml 对人体肠道菌群调节结果呈阳性对照组试验前后各菌无显著性差异 (P>0.05) 说明果葡糖

4 杭锋等 : 低聚果糖调节人体肠道菌群功能的研究 111 浆对人体肠道菌群调节结果呈阴性表 4 试验前后人体肠道菌群比较 (lg cfu/g, x ±SD) Table 4 the comparison of human intestinal flora in the same group before and after FOS administration(lg cfu/g, x ±SD) 组别菌名双歧杆菌乳酸杆菌产气荚膜梭菌肠杆菌肠球菌拟杆菌试食组 50 对照组 50 试验前 7.71± ± ± ± ± ±0.41 试验后 8.16±0.29** 7.43± ±0.34** 6.80±0.28* 6.21±0.32* 5.18±0.37** 试验前 7.81± ± ± ± ± ±0.41 试验后 7.83± ± ± ± ± ±0.38 注 : 与试验前相比较, 进行显著性检验,* 表示 P < 0.05,** 表示 P < 0.01 表 5 试食组和对照组人体肠道菌群比较 (lg cfu/g, x ±SD) Table 5 the comparison of human intestinal flora between the two group before and after FOS administration(lg cfu/g, x ±SD) 组别菌名双歧杆菌乳酸杆菌产气荚膜梭肠杆菌肠球菌拟杆菌试验前试验后 50 试食组 7.71± ± ± ± ± ± 对照组 7.81± ± ± ± ± ± 试食组 8.16±0.29** 7.43± ±0.34** 6.80± ± ± 对照组 7.83± ± ± ± ± ±0.38 注 : 与对照组相比较, 进行显著性检验,** 表示 P < 0.01 由表 5 可见, 与对照组相比, 试验前试食组各种菌均无显著性差异 (P>0.05), 表明试食组与对照组具有可比性 ; 试验后试食组双歧杆菌增加 4.2 %, 且有显著性差异 (P<0.01); 产气荚膜梭菌减少 7.2 %(P<0.01), 而乳杆菌肠杆菌肠球菌和拟杆菌均未发生显著变化 (P>0.05) 试验后试验组与对照组组间比较的差异性, 说明摄食含量不小于 55 % 的低聚果糖 6 ml 对人体肠道菌群调节结果呈阳性 3 结论与对照组相比, 试验前试食组各种菌均无显著性差异 (P>0.05), 表明试食组与对照组具有可比性 ; 试验后试食组双歧杆菌增加 4.2 %, 且有显著性差异 (P<0.01); 产气荚膜梭菌减少了 7.2 % (P<0.01), 而乳杆菌肠杆菌肠球菌和拟杆菌均未发生显著变化 (P>0.05) 与试验前相比, 试食组试验后粪便中双歧杆菌增加 5.8 %(P<0.01), 乳杆菌增加 0.4 %(P>0.05); 产气荚膜梭菌的数量减少 8.6 %(P<0.01); 肠杆菌和肠球菌分别增加了 0.4 % (P<0.05) 和 0.80 %(P<0.05), 拟杆菌明显增加了 1.0 %(P<0.01), 但肠杆菌肠球菌和拟杆菌增加的幅度明显低于双歧杆菌增加的幅度而对照组试验前后各菌无显著性差异 (P>0.05) 通过试验组试验前后人体肠道菌群自身比较差异性以及试验后试验组与对照组组间比较的差异性分析, 表明每日摄食 3.3 g 的低聚果糖亦具有调节人体肠道菌群, 激活人体益生菌增殖并抑制有害菌的作用试食低聚果糖前后, 未观察到过敏及其他不良反应 ; 人体血红蛋白红细胞白细胞血清谷丙转氨酶血尿便常规心率及血压等基本在正常范围, 说明本品对试食者健康无不良影响参考文献 [1] Delzenne NM. Oligosaccharides: state of the art[j]. Proceedings of the Nutrition Society, 2003, 62: [2] Bornet FRJ. Enhancement of Gut Immune functions by short-chain fructooligosaccharides and reduction of colon cancer risk[j]. Journal of Intestinal Microbiology, 2002, 16(1): [3] Bornet FRJ, Brouns F. Immune-stimulating and guthealth-promoting properties of short-chain fructo-oligosaccharides[j]. Nutrition Reviews, 2002, 60(10): [4] 杭锋, 郭本恒, 龚广予, 等. 低聚果糖对小鼠肠道菌群影响与机体免疫调节关系的研究 [J]. 乳业科学与技术,2009,5:9-15, 35. [5] 张帆, 汪会玲, 孟晶. 低聚果糖对人体肠道菌群的影响 [J]. 现代预防医学,2006,33(2): [6] 中华人民共和国卫生部. 保健食品检验与评价技术规范 [M]. 北京 : 人民卫生出版社,2003.

5 112 乳业科学与技术 2010 年第 3 期 ( 总第 142 期 )

中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 46 卷第 9 期 2015 年 5 月 1339 非酒精性脂肪性肝病 (nonalcoholic fatty liver disease,nafld) 是一种与胰岛素抵抗遗

中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 46 卷第 9 期 2015 年 5 月 1339 非酒精性脂肪性肝病 (nonalcoholic fatty liver disease,nafld) 是一种与胰岛素抵抗遗 1338 中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 46 卷第 9 期 2015 年 5 月九味肝泰胶囊对高脂饮食诱导大鼠非酒精性脂肪肝的治疗作用陈菲 1 2,, 艾国 3, 盛柳青 1, 麻佳蕾 1, 黄正明 1. 金华职业技术学院医学院, 浙江金华