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2 This boy is not my son. This is your son!!!.

3 亲权鉴定 kinship identification 这究竟是怎么回事

4 课程内容 : 亲子鉴定的概念及概述 亲权鉴定基本原理 父权否定的原则 父权肯定 父权指数 父权概率

5 亲权鉴定概述 一. 亲权鉴定概念二. 亲权鉴定历史三. 常见的涉及亲子鉴定的情况四. 亲权鉴定理论依据五. 标准化方法必备条件六. 亲权鉴定的遗传标记的特点七. 亲权鉴定的程序

6 一. 亲权鉴定概念 (kinship identification, kinship analysis) 应用医学和生物学的理论和技术, 判断不 同个体间是否有血缘关系 ( 亲缘关系 ) 称为亲权 鉴定 包括 : 有争议的父母与子女之间 同胞兄 ( 姐 ) 弟 ( 妹 ) 之间 祖孙等隔代个体之间 或者叔侄 姨甥等旁系

7 亲子鉴定 ( 父权鉴定 ) 概念 (paternity test) 通过对人类遗传标记的检测, 根据遗传规律, 对有争议的父母与子女之间是否存在亲缘关系的鉴定

8 亲子鉴定和亲权鉴定 大多数亲权鉴定是判断有争议的父亲 ( 可疑父亲或被控父亲 (alleged father,af)) 与子女间的亲缘关系, 故又可称为父权鉴定或亲子鉴定 亲权鉴定除父权鉴定外还包括同胞关系 祖孙关系 叔侄关系等同胞 隔代或旁系个体间血缘关系的鉴定

9 所罗门的审判 二. 亲子鉴定发展历史

10 十二铜表法 公元前 449 年左右, 相当于我国春秋战国时期, 古罗马制定了成文法典 十二铜表法, 它记载有最早的有关 亲子鉴定 的法律条文 即依据妊娠月数推定父权 婴儿自父亲死后 10 个月内出生的推定其为婚生子女

11 谲术察情 在我国, 有关亲权认定的最常见的方法之一为 谲术察情, 即先施诡计, 后观其真情并作出判断 这种方法和前面所说的所罗门断案法如出一辙

12 滴骨验亲法 三国时代 ( 公元 年 ) 谢承著 会稽先贤传 合血法 南宋 ( 公元 1247 年 ) 宋慈著 洗冤集录

13 白细胞血型 HLA-A,-B,-C,-D, -DP,-DQ,-DR 遗传标记 红细胞血型 ABO,Ph, MN, Kell, Duffy, 蛋白型 Hp,Gc,Bf,Tf, a-ta,c2,c4 同工酶型 PGM, EsD,GIOI, ACP,AK,ADA 核 DNA 线粒体 DNA

14 现代亲权鉴定 血型检测 ABO 血型 HLA 分型 RFLPs VNTRs DNA 检验 STRs SNPs mtdna 分析

15 三. 常见的涉及亲子鉴定的情况 民事 : 私生子 ; 丈夫怀疑 ; 怀疑医院调错婴儿 ; 儿童 亲属失散; 财产继承 ; 灾难 意外事故 恐怖袭击遇难者身源认定 刑事 : 强奸致孕案确定犯罪嫌疑人 ; 为拐骗儿童 妇女寻找亲人 行政 : 违纪超生 涉外 : 涉外婚姻移民

16 1. 非遗传特征 四. 亲权鉴定理论依据 妊娠期限 : 天 生育能力和性交能力

17 2. 遗传特征 四. 亲权鉴定理论依据 (1) 单纯遗传特征 : 1) 经家系调查已确定该遗传标记遗传方式遵循孟德尔遗传定律遗传, 出生时已完全表现并且终生不变, 不受年龄 疾病以及其他环境因素的影响 2) 群体调查证明该遗传标记具有遗传多态性, 并具有较高的排除非亲生父亲的能力

18 孟德尔遗传定律 1 一对遗传基因与另一对遗传基因在形成配子时彼此分离, 各自独立, 互不影响 ; 不同对遗传基因组合在一起是完全自由的, 随机的 2 不同的精子和卵细胞在形成合子时也是自由组合的, 而且结合也是随机的

19 2. 遗传特征 四. 亲权鉴定理论依据 (2) 复杂遗传特征 : 毛发颜色 皮肤颜色 耳毛 脸型 短指和多指畸形 身高等等

20 五. 标准化方法必备条件 1. 基因座名称 染色体定位 核心序列 等位基因数 等位基因的片段长度 2. 群体调查 : 群体遗传学参数, 基因座各等位基因的频率或单倍型频率 (1) 个体识别能力 ---discrimination power,dp (2) 非父排除概率 ---probability of exclusion,pe (3) 杂合度 ---Heterozygosity,H (4) 多态信息含量 ---Polymorphism information content,pic 3. 种属特异性 灵敏度 稳定性研究

21 五. 标准化方法必备条件 4. 用于亲子鉴定的分型方法与用于群体遗传学数据分析的实验方法完全相同 标准化方法 : 常染色体 STR 分型补充实验 : mtdna 序列多态性分析 Y-STR 分型

22 六. 亲权鉴定的遗传标记的特点 1. 单基因遗传, 常染色体上符合孟德尔遗传规律 2. 在个体发育早期 ( 婴儿期 胎儿期或更早 ) 即能被检出, 遗传标记的分型终生不变 3. 具有遗传多态性, 基因频率分布较好 4. 遗传稳定, 基因突变率及重组率相对较低 5. 检测方法标准化 6. 体细胞稳定性

23 基本分型技术 PCR-STR DNA 提取 PCR 扩增 银染显带 电泳分离 基因分型 荧光显带

24 七. 亲权鉴定的程序 委托 受理 登记 样本收集 制订实验方案 实验结果记录与分析 制做鉴定书 鉴定书签发

25 亲权鉴定的样本 血液或者血痕 精液或者精斑 亲权鉴定的样本 口腔粘膜细胞 ( 口腔拭子 ) 胎儿羊水 尿液 毛发 牙齿 骨骼 组织 脐血 石蜡包埋组织切片

26 样本采集中的注意事项 被鉴定人在三个月至半年之内未接受过输血 接受骨髓或脐血移植的病人, 不宜采集血液 询问被鉴定人中是否有双胞胎 慎用肿瘤组织

27 鉴定报告 案情介绍 : 委托单位 委托日期 鉴定要求 送检检材 鉴定地点 鉴定日期检验过程 : 检材处理方法及检验方法结果分析 : 阐述理由和因果关系, 解答鉴定事由及有关问题鉴定结论 : 根据结果及科学分析的结论 科学性 可重复性 非法律评价性 结 尾 : 司法鉴定人的技术职务 并签名 司法鉴定人签名处加盖司法鉴定章 司法鉴定专门机构名后文书的制作时间

28 第一节亲子鉴定基本原理 爸妈谁要我?

29 亲子鉴定基本原理 否定 在确认孩子的某个等位基因必定来自其生父, 而假设父亲不带有这个基因时, 可以排除他是孩子的生父

30 亲子鉴定基本原理 认定 在确认孩子的某些等位基因必定来自生父, 而假设父亲也带有这些基因时, 则不能排除他是孩子的生父 这时, 可以计算他是孩子生父的可能性有多大

31 M1 AF1 M2 AF2 A 型 A 型 A 型 O 型 O 型 B 型 ABO 血型的遗传? 不能排除 排除?

32 根据 ABO 血型的遗传规律, 由父母亲的血型, 即 可推断其孩子可能和不可能出现的血型

33 父母的血型与子女的血型关系 父母血型 子女可能有的血型 子女不可能有的血型 O+O O A B AB A+O A O B AB A+A A O B AB B+O B O A AB B+B B O A AB A+B A B AB O --- AB+O A B O AB AB+B A B AB O AB+A A B AB O AB+AB A B AB O

34 在一个家庭, 遗传规律可概括 : 1 孩子的一对等位基因必定一个来自父亲, 一个来自母亲 ; 2 孩子不可能带有双亲均没有的等位基因 ; 3 除了在双亲都带有相同基因 ( 如 A) 的情况下, 孩子不可能带有两个相同基因 (AA); 4 某个基因在双亲中的一方或双方为纯合子时 (AA), 必定要在孩子中表现出来 (A) 常染色体上的遗传标记, 遵循孟德尔遗传规律

35 父 父子 母

36 Paternity Inclusion Paternity Exclusion

37 二. 亲权鉴定中使用的 DNA 遗传标记 1. 常染色体遗传标记 : 按孟德尔遗传规律传递 2.Y- 染色体遗传标记 : 按父系遗传方式传递 3.X- 染色体遗传标记 : 4.mtDNA 遗传标记 : 按母系遗传方式传递

38 1. 常染色体上的遗传标记 ( The Genetic Marker in autosome ) 遵循孟德尔遗传规律 1 孩子的一对等位基因必定一个来自父亲, 一 个来自母亲 2 孩子不可能带有双亲均没有的等位基因

39 child 1 Child 2 father mother STR A locus father mother father mother STR B locus father mother homozygous heterozygous homozygous heterozygous + -

40 2. 父系遗传 ( Paternal inheritance ) Y- 染色体非重组区遗传标记, 按父系遗传方式传递 : 男性子代的 Y-DNA 分型必定与父亲的相同 同一父系的所有男性同胞的 Y-DNA 分型一致

41 AmpFlSTR Y filer Kit Y-STR loci Father Son DYS DYS389Ⅰ DYS DYS389Ⅱ DYS DYS DYS DYS DYS DYS DYS DYS GATA-H4 9 9 DYS DYS DYS

42 Y-STR Father profile

43 Son

44 3. 母系遗传 (Maternalinheritance) mtdna 按母系遗传方式传递 : 子代 ( 男或女 ) 的 mtdna 分型与母亲的分型一致 同一母系的所有同胞的线粒体 DNA 分型一致

45 Maternal Inheritance father mother daughter son son

46

47 fertilization

48 Sperm s nucleus go into the egg, Sperm mitochondria stay outside fertilized egg. the fertilized egg's mitochondria is from the mother.

49 mtdna D-loop Same DNA base sequence A G T T C A A T mother daughter A G T T C A A T

50 mtdna D-loop Same DNA base sequence A G T T C A A T mother son A G T T C A A T

51 Mother,daughter,son have the Same DNA sequence. Mother Daughter Son

52 第二节否定父权 (The exclusion of Paternity)

53 第二节否定父权 (The exclusion of Paternity) 否定父权需要考虑以下两个方面 : 1. 遗传标记在两代人之间是否符合遗传规律 2. 选用的遗传标记在亲子鉴定中的系统效能

54 Parentage Exclusion M2 If the alleged father does not share any one of the paternal obligatory genes with the child, with the precondition of none mutation exist, he will be excluded or found not to be the child s biological father. D8S ,14 D8S ,16 AF2 D8S ,14 Exclusion

55 否定父权 (The exclusion of Paternity) M2 AF2 在确认孩子的某个等 A 型 O 型 位基因必定来自其生父, 而假设父亲不带有这个基因时, 可以排除他是孩子的生父 B 型 排除

56 Case :Parentage Exclusion Loci AF2 C2 M2 Conclusion D7S ,14 14,16 14,14 excluded D16S539 10,11, 9,13 13, 13 excluded D7S820 12, 11 9,10, 11, 10 excluded D13S317 12,13 10,12 10,11 can t be excluded CSF1PO 10, 10 10,11 11, 11 can t be excluded TPOX 9,10, 8, 8 8,11 excluded TH01 9,10 9, 9 9, 9 can t be excluded F13A01 3.2, 3.2 6, 4 4, 3.2 excluded FES/FPS 12, 11 11, 11 11, 10 can t be excluded vwfⅢ 19, 18 17, 16 16, 16 excluded HPRTB 14, 14 13, 12 13, 13 excluded F13B 9, 9 10, 10 10, 9 excluded CYAR04 11, 7 6.1, , 6.1 can t be excluded CD4 7, 7 12, 12 12, 7 excluded

57 一. 否定父权 父权否定的两种情况 : 孩子带有母亲或 AF 均不具有的一个基因 ; 孩子没有 AF 必定要传递给后代的那个基因

58 当孩子具有某种 G.M, 而母亲没有, 这个 G.M 必定来自父亲, 如果 AF 没有这种 G.M, 他应被否定为生父 当 AF 查出一对 G.M, 其中之一必定传递给孩子, 如果孩子没有这对 G.M 中的一个, 则 AF 不是这个孩子的生父 用实验方法检查有无某种遗传标记 (G.M) 直接排除 结果比较可靠

59 A1A2 A3A3 A1A4 A1A3 A2A2 A2A3

60 孩子是某种 G.M 的纯合子, 但这种 G.M AF 不具有,AF 可被否定为生父 孩子缺乏某种 G.M, 而 AF 却是这种 G.M 的纯合子, 此时 AF 可被否定为生父 基于实验结果为阴性, 推断为纯合子 间接排除 下结论时慎重 通过重复试验 家系调查

61 A1A2 A3A3 A4A5 A1A3 A2A2 A2A3

62 二. 非父排除概率 非父排除概率 (probability of exclusion,pe) 累积非父排除概率 (cumulative probability of exclusion, CPE)

63 1. 非父排除概率 (probability of exclusion,pe) 指不是孩子生父的男子能 被该遗传标记排除的概率 通过检测某一个遗传标记系 统, 能将不是生父的假设父 亲 ( 非父 ) 排除的机会.

64 1. 非父排除概率 (probability of exclusion,pe) 它是衡量一个遗传标记排除非父能力的一个客观标准, 表示在所有非父被控为生父的男子中, 用该标记否定父权有多大的可能性 衡量遗传标记系统在亲子鉴 定中实用价值大小的指标

65 1. 非父排除概率 (probability of exclusion,pe) 在遗传标记的鉴别能力低时, 无血缘关系的男子 ( 非父 ) 与孩子的遗传标记偶然也会符合遗传规律, 因而不能否定非父与孩子之间有亲子关系 不同的遗传标记多态性程度高低不同, 无关男子因偶然机会不能被排除的概率有高有低, 不是生父的被控男子用某种遗传标记有多大的可能性被排除父权

66 2. 非父排除概率计算 非父排除概率的计算是依据遗传标记系统是否为显性隐性 共显性的遗传方式的不同, 计算方法也不同 EX:STR 遗传标记遵循复等位共显性遗传 STR 一个基因座有多个等位基因, 并且均为显性 ( 共显性 ) 设 Pi 代表群体中第 i 个等位基因频率,Pj 代表群体中第 j 个等位基因频率, 并且等位基因 i 不等于等位基因 j, 则非父排除概率为 :

67 PE = 式中 n 为某一基因座的等位基因数目,Pi Pj 分别为第 i 个 第 j 个等位基因的表型频率 本公式只是对于一个基因座而言 ) 3 3 (4 2 1 ) (1 n i n i j j i j i n i i i P P P P P P 某个 STR 基因座的非父排除概率

68 3. 累计非父排除概率 (cumulative probability of exclusion, CPE) 亲权鉴定不止使用一个基因座, 有必要知道使用的全部遗传 标记对于不是孩子生父的男子 ( 非父 ), 否定父权有多大的 可能性, 即累计排除概率 (cumulative probability of exclusion,cpe) 计算累计非父排除概率的前提条件 : 一个遗传标记系统独立于另一个系统, 一个无关男子不能被多个遗传标 记排除的概率可由单个遗传标记不能排除的概率累积计算求得

69 累计非父排除概率计算公式 : CPE=1-(1-PE1) (1-PE2) (1-PE3) (1-PEi)=1- 概率乘法定律 : n (1 i 1 PE i ) 独立事件同时发生的概率等于独立 事件的概率乘积

70 累计非父排除概率计算公式 式中 PEi 为第 i 个遗传标记的 PE 值, n 为遗传标记系统排除概率的数目 可根据实验室应用不同试剂盒的基因座, 按其给出的 PE 值, 代入公式求出累计非父排除概率 所用遗传标记数目越多, 累积非父排除概率越高, 鉴定能力越强 累计排除概率越高, 亲子鉴定的系统效能越高

71 3. 累积非父排除概率 (cumulative probability of exclusion, CPE) 1. 概念检测多个遗传标记系统, 能将不是生父的假设父亲排除的机会 2. 前提 : 遗传标记系统相互独立 3. 计算根据概率乘法定律, 独立事件同时发生的概率等于独立事件的概率乘积

72 4. 排除父权的标准 经标准化实验检测遗传标记, 假定为父亲的男子不能提供给孩子必需的等位基因, 在不存在突变的前提下, 可以排除假定父亲的父权, 即可以断定他不是孩子的生物学父亲 为了避免潜在突变影响, 排除父权至少应根据三个或三个以上遗传标记 任何情况下都不能仅根据一个遗传标记排除父权

73 三. 错误否定父权的风险 分析的遗传标记越多, 遇到遗传变异的可能性也增加, 遗传变异使亲子之间的遗传关系呈现为不符合遗传规律, 容易错误否定父权 遗传变异 : 基因突变 沉默基因 基因缺失 基因互换 弱抗原 血型变异等等

74 三. 错误否定父权的风险 ( 一 ) 基因突变由于某些外界因素的作用, 导致基因的核苷酸排列顺序或核苷酸数目发生改变 基因突变是导致亲代与子代的遗传标记不符合遗传规律的主要原因 因此在亲子鉴定中, 应选取突变率低的遗传标记

75 三. 错误否定父权的风险 ( 二 ) 突变率 1. 概念 : 每代细胞发生突变的百分率 是评估遗传标记稳定性与亲子鉴定可靠性的指标, 不同基因座的突变率是不同的 亲子鉴定选用的遗传标记必需经过家系调查, 并且 至少观察 500 次减数分裂, 突变率应低于 0.2%

76 三. 错误否定父权的风险 ( 二 ) 突变率 2.STR 基因座的突变 (1) 复制滑动突变 主要原因表现 :A. 一步突 : 等位基因增加一个或减少一个基序 占 STR 突变 90% B. 多步突变 : 突变涉及几个基序 占 0.1%-0.5%

77 三. 错误否定父权的风险 ( 二 ) 突变率 2.STR 基因座的突变 (1) 复制滑动突变 原因 :A.STR 基因座的突变率与等位基因中基序的碱基 结构和重复次数有一定的关系 基序的碱基结构均一的基因座容易发生突变 ; 简单序列基序重 复次数越多, 基因的突变率越高 等位基因中含有不完全基序 的基因座突变发生率较低

78 三. 错误否定父权的风险 ( 二 ) 突变率 2.STR 基因座的突变 (1) 复制滑动突变原因 :B.STR 基因座的突变与性别有关父方基因的突变比母方多见 男性 : 女性突变比例观察值 =17:3

79 三. 错误否定父权的风险 ( 二 ) 突变率 2.STR 基因座的突变 (1) 复制滑动突变原因 :B.STR 基因座的突变与性别有关突变率与细胞分裂次数密切相关 : 男性精子细胞分化经历的细胞分离次数比卵子细胞多 10 倍 ; 精子染色体中碱基替换的积累比卵细胞快 2 倍

80 Mutation Observed in Family Trio 14,15 15,17 14,15 15,17 15,17 13,17 Normal Transmission of Alleles (No Mutation) Paternal Mutation 家系调查

81 Mutation rates of 15 STR loci observed in meiosis STR Locus Mutation Rate(%) Paternal Maternal Unknown One-step Multiple-step CSF1PO 23(0.175) D3S (0.145) D5S818 12(0.091) D7S820 13(0.099) D8S (0.183) D13S317 3(0.023) D16S539 11(0.084) D18S51 26(0.198) D21S11 25(0.191) FGA 30(0.229) PENTAD 4(0.03) PENTAE 26(0.198) TH01 2(0.015) TPOX 2(0.015) VWA 29(0.221)

82 三. 错误否定父权的风险 ( 二 ) 突变率 2.STR 基因座的突变 (2) 无效等位基因 没有扩增产物的基因 ( 漏检基因 ) 当基因突变发生在引物 3 末端的结合区, 影响引物退 火和延伸, 导致这个等位基因没有扩增产物, 影响靶 基因扩增

83 三. 错误否定父权的风险 ( 二 ) 突变率 2.STR 基因座的突变 (2) 无效等位基因 STR 序列内出现点突变一般不会干扰对片段长度的分型 ( 基序内或基序侧翼区的点突变, 不会影响靶基因的 扩增, 也不会改变等位基因的长度, 对基因型判定没 有影响 ) 对常规使用的 STR 基因座进行观察, 无效基因的出现率 大约为 0.01%-0.5%

84 1. 沉默基因 ( 二 ) 遗传变异 (1) 沉默基因纯合子 (minus-minus 表型 /null 表型 ) 由于血型前身物质未被基因所活化 O 型原因 :1) 调节基因缺如或被抑制, 结构基因正常 孟买型 2) 结构基因缺如或功能不良, 调节基因正常 等位基因替换 D-/-

85 1. 沉默基因 ( 二 ) 遗传变异 (2) 非 minus-minus 表型 /null 表型有沉默等位基因存在, 无基因表达产物产生 Hp0 型 2. 弱抗原弱的血型抗原不容易检测出来, 易误定为抗原阴性 ABO 血型

86 3. 基因互换 ( 二 ) 遗传变异 HLA, 概率很低 4.CIS-AB 效应 AB/O 5. 生理性变异表达产物遗传标记在婴儿期发育不好 Hp0 6. 病理性变异发生溶血反应时,Hp 含量降低检测不出来表现型

87 ( 三 ) 国际上对排除亲权关系时的建议 由于突变或其他因素的存在 1. 只有一个遗传标记不符合遗传规律, 不能轻易作出排除结论, 必须加测其他系统 2.2 个 STR 基因座或同一染色体上的两个遗传标记不符合遗传规律, 需慎重对待, 宜加测遗传标记后再具体分析 3. 有 3 个及以上独立遗传关系 ( 非连锁 ) 的遗传标记不符合遗传规律, 则可作出排除亲权关系的结论

88 A1A2 A3A3 A4A5 A1A3 A2A2 A2A3

89 項目 卓 XX( 父親 ) 卓??( 小孩 ) 趙 XX( 母親 ) 說明 血型 (ABO) B O B 不能排除 D16S539 11, 10 13, 9 13, 13 可以排除 D7S820 12, 11 10, 9 11, 10 可以排除 D13S317 13, 12 12, 10 11, 10 不能排除 CSF1PO 10, 10 11, 10 11, 11 不能排除 TPOX 10, 9 8, 8 11, 8 可以排除 TH01 10, 9 9, 9 9, 9 不能排除 F13A01 3.2, 3.2 6, 4 4, 3.2 可以排除 FES/FPS 12, 11 11, 11 11, 10 不能排除 vwfa31/a 19, 18 17, 16 16, 16 可以排除 HPRTB 14, 14 13, 12 13, 13 可以排除 F13B 9, 9 10, 10 10, 9 可以排除 CYAR04 11, 7 6.1, , 6.1 可以排除 CD4 7, 7 12, 12 12, 7 可以排除

90 項目 AF3 C3 M3 說明 血型 (ABO) A A A 不能排除 D16S539 11, 11 12, 11 12, 12 不能排除 D7S820 13, 10 11, 11 12, 11 可以排除 D13S317 12, 9 12, 9 13, 9 不能排除 CSF1PO 12, 9 12, 12 13, 12 不能排除 TPOX 11, 8 11, 11 11, 9 不能排除 TH01 9, 8 11, 8 8, 8 可以排除 F13A01 6, , 3.2 6, 3.2 不能排除 FES/FPS 11, 11 11, 11 11, 11 不能排除 vwfⅢ 17, 16 17, 16 18, 17 不能排除 HPRTB 13, 13 14, 13 14, 13 不能排除 FABP 10, 9 10, 10 11, 10 不能排除 LPL 9, 10 13, 11 12, 11 可以排除 D8S , 10 16, 10 16, 12 不能排除

91 检验结果 遗传标记 AF C CSF1PO 9,12 9,9 TPOX 8,9 8,11 THO1 7,9 6,9 D16S539 9,11 11,12 D7S820 11,12 10,10 D13S317 8,10 9,9 D2S ,22 18,19 D8S ,12 11,13 D18S535 15,16 13,16 D14S306 12,13 11,12 D1S518 15,16 16,17 D3S ,17 14,17 D19S253 7,11 7,7 vwa 14,17 14,18 HLA-DRB1 12,15 07,15 违背遗传规律 :D7S820 D13S317 D2S1338

92 检验结果遗传标记 M C AF ABO A A B CSF1PO 12,12 11,12 9,10 TPOX 8,8 8,8 11,11 TH01 6,9 7,9 9,9 D16S539 11,13 12,13 10,13 D7S820 10,11 10,11 11,11 D13S317 8,11 9,11 8,9 D2S ,22 15,22 16,19 D8S ,16 10,16 12,13 D18S535 14,15 14,15 13,14 D14S306 10,12 9,10 7,9 D1S518 17,17 17,17 16,18 D3S ,17 15,17 17,18 D19S253 12,12 11,12 11,14 vwa 16,18 14,16 18,19 HLA-DRB1 07,13 08,13 01,07 违背遗传规律 :CSF1PO TPOX TH01 D16S539 D2S1338 D8S1179 D1S518 vwa HLA-DRB1

93 第三节确信父权

94 M1 AF1 父权的肯定 A 型 O 型 A 型 在确认孩子的某些等位基因必定来自生父, 而假设父亲也带有这些基因时, 则不能排除他是孩子的生父 这时, 可以计算他是孩子生父的可能性有多大 不能排除

95 Paternity Inclusion father son mother

96 Paternity Inclusion

97 案例 A: 肯定父权 項目 AF1 C1 M1 說明 血型 (ABO) A O A 不能排除 D16S539 11, 11 12, 11 12, 12 不能排除 D7S820 11, 10 11, 11 12, 11 不能排除 D13S317 12, 9 12, 9 13, 9 不能排除 CSF1PO 12, 9 12, 12 13, 12 不能排除 TPOX 11, 8 11, 11 11, 9 不能排除 TH01 9, 8 9, 9 9, 9 不能排除 F13A01 6, , 3.2 6, 3.2 不能排除 FES/FPS 11, 11 11, 11 11, 11 不能排除 vwfⅢ 17, 16 17, 16 18, 17 不能排除 HPRTB 13, 13 14, 13 14, 13 不能排除 FABP 10, 9 10, 10 11, 10 不能排除 LPL 12, 10 10, 10 12, 10 不能排除 D8S , 10 16, 10 16, 12 不能排除

98 一. 父权指数 (paternity index, PI) 父权概率 (probability of paternity) 不能否定被控父亲 (AF) 为孩子的生父时, 其与孩子有血缘关系的可能性? 1. 父权指数 (paternity index, PI) 2. 父权相对机会 (relative chance of paternity, RCP)

99 1. 父权指数 (paternity index, PI) 亲子鉴定关系鉴定中判断遗传证据强度的指标 判断亲子关系所需两个条件概率的似然比, 即被控 父亲是孩子生物学父亲的概率 (X) 与随机男子是孩 子生物学父亲的概率 (Y) 的比值

100 1. 父权指数 (paternity index, PI) 被控父亲提供生父基因成为孩子生父的可能性 (X) 和随机男 子提供生父基因成为孩子生父的可能性 (Y) 的比值 :PI= X/Y PI 代表 AF 具备生父基因成为孩子生父的可能性是随机男子具 备生父基因成为孩子生父的可能性的多少倍

101 父权指数 (PI) 计算步骤以 STR 基因座为例 1. 测定母亲 孩子与 AF 的基因型 2. 确定生父应该给孩子的必需等位基因 3. 计算母亲给孩子必需等位基因概率 (f) 4. 计算随机男子给孩子必需等位基因概率 (g)

102 父权指数 (PI) 计算步骤 5. 计算 AF 给孩子必需等位基因概率 (c) 6.AF 给孩子必需等位基因成为孩子生父概率 X= c*f; 7. 随机男子给孩子必需等位基因成为孩子生父概率 Y= g*f; 8.PI=X/Y=(c*f)/(g*f)

103 父权指数 (PI) 计算步骤 5. 计算 AF 给孩子必需等位基因概率 (c) 6.AF 给孩子必需等位基因成为孩子生父概率 X= c*f; 7. 随机男子给孩子必需等位基因成为孩子生父概率 Y= g*f; 8.PI=X/Y=(c*f)/(g*f)

104 累计父权指数 (combined paternity index,cpi) 当多个遗传标记用于亲子鉴定时, 若父权不 能否定, 需要计算每一个遗传标记获得的 父权指数,n 个遗传标记的父权指数相乘则 为累计父权指数 CPI=PI 1 PI 2 PI 3 PI 4 PIn

105 三. 父权相对机会 (relative chance of paternity,rcp) cpi 值是两个条件概率的比值, 是一个绝对值, 为使鉴定结果能够以概率形式表达父子关系的相对机会,CPI 值转换成一种相对值 RCP, 即亲子关系概率 ( 父权相对机会 ) 父权相对机会代表了判断 AF 是孩子生父的把握度大小

106 三. 父权相对机会 (relative chance of paternity,rcp) RCP 由 PI 换算而来, 指假设父亲与孩子有亲子 关系的机会 RCP=[PI/(PI+1)] 100% RCP=CPI/(CPI+1)

107 前概率 父权指数是两个条件概率的比值, 但父权指数是一个绝对值, 为使鉴定结果能够以概率形式表达父子关系的相对机会, 按 Bayes 定律, 它的一个条件概率可以换算成另一个条件概率, 得出另一个参数 :CPI; 即 CPI 换算成 RCP 在 Bayes 公式计算亲子关系概率中含有从非遗传标记估计亲子关系的概率, 这种概率称为前概率

108 前概率 从非遗传标记估计被控父亲的确是孩子生父的前概率和被控父亲不是孩子生父的前概率, 若两者机会均等, 均为 50%(0.5), 在此前提下才有 : RCP=PI/(PI+1)

109 共显性遗传标记计算父权指数 孩子母亲被检测男子父权指数 q pq q 1/q pq p or pr q 1/q q q q 1/q pq p or pr or ps qr (or pq) 1/2q q pq qr (or pq) 1/2q q q qr 1/2q pq pq pq 1/(p+q) pq pq q 1/(p+q) pq pq qr 1/(2p+2q)

110 认定父权的标准 经标准化实验检测遗传标记, 假定为父亲的男子不能被排除父权 前概率为 0.5, 计算概率后如同时满足以下两项认定指标, 可以认定假定父亲的父权, 即可以断定他是孩子的生物学父亲 PI 值 时,RCP 值 99.99% 以上

111 第四节法医亲子鉴定标准的要点 1. 实验使用的遗传标记累计排除概率应等于或大于 累计排除概率按公式计算 2. 为了避免潜在突变影响, 任何情况下都不能仅根据一个遗传标记不符合遗传规律就排除父权

112 第四节法医亲子鉴定标准的要点 3. 检测的遗传标记均需计算父权指数, 包括符合和不符合遗传规律的遗传标记 任何情况下都不能为了获得较高的父权指数, 将检测到的不符合遗传规律的遗传标记删除 在获得所有带个遗传标记的父权指数后 计算累计父权指数

113 第四节法医亲子鉴定标准的要点 4. 在满足 点的前提下, 被检测男子的累计父权指数小于 时, 可以排除被检测男子的父权 鉴定意见可表述为 : 被检测男子不是孩子的生物学父亲, 从遗传学角度已经得到科学合理的确信

114 第四节法医亲子鉴定标准的要点 5. 在满足 点前提下, 被检测男子的累计父权指数大于 时, 支持被检测男子是孩子生物学父亲的假设 鉴定意见可表述为 : 被检测男子是孩子的生物学父亲, 从遗传学角度已经得到科学合理的确信 6. 累计父权指数大于 , 二小于 时, 应当通过增加检测的遗传标记来达到要求

115 第五节其他亲缘关系鉴定 亲子鉴定 广泛遗传标记 血缘关系鉴定 同胞兄 ( 姐 ) 弟 ( 妹 ) 祖孙等隔代个体之间叔侄 姨甥等旁系

116 二类 : 血缘关系鉴定的遗传标记 常染色体 DNA 遗传标记 : 孟德尔遗传规律传递 非常染色体 DNA 遗传标记 :Y- 染色体 DNA 遗传标记 mtdna 遗传标记

117 血缘关系鉴定的遗传标记 1. 常染色体 DNA 遗传标记进行血缘关系鉴定的原理 : 基于有血缘关系的个体比无血缘关系的个体共享相同等位基因的概率高, 血缘关系近的个体比血缘关系远的个体共享相同等位基因的概率高 通过与无血缘关系个体比较概率高低来判断是否存在血缘关系

118 血缘关系鉴定的遗传标记 2.mtDNA 遗传标记进行血缘关系鉴定的原理 : 基于母系遗传特征 具有共同的母系祖先的个体具有相同的等位基因, 反之则无 通过检测 mtdna 的遗传标记来判断是否存在血缘关系

119 血缘关系鉴定的遗传标记 3.Y 染色体遗传标记进行血缘关系鉴定的原理 : 基于具有共同的父系遗传特征 具有共同的父系祖先的个体具有相同的等位基因, 反之则无 通过检测 Y 染色体的遗传标记来判断是否存在血缘关系

120 血缘关系鉴定的遗传标记 注意 : 1. 血缘关系鉴定针对的是一组个体的遗传特点, 而不是一个个体的遗传特征, 其特定性需要其他证据来佐证 血缘关系鉴定的特定性不如亲子关系鉴定

121 血缘关系鉴定的遗传标记 注意 : 2. 在鉴定父子关系时, 要增加检测的遗传标记 3.Y 染色体遗传标记, 其基因频率不能采用概率累乘, 所用的全部 Y 染色体基因座必须作为一个整体用其单倍型频率带入计算 同时,Y 染色体遗传标记必须与常染色体遗传标记一起使用

122 血缘关系鉴定的遗传标记注意 : 4. 在鉴定母亲与子女关系时, 增加检测的遗传标记如果为线粒体 DNA(mtDNA) 遗传标记, 其基因频率不能采用概率累乘 所用的全部 mtdna 基因座必须作为一个整体用其单倍型频率带入计算 同时 mtdna 遗传标记必须与常染色体遗传标记一起使用

123 血缘关系鉴定的遗传标记注意 : 5. 如果在鉴定书里使用其他数学或者词语的表达式时, 应定义并解释清楚, 使委托人或法庭了解其意义 如要将父权指数值转换为传统使用的父权相对机会, 必须同时给出转换时所采用的前概率 例如某案父权指数为 时, 可以表述为本案父权指数为 10000, 在假定父权前概率为 0.5 时, 父权相对机会为

124 血缘关系鉴定的遗传标记注意 : 6. 鉴定意见是以不考虑双胞胎或者近亲情况为前提的 近亲情况应该采用另外的公式, 并需全面 系统结合其他因素做综合分析 如果结果是非决定性的, 例如累计父权指数小于 而大于 , 不能采用上述的表述 应对问题的性质给予解释, 说明尚需要何种附加实验

125 父权指数 (PI) 计算步骤 基因座 AF 孩子 母亲 PI D8S , D7S , CSF1PO 12 10,12 10, D3S ,18 15, D5S ,13 11,

126 GM M C AF PI ABO B B O LDLR BB AB AB GYPA BB BB AB HBGG BB BB BB D7S8 BB AB AA GC AB AB BB DQA1 3,3 1.2,3 1.2, CSF1PO 12,12 10,12 10, TPOX 9,11 11,11 8, THO1 9,9 6,9 6, D16S539 8,10 9,10 9, D7S820 10,12 11,12 11, D13S317 9,10 9,10 8, PI( 总 )

127 遗传标记 M C AF 父子关系指数 (PI) ABO O O O LDLR AB BB BB GYPA BB BB BB HBGG BB BB AB D7S8 AB AB AB GC AB AB BB D19S253 11,11 11,11 11, vwa 14,17 14,16 16, D16S539 10,14 9,14 9, D13S317 8,14 12,14 10, D7S820 12,12 11,12 10, D2S ,18 18,25 16, D8S ,15 12,15 12, D18S535 14,15 15,16 14, D14S306 11,14 11,11 11, D1S518 15,19 15,19 18, D3S ,15 15, PI

128 GM M C AF PI ABO B B O LDLR BB AB AB GYPA BB BB AB HBGG BB BB BB D7S8 BB AB AA GC AB AB BB DQA1 3,3 1.2,3 1.2, CSF1PO 12,12 10,12 10, TPOX 9,11 11,11 8, THO1 9,9 6,9 6, D16S539 8,10 9,10 9, D7S820 10,12 11,12 11, D13S317 9,10 9,10 8, PI( 总 )

129 項目賴 XX( 父親 ) 賴!!( 小孩 ) 黃 XX( 母親 ) PI 值說明 血型 (ABO) A A A --- 不能排除 D16S539 11, 11 12, 11 12, 不能排除 D7S820 11, 10 11, 11 12, 不能排除 D13S317 12, 9 12, 9 13, 不能排除 CSF1PO 12, 9 12, 12 13, 不能排除 TPOX 11, 8 11, 11 11, 不能排除 TH01 9, 8 9, 9 9, 不能排除 F13A01 6, , 3.2 6, 不能排除 FES/FPS 11, 11 11, 11 11, 不能排除 vwfa31/a 17, 16 17, 16 18, 不能排除 HPRTB 13, 13 14, 13 14, 不能排除 F13B 10, 10 10, 10 10, 不能排除 FABP 10, 9 10, 10 11, 不能排除 LPL 12, 10 10, 10 12, 不能排除 CYAR04 11, 7 7, 7 11, 不能排除 CD4 7, 7 7, 7 12, 不能排除 GPP3A09 6, 6 6, 6 6, 不能排除 D8S , 10 16, 10 16, 不能排除

130 遗传标记 M C AF 父子关系指数 (PI) ABO O O O LDLR AB BB BB GYPA BB BB BB HBGG BB BB AB D7S8 AB AB AB GC AB AB BB D19S253 11,11 11,11 11, vwa 14,17 14,16 16, D16S539 10,14 9,14 9, D13S317 8,14 12,14 10, D7S820 12,12 11,12 10, D2S ,18 18,25 16, D8S ,15 12,15 12, D18S535 14,15 15,16 14, D14S306 11,14 11,11 11, D1S518 15,19 15,19 18, D3S ,15 15, PI

131 F S M F S M F S

132 Which one is Father? F1 F2 S M F1 F2 S M F1 F2 S M

133 M S2 双胞胎检测 S1 D1 D2

134 亲缘关系鉴定个案中符合遗传规律的遗传标记时的父权指数 (PI) 检测遗传标记结果 AF 表型为 P, 孩子的表型为 P, 母亲的表型为 PQ 以 p 为 P 基因频率,q 为 Q 基因频率, 则 : X=AF 提供 P 基因概率 母亲提供 P 基因概率 =1 0.5=0.5 Y= 随机男子提供 P 基因概率 母亲提供 P 基因概率 =p 0.5= 0.5p PI=0.5/ 0.5p=1/p

135 亲缘关系鉴定个案中不符合遗传规律的遗传标记时的父权指数 (PI) 计算 如果母亲的表型为 PP, 孩子的表型为 PQ, 被检测男子表型为 Q R, 其中 Q 比 Q 小或大一个或 2 个重 复单位 (s=1 或 2) µ 为该基因座平均突变率 q 为 等位基因 Q 的频率 如果突变为 1 步 (s=1), 则 : 如果突变为 2 步 (s=2), 则 : 以此类推 PI=X/Y = µ/(4q) PI=X/Y = µ/(40q)

136 具体计算实例 : ( 以 D13S317 为例, 平均突变率 µ 为 0.002)

137 基因座 母亲 孩子 被检测男子 父权指数 D13S µ / (4 P8) D13S µ / (40 P8) D13S µ / (400 P8) D13S µ / (2 P8) D13S µ / (2 P8) D13S µ / (4 P8) D13S µ / (4 P8) D13S µ / (4 (P7 + P9) D13S µ / (2 (P7 + P9)

138 D13S µ / (4 (P7 +P9 D13S µ(1+1/3.5) / (4 P9) D13S µ / (2 3.5 P8) 表中 P7, P8, P9 为相应等位基因 7,8,9 的频率

139 六 亲权鉴定的伦理道德问题 爸妈谁要我? 司法公正性 社会稳定性 职业道德

140 思考题 : 1. 亲权鉴定基本原理? 2. 亲权鉴定中遗传标记的选择依据? 3. 亲权鉴定中常用的遗传标记有哪些? 5. 父权认定和父权否定原则? 6. 父权指数的计算? 7. 法医亲子鉴定标准的要点?

141

142 谢谢!

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