Microsoft Word 朱珍-二校
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- 衡 范
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1 6 4 Vol. 6 No Journal of Food Safety and Quality Apr., 2015 朱 珍 1, 朱 俊 霖 1, 庄 松 娟 2, 李 振 兴 1* (1., ; 2., ) 摘 要 : 目 的 方 法 0.1%,,,,,,, Aglient ZORBAX Eclipse-C 18, -0.1%, 275 nm, 305 nm, 0.8 ml/min 结 果 µg/kg 72.20%~85.68%, (RSD) 1.716%~9.926% 结 论, > > 关 键 词 : ; ; ; Detection of dissociative o-tyrosine in electron beam irradiated seafood by high performance liquid chromatography ZHU Zhen 1, ZHU Jun-Lin 1, ZHUANG Song-Juan 2, LI Zhen-Xing 1* (1.Food Safety Laboratory, Ocean University of China, Qingdao , China; 2. Qingdao Institute for Food and Drug Control, Qingdao , China ) ABSTRACT: Objective To establish a method for the determination of o-tyrosine in irradiated seafood by high performance liquid chromatography (HPLC). Methods The sample was homogenized with 0.1% formic acid, the ultrasonic bath and centrifugation were followed. Then the resulting supernatants were treated with acetone at 20 for 2 h and centrifuged again. After evaporation of acetone from supernatants, the remaining solution was dried freeze. Finally, the powder was collected, reconstituted in formic acid and detected by HPLC analysis with external reference method. For HPLC separation, Aglient ZORBAX Eclipse-C 18 column was used with a flow rate at 0.8 ml/min, mobile phase: methanol-0.1% formic acid in Milli-Q water, and the fluorescence detector was set at λex275 nm and λem305 nm. Results The recoveries of o-tyrosine at the spiked amounts of 50, 200, and 500 μg/kg were 72.20%~85.68% with RSD value between 1.716% to 9.926%. Conclusion This method can be applied to detect o-tyrosine in electron beam irradiated seafood. The content of dissociative o-tyrosine in some seafood was metapenaeusensis>lateolabrax japonicas> scallop. KEY WORDS: electron beam irradiation; o-tyrosine; high performance liquid chromatography; seafood 基 金 项 目 : (2013GGB01192) Fund: Supported by Science and Technology Development Plan Project of Shandong Province (2013GGB01192) * 通 讯 作 者 :,,, lizhenxing@ouc.edu.cn *Corresponding author: LI Zhen-Xing, Associate Professor, Food Science and Engineering College, No.5, Yushan Road, Qingdao , China. lizhenxing@ouc.edu.cn
2 4, : 引 言,, 60 Co 137 Cs gamma 5MeV X [1], [2,3] [4], [5],, [6], 39.5%, DNA [7,8], gamma,,, - ( ),, [9],, : ( ) ( ),, [10,11],,, 2 材 料 与 方 法 2.1 材 料 与 试 剂 DL- ( 98%, Sigma ); (, TEDIA ); (, );, (, ); Milli-Q ; (1 ml); ( 66, 0.22 μm); (2 ml,,,, Agilent ) ( ) 2.2 实 验 仪 器 与 设 备 (Agilent 1260, Aglient ); (Hei-Vap, Heidolph ); (DS-1, ); (3K-15, Sigma ); (KQ5200B, ); ( 0.1 g, TE601-2, ); ( g, BS-224-S, ); (Milli-Q, Millipore ); Aglient ZORBAX Eclipse-C 18 (4.6 mm 250 mm, 5.0 µm, Aglient ) 2.3 标 准 溶 液 的 配 制 : 5 mg, 0.1% 5 ml, 4 : 0.1%, 样 品 处 理 游 离 邻 酪 氨 酸 的 提 取 Chen [10], 0.8 g ( 0.01 g) 50 ml, 3.5 ml 0.1%, r/min 2 min, 15 min, 8000 r/min, 4 20 min,, 8 ml, h, 8000 r/min, 4 15 min, 45,, 0.8 ml 0.1%, 0.22 µm, 结 合 邻 酪 氨 酸 的 提 取 [11], g ( g) 50 ml, 20 ml - (3:1),, 8000 r/min, 4 10 min,,,,,, 6 ml, 6 mol/l, 110,,
3 色 谱 条 件 及 参 数 非 衍 生 高 效 液 相 色 谱 : AglientZORBAXEclipse-C 18 (4.6 mm 250 mm, 5.0 µm); : 0.1% (A)- (B); : 0~14 min, 92%(A); 14~14.2 min, 92%(A)~20%(A); 14.2~21 min, 20%(A); 21~21.2 min, 20%(A)~92%(A); 21.2~30 min, 92%(A); : 20 µl; : 30 ; 275 nm, 305 nm 柱 前 衍 生 - 高 效 液 相 色 谱 OPA : g, g, g, 50% 10 ml, 0.22 µm, 4 : =1:40 (v:v), 1 min 20 µl : AglientZORBAXEclipse-C 18 (4.6 mm 250 mm, 5.0 µm); : 0.02 mol/l (A)- (B); : 0~10 min, 80%~65%(A), 10~15 min, 65%(A), 15~15.01 min,65%~80%(a), 15.01~20 min, 80%(A); : 30 ; 330 nm, 450 nm 3 结 果 与 分 析 3.1 方 法 的 线 性 范 围 检 出 限 定 量 限 精 密 度 -, 0.1~9500 µg/l, 0.8 µg/l, 5 µg/l, ( 1),,,,, : µg/l, (Y) (X, µg/l), 1~10000 µg/l, Y=0.0503X , , 2 (S/N=3) 2.7 µg/l, (S/N=10) 8 µg/l A: OPA - A: Chromatogram of o-tyrosine standards by pre-column derivatization HPLC with OPA B: B: Chromatogram of o-tyrosine standards by HPLC without derivatization Y: Y: orth o-tyrosine 1 Fig. 1 Liquid chromatogram of o-tyrosine standards
4 4, : Fig. 2 Standard curve of o-tyrosine, 6, 1 1,,, (RSD) 10% 3.2 方 法 的 加 标 回 收 率, µg/kg, 3, , 2, 72.20%~85.68%, 1.716%~9.926% 3.3 辐 照 样 品 的 测 定 ( 10 kw, 10 MeV) 10 kgy ,, 3: 表 1 鲈 鱼 基 围 虾 扇 贝 中 精 密 度 实 验 结 果 (n=6) Table 1 Results of precision test (n=6) o-tyrosine /ng Average/ng RSD/% Lateolabraxjaponicus Metapenaeusensis Scallop 表 2 鲈 鱼 基 围 虾 扇 贝 中 邻 酪 氨 酸 的 加 标 回 收 率 和 相 对 标 准 偏 差 (n=3) Table 2 Recoveries and RSDs of o-tyrosine in real samples by LC-FLD (n=3) (%) (%) (%) (%) (%) (%) HPLC-FLD 50 µg/kg 200 µg/kg 500 µg/kg Lateolabraxjaponicus Metapenaeusensis Scallop 表 3 Table 3 辐 照 水 产 品 中 的 邻 酪 氨 酸 含 量 (n=3) Content of o-tyrosine in seafood (n=3) µg/kg µg/kg Lateolabraxjaponicus Metapenaeusensis Scallop : 10 kgy,
5 1450 6,, 10 kgy 4 讨 论 4.1 实 验 原 理 初 探 : -, OPA( ), [11] ; [12],,,,, :, 110, HPLC [13] ;,,,,,, HPLC [14] -,,, ;,, [8], 4.2 实 验 结 果 讨 论, -,,, ;, 80%, Chen [10] µg/kg,,, [15], mg/100 g, 10-6 ~10-5 [16] HPLC-MS-MS 10 kgy, mg/kg,,, ; [8] 10 kgy, 178.5/288 µg/kg,,, ; Wolfgang [17] kgy,, 10 kgy µg/g, 5 结 论 与 展 望,,,,, > >,,,,, 参 考 文 献 [1]. [J]., 2013, (15): Geng JN. Food irradiation and its application in food processing [J]. Food Res Devel, 2013, (15): [2],,,. [J]., 2007, (01): Ha YM, Shi HD, Wang F, et al. Application and characteristics of food irradiation by electron beam [J]. J Nucl Agric Sci, 2007, (01): [3] Peter B, Roberts. Food irradiation is safe:half a century of studies[j].radiat Phys Chem, 2014, (105): [4],,,.
6 4, : 1451 [J]., 2012, 2(4): Li ZX, Zhang LM, Gu KF, et al.comparative study and suggestion on relevant standards and regulations fordomestic and international aquatic irradiation [J].Chin Fish Qual Stand, 2012, 2(4): [5],,. [J]., 2010, 4: Yu L, Bu Y, Wei ZP. The application study of irradiation on aquatic products [J]. Meat Res, 2010, 4: [6]. [M]. :, 2014 National Bureau of Statistics of the People's Republic of China. China statistical yearbook [M]. Beijing: Chinese Statistics Press, [7],,,. [J]., 2009, (5): Wang F, Wang ZD, Zhou HJ, et al. The methods and standards of detection techniques for irradiated foods [J]. Food Mech, 2009, (5): [8],. [J]., 2005, (06): Ha YM, Zhou HJ. The reviewon analytical detection methodsfor irradiated foods [J]. Food Sci, 2005, (06): [9],,,, [J]., 2011, 30(10): Wu M, Li JX, Zhang ZG, et al. Identification of irradiated protein-rich food by dissociative tyrosine [J].J Instrum Anal. 2011, 30(10): [10] Chen S, Fan LH, Song J, et al. Identification of irradiated meats by determining o- and m-tyrosine as markers [J]. Meat Sci, 2013, 93(2): [11],,,. γ- Lin L, Zhang K, Qian H. Determination of o-tyrosine in irradiated chicken products by HPLC [J]. Food Sci, 2010, (10): [13],,,. [J]., 2011, (01): Zheng R, Ding ZP, Yan LM, et al. Study pre-treatment of HPLC determinatethe o-tyrosine in irradiation food [J].Shanghai Meas Test, 2011, (01): [14] Ibe FI, Grinter R, Massey R, et al. Detection of o-tyrosine in irradiated chicken by reverse-phase HPLC and fluorescence detection [J]. Food Add Contam, 1991, (8): [15], ( ) [M]. :, Wang YD, China Food Composition (The Second Edition) [M].Beijing: Peking University Press,2009. [16],,,. HPLC-MS/MS [J]., 2011, 30(10): Wang M, Zhang XQ, Yang ZY, et al. Determination of o-tyrosine in γ-ray irradiation protein-rich food by HPLC-MS/MS [J]. J Instrum Anal, 2011, 30(10): [17] Wolfgang G, Hein TJ, Simat HS. Determination of non-protein bound o-tyrosine as a marker for the detection of irradiated shrimps [J]. Eur Food Res Technol, 2000, (210): 作 者 简 介 ( 责 任 编 辑 : 李 振 飞 ) 朱 珍, 硕 士 研 究 生, 主 要 研 究 方 向 为 辐 照 食 品 的 检 测 @139.com [J]., 2009, (10): Wang DH, Wang M, Han L, et al.determination of o-tyrosine in γ-ray irradiated food by HPLC [J]. Food Sci, 2009, (10): [12],,. 李 振 兴, 博 士, 副 教 授, 主 要 研 究 方 向 为 水 产 品 的 安 全 与 质 量 控 制 lizhenxing@ouc.edu.cn [J]., 2010, (10):
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