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- 敌 卓
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1 GE Healthcare
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3 FDA ph 90% 70% DNA DNA Cytodex TM Baxter Biosciences 3
4 FDA EMEA cytodex cm 2 /g cytodex 1 25 g cytodex g cytodex g cytodex cm 2 /g cytodex 2 25 g cytodex g cytodex g cytodex cm 2 /g cytodex 3 10 g cytodex g cytodex g DNA 4
5 B A B C D E 1 CHO r-hbsag Bu- tyl-s Sepharose 6 Fast Flow r-hbsag r-hbsag 90% Butyl-S Sepharose 6 Fast Flow 1991 WHO 34 r-hbsag 2 90% r-hbsag 5% DEAE Sepharose Fast Flow 9% Sepharose 6 Fast Flow 800 CCS r-hbsag 97% r-hbsag 1 Butyl-S Sepharose 6 Fast Flow XK50/ ml 300 ml CCS 12 mg rhbsag 0.6 M ph 7.0 Butyl-S Sepharose 6 Fast Flow r-hbsag Sephadex G 25 DEAE Sepharose 6 Fast Flow DNA Sepharose 6 Fast Flow r-hbsag 1. CHO r-hbsag 2. Butyl-S Sepharose 6 Fast Flow r-hbsag 5
6 Butyl-S Sepharose 6 Fast Flow CHO r- HBsAg Bytyl-S Sepharose 6 Fast Flow ph Butyl-S Sepharose 6 Fast Flow 25 ml Butyl-S Sepharose 6 Fast Flow 200 ml Butyl-S Sepharose 6 Fast Flow 1 L Sephdex G-25 coarse 100 g Sephdex G-25 coarse 500 g Sephdex G-25 coarse 5 kg Butyl-S Sepharose 6 Fast Flow BioProcess TM DEAE sepharose Fast Flow 25 ml DEAE sepharose Fast Flow 500 ml DEAE sepharose Fast Flow 10 L Regulatory Support File RSF Butyl-S Sepharose 6 Fast Flow 5 L µm HCP 750 kda Sepharose 4 Fast Flow HCP 60 Q Sepharose XL virus licensed HCP DNA FDA EMEA 750 kda 3. 6
7 3 1 Vero Sepharose 4 Fast Flow 4 DNA Q Sepharose XL virus licensed DNA 5 Sepharose 4 Fast Flow Sepharose 6 Fast Flow Q sepharose XL virus licensed Sepharose 4 Fast Flow Sepharose 4 Fast Flow 1 L 10 L Sepharose 6 Fast Flow 1 L Sepharose 6 Fast Flow 10 L Q Sepharose XL Virus Lic 300 ml Q Sepharose XL Virus Lic 1 L Q Sepharose XL Virus Lic 4. Sepharose 4 Fast Flow 5 L * <100 ng ** * n.d. = ** dose = 45 µg 5. Sepharose 4 Fast Flow Q Sepharose XL virus licensed 7
8 DNA DNA DNA GMP 100 kda DNA DNA RNA DNA cgmp Sepharose 6 Fast Flow PlamidSelect SOURCE 30Q 300 kda DNA RNA DNA DNA Sepharose 6 Fast Flow RNA 2 PlamidSelect oc DNA DNA 3 SOURCE 30 Q 6. AKTApilot AKTApilot Sepharose 6 Fast Flow BPG TM 100 AKTApilot Sepharose 6 Fast Flow DNA PlamidSlect FineLINE TM 70 AKTApilot PlamidSelect DNA SOURCE 30Q FineLINE TM PlamidSelect DNA DNA RNA DNA oc = ccc = 8
9 2 cgmp 3 SOURCE 30Q and SOURCE 30S Plamidselect-Supercoiled Plasmid Puricication Starter Pack DNA BJ cgmp Supercoiled Plasmid Purification Starter Pack Sepharose 6 Fast Flow 1 L Sepharose 6 Fast Flow 10 L mg DNA cgmp Plasmidselect Purification Pack 1 pack Plasmidselect 200 ml Plasmidselect 1 L DNA Plasmidselect Xtra starter Kit Plasmidselect Xtra 1 pack 200 ml Plasmidselect Xtra 1 L SOURCE 30Q 50 ml SOURCE 30Q 200 ml SOURCE 30Q 1 L DNA % CGE* 95 DNA % AGE** 95 mg/ml 3.9 E.U./mg DNA 0.05 RNA µg/mg DNA 0.02 DNA µg/mg DNA 0.97 µg/ml < 51 * ** 1 3. * Sepharose 6 Fast Flow** 92 PlamidSlect % 72 SOURCE 30Q % 98 % 81 * A260 ** PicoGreen TM Molecular Probes pdna PlamidSlect-Supercoiled Plasmid Purification Starter Pack 10 mg DNA Sepharose 6 Fast Flow PlamidSlect SOURCE 30Q cgmp 9
10 Adv i ii iii iv v DNA 8 Q Sepharose XL virus licensed 0.65/0.2 µm 300 kda Q Sepharose XL virus licensed Ad5-CMV-NTR Q Sepharose XL virus licensed Ad5 Sepharose 4 Fast Flow 300 kda Ad5 8. Ad5 Cobra Biomanufacturing 9. Q Sepharose XL virus licensed Cobra Biomanufacturing 10
11 Data File Q sepharose XL Capto Q, S, DEAE AAV4 AAV5 Capto MMC Capto MMC Poster Capto Q Rapid adenovirus purification using Capto MMC Capto Q, S, DEAE Code No. Code No. Q Sepharose XL (virus licensed) Further reading (4) 300 kda Capto MMC AAV Capto Q 300 kda Purified recombinant AAV 4eGFP 10. A. Capto MMC AAV4 B. Capto Q AAV4 11. AAV4 11
12 12 FMD Frenkel BHK PEG Frenkel BHK 12 BHK
13 PEG µm 0.45 µm Lumen E 20 LMH 3A Lumen C E 40 LMH 500 KDa UniFlux membrane filteration system PEG BHK 13
14 Fast Trak Custom Designed Media CDM Fast Trak CDM Fast Trak Education Regulatory Support Files Fast Trak Fast Trak Fast Trak Fast Trak 14
15 Manufacturing Process development Fast Trak Chromatography systems Chromatography columns Chromatography media Membrane systems Membrane devices Research Microcarrier matrices 15
16 1. Belew, M. et al. Purification of recombinant hepatitia B Surface antigen produced by transformed Chinese hamster ovary (CHO) cell line grown in culture Bioseparation 1, (1991). 2. Scale up of a cost-effective and generic purification process for plasmid DNA. Life Science News Vol 16, 16-17, Code No Scale-up of a method for highly pure plasmid DNA. Downstream (2004). Code No Brument, N. et al. A versatile and scalable two-step ion-exchange chromatography process for purification of recombinant adenoassociated virus serotypes-2 and -5. Molecular Therapy (2002). 5. Herzer, S. et al. Key issues in the process development of purification procedures for viral vector and plasmid biopharmaceuticals. BioProcessing Journal 4, (2005). 6. Pitarresi, T. M. et al. Purification of plasmid DNA on an anion exchange column without the use of RNase to process scale. Molecular Therapy 9, [Supplement 1] (2004). 7. Herzer, S. Process design and scale-up of viral vector gene therapy products: New purification challenges. Cell & Gene Therapy 1, (2004). 8. Diogo, M. M. et al Studies on the retention of plasmid DNA and Escherichia coli nucleic acids by hydrophobic interaction chromatography. Bioseparation. 10, (2001) 9. Ferreira, G. N. Cabral, J. M. and Prazeres, D. M. Purification of supercoiled plasmid DNA using chromatographic processes. J. Mol. Recognit. 11, (1998). 10. Diogo, M. M. et al. Production, purification and analysis of an expemental DNA vaccine against rabies. J. Gen. Med. 3, (2001). 11. Jendrek, S. and Ekstrom, D. et al. Development of a production and purification method for type 5 adenovirus. BioProcessing Journal 4, (2005). 12. Blanche, F. et al. An improved anion-exchange HPLC method for the detection and purification of adenoviral particles. Gene Ther. 7, (2000). 13. Purification human influenza virus vaccine - towards a generic strategy. Downstream 37, (2004) Code No lifesciences@ge.com (852) (852) (010) (010) (021) (021) (020) , (020) A-C (028) (028) GE imagination at work BJ
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