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武妮满
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1 第卷第期年月水产学报!! " #$%& $& '% 文章编号 ( )*&&&& ( 饲料锌添加水平对凡纳滨对虾免疫抗菌机能和溶菌酶 $0)- 及 # 受体 $0)- 表达的影响郭腾飞黄旭雄苏明王武刚怀向军胡盼严佳琦吕丹黄征征 & 上海海洋大学水产种质资源发掘与利用教育部重点实验室上海 & 上海市青浦区水产技术推广站上海摘要在基础饲料中添加不同水平蛋氨酸锌添加水平分别为 -7 C )>7 并饲喂凡纳滨对虾养殖 ( 4 后取样测定对虾鳃组织中 $ % 受体 - 和溶菌酶 - 的表达水平以及肝胰腺肌肉和血淋巴中超氧化物歧化酶和溶菌酶 C 活性并进行溶藻弧菌人工急性感染试验结果表明凡纳滨对虾肝胰腺及肌肉中锌蓄积水平随饲料锌添加量的增加而显著增加肝胰腺中锌蓄积更明显添加 -7 C )>7 组锌含量为 & -7 C )>7 饲料对虾鳃组织中的 $ % 受体 - 和溶菌酶 - 表达量均显著高于未添加锌组和添加 -7 C )>7 组添加 -7 C )>7 组对虾肌肉肝胰腺和血淋巴中溶菌酶活性显著高于未添加锌组添加 -7 C )>7 组对虾肝胰腺和血淋巴中的活性也显著高于未添加锌组但与添加 -7 C )>7 组无显著差异而肌肉中活性在添加 -7 C )>7 组中最高经溶藻弧菌人工急性感染后添加 -7 C )>7 组对虾半致死时间和全致死时间大于未添加锌组和添加 -7 C )>7 组本研究表明相比摄食未添加锌组饲料和添加 -7 C )>7 组饲料凡纳滨对虾的免疫抗菌机能在摄取添加 -7 C ) >7 锌含量为 & -7 C )>7 饲料饲料时得到改善关键词凡纳滨对虾蛋氨酸锌 $ % 受体 - 溶菌酶 - 超氧化物歧化酶溶菌酶中图分类号文献标志码凡纳滨对虾,!!! 是世界主要养殖对虾之一也是我国主要对虾养殖品种年全国养殖凡纳滨对虾的产量约达万吨在集约化养殖过程中传染性疾病主要是弧菌病病毒病的暴发是制约对虾养殖效益的主要因素由于使用药物防病可能存在药物残留及病菌耐药性等风险通过营养途径改善机体的免疫机能并由此提高机体的抗病能力是营养饲料学的重要发展方向和研究热点有关凡纳滨对虾的营养免疫研究已有报道主要集中在维生素 ( 多糖中草药等免疫添加剂对机体抗病能力及免疫相关指标的影响饲料中微量元素与对虾免疫机能的关系研究刚刚起步锌是维持生物体生理活性的必需营养素已知动物中有超过种不同的锌依赖性酶锌是酶的组成成分或酶的激活剂参与体内营养与能量代谢其中锌指蛋白是生物体内调控细胞分裂核酸代谢和 ( 合成的一类重要的含锌酶缺锌会导致鱼和虾增长缓慢免疫机能下降死亡率升高对虾等甲壳类不具备特异性免疫机能仅具备非特异性免疫机能溶菌酶是机体重要的非特异性免疫因子其活性是表征机体对细菌性病原抵抗能力的重要指标对虾类的收稿日期修回日期资助项目上海市科委项目 C 上海市重点学科建设项目 E 上海高校创新团队第二期建设项目资助通讯作者黄旭雄!,-./%DD1'. 71$'& 4'&0

2 水产学报卷 $ % 受体 :$ %0 ;:$ 和果蝇 $ % 受体极为相似而在进化更高级的脊椎动物中则广泛存在 $ % 样受体 :$ %,%/> 0 ;:$ $ % 受体是机体非特异性免疫的重要组成部分 $ % 受体在免疫应答中发挥重要作用负责将异物入侵的信号从细胞外传递到细胞内并由此介导细胞产生一系列的免疫反应 E3 等报道了凡纳滨对虾 $ % 受体基因的序列发现凡纳滨对虾 $ % 受体在血细胞及鳃中的表达量高其次是血淋巴而肠肌肉及肝胰脏中的表达水平较低有关饲料维生素水平对凡纳滨对虾 $ % 受体影响有见报道而关于饲料中锌水平对凡纳滨对虾溶菌酶 - 和 $ % 受体 - 表达的影响尚未见报道本文研究了饲料中不同锌添加水平对凡纳滨对虾体内锌蓄积的影响同时检测了对虾 $ % 受体基因和溶菌酶基因的表达水平以及溶菌酶活性和超氧化物歧化酶 ';$D/4 4/ -':. 活性并对不同水平锌饲料处理的对虾进行了弧菌人工急性感染试验旨在探讨饲料锌水平对虾类的免疫抗病机能的影响为虾类营养免疫学及安全水产品生产提供理论依据材料与方法试验饲料的制作及凡纳滨对虾的饲养试验用饲料原料购自上海农好饲料有限公司蛋氨酸锌购自上海华亭化工有限公司根据凡纳滨对虾的营养需求设计基础饲料配方如表实验饲料设个处理分别在基础饲料中添加 -7 C )>7 饲料的蛋氨酸锌将过目筛的各实验饲料原料按配方用逐级扩大法混合均匀加工成 & 8& -- 的颗粒置于 ( < 冰柜中保存备用试验用对虾取自上海青浦练塘渔珠场的一凡纳滨对虾养殖塘挑选规格整齐 J &( 0- 活力好的幼虾 ( 尾转移到个同一水池的网箱中每箱放养虾尾以基础饲料适应性养殖一周后分别投喂种试验饲料每种饲料设个平行养殖期间连续充气水温 J < 每日投喂种试验饲料 ( 次日投喂率约为体重的 2 养殖期间保持水体氨氮 & -7 ) ; & J& 表试验用基础饲料配方及营养组成 & % #; $% '#$ #% # #" %&"#$%"# ; $% 原料名称 / 74/: 菜籽粕.;4 47 配比 )2.:/$ 原料名称 / 74/: 配比 )2.:/$ 酵母. : 鱼粉 / 1-.% 磷脂油 % 0/:1/ 面粉?1.: %$' 大豆粕 $ 6. -.% 花生粕 ;. ':-.% 甜菜碱 $D ' / 大豆油 $ 6. $/% 鱼油 / 1 $/% & 氯化胆碱 01$%/01%$ /4 虾糠 1 /-; 6. 不含锌复合矿物质 -/.%-/D:' 复合维生素 /:.-/ -/D:' & & & 胆固醇 01$%:$% & & 营养组成 #; $% '#$ #% # = * %*&% 粗蛋白 0 '4 ; $: / 粗脂肪 0 '4.: (& J &( &( J & 水分 -$/ :' 灰分. 1 & J & J & 注复合矿物元素的配方 7 )>7". * ( &."% * ( 7 ( ( ( & ( &&. &"$"% & 复合维生素采用商品对虾多维 $: /.%-/D:'0$/ : 4 $ 4/ : 7 )>7". * ( &."% * ( 7 ( ( ( & ( &&. &"$"% & 0$--0/.%0$-;$' 4 /:.-/ ;-/D& 样品的采集用实验饲料养殖 ( 4 后每箱随机取尾虾分别抽取血淋巴液去壳取其肌肉和肝胰腺 < 保存分别用于测定溶菌酶和活性以及锌含量同时取对虾鳃组织置于液氮速冻后转移至 < 保存用于测定鳃组织中 $ % 受体 - 和溶菌酶 - 表达情况饲料肌肉和肝胰腺组织中锌含量的测定将肝胰腺肌肉及饲料烘干至恒重后取适量放入消化管中加硝酸与高氯酸混合液 (H - 加热消解至溶液清亮透明再加 8 - 的蒸馏水继续蒸煮 -/ 去除样品液中的硝酸冷却后定容至 - 的容量瓶中待测以不加样品的空白消解液作空白对照用原子吸收分光光度法测定锌含量每个样品平行测定次溶藻弧菌, 人工急性感染试验养殖实验 ( 4 之后从各箱中分别挑取处于蜕

3 期郭腾飞等饲料锌添加水平对凡纳滨对虾免疫抗菌机能和溶菌酶 - 及 $ % 受体 - 表达的影响皮间期的对虾尾每尾幼虾从尾部腹肌分别注射浓度为 & ")- 的溶藻弧菌菌液以注射无菌生理盐水组摄食商品饲料为阴性对照注射后分别暂养在个水族箱中攻毒后 ( 1 内连续观察并统计对虾死亡情况 + 溶菌酶? 和超氧化物歧化酶 6, 活性测定将待测样品置于冰水浴中加入倍体积 *+; 为 ( 匀浆匀浆液经 )-/ 离心 -/ 取上清液 ( < 保存用于 C 活性和活性测定溶菌酶活性测定参照黄旭雄等的方法进行活性测定采用南京建成生物工程研究所的试剂盒进行以标准蛋白为参照使用南京建成考马斯亮蓝试剂盒直接测定匀浆液的蛋白浓度 # 受体 $0)- 和溶菌酶 $0)- 的表达检测将 < 冻存的对虾鳃组织用 /A$% 按试剂盒... 说明书提取总所提取的的 - ) - 值为 & 8& 参照凡纳滨对虾 $ % 受体基因 3+. > 9 ((& 和溶菌酶基因 3+. > E 设计了荧光定量引物同时设计,.0:/ 引物作为内标所有引物均由上海生工生物技术有限公司合成表采用荧光定量 *" 方法检测按照 E+ * -/ 0 /;:,*" /: 说明书将提出的总先反转录为 0 再采用 E+ 3 嵌合荧光法进行.%,:/- *" 反应 *" 程序为 < 一个循环 < < 共个循环 < 熔解曲线检测反应特异性每个复孔设置参照基因 :! 根据 : 计算法进行相对定量分析鳃中溶菌酶 - 和 $ % 受体 - 的相对表达量表凡纳滨对虾溶菌酶目的基因 # 受体基因与 - 参照基因引物序列. $"# #( $ # '%# -"# 引物 ; /- :!,9 :!,9 $A -,9 $A -,9 $ %0 ;:$,9 $ %0 ;:$,9 序列 '0 "3"3 "" " " 3 """ " "333 "" "" 3"3 3""3" 33 ""33 3"" """ 33" """ " 3"" 3 "3" 数据统计试验结果用平均数 J 标准差表示使用 * & 分析软件对数据进行单因素方差分析 ' 0. 氏法进行多重比较检验处理间的差异显著性结果饲料锌添加量对养殖凡纳滨对虾组织中锌蓄积的影响蛋氨酸锌添加量为时饲料中锌的水平为 -7 )>7 随着蛋氨酸锌添加量的增加饲料中锌含量的成比例显著升高表饲料锌水平显著影响养殖凡纳滨对虾的肝胰腺和肌肉的锌含量对虾组织中的锌含量随饲料锌水平的增加而显著增加锌在对虾肝胰腺中的蓄积量明显高于其在肌肉中的蓄积量表不同饲料中锌含量及其饲喂后凡纳滨对虾肌肉和肝胰腺中锌含量 & '# %% #"(' " %" $' #" *& '& % % * %&%& " 组别 7 $'; 饲料锌含量 0$ ::$ A/ 0/ 4 肌肉锌含量 0$ ::$ A/ 0/ -' 0% 肝胰腺锌含量 0$ ::$ A/ 0/ 1 ;.:$;. 0. J&(. J&. &( J. & J& 6 &( J(& 6 & J& 6 (&( J& 0 & J(& 0 J(& 0 注同一列中不同的上标字母表示差异性显著 $:./ :1.- 0$%'-?/:1.4/ : '; 0 /;:% : / 4/0.: 4/ 0.:& 饲料锌添加水平对凡纳滨对虾肌肉肝胰腺和血淋巴 6, 和溶菌酶活性的影响随着饲料锌添加量的增高肌肉肝胰腺血淋巴中溶菌酶活性先升高后下降趋势添加 -7 C )>7 组显著高于未添加锌组但是与添加 -7 C )>7 组无显著差异表 ( 活性也随饲料锌添加量的增加而升高肌肉活性在未添加锌组和添加 -7 C )>7 组之间无显著差异两者皆显著低于 -7 C ) >7 组肝胰腺和血淋巴中活性在 -7 C )>7 组和 -7 C )>7 组显著高于未添加锌组 -7 C )>7 组和 -7 C )>7 组差异不显著表 (

4 水产学报卷表不同锌添加水平饲料喂养的凡纳滨对虾肌肉肝胰腺和血液的 6, 和溶菌酶活性 " '% #"('$%% # #""#6, #( $ '% %%#'& $#$ $'#" % % * %&%& " 8@$ #% 组别 7 $'; 溶菌酶比活力 %$A -.0:/ /: 肌肉 -' 0% 肝胰腺 1 ;.:$;. 0. 血淋巴 1. -$% -;1 肌肉 -' 0% 比活.0:/ /: 肝胰腺血淋巴 1 ;.:$; $% -;1 & J& (. (& J&. (& J&. & J&. (& J&. & J&. (& J&( 6 & J&( 6 J& ( 6 (&( J&. ( J&( 6 &( J& 6 & J&.6 (&( J&.6 & J&.6 &( J& 6 ( J& 6 & J& 6 注同一列中不同的上标字母表示差异性显著 $:./ :1.- 0$%'-?/:1 4/ : '; 0 /;:% : / 4/0.: 4/ 0.:& 饲料锌添加水平对凡纳滨对虾 # 受体 $0)- 和溶菌酶 $0)- 表达的影响饲料锌添加水平对凡纳滨对虾溶菌酶 - 和 $ % 受体 - 表达水平有显著影响随着饲料锌水平升高鳃组织中溶菌酶 - 和 $ % 受体 - 表达水平出现先上调后下调的趋势图添加 -7 C )>7 组溶菌酶 - 表达水平比未添加锌组显著提高了 2 添加 -7 C )>7 组和未添加锌组没有显著性差异添加 -7 C )>7 组和添加 -7 C )>7 组 $ % 受体 - 表水平分别比未添加锌组显著提高了 (2 和 2 但添加 -7 C )>7 组 $ % 受体 - 表水平比添加 -7 C )>7 组显著降低了 2 生理盐水后 ( 1 内的累积死亡率为 &2 而其他组 ( 1 内累计死亡率皆为 2 添加 -7 C )>7 组累计死亡率在第小时为 2 而未添加组为 &2 添加 -7 C )>7 组为 2 图添加 -7 C )>7 组全致死时间和半致死时间均高于未添加锌组和添加 -7 C )>7 组图图摄食不同锌添加水平饲料的凡纳滨对虾人工急性感染溶藻弧菌后的死亡曲线 1" '% #"('$%% # #""# ' $% % "% " '% * %&, 图饲喂不同锌添加量的凡纳滨对虾鳃组织中溶菌酶 $0)- 和 # 受体 $0)- 相对表达不同上标字母表示差异性显著 1#( $ $0)- # '%#$0)- ;# #"%&& $ " * %& " %('$%% # #"" #.%'?/:1.4/ : '; 0 /;:% :/ 4/0.: 4/ 0.: & 溶藻弧菌人工急性感染后全致死时间和半致死时间在急性感染溶藻弧菌后阴性对照组在注射图摄食不同锌添加水平饲料的凡纳滨对虾人工急性感染溶藻弧菌后的半致死时间和全致死时间 1 & " '#$ % %& % $ #"%& $ "" %('$%% # #" ""% " '% * %&,

5 期郭腾飞等饲料锌添加水平对凡纳滨对虾免疫抗菌机能和溶菌酶 - 及 $ % 受体 - 表达的影响讨论锌是动物的必需微量营养元素人食物中含锌的最高允许量为 ( 8-7 )>7 畜禽的饲料中最适含量为 8-7 )>7 动物饲料锌含量过高过低都会出现不良反应 ( 对鱼类饲料中最适宜锌含量报道也很多不同鱼类最适宜锌含量不相同在对虾饲料中最适宜锌含量研究结果各不相同杨原志等认为凡纳滨对虾饲料中蛋氨酸锌添加量为 ( 8-7 )>7 时可满足需要硫酸锌添加量在 -7 )>7 时效果最好过高和过低会导致生长变慢过高会导致锌中毒血淋巴中酚氧化酶活性降低等发现斑节对虾增重率随着饲料锌添加量增加而增加在饲料锌水平为 8( -7 )>7 时增长率和非特异性免疫最好饲料锌含量过高和过低时生长受阻导致血细胞密度降低和活性降低 # 等报道纯日粮中锌添加量大于或等于 -7 )>7 时凡纳滨对虾增重最快锌添加量大于 -7 )>7 时才能克服饲料中植酸的不良影响刘发义等认为尽管添加锌对中国对虾没有明显的促生长作用饲料中添加适量的锌仍较好其添加量为 8-7 )>7 为宜饲料锌含量过高会造成动物锌中毒和环境污染锌缺乏会导致生长受阻本研究的结果表明饲料中的锌水平显著影响养殖凡纳滨对虾肝胰腺和肌肉中锌的蓄积量对虾组织中锌的蓄积水平随其所摄食饲料锌水平的增加而升高等报道了斑节对虾!! -! 肝胰腺和全身锌含量随着所摄取饲料的锌水平升高而增加杨原志等报道了凡纳滨对虾肌肉中锌含量随着饲料锌水平增加而呈现升高的趋势但肝胰腺中锌含量会随着饲料锌水平增加而显著升高 5 等将凡纳滨对虾养殖在不同锌水平水体中发现肝胰腺中锌浓度随水体锌浓度升高而显著升高而肌肉中升高不显著本研究的结果还表明饲料中的锌在对虾不同组织中的蓄积程度不同肝胰腺中锌的蓄积量明显比肌肉中高阮金山等发现锌在长毛对虾!! 体内的蓄积分布存在组织差异性肝胰腺蓄积量最高鳃和肠次之肌肉最低外壳次低饲料锌在对虾肌肉及肝胰腺中蓄积量的差异与肝胰腺的生理功能密切相关肝胰腺是对虾重要的消化器官同时还是机体消化吸收的营养物质在体内转化和贮存的重要器官此外还是机体有毒物质重要的分解器官当锌摄入不足时肝胰腺中蓄积的锌释放出来满足机体新陈代谢需要当摄入过量时锌可以通过在肝胰腺中的积累而降低它的整体毒性肝胰腺在此发挥解毒功能锌是机体体内多种金属酶的组成成分或激活因子参与机体许多生理生化代谢过程锌也是超氧化物歧化酶的重要组成部分是机体重要的抗氧化酶能消除体内自由基当活性降低时生物体内自由基过多势必扰乱破坏一些重要的生化过程导致代谢紊乱生理功能失 ( 调及免疫机能下降李光友等研究表明溶解氧 ; 温度重金属等都会使水生生物体内活性发生显著变化俞亚东等研究表明 C = 影响罗氏沼虾鳃中活性随着水体中 C = 浓度的升高鳃中活性先升高超过最佳浓度后开始下降本研究发现饲料锌水平显著影响虾组织中活性随着饲料中锌水平提高虾肌肉肝胰腺和血淋巴中酶活性也随之显著升高摄食未添加蛋氨酸锌组饲料的对虾血淋巴和肝胰腺中活性显著降低暗示低锌可能抑制了超氧化物歧化酶正常表达或使其活性受阻而摄食 -7 C )>7 组和 -7 C )>7 组饲料的凡纳滨对虾血液和肝胰腺中活性差异不显著其原因一方面可能是过量锌蓄积降低了对虾体内超氧根离子的产生而间接降低了活性等研究发现饲料中锌水平为 8( -7 C )>7 时养殖斑节对虾体内超氧根离子水平最高过高或过低的饲料锌水平均会降低对虾体内超氧根离子水平超氧根离子具有杀菌作用但过多的超氧根离子在杀菌的同时也会对自身的组织产生破坏作用因此机体必须动用包括在内的抗氧化防御机制有效地控制和清除多余的氧自由基另一方面也可能是过高的锌蓄积诱导锌指蛋白负调控抑制基因的表达溶菌酶能破坏细菌细胞壁是对虾免疫防御体系重要组成部分凡纳滨对虾溶菌酶基因全长序列已见报道对虾在感染哈维氏弧菌 3 溶藻弧菌后其溶菌酶基因的表达会显著上调 ( 本研究表明饲料锌水平显

6 水产学报卷著影响凡纳滨对虾组织溶菌酶活力和鳃组织中溶菌酶基因 - 表达量无论是溶菌酶活性还是溶菌酶基因 - 表达量均在摄食添加 -7 C )>7 组饲料的对虾中得到显著增强或上调无脊椎动物受微生物入侵时机体借助 *3 *, 和 3 +*, 复合物与病原微生物上病原相关的分子模式 ;.:1$7,. $0/.: 4 -$% 0'%. ;.: ** 结合后激活 ;.:A% 蛋白被活化的 ;.:A% 蛋白与 $ % 受体结合将异物入侵的信号从胞外传递到胞内从而引起胞内信号级联反应释放出类似于,>+ 样蛋白的核转录因子进入细胞核调节抗菌肽基因的表达因此对虾 $ % 受体基因的表达水平在一定程度上可以反映机体异物入侵信号能否及时传递并产生相应免疫反应多种对虾体内的 $ % 受体基因已 ( 得到研究 ( E3 等研究表明凡纳滨对虾 $ % 受体在血细胞及鳃中的表达量高其次是血淋巴而肠肌肉及肝胰脏中的表达水平较低凡纳滨对虾 $ % 受体不参与独立双链病毒免疫反应但弧菌感染之后 $ % 受体的表达 ( 能升高 ( 表明凡纳滨对虾 $ % 受体参与细菌感染的机体免疫反应本研究中饲料锌水平为 & -7 )>7 蛋氨酸锌添加量 -7 C )>7 时 $ % 受体表达量显著高于高锌和低锌组表明饲料中的锌水平会影响凡纳滨对虾细胞免疫反应中异物入侵信号的传递 $ % 受体介导的免疫反应必须受到严格的调控持续激活状态可长时间高表达免疫细胞的效应因子导致机体产生慢性炎症自身免疫紊乱和其他免疫相关疾病正常生理状态下机体存在着多种 $ % 受体的负调控机制以维持免疫反应的平衡抑制性锌指蛋白是参与 $ % 受体调控的重要蛋白锌指蛋白过度升高或降低可以负调控, + 样蛋白的核转录因子的过度 ( 活化从而负调控免疫基因转录本研究中与添加 -7 C )>7 组相比添加 -7 C )>7 组和 -7 C )>7 组对虾溶菌酶基因和 $ % 受体基因表达相对下调推测其机制可能与锌指蛋白相关用溶藻弧菌人工急性感染试验凡纳滨对虾阴性对照组 ( 1 内一直维持在 &2 尽管因攻毒剂量及细菌毒力等原因各试验组在感染后 ( 1 内均出现了 2 的死亡但死亡的进程 2 致死时间和 2 致死时间表明摄食 -7 C ) >7 组饲料的凡纳滨对虾表现出相对强的抗弧菌能力其抗菌能力与检测的溶菌酶活性溶菌酶基因 - 表达量和 $ % 受体 - 表达量变化相吻合综上所述饲料中锌添加水平对凡纳滨对虾的免疫抗病机能及 $ % 受体 - 和溶菌酶 - 表达具有显著影响相比未添加锌组饲料和添加 -7 C )>7 组饲料凡纳滨对虾的免疫抗病机能在摄取添加 -7 C )>7 饲料锌含量在 & -7 )>7 饲料时得到改善 $ % 受体 - 和溶菌酶 - 表达量最高参考文献艾春香陈立侨刘晓玲等 & 维生素 " 对中华绒螯蟹非特异性免疫的影响水产学报 ( 冯伟李健李吉涛等 &#0 对中国对虾非特异免疫因子及 ),+ 表达量的影响水产学报 &!! E&#/:.-/! '/-: $ ' /% 7.1 /-;!! -!. 4 0: $ $, ; 0/ /0 /--' ;$ / 1 1 % / 1 --' $%$7 ( ( ( ( "! E *" + & 1/ :. 0 :$ ;1/0.% : 6!! -! ' /%4 4/ : ';;% -: 4?/:1. :.D. :1/ '.0'%:' & 53E"" 3*"! E& / :/.% :/-, / D; /$ $ /--',%.: 4 7$ *.0/ /0?1/: 1 /-;,!!! / ;$ :$ 4/ :. / 0%' /$ $,,7%'0. / 1 1 % / 1 --' $%$7( 3BBC 9C 3 & 10:$. 7. '- ' / $ - ;$%.001. /4 D:.0: $ /6 /$ / / : /--'.0:/ /: $ :1 1 /-;!!!!! / 1 1 % / 1 --' $%$7 汪小锋樊廷俊丛日山等 & 几种免疫促进剂对中国对虾血细胞数量形态结构以及酚氧化酶产量和活性的影响水产学报 (& 苏永腾刘波周群兰等 & 大黄蒽醌提取物对罗氏沼虾抗鳗弧菌感染的研究水产学报 ( ( (& 赵红霞曹俊明周萌等 & 二甲基丙酸噻亭对凡纳

7 期郭腾飞等饲料锌添加水平对凡纳滨对虾免疫抗菌机能和溶菌酶 - 及 $ % 受体 - 表达的影响滨对虾幼虾生长蜕壳和渗透调节的影响水产学报 (( (& 陈乃松魏涛涛廖奕招 & 蝇蛆粉和葡聚糖对凡纳滨对虾生长和免疫的影响水产学报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黄旭雄周洪琪宋理平 & 急性感染对中国明对虾非特异免疫水平的影响水生生物学报 *!!N3!* & 0:/.:/$ $ :$ %4' / 7 ' 7.%/ 0:/$ 6.6%$$4 /; $:. 0/0 ( & 1 /--' ;$ $.:'( &! $ %0 ;:$/ /.: /--' /: 4 / " %+/$%$7 ( E3 E C B B $ % 0 ;:$ / 1 /-; $% 0'%. --' $%$7 (( 黄旭雄周洪琪 & 不同规格中国明对虾的非特异性免疫水平 & 上海水产大学学报 & ( 丁小波文利新牛同利 & 微量元素锌的毒性研究 & 微量元素与健康研究 (( & 张佳明艾庆辉麦康森等 & 大黄鱼幼鱼对饲料中的锌需要量水产学报 ( (& 崔立娇张利民王际英等 & 饲料锌水平对星斑川鲽幼鱼生长组织积累和抗氧化功能的影响 & 水产学报 ( ( ( 杨原志董晓慧 & 锌源对凡纳滨对虾生长免疫的影响 & 大连水产学院学报 (& E3 "& / :. A/ 0 '/-: $ 7.1 /-;!! -!. 4 0: $ /--' ;$ '.0'%:' ( ( ( #5! "!!.%'.:/$ $ :1 4/ :. A/ 0 '/-:$!!!. 4 0: $ ;1 :/0.0/4 $ A/ 0. 4 ;1$ ;1$ ' 6/$../%.6/%/:$'.%$ :1 5$ %4 '.0'%:' $0/ : (( (& 刘发义李荷芳 & 中国对虾矿物质营养的研究海洋科学 ( 5 * "! " 3 & / :$;.:1$%$7/0.%. 4 6/$01 -/0.% /40 $ 1 ;.:$;. 0.:/0:$D/0/: 0.' /'-. 4 A/ 0/ :1?1/:1 /-;,!!! "1 -$ ;1 & 阮金山黄美珍 & 锌在长毛对虾体内的积累分布和排出的研究 & 福建水产 & "" 3"!!" ' 0:/$ / - $ A/ 0- :.%$A - $'.% $': /:/$ ( (( ( 李光友 & 中国对虾疾病与免疫机制海洋科学 ( 俞亚东许燕杨洁 &"' = C = 对罗氏沼虾鳃中同工酶的影响 & 上海师范大学学报 & 5 " 9& $% 0'%. 0%$ / :/A.:/$D; /$. 4. :/6.0:/.%..%/ $. %$A - 1$-$%$7' $-!!! *!& $% 0'%. +/$%$7 ;$ :!,,!,,!,#!3! 0 0%$ / 7 $ :1 %$A - $ :1?1/:1 /-;!!! & / 1 1 % / 1 --' $%$7 ( "1..0:/A.:/$. 4 ' 0:/$ $ >' '-. 1 /-;

8 水产学报卷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孙冰韩代书 & $ % 样受体信号通路的负调控生物化学与生物物理进展 (! E / 1/6/:$ 0:$ $, +.0:/.:/$ /./?. ;/:1 %/'- ';$ /%'A. / ' / 0:/$ &!' $;. $'.%$ *1. -.0$%$7( (& (!E" +!E! 1 0 :$>/, / 4'0/6% A/ 0 / 7; $: / / 1/6/:,, / 4'0 4, +.0:/.:/$.::1 % %$&!+: (((! +! 3! #!E" ' 0:/$.%4' 4. 0 $ :1 A/ 0 / 7 $ $ / 1/6/:/$ $, +.0:/.:/$. 4 ; $: /, ; $: / / :.0:/$&!+:(

9 期郭腾飞等饲料锌添加水平对凡纳滨对虾免疫抗菌机能和溶菌酶 - 及 $ % 受体 - 表达的影响 " '% #"('$%% # %# %&$$ % 7# % % %#( $ $0)- # '%#$0)- ;# %& *& %& $! 37,/ 3B',D/$ 7 / 7 535',7. 7 B/. 7, ' *. E/., / O. 3C17,A17 &$'!$ 7 0! * "!! 5!/! 1 "#!$!$ 7*! 4$7!!!, 0 2!! - %'%!D;/-:? 0$ 4'0: 4 :$ :'4 :10: $ 4/ :. A/ 0 ';;% -:.:/$ $ :1 /--' 7D; /$. 4 /--' /:. 4 4/., / :. :.6/%/: $?1/:1 /-;,!!! 1 1 /-;? 4?/:1 A/ 0- :1/$ /4/ : ';;% -: 4.: -7 C )>7 4/ : ; 0:/% ; 0:/% $ ( 4.& 1 :1D; /$$$ %0 ;:$ -. 4 %$A - - / 7/%. 4 ';$D/4 4/ -':..0:/ /:. 4 %$A - C.0:/ /: / 1 ;.:$;. 0. -' 0% $% -;1?..4 ; 0:/% 11 /-; :.: 4?/:1 4/ :A/ 04/ :?.% $ 01.%7 4?/:1 3 *! 1'%:1$? 4 :1.::1 A/ 0% % / 1 ;.:$; ' 0% $1 /-; /7 / /0. :% / 0.4. :1 4/ :. A/ 0/ 0.4&51/% :1 1 ;.:$; '-'%.: 4 -$ A/ 0:1. -' 0%"$-;.4 :$ :1$$ :11 /-; / -7 C )> C )>7 :.:-: :1 D; /$$$ %0 ;:$ -. 4 %$A - - / 7/%$ :11 /-; / -7 C )>7 :.:-:?/7 / /0. :% ';,7'%.: 4& 1 %$A -.0:/ /:// -' 0% 1 ;.:$; $% -;1 $ :1 1 /-; / -7 C )>7 :.:-:?/7 / /0. :% 1/71:1. :1$/ -7 C )>7 :.:-:& 1.0:/ /:// 1 ;.:$; $% -;1 $ :11 /-; / -7 C )> C )>7 :.:-:?.% $ 1/71:1. :1$/ -7 C )>7 :.:-: &51/% :1.0:/ /: / -' 0% $ :11 /-; :.: 4?/:1-7 C )>7?./7 / /0. :% 1/71:1. :1$:.: 4?/:1-7 C )> C )>7 ; 0:/% 1 1.% % :1.%:/-. 4 0$-;% : % :1.%:/-$ :11 /-; / -7 C )>7 :.:-:? %$ 7:1. :1$/ -7 C )> C )>7 :.:-:. :6 / 7 01.%7 4?/:1 3 *!:/ :1$ '77: 4 :1.:0$-;.4 :$ :1$/ -7 C )> C )>7 :.:-: :11 /-; 4 :1 4/ : C )>7:1 0$ ::$ A/ 0/ 4/ :?. -7 C )>7 1.4 /-; $4 /--' /:. 4 3, / :. :.6/%/: *#,!!! A/ 0 - :1/$ / $ % 0 ;:$ - %$A - - %$A - /# # %&# 3B',D/$ 7&!,-./%DD1'. 71$'& 4'&0

材料! 方法! # 基因的扩增及其序列分析

材料! 方法! # 基因的扩增及其序列分析生物技术通报黄艳燕黄靖华卢福芝孙靓彭立新周兴黄日波利用的方法从鼠李糖乳杆菌基因组中扩增到乳酸脱氢酶基因并连接到载体上构建表达质粒将重组质粒转化大肠杆菌重组菌株经诱导表达电泳分析表明在大肠杆菌中实现了表达表达产物的分子量约为同时采用紫外分光光度法测定乳酸脱氢酶的酶活测得重组菌株的乳酸脱氢酶活力为最适反应温度为最适乳酸脱氢酶克隆表达鼠李糖乳杆菌