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艮怀
7 years ago
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1 H7N9 流感檢驗機制及我國合約實驗室量能報告人 : 吳和生主任單位 : 疾病管制局日期 :

2 大綱因應中國 H7N9 人類禽流感疫情實驗室之整備 H7N9 流感病毒檢驗流程中國大陸分讓 H7N9 流感病毒合約 / 指定實驗室檢驗量能我國流感實驗室監測檢驗結果社區流感監測檢驗結果流感併發症流感監測檢驗結果未明原因肺炎檢驗結果 H5N1 調查病例檢驗 H7N9 通報個案檢驗件數統計結果 H7N9 流感病毒基因分析中國大陸公布 H7N9 病毒基因資料台灣第一例境外移入 H7N9 確認個案分離病毒基因資料 2

3 因應中國 H7N9 人類禽流感疫情實驗室之整備 3

4 研檢中心因應作為 3/31: 接獲中國大陸於 3/29 確認 3 例人類感染 H7N9 禽流感病毒病例 4/1: 自 GISAID 資料庫下載 H7N9 流感病毒之全基因序列 4/2: 自行設計針對 H7N9 病毒之全基因定序引子, 比較 H7N9 病毒之 HA NA 及 M 基因序列, 並確認本局現有檢驗方法之專一性 4/3: 建立 H7N9 流感病毒檢驗標準作業流程及檢體採檢及運送準則 4/8: 製備 H7N9 病毒 real-time RT-PCR (TCDC) 之陽性對照組 DNA 4/9:WHO 公佈 H7N9 病毒之 real-time RT-PCR 檢驗方法 ; 立即合成相關引子與探針序列, 建立 real-time RT-PCR 檢驗方法並製備 H7N9 病毒 real-time RT-PCR (WHO) 之陽性對照組 DNA 4/16: 將 WHO 檢驗方法之引子探針陽性對照組 DNA 及檢驗 SOP 提供本局合約實驗室使用

5 H7N9 流感病毒檢驗檢體種類 : 咽喉拭子痰液 : 病毒 RNA 檢測及病毒培養血清 : 病毒及抗體檢測檢驗流程及方法 : 檢體前處理核酸萃取 (1-2 小時 ) Real-time RT-PCR (2-4 小時 ) : 檢測病毒 RNA Conventional RT-PCR & Sequencing (24-36 小時 ) : 病毒基因序列分析病毒培養 (3-5 天 ) 血清抗體檢測 (4-8 小時 ): 血清檢體先保留, 若有需要將以紅血球凝集抑制試驗 (HI) 進行流感抗體檢測 5

min Sequence analysis Influenza A&B Virus isolation Adenovirus HSV, RSV

6 Rapid test 流感病毒檢驗流程圖 30 min Swabs RNA extraction 1 hr Real-time RT-PCR Influenza A&B, 4-6 hrs Influenza A + H1, H3, / H5, H7, H hrs 30 min Sequence analysis Influenza A&B Virus isolation Adenovirus HSV, RSV Metapneumovirus Parainfluenza Ⅰ& Ⅱ& Ⅲ 7-10 days Influenza isolates HI test 6

7 Real-time RT-PCR diagnosis 1) Influenza A/B real-time (targeting to M gene) 2) H1N1pdm09 HA gene 3) Seasonal H3N2 HA gene 4) H7N9 HA gene Influenza A (+) H1(-), H3(-), H7(-) Subtyping test (H5/H9) H1N1pdm09 (+) or Seasonal H3N2 (+) or H7N9 (+) Influenza B(+) Negative H5/H9 (+) Negative Microarray gene sequences 7

8 中國大陸分讓 H7N9 流感病毒 4/7: 中午本局傳真對口單位要求分讓 H7N9 病毒 4/8: 下午 5:30 傳真回覆同意, 辦理手續中 4/16: 上午 10:00 傳真, 程序完成已通知快遞公司 4/20 中午 12:28 病毒株運抵疾病管制局昆陽 BSL-3 實驗室病毒株相關資訊病毒名稱 : A/Anhui/1/2013 (H7N9) 繼代數 :E2 病毒價位 :HA 256 病毒來源 : 中國疾病預防控制中心

9 H7N9 流感病毒接種流程將病毒原液稀釋後接種至 9-11 日齡之雞胚蛋將接種後之雞胚蛋置於恆溫培養箱內小時將雞胚蛋自培養箱取出後置於 4 冰箱內 16 小時收取雞胚蛋內之病毒培養液測定培養液之 H7N9 流感病毒量

10 尿囊腔 10 日齡之雞胚蛋

11 病毒培養結果 A/Anhui/1/2013, received from China CDC 4/20 To Taiwan, 0.5 ml (E2: HA titer 256) 4/25 egg-culture 25 ml (E3: HA titer 1024) A/Taiwan/1/2013, isolated from clinical specimen 4/24 clinical sample 5/02 egg-culture 20 ml (E1: HA titer 128)

12 指定實驗室量能

13 指定檢驗機構的設置自本 (102) 年 3 月 31 日中國大陸發布 H7N9 疫情後, 為監控疫情後續發展, 本局於 4 月 3 日報請行政院成立 H7N9 流感中央流行疫情指揮中心, 並配合政策針對疑似 H7N9 流感通報個案檢體進行檢驗惟為因應檢體量可能的增加, 於 4 月 24 日以中央流行疫情指揮中心名義發佈 6 家實驗室為 H7N9 流感指定檢驗機構, 協助本局進行 H7N9 流感通報個案送驗檢體的檢驗, 並函知相關單位配合辦理

14 法源依據依傳染病防治法第 46 條及傳染病檢驗及檢驗機構管理辦法第 6 條規定辦理第一類及第五類傳染病應送中央主管機關或其指定實驗室檢驗符合下列資格者, 中央主管機關得指定為指定檢驗機構具備符合感染性生物材料管理辦法所定第三級或第四級實驗室置有經生物安全訓練合格之實驗室人員備有與操作檢體相當等級之生物安全管理措施及文件

15 本局及指定機構之檢驗責任區實驗室責任區空運及海運責任區桃園機場松山機場基隆港台北港蘇澳港疾病管制局澎湖縣金門縣連江縣金門機場金門料羅及水昆陽實驗室頭港馬祖福澳及白沙港馬公機場馬公港臺大醫院林口長庚醫院院內檢體台北市基隆市及宜蘭縣院內檢體新北市桃園縣新竹縣及苗栗縣台中榮民總醫院院內檢體台中市南投縣及彰化縣清泉崗機場台中港國立成功大學院內檢體嘉義縣雲林縣台南市安平港布袋港高雄榮民總醫院院內檢體高雄市及屏東縣小港機場高雄港慈濟綜合醫院院內檢體花蓮縣及台東縣花蓮機場花蓮港台東機場

16 指定檢驗執行期間自發布日起至 H7N9 中央流行疫情指揮中心 ( 以下稱本中心 ) 解散或本中心通知終止指定作業或 102 年 12 月 31 日止另依傳染病檢驗及檢驗機構管理辦法第 15 條規定部分補助檢驗費用

17 檢驗量能及檢驗報告時效檢驗報告時效原則上人員採三班制輪班, 受指定實驗室應於檢體收件後 8-12 小時內完成檢驗 ( 含例假日 ), 並登入傳染性通報系統六家指定實驗室檢驗量能估計以每日三班估計, 每班可受理之檢驗量能為件,45-60 件 / 家, 估計每天可檢驗件 ( 含本局昆陽實驗室 )

18 我國流感實驗室監測檢驗結果 18

19 合約實驗室社區流感監測檢驗結果 Year Month H3N2 H1N Untyped Flu A Flu B 檢驗件數 /1-5/ Total ,283 19

20 流感併發症流感監測檢驗結果 Year Month H3N2 H1N1 H7N Untyped Flu A Flu B 通報個案 /1-5/ Total

21 未明原因肺炎檢驗結果 Year 2013 Month H3N 2 H1N1 H7N9 Untyped Flu A Flu B 其他病原體通報個案 /1-5/ Total

22 102 年 H5N1 調查病例檢驗自 102 年 1 月 1 日至 5 月 15 日止, 亦檢驗 2 例 H5N1 疑似病例, 檢驗結果皆為陰性, 已排除 H5N1 病毒之感染 ; 其他流感病毒檢驗結果亦皆為陰性通報日期檢驗日期個案 H5N1 流感檢驗結果其他流感病毒檢驗結果 101/2/26 101/2/26 楊陰性陰性 101/3/6 101/3/6 潘陰性陰性 22

23 年 H5N1 調查病例檢驗 Year Person under investigation H5N1 influenza positive cases Seasonal influenza positive cases H1N1 H3N2 Influenza B Total

24 H7N9 通報個案檢驗件數統計結果 H7N9 通報個案數其他 (H7N9) Total 週別昆陽指定昆陽備註 4/3-4/ /24: 4/10-4/ /17-4/ /24-4/ (1 件陽性 ) 137 4/29-5/ /6-5/ Total H7N9(+) 2. 4/25: 指定實驗室正式運作

25 首例境外移入 H7N9 個案檢驗經過及結果 3/28-4/9 個案於中國蘇州出差 4/9 自上海浦東機場搭機返回台灣 4/12 發病至某診所就醫 4/16 轉某醫院住院治療,Throat swab 送檢疾管局, 檢驗結果陰性 4/20 轉台大醫院住院治療 4/21 Throat swab 送檢疾管局, 檢驗結果陰性 4/24 凌晨 : Sputum 送檢疾管局,real-time RT-PCR 檢驗結果陽性 4/24 下午 4:00 : H7N9 病毒基因序列 (HA NA) 確認陽性 25

26 首例病例 RT-PCR 結果 Real-time RT-PCR Conventional RT-PCR 病人檢體陽性對照陰性對照 DNA 帶螢光訊號曲線圖 (fluorescence curve) 凝膠之帶狀圖 (gel banding)

首例病例 H7N9 之基因定序結果 A/Shanghai/2/2013 A/Hangzhou/1/2013 A/chicken/Jiangsu/K89/2013 A/Zhejiang/DTID-ZJU01/2013 A/Anhui/1/2013 A/Environment/Shanghai/S1088/2013 A/Hangzhou/2/2013 A/Taiwan/1/2013

27 首例病例 H7N9 之基因定序結果 A/Shanghai/2/2013 A/Hangzhou/1/2013 A/chicken/Jiangsu/K89/2013 A/Zhejiang/DTID-ZJU01/2013 A/Anhui/1/2013 A/Environment/Shanghai/S1088/2013 A/Hangzhou/2/2013 A/Taiwan/1/2013 A/Hangzhou/3/2013 A/chicken/Jiangsu/K27/ H7N9 A/Shanghai/1/2013 A/duck/Zhejiang/12/ /06/ 4 (HA) A/duck/Zhejiang/11/ /06/ 4 (HA) A/duck/Zhejiang/2/2011(HA) A/duck/Zhejiang/10/2011 (HA) A/duck/Taiwan/4201/99(HA) A/Netherlands/219/2003 (HA) A/wild duck/mongolia/1-241/2008(h7n9) A/wild duck/mongolia/1-241/ /... A/spot-billed duck/korea/447/2011(h7n9) A/wild bird/korea/a3/2011(h7n9) A/wild bird/korea/a9/2011(h7n9) A/duck/Taiwan/33/1993 (HA) A/duck/Taiwan/Ya103/1993 (HA) A/Canada/rv504/2004 (HA) A/Mexico/InDRE7218/2012 (HA) 完整呈現病毒核酸序列 0.05 親源樹狀圖結果顯示與大陸 H7N9 病毒同源

28 台灣首例 NA 基因 292 位點分析原始檢體 : 292R/K 培養後結果 :292R/K 28

29 H7N9 流感病毒基因分析 29

30 本局自 GISAID 下載資料分析 H7N9 病毒 -1 PB2 PB1 PA HA-H9 NP NA-N2 MP NS PB2 PB1 PA HA-H7 HA/H7 H7N3 (A/duck/Zhejiang/2/2011) H9N2 2010~2012 NP NA-N9 MP NS 2013 H7N9 NA/N9 H7N9 (A/wild bird/korea/a14/2011) 30

本局自 GISAID 下載資料分析 H7N9 病毒 -2 Determination of viral pathogenicity Protein Position Pathogenicity 2013 H7N9 Function Low High PB2 627 E K K replication ability 701 D Q D Nuclear Import PB1-F2 66 N S N

31 本局自 GISAID 下載資料分析 H7N9 病毒 -2 Determination of viral pathogenicity Protein Position Pathogenicity 2013 H7N9 Function Low High PB2 627 E K K replication ability 701 D Q D Nuclear Import PB1-F2 66 N S N induction of apoptosis HA Cleavage site Single basic aa Multiple basic aa Single basic aa HA cleavage NS1 92 D E D unknown C- terminus (PDZ) RSEV ESEV 13 C terminal aa truncated PB2 protein: E627K 分析日期 :4 月 2 日 unknown

32 中國大陸 H7N9 病例發表於 NEJM 論文 Gao, R., N Engl J Med Apr 11. [Epub ahead of print]

33 Genomic signature and protein sequence analysis

34 病毒抗藥性分析 M2 protein : Amantadine resistant (S31N) NA protein: Oseltamivir sensitive N2 E119V I222T R224K H274Y E276D R292K R371K N9 E I R H E 1K/14R R

35 NA protein deletion aa deletion Deletions in the NA stalk region influenced the virus replication efficiency in vivo increased its host range reduced its NA enzymatic activity increased the virus virulence in some cases

36 HA protein-1 Human HA: a2-6-linked sialoside Avian HA: a2-3-linked sialoside a2-3 a2-6 Avian HA Human HA H2, H3: Q226L & G228S H1: E190D & G225D H5 G228S or Q226L/G228S 36

37 HA protein-2 H5 a2-3 a2-6 Avian HA Human HA G228S or Q226L/G228S Aerosol transmission? A/H5N1HA: N182K, Q222L, G224S. Imai M et al. (2012) Nature 486: E119G/V152I/N224K/Q226L Russell CA, et al. (2012) Science 336: H7N9 HA PB2 D119, K152, N224 G186V (1G, 18V) Q226L(2Q, 14L, 2I, 1P), G228 E627K 37

38 2013 年 H7N9 病毒基因分析 PB2: E627K 變異顯示, 該病毒之聚合酶 (polymerase) 於較低溫度 (34-36C) 下, 其活性不致降低, 有利於感染哺乳類動物 M2: S31N 變異顯示, 對 Amantadine 藥物具抗藥性 NA: 對可能降低 Oseltamivir (Tamiflu) 藥效敏感度之 292 位點, 絕大部分仍為 R, 只有 1 株為 R292K (A/Shanghai/1/2013/H7N9) 但減少 5 個胺基酸 (69-73), 是否會增加毒力仍有待實驗證明 HA: 在 ᾳ2-3-linked sialoside (avian) 改為 ᾳ2-6-linked sialoside (human) 方面, 雖然絕大部分已有 Q226L 變異 (14/19), 但 228 位點仍未變異, 故尚未形成有效之 human-to-human transmission; 此外, 在幾個關鍵位點上, 如及 228 等均無變異, 故目前尚無 air-borne transmission 之疑慮 38

39 39

40 報告完畢敬請指教 40

1995年縣市長選舉候選人資歷統計表

1995年縣市長選舉候選人資歷統計表第 18 屆縣 ( 市 ) 議員選舉政黨席次統計表總計 341 235 170 124 1 1 4 1 11 4 14 4 1 0 354 161 臺灣省 306 214 169 123 1 1 4 1 11 4 14 4 1 0 338 155 新竹縣 31 23 6 2 1 1 1 1 0 0 0 0 0 0 25 9 苗栗縣 22 19 8 4 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 31