210 生物技术通报 Biotechnology Bulletin 2015,Vol.31,No.1 本沼虾产业的发展在我国一些水产养殖地区, 均不同程度地暴发链球菌病, 给水产养殖业造成了严重的经济损失大连某养殖场发生过对虾链球菌病, 造成了严重的经济损失 [2] 近年来, 广东地区也出现南美

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亶蚊柯
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1 研究报告生物技术通报 BIOTECHNOLOGY BULLETIN 2015, 31(1): 停乳链球菌对日本沼虾总超氧化物歧化酶活性的影响 1,2 赵卫红 3 张凤英 1,2 於叶兵 1 王资生 1 齐志涛 (1. 盐城工学院海洋与生物工程学院, 盐城 ;2. 江苏省沿海池塘养殖重点实验室, 盐城 ;3. 中国水产科学研究院东海水产研究所, 上海 ) 摘要 : 对健康的日本沼虾 (1.40 ± 0.12)g 分别肌肉注射 CFU/mL 的停乳链球菌菌液 10 μl, 注射后 3 h 6 h 9 h 12 h 24 h 5 d 10 d 分别采集肝胰腺肌肉和鳃组织, 测定其中的总超氧化物歧化酶 (T-SOD) 活性, 研究停乳链球菌对日本沼虾 T-SOD 活性的影响研究结果显示, 肝胰腺中 T-SOD 活性于注射 5 d 后达到最大值 (P < 0.05), 10 d 后和 CFU/mL 组 T-SOD 活性下降并接近对照组水平, 而最高浓度组 ( CFU/mL)T-SOD 酶活性仅有对照组的 46% 肌肉和鳃中 T-SOD 活性均在注射 6 h 后达到最大值, 注射 10 d 后, 和 CFU/mL 组的肌肉和 CFU/mL 组的鳃组织中 T-SOD 活性均仅有对照组的 50% 左右另外, 肌肉组织中 T-SOD 的峰值远高于鳃和肝胰腺组织中的峰值上述结果表明, 停乳链球菌不仅影响日本沼虾机体 T-SOD 酶的活性, 而且肌肉鳃和肝胰腺组织中酶的活性应答时间不同, 且组织内酶活性的应答与菌的感染方式有关, 另外, 注射高浓度停乳链球菌长时间后会降低其组织中 T-SOD 酶活性关键词 : 停乳链球菌 ; 日本沼虾 ; 总超氧化物歧化酶 DOI : /j.cnki.biotech.bull Effect of Streptococcus dysgalactiae equisimilis on Total SOD Activity in Macrobrachium nipponense Zhao Weihong 1,2 Zhang Fengying 3 Yu Yebing 1,2 Wang Zisheng 1,2 Qi Zhitao 1 (1. School of Marine and Bioengineering,Yancheng Institute of Technology,Yancheng ;2. Jiangsu Provincial Key Laboratory of Coastal Pond Aquaculture Ecology,Yancheng, ;3. East China Sea Fisheries Research Institute,Chinese Academy of Fishery Science, Shanghai ) Abstract: Total superoxide dismutase(t-sod)activities were investigated in hepatopancreas, muscle and gill of Macrobrachium nipponense at 3 h, 6 h, 9 h, 12 h, 24 h, 5 d and 10 d after being challenged by Streptococcus dysgalactiae equisimilis at levels of , , or CFU/mL in this study. Results showed that activity of T-SOD in hepatopancreas of the prawn reached the maximum at 5 d after infection. The values in muscle and gill reached to a maximum at 6 h. The activities of T-SOD in the hepatopancreas and gill of prawns infected with CFU/mL bacteria, in the muscle of prawns infected with or CFU/mL bacteria at 10 d decreased to about half of that in the control group. And the maximum in muscles was higher than those in hepatopancreas and gills. The results showed that Streptococcus dysgalactiae equisimilis could affect the activity of SOD in M. nipponense, and the response of the prawn to the bacteria was different in hepatopancreas, muscle and gill. Key words: Streptococcus dysgalactiae equisimilis ;Macrobrachium nipponense ;total superoxide dismutase(t-sod) 日本沼虾 (Macrobrachium nipponense) 是我国重要的淡水养殖经济品种, 具有较高的食用价值和经济价值, 并具有潜在的药用价值 [1], 一直以来为人们所喜爱近年来, 随着人工化养殖技术的快速发展, 规模化高密度养殖模式的普及, 水产动物间病原体交叉感染严重, 细菌病等疾病的暴发制约着日收稿日期 : 基金项目 : 国家自然科学基金项目 ( ), 江苏省自然科学基金资助项目 (BK ,BK ) 作者简介 : 赵卫红, 女, 副教授, 博士, 研究方向 : 水产经济动物繁殖生理与营养 ; misszwh@163.com 通讯作者 : 张凤英, 女, 副研究员, 研究方向 : 水产生物遗传育种 ; zhangfy76@126.com

2 210 生物技术通报 Biotechnology Bulletin 2015,Vol.31,No.1 本沼虾产业的发展在我国一些水产养殖地区, 均不同程度地暴发链球菌病, 给水产养殖业造成了严重的经济损失大连某养殖场发生过对虾链球菌病, 造成了严重的经济损失 [2] 近年来, 广东地区也出现南美白对虾感染链球菌病例虽然未见日本沼虾养殖中链球菌病大规模爆发的报道, 但是在本课题组的前期研究中发现, 链球菌同样对日本沼虾具有感染致死作用因此, 研究链球菌对日本沼虾免疫机能的影响对防范该菌在虾类养殖中的大规模爆发, 进一步探讨甲壳动物的免疫机制有着十分现实的意义超氧化物歧化酶 (SOD) 是细胞内最有效的抗氧化酶之一, 是生物体内清除活性氧从而保护机体组织的第一道防线 [3] 超氧化物歧化酶(SOD) 广泛存在于细菌真菌植物和动物等生物体内 [4], 它以多种形式存在, 主要有锰超氧化物歧化酶 (Mn- SOD) 铁超氧化物歧化酶(Fe-SOD) 和铜锌超氧化物歧化酶 (CuZn-SOD) [5], 这些 SOD 统称为总 SOD (T-SOD) SOD 在抵抗各种应激因子上具有重要作用, 如细菌 [6] 病毒 [7] [8] [9] 有毒化学物质和热刺激等 SOD 可作为水产动物免疫机能的一个生物标记, 其活性大小是衡量生物体免疫活性强弱的一个非常重要的参考指标 [10] 本研究主要通过研究日本沼虾感染停乳链球菌情况下其肝胰腺肌肉和鳃中 T-SOD 活性的变化, 为甲壳动物抵抗病菌感染能力以及免疫调节机能的生理和分子机制提供相关的科学依据 1 材料与方法 1.1 材料试验虾 2013 年 3 月, 于盐城通渝河购买日本沼虾, 以新鲜的碎河蚌肉为饵料 ( 投饵率 4%-5%), 上午 7 00 下午 6 00 的投饵量分别占日投饵量的 40% 和 60%, 实验室暂养 1 周后挑选活力好规格整齐 (1.40 ± 0.12)g 的健康个体作为实验虾试验期间,24 h 供氧, 水温稳定在 19 左右, 水质良好停乳链球菌的获得停乳链球菌 (Streptococcus dysgalactiae equisimilis) 由中国科学院水生生物研究所淡水生态和生物技术国家重点实验室的李爱华研究员提供, 来源于得病的鲟鱼 (Sturgeon sp.), 从 10 条患病的鲟鱼体内分离获得, 通过生理生化特性和分子鉴定确认 1.2 方法不同浓度停乳链球菌活菌的注射本试验分为四组, 每组分别注射 CFU 停乳链球菌活菌 10 μl, 对照组注射同等剂量的 PBS(0.1 mol/l,ph 7.0), 每组 3 个平行, 每个平行 60 尾虾在第 2 腹甲和第 3 腹甲之间与身体呈 45 角肌肉处进行注射, 注射剂量 10 μl 日本沼虾组织的提取与处理取样前 24 h 停食, 为了检测链球菌注射后短时间 (24 h 内 ) 和较长时间内虾体 T-SOD 活性的影响, 于注射后 3 h 6 h 9 h 12 h 24 h 5 d 和 10 d 取 5 尾试验虾的肝胰腺肌肉和鳃 -20 保存待测测定时肌肉和鳃按重量体积比加生理盐水制成 10% 的组织匀浆, 肝胰腺制成 5% 的组织匀浆,6 000 r/min 离心 15 min, 上清用于测定其 T-SOD 活性蛋白浓度测定采用南京建成生物工程研究所考马斯亮蓝蛋白测定试剂盒蛋白计算公式如下 : 蛋白浓度 (g/l)=( 测定管 OD 值 - 空白管 OD 值 )/( 标准管 OD 值 - 空白管 OD 值 ) 标准管浓度 (0.563 g/l) T-SOD 活性测定 T-SOD 活性采用南京建成生物工程研究所试剂盒进行测定, 方法为黄嘌呤氧化法 T-SOD 活性定义为每毫克组织蛋白在 1 ml 反应液中 T-SOD 抑制率达 50% 时所对应的 T-SOD 量为一个 T-SOD 活性单位 (U) 依据上面所测的蛋白浓度,T-SOD 活性计算公式如下 : T-SOD 活性 (U/mgprot)=( 对照管吸光度 - 测定管吸光度 )/ 对照管吸光度 /50% 反应液总体积 / 取样量 (ml)/ 待测样本蛋白浓度 (mgprot/ml) 数据处理考虑到注射应激和试验时间等因素对酶活性的影响, 每组酶活性测定均采用试验组酶活性和对照组酶活性的比值, 即试验组酶活性和 PBS 对照组酶活性的比值, 用平均值 ± 标准差 (x - ± s) 形式表示对上述比值采用 SPSS17.0 统计软件和单因素 (One-way) 分析法进行处理用 Duncan 氏多重比较法分析组间差异显著程度, 显著水平为 P < 0.05

3 2015,31(1) 赵卫红等 : 停乳链球菌对日本沼虾总超氧化物歧化酶活性的影响结果 2.1 停乳链球菌对日本沼虾肝胰腺中 T-SOD 活性影响结果显示 ( 表 1), 注射 5 d 后肝胰腺组织中 T-SOD 酶活性在每个浓度组均达到最大值, 均显著高于对照组 (P < 0.05), 且随着注射浓度的增大, T-SOD 活性逐渐增强, 至 CFU/ ml 浓度组肝胰腺中 T-SOD 活性达到最大值 8.99 ± 0.00, 与 CFU/mL CFU/mL 和 CFU/mL 浓度组差异显著 (P < 0.05) 注射 10 d 后肝胰腺中 T-SOD 活性相对于 5 d 显著降低 (P < 0.05), 均低于对照组, 且最高浓度组酶活仅有对照组的 0.46 倍表 1 停乳链球菌对日本沼虾肝胰腺中 T-SOD 活性的影响 3 h 1.17±0.01 cb 1.19±0.00 cdb 1.40±0.01 da 1.37±0.03 ba 6 h 1.04±0.03 cd 2.47±0.23 bb 3.14±0.02 ba 1.60±0.11 bc 9 h 0.79±0.04 ca 0.73±0.04 dea 0.88±0.01 ea 1.02±0.00 ca 12 h 1.03±0.02 cc 1.15±0.06 dc 1.81±0.03 ca 1.46±0.02 bb 24 h 1.35±0.01 bb 1.39±0.08 cb 1.87±0.09 ca 1.14±0.11 cb 5 d 4.06±0.17 ac 5.25±0.08 ab 5.46±0.25 ab 8.99±0.00 aa 10 d 0.78±0.03 ca 0.77±0.00 ea 0.81±0.05 ea 0.46±0.01 db 注 : 表中数字字母上标不同表示差异显著, 其中小写字母表示同列数据之间比较, 大写字母表示同行数据之间比较, 下同 2.2 停乳链球菌对日本沼虾肌肉中 T-SOD 活性的影响从表 2 可以看出, 停乳链球菌注射 6 h 后, 肌肉中 T-SOD 活性均升至峰值, 且 CFU/mL 组活性最强, 显著高于其他各组 (P < 0.05) 和 CFU/mL 组酶活性在 12 h 和 5 d 均显著高于和 CFU/mL 组 (P < 0.05) 与感染 5 d 后相比, 感染 10 d 后肌肉 T-SOD 酶活性, CFU/mL 组显著升高 (P < 0.05), 其他 3 组, 显著下降 (P < 0.05), 且和 CFU/mL 表 2 停乳链球菌对日本沼虾肌肉中 T-SOD 活性的影响 3 h 0.96±0.01 ca 0.84±0.02 ea 0.94±0.04 fa 0.80±0.01 ea 6 h 7.09±0.11 ab 18.54±0.38 aa 6.83±0.23 ab 7.50±0.14 ab 9 h 0.99±0.01 cc 1.36±0.01 db 1.71±0.03 ea 1.73±0.05 da 12 h 2.30±0.09 bb 1.76±0.05 cc 5.43±0.02 ba 5.00±0.02 ba 24 h 1.39±0.24 cc 4.87±0.25 ba 3.82±0.05 cb 1.21±0.05 ec 5 d 0.40±0.05 dd 1.48±0.05 cdc 2.49±0.13 db 3.24±0.04 ca 10 d 1.23±0.03 ca 0.91±0.01 ea 0.47±0.04 gb 0.43±0.02 fb 组酶活性均仅有对照组的一半左右 2.3 停乳链球菌对日本沼虾鳃中 T-SOD 活性影响感染不同浓度停乳链球菌 6 h 后鳃中 T-SOD 活性显著升高, 且均达到峰值 (P < 0.05)( 表 3) 而感染 3 h 24 h 和 5 d 后, 所有感染浓度组之间差异均不显著 (P > 0.05) 感染 9 h 后, CFU/mL 显著低于其它 3 组 (P < 0.05), 感染 12 h 后, 和 CFU/mL 组显著低于其它两组 (P < 0.05) 感染 10 d 后, 最高浓度组 ( CFU/mL) 鳃中 T-SOD 活性降至最低值 0.54 ± 0.01, 约为对照组鳃中 T-SOD 活性的 1/2, 且显著低于其他浓度组 (P < 0.05) 3 讨论 SOD 是体内清除氧自由基最主要的酶, 其活性的高低间接反映了机体清除氧自由基的能力 [11] SOD 活性高低与虾蟹的免疫机能状况密切相关 [12] 本试验结果表明, 注射停乳链球菌对日本沼虾肌肉鳃和肝胰腺中 T-SOD 活性的影响不仅和菌液

4 212 生物技术通报 Biotechnology Bulletin 2015,Vol.31,No.1 表 3 停乳链球菌对日本沼虾鳃中 T-SOD 活性的影响 3 h 1.06±0.02 ba 1.01±0.02 ba 0.99±0.01 cda 1.08±0.02 ca 6 h 2.69±0.08 ab 1.57±0.02 ac 4.83±0.04 aa 4.48±0.29 aa 9 h 0.92±0.01 bb 1.44±0.01 aa 1.32±0.03 ba 1.22±0.00 ba 12 h 1.03±0.00 bb 0.87±0.01 bb 1.29±0.01 ba 1.28±0.01 ba 24 h 0.91±0.00 ba 0.79±0.03 ba 0.86±0.04 da 1.04±0.03 ca 5 d 1.15±0.13 ba 1.40±0.03 aa 1.27±0.35 bcda 1.39±0.02 ba 10 d 1.01±0.00 ba 1.15±0.01 ba 0.82±0.01 db 0.54±0.01 dc 的浓度大小有关, 还与感染时间长短有关如多氯联苯 (PCBs) 刺激剑尾鱼 (Xiphophorus helleri)12 h 内,T-SOD 活性略有上升, 而在 48 h 和 72 h 内, T-SOD 活性显著下降 [13] ; 罗氏沼虾 (Macrobrachium rosenbergii) 受莫格球拟酵母 (Torulopsis) 感染致病后,T-SOD 活性下降 [14] ; 而红螯螯虾感染嗜水气单胞菌 h SOD 活性明显升高 [15] T-SOD 产生如此复杂的变化, 与动物体内相互关联的免疫系统有关作为甲壳动物的日本沼虾, 其免疫系统主要由血淋巴细胞和溶酶体酶组成, 前者包括透明细胞小颗粒细胞和大颗粒细胞, 后者包括 SOD 过氧化氢酶 (CAT) 谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px) 等, 血淋巴细胞的数量和种类会影响溶酶体的酶活, 而且几种溶酶体之间亦有关联感染停乳链球菌 5 d 后日本沼虾肝胰腺中 T-SOD 活性随着感染菌液浓度的升高而增强产生这一结果的原因可能是, 随着感染菌液浓度的增加, 虾体产生的氧自由基随之增加, 作为甲壳动物最主要的免疫器官的肝胰腺, 是清除体内氧自由基的主要器官, 其 T-SOD 活性亦即随之增强另外, 停乳链球菌感染 10 d 后, 在所有低浓度组 ( 和 CFU/mL) 肌肉和鳃中 T-SOD 活性恢复到对照组水平, 原因可能是低浓度感染 10 d 后, 体内活性氧自由基被清除, 机体对停乳链球菌感染入侵产生了应答 ; 而高浓度组 ( CFU/mL) 感染 10 d 后所有组织中 T-SOD 酶活均显著降低, 仅有对照组的 50% 左右在盐度对 SOD 活性影响的研究中同样也发现, 高盐度对 SOD 活性具有抑制作用 [16] 以上结果同时也表明一方面可能是因为日本沼虾抗氧化调节机制是有限度的, 高浓度停乳链球菌长时间感染对机体造成损伤, 引起体内合成代谢受阻,T-SOD 活性下降 [17] ; 另一方面, 可能是日本沼虾体内的部分血细胞的结构与功能遭到破坏和血细胞的寿命缩短等原因, 致使血细胞新生数量减少 [18], 而 SOD 酶主要来自于血细胞, 从而造成 T-SOD 活性下降这与 [19] 王玥等研究报道的氨态氮和亚硝态氮对罗氏沼虾超氧化物歧化酶活性影响结果相符本试验中日本沼虾不同组织 T-SOD 活性有一定差异, 可能是 T-SOD 在日本沼虾中存在一定的组织特异性在青鱼各组织中 SOD 含量大小依次为肝脏鳃丝和肌肉 [20] [21] 孔祥会等报道,T-SOD 活性在锯缘青蟹 (Scylla serrata) 肝胰腺肌肉和鳃中差异 [22] 极显著王伟伟研究发现, 克氏原螯虾中 T-SOD 含量从高到低依次是肝胰腺肌肉和鳃, 日本对虾中 T-SOD 含量从高到低依次是肝胰腺肌肉和鳃, 凡纳滨对虾中 T-SOD 含量从高到低依次是肝胰腺鳃和肌肉这些研究结果表明甲壳动物中 T-SOD 存在组织特异性, 同时验证了本试验观点的合理性另外, 本试验结果显示, 日本沼虾在感染停乳链球菌 6 h 后肌肉和鳃中 T-SOD 活性达到最大值, 而肝胰腺 5 d 后达到最大值产生这样的组织差异可能还因为, 本试验停乳链球菌是通过肌肉注射的, 所以短时间内肌肉中 T-SOD 活性首先被激活增强, 且肌肉中 T-SOD 酶活性峰值最高也就不足为奇了 ; 而鳃由于裸露在外, 是虾体抵御不良刺激的第一道防线, 所以 T-SOD 在鳃中亦快速增加, 从而提高虾体的免疫机能, 而肝胰腺位于体内, 所以其应答时间最长, 其 T-SOD 活性于感染后 5 d 才达到最大值本试验研究了日本沼虾感染停乳链球菌后 T-SOD 的活性变化, 有助于了解链球菌感染对日本沼虾生理生化的影响, 对进一步研究 SOD 在甲壳动物机体中的免疫功能, 以及对甲壳动物健康养殖和

5 2015,31(1) 赵卫红等 : 停乳链球菌对日本沼虾总超氧化物歧化酶活性的影响 213 疾病防治等具有重要的参考价值 4 结论日本沼虾肌肉注射停乳链球菌注射 6 h 后, 肌肉和鳃中 T-SOD 活性均达到最大值, 注射 5 d 后肝胰腺中 T-SOD 活性达到最大值,10 d 后最高浓度组 ( CFU/mL) 肌肉鳃和肝胰腺中和次高浓度组 ( CFU/mL) 肌肉中 T-SOD 酶活性均降至对照组的近一半, 其他各组均逐渐降至对照组水平另外, 肌肉组织中 T-SOD 的峰值远高于鳃和肝胰腺组织中的峰值参考文献 [1] 江辉, 李大高, 向国荣. 日本沼虾的人工养殖 ( 上 )[J/OL]. 湖南农业, 2009 : [2] 杜佳垠. 大连发生养殖对虾链球菌病 [J]. 现代渔业信息, 1989, Z2(5-6):59. [3] 黄旭雄, 周洪琪. 甲壳动物免疫机能的衡量指标及科学评价 [J]. 海洋科学, 2007, 31(7): [4] 田春美, 钟秋平. 超氧化物歧化酶的现状研究进展 [J]. 中国热带医学, 2005, 5(8): [5]Wang M, Su X, Li Y, et al. Cloning and expression of the Mn- SOD gene from Phascolosoma esculenta[j]. Fish & Shellfish Immunology, 2010, 29 : [6]Umasuthan N, Bathig SDNK, Revathy KS, et al. A manganese superoxide dismutase(mnsod)from Ruditapes philippinarum : Comparative structural- and expressional-analysis with copper/zinc superoxide dismutase(cu/znsod)and biochemical analysis of its antioxidant activities[j]. Fish & Shellfish Immunology, 2012, 33 : [7]Zhang Q, Li F, Wang B, et al. The mitochondrial manganese superoxide dismutase gene in Chinese shrimp Fenneropenaeus chinensis :Cloning, distribution and expression[j]. Development of Comparative Immunology, 2007, 31 : [8]Liu K, Zhu X, Wang Q, et al. Copper/zinc superoxide dismutase from the cladoceran Daphnia magna :molecular cloning and expression in response to different acute environmental stressors[j]. Environmental Science & Technology, 2013, 47 : [9]Choi YS, Lee KS, Yoon HJ, et al. Bombus ignitus Cu, Zn superoxide dismutase(sod1):cdna cloning, gene structure, and up-regulation in response to paraquat, temperature stress, or lipopolysaccharide stimulation[j]. Comparative Biochemistry and Physiology B :Biochemistry and Molecular Biology, 2006, 144 : [10]Semedo M, Reis-henriques MA, Rey-salgueiro L, et al. Metal accumulation and oxidative stress biomarkers in octopus(octopus vulgaris)from Northwest Atlantic[J]. Science of the Total Environment, 2012, 433, [11] 刘文珍, 邱德全. 溶藻弧菌对凡纳滨对虾血清中一氧化氮及氧自由基的影响 [J]. 广东海洋学报, 2007, 27(3): [12] 林林, 丁美丽, 孙舰军, 等. 有机污染提高对虾对病原菌敏感性试验 [J]. 海洋学报, 1998, 20(1): [13] 方展强, 张凤君, 等. 多氯联苯对剑尾鱼超氧化物歧化酶活性的影响 [J]. 中国实验动物学报, 2004, 12(2): [14] 蔡完其. 罗氏沼虾莫格球拟酵母病原菌的病理研究 [J]. 水产学报, 1996, 20(1): [15]Liu YT, Chang CI, Hseu JR, et al. Immune responses of prophenoloxidase and cytosolic manganese superoxide dismutase in the freshwater crayfish Cherax quadricarinatus against a virus and bacterium[j]. Molelulor Immunology, 2013, 56(1-2 ): [16] 吕昊泽, 刘健, 陈锦辉, 等. 盐度对缢蛏超氧化物歧化酶和过氧化氢酶活性的影响 [J]. 海洋渔业, 2013, 35(4): [17] 刘洋, 凌去非, 于连洋, 等. 氨氮胁迫对泥鳅不同组织 SOD 和 GSH-PX 活性的影响 [J]. 安徽农业科学, 2011, 39(2): [18] 刘栋辉, 何建国, 刘永坚. 免疫刺激物在虾养殖中的应用和前景 [J]. 广东饲料, 1999, 4 : [19] 王玥, 胡义波, 姜乃澄. 氨态氮亚硝态氮对罗氏沼虾免疫相关酶类的影响 [J]. 浙江大学学报 : 理学版, 2005, 32(6): [20] 赵汉取, 施沁璇, 等. 低浓度 Cd + 胁迫对青鱼组织 SOD 活性和 MT 诱导的影响 [J]. 水生态学杂志, 2014, 35 (2): [21] 孔祥会, 王桂忠, 等. 锯缘青蟹不同器官组织中总抗氧能力和 SOD 活性的比较研究 [J]. 台湾海峡, 2003, 22(4): [22] 王伟伟. 不同虾类超氧化物歧化酶性质的研究 [D]. 保定 : 河北大学, ( 责任编辑李楠 )

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1 2 / 3 1 A (2-1) (2-2) A4 6 A4 7 A4 8 A4 9 A ( () 4 A4, A4 7 ) 1 (2-1) (2-2) () (39mm E-Mail ( )( ), : : 1 1 ( ) 2 2 ( ) 29mm) WSK ( 1 2 / 3 1 A4 2 1 3 (2-1) 2-1 4 (2-2) 2-2 5 A4 6 A4 7 A4 8 A4 9 A4 10 11 ( () 4 A4, 5 6 7 8 A4 7 ) 1 (2-1) (2-2) () 1 2 (2-1) 3 (2-2) 4 5 6 7 (8 ) 9