是 一 类 物 质, 如 PAS 呈 阳 性 反 应 者 有 糖 原 粘 蛋 白 网 织 纤 维 软 骨 阿 米 巴 原 虫 霉 菌 等 许 多 物 质 和 组 织 结 构, 并 不 能 确 定 是 哪 一 种 具 体 成 分 所 谓 特 殊 染 色 的 相 对 性, 就 是 一 种 方 法 可 以

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1 一 概 述 : 为 了 显 示 与 确 定 组 织 或 细 胞 中 的 正 常 结 构 或 病 理 过 程 中 出 现 的 异 常 物 质 病 变 及 病 原 体 等, 需 要 分 别 选 用 相 应 的 显 示 这 些 成 分 的 染 色 方 法 进 行 染 色 包 括 : 胶 原 纤 维 染 色 (Masson 等 ) 网 状 纤 维 染 色 弹 力 纤 维 染 色 肌 肉 组 织 染 色 ( 磷 钨 酸 苏 木 素 ) 脂 肪 染 色 ( 苏 丹 III) 糖 原 染 色 (PAS) 粘 液 染 色 (PAS) 等 二 作 用 : 在 常 规 病 理 学 诊 断 中, 有 许 多 物 质 成 分 或 微 生 物 在 光 镜 下 难 以 识 别 或 鉴 别, 通 过 酶 组 织 学 染 色, 可 以 让 这 种 物 质 显 示 出 来 在 光 镜 下 观 察 到, 从 而 有 利 于 对 疾 病 进 行 诊 断 比 如, 当 细 胞 中 出 现 色 素, 是 黑 色 素 还 是 含 铁 血 黄 素 以 及 当 组 织 中 出 现 均 一 化 学 物 质 是 否 为 淀 粉 样 变 性 等, 用 组 织 化 学 技 术 区 别 起 来 很 简 单, 所 以 组 织 化 学 技 术, 虽 然 已 有 几 十 年 到 几 百 年 的 历 史, 仍 是 一 个 很 有 实 用 价 值 的 技 术 三 染 色 方 法 :1863 年 由 waldeyer 率 先 倡 导 用 苏 木 素 染 液 染 细 胞 核, 后 来 Mallory Mayer 等 也 阐 述 过 苏 木 素 的 应 用 近 年 来 特 殊 染 色 和 组 织 化 学 方 法 也 屡 有 创 新 Shikata(1973),Tanka 等 (1981 年 ) 分 别 介 绍 了 用 地 依 红 和 维 多 利 亚 蓝 混 合 液 显 示 乙 型 肝 炎 表 面 抗 原 的 方 法 ;1987 年 Crocker J 等 推 出 了 核 仁 组 成 区 嗜 银 蛋 白 染 色 的 技 术 方 法 以 及 1991 年 进 行 的 乳 腺 肿 瘤 核 仁 组 成 区 的 研 究 方 法 等 四 特 殊 染 色 的 分 类 : 特 殊 染 色 方 法 按 照 所 染 目 的 物 进 行 分 类, 有 结 缔 组 织 肌 肉 组 织 神 经 组 织 脂 类 物 质 糖 类 色 素 病 理 的 内 源 性 沉 着 物 病 原 微 生 物 内 分 泌 物 质 单 种 细 胞 和 性 染 色 质 骨 血 液 及 造 血 组 织 核 酸 酶 类 等 五 特 殊 染 色 的 命 名 : 对 于 特 染 的 命 名 至 今 尚 无 统 一 的 规 定, 多 数 均 按 发 明 者 的 姓 名 命 名, 如 van Geison 染 色 等 ; 有 的 则 按 所 用 染 色 剂 命 名, 如 甲 基 绿 一 派 若 宁 染 色 苏 丹 Ⅲ 染 色 等 ; 有 的 按 目 的 物 命 名, 如 网 织 纤 维 染 色 ; 还 有 的 采 用 混 合 命 名, 如 试 剂 十 人 名 等 六 染 色 原 理 : 染 色 过 程 是 染 色 剂 和 组 织 细 胞 相 结 合 的 过 程 其 机 理 尚 未 完 全 清 楚 1 有 学 者 认 为 从 物 理 学 角 度 看, 染 色 剂 和 组 织 细 胞 的 结 合 是 溶 解 或 吸 收 例 如 苏 丹 类 染 色 剂 使 脂 质 着 色, 就 是 利 用 染 色 剂 在 脂 质 中 的 溶 解 度 大 于 在 洒 精 等 溶 剂 中 的 溶 解 度 这 一 特 性 有 些 染 色 剂 是 染 色 剂 分 子 通 过 渗 透 和 毛 细 血 管 作 用 而 被 吸 收 或 沉 淀 到 组 织 细 肋 的 小 孔 中 去 而 着 色 的 这 种 机 制 的 染 色 是 很 少 的 2 另 有 学 者 认 为 染 色 是 染 色 剂 相 组 织 细 胞 之 间 的 化 学 性 结 合 如 显 示 含 铁 血 黄 素 的 普 鲁 士 反 应 是 最 典 型 的 例 子 但 是, 大 量 染 色 的 化 学 反 应 并 不 象 铁 反 应 那 样 明 确 大 多 数 染 色 的 原 理 至 今 仍 未 搞 清 楚, 有 些 可 能 是 物 理 性 的, 有 些 可 能 是 化 学 性 的, 有 些 则 可 能 2 种 机 制 都 起 作 用 正 因 为 人 们 对 染 色 的 原 理 还 没 有 完 全 掌 握, 所 以 还 不 能 很 好 地 运 用 原 理 来 控 制 它, 在 相 当 程 度 上 需 凭 工 作 经 验 七 染 色 的 分 类 ( 一 ) 普 通 染 色 最 广 泛 应 用 于 常 规 制 片 的 苏 木 素 和 伊 红 染 色, 又 称 为 常 规 染 色 ( 二 ) 特 殊 染 色 1. 定 义 专 门 用 于 显 示 某 些 特 定 目 的 物 的 染 色 方 法 称 为 特 殊 染 色, 它 又 可 以 理 解 为 选 择 性 染 色 特 殊 染 色 对 目 的 物 的 选 择 性 是 相 对 的 有 些 方 法 具 有 相 对 的 特 异 性, 加 油 红 O 等 脂 质 染 色, 显 阳 性 者 可 以 肯 定 为 脂 质 ; 有 些 则 显 示 的

2 是 一 类 物 质, 如 PAS 呈 阳 性 反 应 者 有 糖 原 粘 蛋 白 网 织 纤 维 软 骨 阿 米 巴 原 虫 霉 菌 等 许 多 物 质 和 组 织 结 构, 并 不 能 确 定 是 哪 一 种 具 体 成 分 所 谓 特 殊 染 色 的 相 对 性, 就 是 一 种 方 法 可 以 显 示 多 种 目 的 物, 一 种 目 的 物 可 以 用 多 种 方 法 显 示, 其 中 有 些 方 法 可 能 呈 阳 性, 而 有 些 方 法 则 呈 阴 性, 这 就 需 要 我 们 拿 捏 多 种 方 法, 因 为 有 时 只 有 依 靠 多 种 方 法 才 能 确 定 所 要 确 认 的 目 标 4. 特 殊 染 色 的 意 义 1) 可 以 显 示 在 常 规 HE 染 色 切 片 中 不 明 显 的 目 的 物, 例 如 当 病 变 中 霉 菌 数 量 较 少 时, 应 用 Gridley 染 色 就 容 易 发 现 2) 可 以 区 别 胶 原 纤 维 和 平 滑 肌, 苏 丹 染 色 可 区 别 脑 浆 内 的 脂 肪 变 和 水 池 变 3) 可 以 显 示 某 些 HE 染 色 中 不 能 看 到 的 目 的 物 如 网 织 纤 维 星 形 细 胞 的 突 起 结 核 杆 菌 螺 旋 茵 等, 都 可 用 相 应 的 特 殊 染 色 法 显 示 因 此, 特 殊 染 色 是 常 规 染 色 的 必 要 补 允, 也 是 染 色 技 术 中 不 可 缺 少 的 组 成 部 分 它 在 病 理 诊 断 中 起 着 辅 助 作 用 八 组 织 化 学 的 基 本 概 念 : 组 织 化 学 是 在 形 态 学 基 础 上 研 究 细 胞 或 组 织 中 物 质 的 化 学 组 成 定 位 定 量 及 代 谢 状 态 的 学 科, 是 组 织 学 与 生 物 学 及 生 物 化 学 等 的 边 缘 科 学, 其 目 的 是 联 系 形 态, 化 学 成 分 和 功 能 来 了 解 组 织 或 细 胞 的 代 谢 变 化 目 前 有 许 多 组 织 化 学 方 法 已 划 入 特 殊 染 色, 划 分 特 殊 染 色 和 组 织 化 学 无 绝 对 界 限 九 特 殊 染 色 和 组 织 化 学 现 阶 段 的 发 展 状 况 1. 虽 然 形 成 了 许 多 显 示 细 胞 化 学 的 方 法 及 一 些 特 殊 染 色 但 发 展 的 速 度 比 较 缓 馒 这 是 因 为 每 一 种 方 法 都 有 自 己 不 相 同 的 试 剂 底 物 和 方 法, 在 发 展 上 既 没 有 系 统 的 经 验 可 以 遵 循, 在 学 习 使 用 上 也 比 较 困 难 ; 2 自 从 免 疫 组 织 化 学 问 世 以 来. 几 乎 所 有 的 组 织 化 学 成 分 都 可 以 用 免 疫 组 织 化 学 方 法 检 测, 所 以 组 织 细 胞 化 学 的 许 多 方 法. 绝 大 多 数 被 免 疫 组 织 化 学 所 代 替 : 3. 但 有 些 组 织 化 学 力 法 定 性 准 确, 方 法 简 单. 使 用 方 便. 或 因 试 剂 便 宜, 至 今 沿 用 不 衰 : 十 组 织 化 学 的 方 法 和 种 类 1 化 学 方 法 : 根 据 其 化 学 反 应 的 原 理, 在 组 织 切 片 上 生 成 沉 淀, 显 示 定 位 2 类 化 学 方 法 : 有 少 数 方 法 的 染 色 反 应 有 特 殊 性, 但 机 制 不 明 3 物 理 方 法 : 应 用 物 质 的 物 理 学 特 性, 如 苏 丹 油 红 染 料 易 溶 于 脂 类 而 使 脂 类 染 色 十 一 组 织 化 学 技 术 应 掌 握 的 要 点 1. 组 织 材 料 及 时 切 片 与 染 色, 才 能 保 持 组 织 细 胞 良 好 的 形 态 结 构 2. 染 色 切 片 的 判 断, 应 把 病 变 的 形 态 部 位 及 相 应 的 理 论 一 起 进 行 综 合 分 析, 可 借 助 阴 性 及 阳 性 对 照, 正 确 分 析 实 验 结 果 3. 生 成 的 反 应 产 物 必 须 在 原 位 沉 淀, 着 色 深, 且 不 溶, 为 细 小 沉 淀 或 小 结 晶 能 保 证 定 位 的 精 确 性 及 稳 定 性, 便 于 反 复 观 察 十 二 各 种 特 殊 染 色 A\ 糖 原 和 粘 液 物 质 染 色 1 糖 原 糖 原 在 肝 细 胞 心 肌 细 胞 骨 胳 肌 细 胞 内 含 量 最 多, 其 次 是 毛 囊 子 官 腺 体 阴 道 上 皮 脐 带 等 处 均 有 少 量 糖 原 存 在 糖 原 易 溶 于 水, 在 酶 的 作 用 下 容 易 分 解 为 葡 萄 糖 葡 萄 糖 更 易 溶 于 水, 故 机 体 死 亡 后 糖 原 易 受 到 破 坏, 其 含 量 发 生 明 显 变 化 甚 至 完 全 消 失 用 常 规 HE 染 色 观 察 不 到 糖 原 的 形 态, 用 显 示 糖 原 的 特 殊 染 色 也 难 以 观 察 到 糖 原 的 形 态 及 分 布 所 以

3 为 了 观 察 和 研 究 组 织 内 糖 原 的 含 量 及 分 布 必 须 选 取 新 鲜 标 本, 用 能 保 存 糖 原 的 固 定 液 及 时 固 定, 再 经 特 殊 染 色 后 才 能 将 糖 原 显 示 出 来 (1) 固 定 方 法 及 注 意 事 项 1) 尽 可 能 选 取 小 块 新 鲜 组 织 并 及 时 固 定 2) 多 次 更 换 乙 醇 混 合 同 定 液, 在 4 左 右 内 固 定 与 保 存 这 是 针 对 糖 原 的 性 质 和 避 免 糖 原 溶 于 水 而 采 取 的 相 应 措 施 乙 醇 虽 然 是 保 持 糖 原 的 较 好 固 定 剂, 但 是 用 单 一 的 乙 醇 尤 其 是 用 无 水 乙 醇 固 定 肝 肌 肉 等 实 质 性 组 织 时, 固 定 作 用 迅 速 而 穿 运 力 弱, 组 织 表 面 会 很 决 凝 固 变 硬 这 样 由 于 固 定 不 透 和 不 均, 糖 原 同 样 不 能 得 到 较 好 的 保 存, 易 出 现 糖 原 颗 粒 趋 于 细 胞 一 端 的 极 化 现 象 目 前 固 定 与 保 存 糖 原 的 固 定 液, 以 乙 醇 为 溶 剂 配 制 含 甲 醛 冰 醋 酸 及 苦 昧 酸 等 混 合 固 定 液 为 好 : 此 类 固 定 液 利 用 乙 醇 防 止 糖 原 溶 解 于 水 ; 利 用 冰 酷 酸 和 苦 味 酸 的 膨 胀 及 软 化 作 用, 抵 消 乙 醇 对 组 织 的 收 缩 硬 脆 ; 利 用 甲 醛 对 组 织 固 定 的 渗 透 力 强 固 定 均 匀 等 优 点 其 固 定 原 理 是 使 与 糖 原 相 结 合 的 蛋 白 质 凝 固 (2) 常 用 固 定 液 1.Gendre 固 定 液 苦 味 酸 无 水 乙 醇 饱 和 溶 液 ( 约 8. 96%)80ml, 甲 醛 (38% 一 40 %)5ml, 冰 醋 酸 5ml 临 用 前 配 制 取 小 块 组 织 置 于 4 冰 箱 内 固 定 1 4 小 时, 固 定 期 间 更 换 2 3 次 新 液 固 定 前 组 织 禁 用 水 洗, 直 接 用 80% 乙 醇 浸 洗 数 次 后, 至 95% 乙 醇 开 始 脱 水 2.Lillie 固 定 液 (AFF) 无 水 乙 醇 85ml, 冰 醋 酸 5ml, 甲 醛 (38% 一 40%)10ml 此 液 为 优 良 的 固 定 液 配 制 及 使 用 方 法 与 Gendre 固 定 液 相 同 固 定 后 组 织 可 直 接 用 95% 乙 醇 开 始 脱 水 3.Rossman 固 定 液 苦 昧 酸 无 水 乙 醇 饱 和 被 90ml, 甲 醛 (38% 一 40%)10ml 临 用 前 配 制, 取 小 块 新 鲜 组 织 于 4 冰 箱 内 固 定 1 2d, 更 换 2 3 次 新 液, 然 后 在 室 温 下 用 95% 乙 醇 浸 洗 数 次, 经 无 水 乙 醇 脱 水 (3) 糖 原 染 色 应 用 1. 细 胞 内 泡 状 变 性 的 鉴 别 在 常 规 石 蜡 切 片 的 HE 染 色 中, 如 胞 浆 内 出 现 大 小 不 等 的 空 泡, 应 考 虑 可 能 是 脂 肪 变 性, 经 脂 溶 剂 的 脱 水 透 明 过 程 溶 解 而 形 成 的 空 泡 ; 也 可 能 是 糖 原 在 经 水 溶 液 固 定 过 程 小 的 脱 失 所 致 ; 或 可 能 是 单 纯 的 水 样 变 性 为 了 鉴 别 其 性 质, 则 需 要 用 显 示 糖 原 或 脂 质 染 色 法 加 以 证 明 2. 在 心 肌 病 变 及 其 他 心 血 管 疾 病 的 研 究 用 显 示 糖 原 的 特 殊 染 色, 可 以 观 察 到 由 缺 血 缺 氧 所 致 急 性 早 期 心 肌 坏 死 病 灶 内 的 糖 原 明 显 减 少 甚 至 消 失, 呈 均 质 的 浓 染 状 态, 而 病 灶 周 围 则 出 现 反 应 性 异 常 糖 原 增 多 ; 已 愈 合 的 心 肌 梗 死 灶 周 围 的 心 肌 纤 维 内 可 有 糖 原 颗 粒 浸 润 ; 心 肌 的 横 纹 肌 瘤 也 有 大 量 糖 原 存 在 3. 糖 原 累 积 病 的 诊 断 及 研 究 用 显 示 糖 原 的 特 染 方 法 可 观 察 到 由 先 天 性 遗 传 缺 陷 引 起 的 糖 原 累 积 病 时, 心 肝 肾 骨 骼 肌 单 核 吞 噬 系 统 等 器 官 内 均 有 大 量 的 糖 原 推 积 4. 糖 尿 病 诊 断 及 研 究 在 患 糖 尿 病 时, 肝 细 胞 肾 曲 管 上 皮 细 胞 心 肌 纤 维 内 均 可 见 糖 原 颗 粒 沉 着, 共 含 量 的 多 与 少 和 血 糖 水 平 呈 平 行 关 系 5. 用 于 某 些 肿 瘤 的 诊 断 与 鉴 别 1 鉴 别 肝 细 胞 癌 与 胆 管 癌 前 者 糖 原 染 色 为 阳 性, 后 者 为 阴 性 ; 鉴 别 横 纹 肌 瘤 与 颗 粒 细 胞 母 细 胞 瘤, 前 者 为 阳 性, 后 者 为 阴 性 ;3 骨 尤 文 氏 瘤 汗 腺 瘤 横 纹 肌 肉 瘤 化 学 感 受 器 瘤 脊 索 瘤 等, 用 糖 原 染 色 均 可 显 示 为 阳 性 (4) 显 示 糖 原 的 方 法 过 碘 酸 雪 夫 反 应 (PAS)

4 此 法 不 仅 能 显 示 糖 原, 而 且 还 能 显 示 中 性 粘 液 性 物 质 和 某 些 酸 性 粘 液 性 物 质 以 及 软 骨 脑 垂 体 霉 菌 脂 质 色 素 淀 粉 样 物 质 及 基 底 膜 等 故 PAS 法 在 病 理 学 上 可 用 于 多 种 疾 病 的 研 究 其 染 色 原 理 为 : 过 碘 酸 是 一 种 氧 化 剂, 它 能 氧 化 糖 类 及 有 关 物 质 中 的 l,2 一 乙 二 醇 基, 使 之 变 为 二 醛 ; 醛 与 Schiff( 雪 夫 试 剂 ) 结 合 生 成 种 品 红 化 合 物, 即 形 成 红 色 取 代 色 素 而 得 到 定 位 试 剂 配 制 (1)1% 过 碘 酸 水 溶 液 过 碘 酸 l 克, 蒸 馏 水 100ml (2)Schiff 试 剂 1N 盐 酸 20m1, 碱 性 品 红 1 克, 亚 硫 酸 氢 钠 l 克, 活 性 碳 2 克, 蒸 馏 水 200 m1 先 将 蒸 馏 水 加 热 煮 沸 后, 去 火 加 入 碱 性 品 红, 并 不 停 摇 荡 5min 使 其 溶 解, 待 溶 液 冷 至 50 时 过 滤, 再 加 入 适 量 盐 酸, 冷 至 25 再 加 入 亚 硫 酸 氢 钠 摇 荡 将 容 器 密 闭 后 存 放 于 暗 处 或 冰 箱 内 静 止 12 24h, 此 时 的 溶 液 以 淡 黄 色 或 无 色 为 好, 为 消 除 溶 液 的 颜 色 再 加 上 活 性 碳 2 克, 摇 荡 1min 后 过 滤, 溶 液 将 成 为 无 色 透 明 状 态 贮 存 于 4 冰 箱 内, 临 用 前 取 出, 待 溶 液 升 至 室 温 时 使 用 (3) 亚 硫 酸 氢 钠 溶 液 亚 硫 酸 氢 钠 2g, 蒸 馏 水 180m1, 盐 酸 20ml (4)IN 盐 酸 溶 液 浓 盐 酸 ( 比 重 1.19, 含 量 37%)8.5m1, 蒸 馏 水 91.5m1 染 色 步 骤 I) 石 蜡 切 片 3 5μm, 脱 蜡 至 水 洗 2) 蒸 馏 水 洗 1 2min 3) 用 1% 过 碘 酸 水 溶 液 氧 化 5 10min 4) 充 分 水 洗 5) 蒸 馏 水 洗 涤 数 次 6) 用 Schiff 试 剂 浸 染 5 一 10min, 如 温 度 低 时 可 延 长 浸 染 时 间 7) 倾 去 Schiff 试 剂, 直 接 流 水 冲 洗 10min 8) 用 明 砚 苏 木 素 染 液 浅 染 胞 核 2 3min, 过 染 时 可 用 o5% 盐 酸 乙 醇 液 稍 分 化 9) 流 水 冲 洗 5 一 l0min 10) 乙 醇 脱 水, 二 甲 苯 运 明, 中 性 树 胶 封 固 注 意 事 项 1) 过 碘 酸 的 浓 度 在 0.5% 一 2% 范 围 内, 其 染 色 结 果 无 显 著 差 异, 但 一 般 多 采 用 在 0.5% 一 1% 的 浓 度 其 PH 为 3 5 之 间 2) 用 过 碘 酿 液 氧 化 时 的 温 度 及 作 用 时 间 值 得 注 意 若 温 度 高 作 用 时 间 长 可 使 某 些 物 质 成 分 发 生 非 特 异 性 反 应, 结 果 会 出 现 假 阳 性, 以 其 氧 化 时 间 应 控 制 在 5 一 10min 环 境 温 度 不 高 于 20 为 宜, 室 温 稍 高 时 其 氧 化 时 间 应 适 当 缩 短 3) 配 制 雪 夫 试 剂 的 方 法 很 多, 其 基 本 原 理 都 是 将 碱 性 品 红 与 亚 硫 酸 氢 钠 等 作 用, 变 成 无 色 终 产 物, 故 较 为 理 想 的 雪 夫 试 剂 应 为 无 色 透 明 溶 液 其 质 量 如 何, 主 要 取 决 于 所 用 试 剂 碱 性 品 红 的 质 量, 也 与 配 制 方 法 所 用 器 皿 的 清 洁 程 度 及 保 存 妥 当 与 否 有 关 当 贮 存 的 溶 液 变 为 橘 红 色 或 粉 红 色 时, 即 说 明 已 变 质 失 效 而 不 能 再 用 4) 亚 硫 酸 氢 钠 冲 洗 液 必 须 在 临 用 前 配 制, 用 过 的 或 放 置 后 溶 液 不 能 再 用 经 此 液 作 用 后,PAS 阳 性 物 质 显 红, 以 谈 染 为 宜 5) 复 染 核 不 要 过 深, 应 谈 染 为 宜 2 粘 液 物 质 人 体 各 种 腺 体 及 其 他 组 织 细 胞 所 分 泌 的 粘 液 类 物 质 大 体 上 相 似, 统 称 为 粘 液 按 其 化 学 结 构 和 物 理 状 态 的 不 同, 粘 液 物 质 由 粘 多 糖 和 粘 蛋 白 组 成 (1) 粘 多 糖 粘 多 糖 包 括 酸 性 粘 多 糖 和 中 性 粘 多 糖, 两 者 均 以 氨 基 已 糖 为 主 要 成 分 1) 酸 性 粘 多 糖 其 基 质 成 分 以 硫 酸 性 和 唾 液 酸 性 2 种 形 式 存 在, 广 泛 地 分 布 于 全 身 各 处 正 常 生 理 情 况 下, 主 要 存 在 于 消 化 道 呼 吸 道 及 其 他 部 位 的 粘 液 腺 分 泌

5 物 中, 在 滑 膜 玻 璃 体 角 膜 脐 带 等 处 尤 为 丰 富, 硫 酸 软 骨 素 和 肝 素 为 复 杂 的 酸 性 粘 多 糖 硫 酸 软 骨 素 分 A B C3 型, 存 在 于 软 骨 结 缔 组 织 肌 脂 血 管 和 皮 肤 的 基 质 内 ; 而 肝 素 则 存 在 于 肥 大 细 胞 的 胞 浆 中 2) 中 性 粘 多 糖 主 要 存 在 于 胃 粘 膜 表 面 上 皮 幽 门 腺 十 二 指 肠 的 勃 鲁 钠 腺 等 处, 不 如 酸 性 粘 多 糖 分 布 广 泛 (2) 粘 蛋 白 粘 蛋 白 是 由 糖 和 蛋 白 质 相 结 合 而 构 成, 故 又 称 糖 蛋 白 见 于 各 种 组 织 上 皮 和 腺 体 导 管 的 分 泌 物 中, 在 垂 体 前 叶 的 嗜 碱 性 细 胞 所 含 促 生 殖 腺 激 素 和 促 甲 状 腺 激 素 中 也 可 见 到 粘 蛋 白, 还 有 一 些 存 在 于 血 清 中 在 同 一 种 上 皮 和 腺 体 内 常 可 同 时 分 泌 2 种 粘 液 物 质, 而 在 同 部 位 的 分 泌 物 中 两 者 的 比 例 和 含 量 都 有 所 不 同 粘 液 物 质 一 般 具 有 下 列 性 质 :1 对 异 染 性 染 料 具 有 异 染 性 ;2 对 碱 性 染 料 具 有 很 强 的 亲 和 力 ;3 除 胃 粘 蛋 白 外, 其 他 粘 液 遇 醋 酸 时 都 会 发 生 沉 淀 ;4 可 溶 于 弱 碱 性 溶 液 (1) 粘 液 染 色 的 应 用 1 用 于 一 般 粘 液 性 病 变 的 观 察 在 病 理 状 下, 结 缔 组 织 肾 等 一 些 实 质 性 脏 器, 可 出 现 粘 液 水 肿 粘 液 变 性 和 粘 蛋 白 的 增 多 常 规 HE 染 色, 粘 液 呈 污 秽 和 淡 蓝 色, 很 不 清 楚, 如 用 粘 液 物 质 染 色 可 以 得 到 满 意 的 结 果 2 肿 瘤 的 诊 断 和 鉴 别 诊 断 1) 胃 癌 在 粘 膜 表 面 上 皮 和 癌 组 织 内 均 可 见 到 呈 阳 性 反 应 的 粘 液 物 质 : 同 时 还 可 证 明 癌 细 胞 是 否 浸 润 到 间 质 中 ; 粘 液 染 色 对 观 察 肠 上 皮 化 生 也 是 很 有 意 义 的 2) 对 肺 部 某 些 肿 瘤 的 观 察 3) 粘 液 瘤 和 粘 液 肉 瘤 用 粘 液 物 质 染 色 均 呈 阳 性, 可 以 明 确 肿 瘤 性 质, 确 立 诊 断 4) 软 骨 粘 液 样 纤 维 瘤 胚 胎 样 横 纹 肌 肉 瘤, 用 粘 液 染 色 均 呈 阳 性 5) 鉴 别 粘 液 表 皮 样 癌 与 鳞 状 上 皮 癌 时, 前 者 呈 阳 性, 后 者 呈 阴 性 6) 鉴 别 粘 液 腺 癌 与 低 分 化 鳞 癌, 前 者 呈 阳 性, 后 者 呈 阴 性 7) 鉴 别 滑 膜 肉 瘤 与 软 组 织 腺 泡 状 肉 瘤 间 皮 瘤 腺 泡 状 横 纹 肌 肉 瘤, 滑 膜 肉 瘤 呈 阳 性, 后 者 呈 阴 性 3. 用 于 动 脉 粥 样 硬 化 胶 原 病 粘 液 性 水 肿 Marfan 氏 综 合 征 等 其 他 疾 病 的 诊 断 和 研 究 ( 二 ) 组 织 固 定 方 法 采 用 含 汞 盐 的 固 定 液 固 定 效 果 最 佳 如 果 是 巳 用 甲 醛 或 乙 醇 固 定 的 组 织, 应 在 切 片 脱 蜡 后 用 5% 氯 化 汞 水 溶 液 媒 染 5min, 再 用 碘 液 和 5% 硫 代 硫 酸 钠 水 溶 液 作 脱 汞 处 理, 可 得 到 一 定 的 改 善 应 注 意 粘 液 物 质 不 能 用 碱 性 甲 醛 等 固 定 液 固 定, 以 免 大 量 的 酸 性 粘 多 糖 被 溶 解 ( 三 ) 染 色 方 法 1 异 染 反 应 法 2 Mayer 胭 脂 红 染 色 法 3 Southgate 胭 脂 红 染 色 法 4 Hale 改 良 胶 质 铁 染 色 法 5 PAS 过 碘 酸 雪 夫 反 应 法 6 AB-PAS 爱 先 蓝 过 碘 酸 雪 夫 反 应 法 7 Culling 爱 先 蓝 醛 复 红 染 色 法 8 爱 先 蓝 染 色 法 B\ 病 理 性 色 素 及 沉 着 物 的 组 化 染 色 黑 色 素 : 在 正 常 情 况 下, 皮 肤 虹 膜 脉 络 膜, 软 脑 膜 等 处 均 可 有 黑 色 素 沉 着 在 病 理 情 况 下 可 能 在 全 身 各 处 含 有 黑 色 素 沉 着 物 (1) 黑 色 素 染 色 的 应 用 1. 用 于 黑 色 素 瘤 的 诊 断 在 疑 为 黑 色 素 瘤 时, 常 需 黑 色 素 染 色 当 肿 瘤 黑 色 素

6 很 少 时, 黑 色 素 染 色 可 使 黑 色 素 容 易 发 现, 当 病 变 内 黑 色 素 含 量 多 时, 可 用 漂 白 法 以 便 观 察 核 的 结 构 和 核 分 裂 现 象 2. 其 他 色 素 性 神 经 瘤 透 明 细 胞 肉 瘤 也 有 黑 色 素 存 在 ; 皮 病 性 淋 巴 结 炎 时, 淋 巴 结 内 也 可 有 黑 色 素 沉 着 3. 皮 肤 病 黑 色 棘 皮 病 老 年 疣 白 癜 风 色 素 性 荨 麻 疹 瑞 尔 黑 变 病 网 状 色 素 性 皮 肤 异 色 病 红 斑 狼 疮 扁 平 苔 藓 和 许 多 内 分 泌 代 谢 性 疾 病 ( 阿 狄 森 病 肝 病 等 ), 这 些 疾 病 的 皮 肤 中 都 有 色 素 沉 着 或 脱 失 在 必 要 的 情 况 下 用 黑 色 素 染 色 法 4. 神 经 黑 色 素 中 枢 神 经 系 统 的 黑 质 蓝 斑 以 及 其 他 部 位 神 经 细 胞 的 色 素 与 皮 肤 的 黑 色 素 稍 有 区 别, 又 称 神 经 黑 色 素 通 过 黑 色 素 染 色 法, 可 供 神 经 研 究 的 参 考 5. 假 性 黑 变 病 色 素 这 种 假 性 黑 色 素 主 要 见 于 大 肠, 又 称 为 结 肠 黑 变 病 在 临 床 上 见 于 严 重 便 秘 和 习 惯 用 鼠 李 皮 作 缓 泻 剂 者 在 固 有 膜 巨 噬 细 胞 内 有 一 种 性 质 不 明 的 色 素, 普 鲁 士 蓝 反 应 弱 阳 性,PAS 阳 性 有 人 认 为 是 含 铁 血 黄 素 与 肠 道 内 细 菌 黑 色 素 脂 褐 素 相 似 的 物 质 (2) 染 色 方 法 1 Masson Fontana 银 浸 法 2 DOPA 黑 色 素 反 应 法 3 脱 色 素 漂 白 法 脱 黑 色 素 的 方 法, 就 是 将 要 显 示 黑 色 素 的 连 续 切 片 应 用 氧 化 剂 氧 化 及 漂 白 处 理, 使 黑 色 素 被 脱 色, 然 后 再 用 显 示 黑 色 素 的 染 色 方 法 加 以 证 明 为 阳 性 结 果 通 常 采 用 此 法 来 证 实 是 否 有 黑 色 素 存 在 时, 需 制 3 张 连 续 石 蜡 切 片, 一 张 作 黑 色 素 染 色, 一 张 用 氧 化 漂 白 脱 色 素 法 脱 色 方 法 1) 氯 化 钾 乙 醇 盐 酸 法 氯 化 钾 1 克,70% 乙 醇 50m1, 浓 盐 酸 1m1 在 立 式 染 色 缸 中 进 行 3h 2) 高 锰 酸 钾 草 酸 法 用 o.1% 一 0.25% 高 锰 酸 钾 溶 液 处 理 切 片 2 ª4h, 水 洗 后 用 1 % 草 酸 处 理 1min 3) 溴 水 脱 色 法 用 1% 浊 水 溶 液 处 理 切 片 12 ª24h 4) 铬 酸 脱 色 法 用 1% 铬 酸 水 溶 液 与 5% 氯 化 钙 水 溶 液 之 等 量 混 合 液 处 理 切 片 8 ª12h 5) 过 氧 化 氢 脱 色 法 用 10% 过 氧 化 氢 狡 处 理 切 片 24 ª48h 6) 过 醋 酸 脱 色 法 用 40% 过 醋 酸 水 溶 液 处 理 2 ª16h 根 据 需 要 进 行 染 色 常 规 脱 水 透 明 及 封 固 在 进 行 氧 化 漂 白 处 理 过 程 中, 应 随 时 取 出 镜 捡, 以 细 胞 内 外 之 黑 色 素 完 全 消 失 为 准 淀 粉 样 物 质 淀 粉 样 物 质 是 一 种 无 细 胞 的 同 质 性 的 嗜 伊 红 性 物 质, 在 化 学 上 属 于 糖 蛋 白, 其 蛋 白 质 部 分 与 球 蛋 白 相 似, 还 可 以 认 为 是 由 蛋 白 质 与 硫 酸 软 骨 素 所 合 成 的 化 合 物 淀 粉 样 蛋 白 90% 为 淀 粉 样 原 纤 维 蛋 白,10% 为 糖 蛋 白 淀 粉 样 物 质 染 色 应 用 1 显 示 淀 粉 样 变 性 程 度 在 心 肾 脾 淋 巴 结 甲 状 腺 舌 喉 肠 道 血 管 及 皮 肤 等 处 较 易 出 现 全 身 性 淀 粉 样 变 性 时, 均 可 用 淀 粉 样 物 质 染 色 法 显 示 以 区 分 变 性 程 度 2 用 以 区 分 淀 粉 样 变 性 与 其 他 变 性 在 胶 原 纤 维 和 网 状 纤 维 周 围 小 动 脉

7 血 管 外 膜 及 毛 细 血 管 血 窦 等 出 现 变 性 时, 可 用 淀 粉 样 物 质 染 色 法 进 行 显 示 和 区 分 其 性 质 3. 用 于 肿 瘤 的 诊 断 与 鉴 别 某 些 肿 瘤, 特 别 是 内 分 泌 肿 瘤, 间 质 内 时 常 会 出 现 淀 粉 样 物 质 沉 着, 如 甲 状 腺 髓 样 癌 胰 岛 细 胞 癌 肺 小 细 胞 癌 等 4. 皮 肤 组 织 的 淀 粉 样 变 性 多 沉 积 于 真 皮 的 乳 头 层 内 可 见 于 皮 肤 脂 溢 性 角 化 老 年 性 角 化 皮 脂 腺 痣 红 斑 狼 疮 5. 为 某 些 疾 病 的 诊 断 与 鉴 别 提 供 依 据 钙 化 上 皮 瘤, 声 带 息 肉, 老 年 人 胰 岛 脑 垂 体 及 前 列 腺 腔 内, 时 常 会 出 现 淀 粉 样 变 性 染 色 方 法 1.Jurgens 甲 基 紫 法 2.Puchtler Sweat 一 Levine 法 3.Freudenrhal 改 良 刚 果 红 法 4.Cole( 高 PH 值 ) 刚 果 红 法 5. Dennhold 刚 果 红 法 6.Highman 甲 醇 刚 果 红 法 Freudenrhal 改 良 刚 果 红 法 此 法 经 改 良 后 有 较 好 的 效 果, 故 较 为 常 用 [ 染 色 步 骤 ] 1) 切 片 脱 蜡 至 水 2) 浸 入 10% 甲 醛 液,15 30min 3) 直 接 入 刚 果 红 染 色 液 15min 4) 经 自 来 水 洗 2min, 蒸 馏 水 稍 洗 5) 入 Mayer 或 Ehrlish 苏 木 素 液 2min 6) 自 来 水 洗 后 入 0. 5% 盐 酸 乙 醇 分 化 7) 充 分 水 洗 返 蓝 8) 无 水 乙 醇 脱 水, 二 甲 苯 透 明, 中 性 树 胶 封 固 [ 结 果 ] 淀 粉 样 物 质 呈 鲜 红 色, 胞 核 呈 蓝 色 C\ 结 缔 组 织 和 肌 肉 组 织 染 色 网 状 纤 维 网 状 纤 维 是 网 状 结 缔 组 织 内 的 一 种 纤 维 这 种 纤 维 用 HE 染 色 一 般 不 易 辨 认, 若 用 氨 银 溶 液 浸 染 能 使 纤 维 变 成 黑 色, 故 又 称 嗜 银 纤 维 (1) 网 状 纤 维 染 色 的 应 用 1. 用 于 显 示 和 鉴 别 肿 瘤 的 性 质 的 来 源 (1) 显 示 和 区 分 癌 与 肉 瘤 来 源 于 上 皮 组 织 的 恶 性 肿 瘤 ( 癌 ) 周 围 有 网 状 纤 维 包 绕, 巢 内 癌 细 胞 之 间 则 没 有 网 状 纤 维 分 布 ; 来 源 于 间 叶 组 织 的 恶 性 肿 瘤 ( 肉 瘤 ), 癌 细 胞 之 间 往 往 可 见 较 多 的 网 状 纤 维 存 在 (2) 区 分 血 管 内 皮 瘤 与 血 管 外 皮 瘤 恶 性 血 管 内 皮 瘤 的 瘤 细 胞 主 要 在 嗜 银 纤 维 鞘 结 构 以 内, 单 个 细 胞 则 无 嗜 银 纤 维 围 绕 ; 恶 性 血 管 外 皮 瘤 的 瘤 细 胞 均 位 于 小 血 管 之 间 网 状 纤 维 鞘 之 外, 并 有 丰 富 的 网 状 纤 维 自 小 血 管 壁 向 外 呈 放 射 状 包 绕 瘤 细 胞 (3) 用 以 鉴 别 恶 性 淋 巴 瘤 与 网 状 细 胞 肉 瘤 在 恶 性 淋 巴 细 胞 瘤 中 产 生 的 网 状 纤 维 比 在 正 常 淋 巴 结 内 的 网 状 纤 维 稍 为 减 少, 网 状 纤 维 在 瘤 细 胞 间 普 遍 存 在 ; 而 网 状 细 胞 肉 瘤 的 网 状 细 胞 中 会 产 生 较 多 的 网 状 纤 维, 与 网 状 纤 维 细 胞 紧 密 粘 连 或 自 胞 浆 伸 出, 分 布 于 每 个 细 胞 之 间 (4) 区 分 骨 尤 文 肉 瘤 与 骨 网 状 细 胞 肉 瘤 骨 尤 文 肉 瘤 肿 瘤 组 织 区 域 没 有 网 状 纤 维. 网 状 纤 准 只 见 于 血 管 周 围 和 纤 维 性 骨 小 梁 之 间 ; 而 骨 网 状 细 胞 肉 瘤 在 网 状 纤 维 染 色 中, 可 见 细 胞 间 有 大 量 的 网 状 纤 维 存 在 (5) 显 示 与 鉴 别 骨 异 质 增 生 与 骨 化 性 纤 维 瘤 用 网 状 纤 维 染 色 骨 异 质 增 生 可 显 示 编 织 状 结 构 ; 骨 化 性 纤 维 瘤 用 银 染 色 可 显 示 呈 平 行 状 结 构 (6) 鉴 别 脑 膜 瘤 与 星 形 细 胞 瘤 脑 膜 瘤 来 自 蛛 网 膜 细 胞, 用 网 状 纤 维 染 色 可 见 网

8 状 纤 维 散 在 分 布 于 肿 瘤 组 织 中 ; 星 形 细 胞 瘤 则 显 示 不 出 网 状 纤 维 2. 用 于 某 些 肿 瘤 的 诊 断 根 据 染 色 所 显 示 的 网 状 纤 维 多 少 分 布 及 走 行 特 点, 可 用 于 诊 断 下 列 肿 瘤, (1) 平 滑 肌 肉 瘤 细 胞 之 间 见 大 量 平 行 分 布 的 网 状 纤 维 (2) 纤 维 肉 瘤 可 见 大 量 网 状 纤 维 存 在, 并 且 包 绕 瘤 细 胞 (3) 滑 膜 肉 瘤 其 梭 形 细 胞 产 生 网 状 纤 维, 但 不 如 纤 维 肉 瘤 多, 上 皮 样 细 胞 不 产 生 网 状 纤 维 (4) 恶 性 神 经 鞘 瘤 在 细 胞 致 密 区 域 网 状 纤 维 细 长 而 且 行 走 在 细 胞 之 间, 纤 维 与 细 胞 关 系 密 切, 但 不 包 绕 细 胞 3. 显 示 与 观 察 基 底 膜 的 变 化 癌 肿 时 癌 细 胞 不 产 生 网 状 纤 维, 癌 细 胞 巢 周 围 绕 有 网 状 纤 维 形 成 基 底 膜 肉 瘤 时, 瘤 细 胞 间 产 生 网 状 纤 维, 不 形 成 巢, 缺 乏 基 底 膜 上 皮 样 间 叶 细 胞 间 皮 或 滑 膜 等 可 形 成 细 胞 梁, 也 可 产 生 少 量 网 状 纤 维, 不 形 成 基 底 膜 4. 用 于 识 别 坏 死 组 织 的 结 构 凝 固 性 坏 死 用 HE 染 色 往 往 成 为 一 片 红 色 的 无 定 形 物 质, 识 别 不 出 网 状 纤 维 支 架 的 形 态 用 网 状 纤 维 染 色, 可 观 察 列 早 期 凝 固 性 坏 死 处 的 网 状 支 架 还 保 留 其 特 点 5. 用 于 显 示 和 研 究 肝 组 织 病 变 用 网 状 纤 维 的 染 色 法, 可 观 察 肝 脏 病 变 处 的 网 状 支 架 形 态, 分 布 特 点 及 其 破 坏 情 况, 可 以 判 定 和 研 究 其 病 变 性 质 程 度 及 其 发 展 与 转 归 例 如, 探 讨 亚 急 性 黄 色 肝 萎 缩 是 否 向 肝 硬 化 演 变 转 向 硬 化 方 面 演 变 则 可 见 到 网 状 支 架 塌 陷, 黑 色 纤 细 的 网 状 纤 维 逐 渐 移 行 为 囊 状 新 形 成 之 胶 原 纤 维 被 染 成 棕 色 (2) 网 状 纤 维 染 色 的 注 意 事 项 网 状 纤 维 染 色 方 法 很 多, 各 种 方 法 的 试 剂 配 制 和 操 作 方 法 不 同, 但 在 染 色 中 的 要 求 都 是 严 格 的 1) 用 新 鲜 蒸 馏 水 ( 最 好 用 双 蒸 馏 水 ) 配 制 2) 所 用 玻 璃 器 材 及 载 破 片 均 达 到 化 学 洁 净 程 度 3) 对 已 配 制 好 的 硝 酸 银 液 和 氨 银 溶 液, 要 贮 藏 冰 箱 保 存 待 用 4) 在 染 色 过 程 中. 用 染 氨 银 溶 液 或 者 硝 酸 银 液 的 前 后 应 用 蒸 馏 水 沉 浸 5) 氯 化 金 调 整 色 和 硫 代 硫 酸 钠 固 定 的 时 间 不 应 太 长 否 则 会 引 起 纤 维 褪 淡 现 象 6) 根 据 诊 断 需 耍, 可 进 行 胞 核 染 色 和 其 他 纤 维 套 色 增 染, 使 色 彩 更 为 鲜 丽 清 晰 7) 脱 水 后 及 时 封 片, 不 宜 在 空 气 中 停 留 时 间 过 长, 以 免 产 生 色 素 颗 粒 (3) 染 色 方 法 1.Gomori 银 染 色 法 [ 固 定 ] 甲 醛 溶 液 乙 醇 或 其 他 固 定 液 均 可 [ 试 剂 配 制 ] 氨 性 银 溶 液 ( 甲 液 : 硝 酸 银 10.2 克, 蒸 馏 水 100ml 乙 液 : 氢 氧 化 钠 3. 1 克, 蒸 溜 水 100ml) 取 甲 液 5ml, 滴 加 氨 水 至 溶 解 清 亮 为 止 再 加 入 5m1 乙 液, 此 时 该 液 突 然 变 为 紫 黑 色, 再 滴 加 氨 水 至 清 亮 为 止 补 加 4 滴 氨 水. 用 蒸 馏 水 补 足 50ml [ 染 色 步 骤 ] 1) 石 蜡 切 片, 脱 蜡 至 水 2) 入 9.5% 高 锰 酸 钾 中, 至 3% 硫 酸 (5ml)5min 3) 自 来 水 洗 4)2% 草 酸 漂 洗 2 次, 水 洗 2min 5)2% 硫 酸 铁 铵 媒 染 1min 6) 自 来 水 及 蒸 馏 水 洗 2 次 7) 入 氨 性 银 溶 液 内 1min 8) 蒸 馏 水 洗 2 次 9) 入 20% 甲 醛 液 中 5min 10) 蒸 馏 水 浸 洗 2 次 11) 入 o.2% 氯 化 金 液 中 2min 12)2% 硫 代 硫 酸 钠 固 定 2min 13) 自 来 水 洗, 蒸 馏 水 洗 2 次 14)V.G 复 染 3min 15) 直 接 用 无 水 乙

9 醇 脱 水, 二 甲 苯 透 明, 中 性 树 胶 封 固 [ 结 果 ] 网 状 纤 维 灰 黑 色, 胶 原 纤 维 红 色, 基 质 黄 色 结 缔 组 织 多 色 染 色 法 在 组 织 胚 胎 学 中 将 结 缔 组 织 分 为 疏 松 组 织 致 密 组 织 网 状 组 织 软 骨 组 织 骨 组 织 和 血 液 等 结 缔 组 织 结 构 上 的 特 征 是 细 胞 分 散, 有 大 量 的 细 胞 间 质 结 缔 组 织 染 色 主 要 以 显 示 或 区 分 各 种 纤 维 成 分, 故 又 称 为 纤 维 性 结 缔 组 织 多 色 染 色 在 病 理 诊 断 中, 用 于 判 定 各 种 组 织 器 官 和 病 变 程 度 与 修 复 情 况, 以 不 同 色 调 显 示 与 区 别 某 些 非 结 缔 组 织 及 物 质 成 分 1 Masson 三 色 染 色 法 主 要 显 示 核 嗜 银 颗 粒 神 经 胶 质 纤 维 胶 原 角 质 细 胞 间 纤 维 等 [ 固 定 ] 此 法 最 好 用 zenker 液 或 Bouin 液 固 定,10% 甲 醛 固 定 也 可, 若 再 用 重 铬 酸 钾 液 处 理 后 也 能 获 得 较 好 的 结 果 [ 试 剂 配 制 ] (1)Regaud 苏 木 素 染 液 苏 木 素 lg,95% 乙 醇 10ml, 甘 油 10ml, 蒸 馏 水 80ml (2) 丽 春 红 酸 性 复 红 液 丽 春 红 o.7g, 酸 性 复 红 o.3g, 蒸 馏 水 99ml, 冰 醋 酸 1ml (3) 醋 酸 苯 胺 蓝 液 苯 胺 蓝 2g, 蒸 馏 水 98ml, 醋 酸 2ml (4) 苦 味 酸 乙 醇 液 苦 味 酸 ( 约 7%) 加 入 95% 乙 醇 中 的 饱 和 液 20ml, 再 加 95% 乙 醇 10ml 染 色 步 骤 1) 切 片 脱 蜡 至 水, 如 用 zenker 液 固 定 2)Regaud 苏 木 素 液 染 5min 3)95% 乙 醇 中 洗 2 次 4) 在 苦 昧 酸 乙 醇 液 中 分 色 5) 在 流 水 中 洗, 蒸 馏 水 洗 6) 丽 春 红 酸 性 复 红 液 中 染 5min 7) 蒸 馏 水 洗 8)1% 磷 钼 酸 中 染 5min 9) 不 经 水 洗, 直 接 入 醋 酸 苯 胺 蓝 液 中 3min 10)1% 醋 酸 处 理 1min 11)95% 乙 醇 脱 水, 无 水 乙 醇 脱 水 多 次 12) 二 甲 苯 透 明, 中 性 树 胶 封 固 D\ 病 原 体 染 色 1 细 菌 细 菌 是 最 常 见 的 一 类 病 原 微 生 物, 是 具 有 细 胞 壁 的 单 细 胞 生 物 根 据 染 色 方 法 可 以 把 细 菌 分 为 一 般 细 菌 和 抗 酸 菌 两 类, 这 两 类 细 菌 在 染 色 方 法 上 是 显 著 不 同 的, 下 面 主 要 介 绍 抗 酸 菌 (1) 抗 酸 菌 染 色 的 应 用 根 据 染 色 特 点 将 结 核 杆 菌 麻 风 杆 菌 通 常 称 为 抗 酸 杆 菌 因 为 结 核 杆 和 麻 风 杆 菌 中 含 有 一 种 特 殊 的 脂 质 性 包 膜, 对 一 些 染 料 有 一 定 的 拒 抗 作 用, 因 此 用 一 般 性 染 料 和 方 法 则 不 易 着 色 ; 经 过 特 殊 的 染 色 处 理 后, 这 类 细 菌 一 经 染 上 颜 色, 又 不 易 脱 色, 所 以 这 类 杆 菌 又 称 为 抗 酸 杆 菌, 所 用 染 色 方 法 称 抗 酸 杆 菌 染 色 此 类 菌 在 HE 中 是 看 不 到 的, 只 有 经 过 特 染 才 能 观 察 到 细 菌 是 否 存 在 (1.1) 结 核 病 与 类 结 核 病 的 鉴 别 在 通 常 的 情 况 下, 有 特 异 病 理 变 化 的 典 型 结 核 不 难 诊 断. 仍 非 典 型 者 常 需 要 特 殊 染 色 与 类 结 核 病 鉴 别 如 结 核 病 用 结 核 杆 菌 的 染 色 方 法 时 其 病 灶 内 可 查 出 抗 酸 杆 菌 为 阳 性 反 应, 而 结 节 病 梅 毒 颗 粒 肿 矽 肺 亚 急 性 甲 状 腺 炎 等 类 结 核 病 变 均 为 阴 性 反 应 (1.2) 用 于 麻 风 病 的 诊 断 与 鉴 别 麻 风 病 变 切 片 用 抗 酸 杆 菌 染 色 显 示 麻 风 杆 菌 可 确 诊 为 麻 风 病, 并 可 根 据 麻 风 杆 菌 的 数 量 区 分 瘤 型 或 类 结 核 型, 也 可 根 据 抗 酸 杆 菌 病 变 的 形 态 分 布 特 点 等 进 行 鉴 别

10 (2) 染 色 注 意 事 项 在 显 示 抗 酸 杆 菌 的 方 法 中 传 统 的 ZzehI Neelscn 法 较 为 普 通 使 用, 用 染 色 能 力 很 强 的 复 红 作 染 剂, 以 石 炭 酸 作 媒 染 剂 为 了 促 进 染 液 穿 透, 采 用 加 热 的 方 法 细 菌 着 色 后 用 稀 酸 除 去 背 景 染 色, 最 后 再 用 亚 甲 蓝 等 复 染 背 景, 结 果 在 蓝 色 的 背 景 上 抗 酸 杆 菌 呈 鲜 红 色 (3) 染 色 方 法 1.ziehl 一 Neelsen 抗 酸 杆 菌 法 [ 试 剂 配 制 ] 石 炭 酸 复 红 液 ( 碱 性 复 红 lg, 纯 乙 醇 l0ml, 石 炭 酸 (5%) 水 溶 液 100m1) 碱 性 复 红 溶 于 乙 醇 内, 然 后 与 石 炭 酸 水 溶 液 混 合, 用 前 过 滤 [ 染 色 步 骤 ] 1) 切 片 脱 蜡 至 水 2) 入 石 炭 酸 复 红 掖 1h. 于 37C 或 56 温 箱 内 30min 3) 自 来 水 洗 4) 用 0.5% 盐 酸 乙 醇 分 化 5) 水 洗, 用 0.1% 亚 甲 蓝 水 溶 液 复 染 6) 用 95% 乙 醇 分 化, 使 亚 甲 蓝 脱 色, 以 便 显 示 清 楚 7) 无 水 乙 醇 脱 水, 二 甲 苯 透 明, 中 性 树 胶 封 固 ( 二 ) 真 菌 真 菌 又 称 霉 菌, 种 类 很 多, 和 其 他 微 生 物 一 样, 广 泛 分 布 于 自 然 界 在 人 体 中 有 2 种 基 本 形 态, 即 单 细 胞 型 和 多 细 胞 型 (1) 真 菌 染 色 法 的 选 用 1. 曲 菌 通 常 HE 染 色 中 可 见 到 曲 菌, 因 为 曲 菌 菌 丝 对 苏 木 素 有 弱 嗜 染 性, 故 一 般 可 用 高 碘 酸 无 色 复 红 法, 但 也 可 用 醛 复 红 法 或 六 胺 银 法, 效 果 均 较 好 这 种 真 菌 感 染 多 见 于 肺 部, 皮 肤 耳 鼻 腔 眼 眶 等 2. 毛 霉 菌 形 态 和 曲 菌 相 似 其 染 色 以 用 六 胺 银 和 无 色 复 红 醛 复 红 为 佳 人 体 毛 霉 菌 常 见 于 头 面 部 肺 部 和 消 化 道, 易 侵 犯 血 管, 常 引 起 脉 管 炎 血 栓 形 成 和 梗 死 等 病 变 3. 新 型 隐 球 菌 呈 圆 形 或 卵 圆 形, 为 一 种 粘 多 糖 物 质 所 组 成 爱 先 蓝 ( 阿 尔 森 蓝 ) 和 粘 液 胭 脂 红 染 色 呈 阳 性 反 应 4. 放 线 茵 是 一 种 有 细 胞 壁, 其 化 学 组 成 与 细 菌 相 似 的 真 菌 在 HE 染 色 中 可 见 中 央 菌 体 呈 紫 蓝 色, 菌 丝 末 端 带 有 胶 样 物 质 组 成 的 鞘 包 围 而 膨 大 成 棒 状, 嗜 染 曙 红 而 呈 红 色 用 六 胺 银 染 色 能 把 菌 丝 和 胶 样 鞘 都 显 示 出 来 主 要 侵 犯 人 的 面 颈 部 腹 部 和 胸 部, 也 可 侵 犯 肠 壁 肝 和 肺 5. 白 色 念 珠 菌 是 一 种 圆 形 生 芽 的 酵 母 样 菌 在 组 织 切 片 内 常 同 时 见 到 孢 子 和 菌 丝 孢 子 和 菌 丝 在 HE 染 色 中 均 呈 蓝 紫 色, 用 革 蓝 法 或 六 胺 银 法 染 色 也 呈 阳 性 本 病 好 发 于 皮 肤 口 腔 外 明 及 阴 道 和 呼 吸 道 等 Grocott 六 胺 银 核 固 红 亮 绿 法 用 铬 酸 氧 化 真 菌 内 多 糖 化 合 物 而 暴 露 醛 基, 醛 基 还 原 六 胺 银 液 成 为 黑 色 的 金 属 银 氯 化 金 用 来 调 色, 把 金 属 银 转 变 为 更 稳 定 的 金 属 银, 并 可 排 除 组 织 中 的 黄 色 色 调 硫 代 硫 酸 钠 液 对 已 显 色 的 银 盐 起 固 定 作 用 并 除 去 末 反 应 的 银 离 于. 对 曲 菌 显 示 较 好 [ 固 定 ] 中 性 甲 醛 液 或 Helly 液

11 试 剂 配 制 (1) 六 次 甲 基 四 胺 一 硝 酸 银 原 液 ( 简 称 六 胺 银 原 液 )3% 六 次 甲 基 四 胺 水 溶 掖 l00ml,5% 硝 酸 银 水 溶 液 5m1 临 用 时 将 两 液 混 合 呈 现 乳 白 色, 瞬 时 透 明 (2) 六 胺 银 硼 砂 染 色 液 六 胺 银 原 液 25ml, 蒸 馏 水 25ml,5% 硼 砂 ( 四 硼 酸 钠 ) 水 溶 液 2ml (3) 核 固 红 染 液 核 固 红 o.1g, 硫 酸 铝 5g, 蒸 馏 水 100m1 将 硫 酸 铝 溶 于 蒸 馏 水 内. 放 人 核 固 红 染 色 剂 煮 沸, 冷 却, 过 滤, 染 液 可 保 存 于 室 温 (4) 亮 绿 溶 液 亮 绿 0.2g, 蒸 馏 水 100m1, 冰 醋 酸 0.2g 染 色 步 骤 1) 切 片 脱 蜡 至 水 经 Helly 液 固 定 的 组 织 切 片 可 先 脱 汞 2) 氧 化 切 片 于 5% 铬 酸 水 溶 液 1h 3) 流 水 清 洗 5min 4) 浸 人 1% 亚 硫 酸 钠 水 浴 液 1min, 除 掉 铬 酸, 5) 自 来 水 清 洗 5min 6) 蒸 馏 水 清 洗 3 次 7) 放 人 六 胺 银 硼 砂 液 染 色 lh( 于 温 箱 内 ), 切 片 呈 浅 棕 色 为 止 在 镜 下 观 察, 如 过 染 则 结 缔 组 织 着 色 太 深 8) 蒸 馏 水 洗 3 次 9) 用 0.2% 氯 化 金 水 溶 液 调 色 5min 10) 蒸 馏 水 洗 11) 固 定 于 2% 硫 代 硫 酸 钠 水 溶 液 3min 12) 自 来 水 洗 13) 入 核 固 红 染 液 染 细 胞 核 10min 14) 自 来 水 洗, 蒸 馏 水 洗 15) 入 亮 绿 染 液 30 秒 ( 或 用 马 休 黄 液 复 染 ) 16) 蒸 馏 水 快 速 稍 洗 17) 无 水 乙 醇 脱 水 二 甲 苯 透 明, 中 性 树 胶 封 固 [ 结 果 ]: 各 种 真 菌 均 被 着 色 菌 丝 和 孢 子 呈 明 显 的 黑 褐 色, 抗 酸 菌 也 呈 黑 褐 色, 粘 液 呈 紫 色, 细 胞 核 呈 红 色 附 注 1) 当 切 片 置 入 六 胺 银 工 作 液 60min 时 菌 体 才 开 始 淡 淡 地 显 影 因 此 在 60min 左 右 即 取 出 用 蒸 馏 水 洗 后 置 镜 下 观 察 有 否 菌 体 出 现, 以 后 每 隔 10min 取 出 镜 检 控 制 为 准 2) 在 低 倍 镜 下 菌 体 不 宜 着 色 太 黑, 否 则 在 高 倍 镜 下 观 察 时 则 不 够 清 晰 透 亮 3) 六 胺 银 溶 液 都 应 放 入 4 冰 箱 中 保 存 为 好 E\ 脂 类 染 色 脂 类 或 脂 质 是 中 性 脂 肪 类 脂 以 及 它 们 的 衍 生 物 的 总 称 脂 类 的 共 同 物 理 性 质 是 不 溶 于 水 而 溶 于 乙 醇 三 氯 甲 烷 乙 醚 和 四 氯 化 碳 等 有 机 溶 剂 人 体 内 脂 质 以 2 种 形 式 存 在 : 一 种 是 贮 藏 脂 肪, 主 要 是 中 性 脂 肪, 另 一 种 是 结 构 脂 肪, 主 要 为 类 脂 1 脂 类 染 色 的 应 用 1) 证 实 和 区 分 脂 肪 变 性 2) 显 示 病 变 的 脂 质 沉 着 3) 用 于 肿 瘤 组 织 的 鉴 别 与 诊 断, 2 染 色 方 法 中 性 脂 肪 的 染 色 常 采 用 偶 氯 类 染 料 如 苏 丹 Ⅱ 苏 丹 Ⅲ 苏 丹 Ⅳ 苏 丹 B 及 油 红 o 等, 这 些 染 料 不 溶 于 水, 稍 溶 于 乙 醇, 但 更 易 溶 于 脂 肪, 因 此 被 广 泛 应 用 于 组 织 切 片 内 脂 滴 的 显 示 1. 苏 丹 Ⅳ 苏 丹 Ⅲ 或 苏 丹 Ⅱ 法 [ 试 剂 配 制 ] (1) 苏 丹 Ⅳ 染 液 苏 丹 Ⅳ 或 苏 丹 Ⅲ 苏 丹 Ⅱ 均 可 0.5g;70% 乙 醇 50ml. 内 酮 50ml 取 一 只 洁 净 的 l00ml 小 口 砂 塞 瓶, 先 倒 人 70% 乙 醇 和 丙 酮 混 合, 再 加 入 苏 丹 Ⅳ 或 Ⅲ 或 Ⅱ, 不 时 摇 动, 使 尽 量 溶 解 达 饱 和, 待 1 2d 后 过 滤 到 另 一 小 口 砂 塞 瓶 内 密 封 保 存 备 用, 也 可 不 过 滤, 用 时 吸 其 上 清 液 (2)Mayer 苏 木 素 液 ( 参 阅 第 章 )

12 [ 染 色 步 骤 ] 1) 组 织 用 10% 甲 醛 固 定 2) 冰 冻 切 片, 厚 6 一 l0 微 米, 用 玻 璃 钩 把 切 片 捞 入 60% 乙 醇 中 略 洗 ( 如 为 新 鲜 组 织 用 低 温 恒 冲 陈 切 片, 裱 贴 于 玻 片 上, 于 l0% 甲 醛 液 同 定 10min, 稍 水 洗 后, 再 用 60% 乙 醇 洗 ) 3) 用 吸 管 吸 取 苏 丹 Ⅳ 染 液 ( 或 苏 丹 Ⅲ 苏 丹 Ⅱ 均 可 ) 约 3ml 4ml 于 称 量 瓶 内, 从 60% 乙 醇 中 把 切 片 涝 入 盛 有 染 液 的 称 量 瓶 内 并 加 盖 浸 染 1 2min ( 裱 于 玻 片 上 的 切 片 需 要 加 盖 染 色 时 间 要 短, 尽 量 防 止 染 液 挥 发, 否 则 沉 淀 污 染 切 片 ) 4)70% 乙 醇 稍 洗 去 多 余 残 液 5) 流 水 稍 洗 6) 苏 木 素 复 染 胞 核, 必 要 时 用 1% 盐 酸 乙 醇 分 化 7) 水 洗 10min, 或 于 稀 碳 酸 锂 水 溶 液 中 促 蓝, 把 切 片 帖 于 载 玻 片, 并 将 周 围 水 份 抹 干 8) 阿 拉 伯 糖 胶 或 甘 油 明 胶 封 盖,( 如 需 较 长 时 间 保 存 切 片, 应 在 玻 片 干 洁, 所 封 阿 拉 伯 糖 胶 或 甘 油 明 胶 不 溢 出 盖 玻 片 的 条 件 下, 用 中 性 树 胶 在 盖 玻 片 的 四 周 和 载 玻 片 的 交 界 处 作 一 堤 围 状 封 固, 堤 因 宽 度 约 3 3mm) [ 结 果 ] 中 性 脂 肪 呈 猩 红 色 ( 用 苏 丹 Ⅳ 染 色 ) 橙 红 色 ( 用 苏 丹 Ⅲ 染 色 ) 橙 黄 到 橙 红 色 ( 用 苏 丹 Ⅱ 染 色 ), 胞 核 蓝 色 十 三 结 束 语 现 代 的 病 理 诊 断 中 大 部 分 特 殊 染 色 被 免 疫 组 织 化 学 方 法 取 代, 但 是 有 些 特 殊 染 色 是 无 法 完 全 取 代, 如 糖 原 网 织 染 色 淀 粉 样 变 抗 酸 染 色 脂 肪 染 色 等 在 临 床 诊 断 病 理 上 仍 然 广 泛 应 用 一 概 述 : 为 了 显 示 与 确 定 组 织 或 细 胞 中 的 正 常 结 构 或 病 理 过 程 中 出 现 的 异 常 物 质 病 变 及 病 原 体 等, 需 要 分 别 选 用 相 应 的 显 示 这 些 成 分 的 染 色 方 法 进 行 染 色 包 括 : 胶 原 纤 维 染 色 (Masson 等 ) 网 状 纤 维 染 色 弹 力 纤 维 染 色 肌 肉 组 织 染 色 ( 磷 钨 酸 苏 木 素 ) 脂 肪 染 色 ( 苏 丹 III) 糖 原 染 色 (PAS) 粘 液 染 色 (PAS) 等 二 作 用 : 在 常 规 病 理 学 诊 断 中, 有 许 多 物 质 成 分 或 微 生 物 在 光 镜 下 难 以 识 别 或 鉴 别, 通 过 酶 组 织 学 染 色, 可 以 让 这 种 物 质 显 示 出 来 在 光 镜 下 观 察 到, 从 而 有 利 于 对 疾 病 进 行 诊 断 比 如, 当 细 胞 中 出 现 色 素, 是 黑 色 素 还 是 含 铁 血 黄 素 以 及 当 组 织 中 出 现 均 一 化 学 物 质 是 否 为 淀 粉 样 变 性 等, 用 组 织 化 学 技 术 区 别 起 来 很 简 单, 所 以 组 织 化 学 技 术, 虽 然 已 有 几 十 年 到 几 百 年 的 历 史, 仍 是 一 个 很 有 实 用 价 值 的 技 术 三 染 色 方 法 :1863 年 由 waldeyer 率 先 倡 导 用 苏 木 素 染 液 染 细 胞 核, 后 来 Mallory Mayer 等 也 阐 述 过 苏 木 素 的 应 用 近 年 来 特 殊 染 色 和 组 织 化 学 方 法 也 屡 有 创 新 Shikata(1973),Tanka 等 (1981 年 ) 分 别 介 绍 了 用 地 依 红 和 维 多 利 亚 蓝 混 合 液 显 示 乙 型 肝 炎 表 面 抗 原 的 方 法 ;1987 年 Crocker J 等 推 出 了 核 仁 组 成 区 嗜 银 蛋 白 染 色 的 技 术 方 法 以 及 1991 年 进 行 的 乳 腺 肿 瘤 核 仁 组 成 区 的 研 究 方 法 等 四 特 殊 染 色 的 分 类 : 特 殊 染 色 方 法 按 照 所 染 目 的 物 进 行 分 类, 有 结 缔 组 织 肌 肉 组 织 神 经 组 织 脂 类 物 质 糖 类 色 素 病 理 的 内 源 性 沉 着 物 病 原 微 生 物 内 分 泌 物 质 单 种 细 胞 和 性 染 色 质 骨 血 液 及 造 血 组 织 核 酸 酶 类 等 五 特 殊 染 色 的 命 名 : 对 于 特 染 的 命 名 至 今 尚 无 统 一 的 规 定, 多 数 均 按 发 明 者 的

13 姓 名 命 名, 如 van Geison 染 色 等 ; 有 的 则 按 所 用 染 色 剂 命 名, 如 甲 基 绿 一 派 若 宁 染 色 苏 丹 Ⅲ 染 色 等 ; 有 的 按 目 的 物 命 名, 如 网 织 纤 维 染 色 ; 还 有 的 采 用 混 合 命 名, 如 试 剂 十 人 名 等 六 染 色 原 理 : 染 色 过 程 是 染 色 剂 和 组 织 细 胞 相 结 合 的 过 程 其 机 理 尚 未 完 全 清 楚 1 有 学 者 认 为 从 物 理 学 角 度 看, 染 色 剂 和 组 织 细 胞 的 结 合 是 溶 解 或 吸 收 例 如 苏 丹 类 染 色 剂 使 脂 质 着 色, 就 是 利 用 染 色 剂 在 脂 质 中 的 溶 解 度 大 于 在 洒 精 等 溶 剂 中 的 溶 解 度 这 一 特 性 有 些 染 色 剂 是 染 色 剂 分 子 通 过 渗 透 和 毛 细 血 管 作 用 而 被 吸 收 或 沉 淀 到 组 织 细 肋 的 小 孔 中 去 而 着 色 的 这 种 机 制 的 染 色 是 很 少 的 2 另 有 学 者 认 为 染 色 是 染 色 剂 相 组 织 细 胞 之 间 的 化 学 性 结 合 如 显 示 含 铁 血 黄 素 的 普 鲁 士 反 应 是 最 典 型 的 例 子 但 是, 大 量 染 色 的 化 学 反 应 并 不 象 铁 反 应 那 样 明 确 大 多 数 染 色 的 原 理 至 今 仍 未 搞 清 楚, 有 些 可 能 是 物 理 性 的, 有 些 可 能 是 化 学 性 的, 有 些 则 可 能 2 种 机 制 都 起 作 用 正 因 为 人 们 对 染 色 的 原 理 还 没 有 完 全 掌 握, 所 以 还 不 能 很 好 地 运 用 原 理 来 控 制 它, 在 相 当 程 度 上 需 凭 工 作 经 验 七 染 色 的 分 类 ( 一 ) 普 通 染 色 最 广 泛 应 用 于 常 规 制 片 的 苏 木 素 和 伊 红 染 色, 又 称 为 常 规 染 色 ( 二 ) 特 殊 染 色 1. 定 义 专 门 用 于 显 示 某 些 特 定 目 的 物 的 染 色 方 法 称 为 特 殊 染 色, 它 又 可 以 理 解 为 选 择 性 染 色 特 殊 染 色 对 目 的 物 的 选 择 性 是 相 对 的 有 些 方 法 具 有 相 对 的 特 异 性, 加 油 红 O 等 脂 质 染 色, 显 阳 性 者 可 以 肯 定 为 脂 质 ; 有 些 则 显 示 的 是 一 类 物 质, 如 PAS 呈 阳 性 反 应 者 有 糖 原 粘 蛋 白 网 织 纤 维 软 骨 阿 米 巴 原 虫 霉 菌 等 许 多 物 质 和 组 织 结 构, 并 不 能 确 定 是 哪 一 种 具 体 成 分 所 谓 特 殊 染 色 的 相 对 性, 就 是 一 种 方 法 可 以 显 示 多 种 目 的 物, 一 种 目 的 物 可 以 用 多 种 方 法 显 示, 其 中 有 些 方 法 可 能 呈 阳 性, 而 有 些 方 法 则 呈 阴 性, 这 就 需 要 我 们 拿 捏 多 种 方 法, 因 为 有 时 只 有 依 靠 多 种 方 法 才 能 确 定 所 要 确 认 的 目 标 4. 特 殊 染 色 的 意 义 1) 可 以 显 示 在 常 规 HE 染 色 切 片 中 不 明 显 的 目 的 物, 例 如 当 病 变 中 霉 菌 数 量 较 少 时, 应 用 Gridley 染 色 就 容 易 发 现 2) 可 以 区 别 胶 原 纤 维 和 平 滑 肌, 苏 丹 染 色 可 区 别 脑 浆 内 的 脂 肪 变 和 水 池 变 3) 可 以 显 示 某 些 HE 染 色 中 不 能 看 到 的 目 的 物 如 网 织 纤 维 星 形 细 胞 的 突 起 结 核 杆 菌 螺 旋 茵 等, 都 可 用 相 应 的 特 殊 染 色 法 显 示 因 此, 特 殊 染 色 是 常 规 染 色 的 必 要 补 允, 也 是 染 色 技 术 中 不 可 缺 少 的 组 成 部 分 它 在 病 理 诊 断 中 起 着 辅 助 作 用 八 组 织 化 学 的 基 本 概 念 : 组 织 化 学 是 在 形 态 学 基 础 上 研 究 细 胞 或 组 织 中 物 质 的 化 学 组 成 定 位 定 量 及 代 谢 状 态 的 学 科, 是 组 织 学 与 生 物 学 及 生 物 化 学 等 的 边 缘 科 学, 其 目 的 是 联 系 形 态, 化 学 成 分 和 功 能 来 了 解 组 织 或 细 胞 的 代 谢 变 化 目 前 有 许 多 组 织 化 学 方 法 已 划 入 特 殊 染 色, 划 分 特 殊 染 色 和 组 织 化 学 无 绝 对 界 限 九 特 殊 染 色 和 组 织 化 学 现 阶 段 的 发 展 状 况 1. 虽 然 形 成 了 许 多 显 示 细 胞 化 学 的 方 法 及 一 些 特 殊 染 色 但 发 展 的 速 度 比 较 缓 馒 这 是 因 为 每 一 种 方 法 都 有 自 己 不 相 同 的 试 剂 底 物 和 方 法, 在 发 展 上 既 没 有 系 统 的 经 验 可 以 遵 循, 在 学 习 使 用 上 也 比 较 困 难 ;

14 2 自 从 免 疫 组 织 化 学 问 世 以 来. 几 乎 所 有 的 组 织 化 学 成 分 都 可 以 用 免 疫 组 织 化 学 方 法 检 测, 所 以 组 织 细 胞 化 学 的 许 多 方 法. 绝 大 多 数 被 免 疫 组 织 化 学 所 代 替 : 3. 但 有 些 组 织 化 学 力 法 定 性 准 确, 方 法 简 单. 使 用 方 便. 或 因 试 剂 便 宜, 至 今 沿 用 不 衰 : 十 组 织 化 学 的 方 法 和 种 类 1 化 学 方 法 : 根 据 其 化 学 反 应 的 原 理, 在 组 织 切 片 上 生 成 沉 淀, 显 示 定 位 2 类 化 学 方 法 : 有 少 数 方 法 的 染 色 反 应 有 特 殊 性, 但 机 制 不 明 3 物 理 方 法 : 应 用 物 质 的 物 理 学 特 性, 如 苏 丹 油 红 染 料 易 溶 于 脂 类 而 使 脂 类 染 色 十 一 组 织 化 学 技 术 应 掌 握 的 要 点 1. 组 织 材 料 及 时 切 片 与 染 色, 才 能 保 持 组 织 细 胞 良 好 的 形 态 结 构 2. 染 色 切 片 的 判 断, 应 把 病 变 的 形 态 部 位 及 相 应 的 理 论 一 起 进 行 综 合 分 析, 可 借 助 阴 性 及 阳 性 对 照, 正 确 分 析 实 验 结 果 3. 生 成 的 反 应 产 物 必 须 在 原 位 沉 淀, 着 色 深, 且 不 溶, 为 细 小 沉 淀 或 小 结 晶 能 保 证 定 位 的 精 确 性 及 稳 定 性, 便 于 反 复 观 察 十 二 各 种 特 殊 染 色 A\ 糖 原 和 粘 液 物 质 染 色 1 糖 原 糖 原 在 肝 细 胞 心 肌 细 胞 骨 胳 肌 细 胞 内 含 量 最 多, 其 次 是 毛 囊 子 官 腺 体 阴 道 上 皮 脐 带 等 处 均 有 少 量 糖 原 存 在 糖 原 易 溶 于 水, 在 酶 的 作 用 下 容 易 分 解 为 葡 萄 糖 葡 萄 糖 更 易 溶 于 水, 故 机 体 死 亡 后 糖 原 易 受 到 破 坏, 其 含 量 发 生 明 显 变 化 甚 至 完 全 消 失 用 常 规 HE 染 色 观 察 不 到 糖 原 的 形 态, 用 显 示 糖 原 的 特 殊 染 色 也 难 以 观 察 到 糖 原 的 形 态 及 分 布 所 以 为 了 观 察 和 研 究 组 织 内 糖 原 的 含 量 及 分 布 必 须 选 取 新 鲜 标 本, 用 能 保 存 糖 原 的 固 定 液 及 时 固 定, 再 经 特 殊 染 色 后 才 能 将 糖 原 显 示 出 来 (1) 固 定 方 法 及 注 意 事 项 1) 尽 可 能 选 取 小 块 新 鲜 组 织 并 及 时 固 定 2) 多 次 更 换 乙 醇 混 合 同 定 液, 在 4 左 右 内 固 定 与 保 存 这 是 针 对 糖 原 的 性 质 和 避 免 糖 原 溶 于 水 而 采 取 的 相 应 措 施 乙 醇 虽 然 是 保 持 糖 原 的 较 好 固 定 剂, 但 是 用 单 一 的 乙 醇 尤 其 是 用 无 水 乙 醇 固 定 肝 肌 肉 等 实 质 性 组 织 时, 固 定 作 用 迅 速 而 穿 运 力 弱, 组 织 表 面 会 很 决 凝 固 变 硬 这 样 由 于 固 定 不 透 和 不 均, 糖 原 同 样 不 能 得 到 较 好 的 保 存, 易 出 现 糖 原 颗 粒 趋 于 细 胞 一 端 的 极 化 现 象 目 前 固 定 与 保 存 糖 原 的 固 定 液, 以 乙 醇 为 溶 剂 配 制 含 甲 醛 冰 醋 酸 及 苦 昧 酸 等 混 合 固 定 液 为 好 : 此 类 固 定 液 利 用 乙 醇 防 止 糖 原 溶 解 于 水 ; 利 用 冰 酷 酸 和 苦 味 酸 的 膨 胀 及 软 化 作 用, 抵 消 乙 醇 对 组 织 的 收 缩 硬 脆 ; 利 用 甲 醛 对 组 织 固 定 的 渗 透 力 强 固 定 均 匀 等 优 点 其 固 定 原 理 是 使 与 糖 原 相 结 合 的 蛋 白 质 凝 固 (2) 常 用 固 定 液 1.Gendre 固 定 液 苦 味 酸 无 水 乙 醇 饱 和 溶 液 ( 约 8. 96%)80ml, 甲 醛 (38% 一 40 %)5ml, 冰 醋 酸 5ml 临 用 前 配 制 取 小 块 组 织 置 于 4 冰 箱 内 固 定 1 4 小 时, 固 定 期 间 更 换 2 3 次 新 液 固 定 前 组 织 禁 用 水 洗, 直 接 用 80% 乙 醇 浸 洗 数 次 后, 至 95% 乙 醇 开 始 脱 水 2.Lillie 固 定 液 (AFF) 无 水 乙 醇 85ml, 冰 醋 酸 5ml, 甲 醛 (38% 一 40%)10ml 此 液 为 优 良 的 固 定 液 配 制 及 使 用 方 法 与 Gendre 固 定 液 相 同 固 定 后 组 织 可 直 接 用 95% 乙 醇 开 始 脱 水

15 3.Rossman 固 定 液 苦 昧 酸 无 水 乙 醇 饱 和 被 90ml, 甲 醛 (38% 一 40%)10ml 临 用 前 配 制, 取 小 块 新 鲜 组 织 于 4 冰 箱 内 固 定 1 2d, 更 换 2 3 次 新 液, 然 后 在 室 温 下 用 95% 乙 醇 浸 洗 数 次, 经 无 水 乙 醇 脱 水 (3) 糖 原 染 色 应 用 1. 细 胞 内 泡 状 变 性 的 鉴 别 在 常 规 石 蜡 切 片 的 HE 染 色 中, 如 胞 浆 内 出 现 大 小 不 等 的 空 泡, 应 考 虑 可 能 是 脂 肪 变 性, 经 脂 溶 剂 的 脱 水 透 明 过 程 溶 解 而 形 成 的 空 泡 ; 也 可 能 是 糖 原 在 经 水 溶 液 固 定 过 程 小 的 脱 失 所 致 ; 或 可 能 是 单 纯 的 水 样 变 性 为 了 鉴 别 其 性 质, 则 需 要 用 显 示 糖 原 或 脂 质 染 色 法 加 以 证 明 2. 在 心 肌 病 变 及 其 他 心 血 管 疾 病 的 研 究 用 显 示 糖 原 的 特 殊 染 色, 可 以 观 察 到 由 缺 血 缺 氧 所 致 急 性 早 期 心 肌 坏 死 病 灶 内 的 糖 原 明 显 减 少 甚 至 消 失, 呈 均 质 的 浓 染 状 态, 而 病 灶 周 围 则 出 现 反 应 性 异 常 糖 原 增 多 ; 已 愈 合 的 心 肌 梗 死 灶 周 围 的 心 肌 纤 维 内 可 有 糖 原 颗 粒 浸 润 ; 心 肌 的 横 纹 肌 瘤 也 有 大 量 糖 原 存 在 3. 糖 原 累 积 病 的 诊 断 及 研 究 用 显 示 糖 原 的 特 染 方 法 可 观 察 到 由 先 天 性 遗 传 缺 陷 引 起 的 糖 原 累 积 病 时, 心 肝 肾 骨 骼 肌 单 核 吞 噬 系 统 等 器 官 内 均 有 大 量 的 糖 原 推 积 4. 糖 尿 病 诊 断 及 研 究 在 患 糖 尿 病 时, 肝 细 胞 肾 曲 管 上 皮 细 胞 心 肌 纤 维 内 均 可 见 糖 原 颗 粒 沉 着, 共 含 量 的 多 与 少 和 血 糖 水 平 呈 平 行 关 系 5. 用 于 某 些 肿 瘤 的 诊 断 与 鉴 别 1 鉴 别 肝 细 胞 癌 与 胆 管 癌 前 者 糖 原 染 色 为 阳 性, 后 者 为 阴 性 ; 鉴 别 横 纹 肌 瘤 与 颗 粒 细 胞 母 细 胞 瘤, 前 者 为 阳 性, 后 者 为 阴 性 ;3 骨 尤 文 氏 瘤 汗 腺 瘤 横 纹 肌 肉 瘤 化 学 感 受 器 瘤 脊 索 瘤 等, 用 糖 原 染 色 均 可 显 示 为 阳 性 (4) 显 示 糖 原 的 方 法 过 碘 酸 雪 夫 反 应 (PAS) 此 法 不 仅 能 显 示 糖 原, 而 且 还 能 显 示 中 性 粘 液 性 物 质 和 某 些 酸 性 粘 液 性 物 质 以 及 软 骨 脑 垂 体 霉 菌 脂 质 色 素 淀 粉 样 物 质 及 基 底 膜 等 故 PAS 法 在 病 理 学 上 可 用 于 多 种 疾 病 的 研 究 其 染 色 原 理 为 : 过 碘 酸 是 一 种 氧 化 剂, 它 能 氧 化 糖 类 及 有 关 物 质 中 的 l,2 一 乙 二 醇 基, 使 之 变 为 二 醛 ; 醛 与 Schiff( 雪 夫 试 剂 ) 结 合 生 成 种 品 红 化 合 物, 即 形 成 红 色 取 代 色 素 而 得 到 定 位 试 剂 配 制 (1)1% 过 碘 酸 水 溶 液 过 碘 酸 l 克, 蒸 馏 水 100ml (2)Schiff 试 剂 1N 盐 酸 20m1, 碱 性 品 红 1 克, 亚 硫 酸 氢 钠 l 克, 活 性 碳 2 克, 蒸 馏 水 200 m1 先 将 蒸 馏 水 加 热 煮 沸 后, 去 火 加 入 碱 性 品 红, 并 不 停 摇 荡 5min 使 其 溶 解, 待 溶 液 冷 至 50 时 过 滤, 再 加 入 适 量 盐 酸, 冷 至 25 再 加 入 亚 硫 酸 氢 钠 摇 荡 将 容 器 密 闭 后 存 放 于 暗 处 或 冰 箱 内 静 止 12 24h, 此 时 的 溶 液 以 淡 黄 色 或 无 色 为 好, 为 消 除 溶 液 的 颜 色 再 加 上 活 性 碳 2 克, 摇 荡 1min 后 过 滤, 溶 液 将 成 为 无 色 透 明 状 态 贮 存 于 4 冰 箱 内, 临 用 前 取 出, 待 溶 液 升 至 室 温 时 使 用 (3) 亚 硫 酸 氢 钠 溶 液 亚 硫 酸 氢 钠 2g, 蒸 馏 水 180m1, 盐 酸 20ml (4)IN 盐 酸 溶 液 浓 盐 酸 ( 比 重 1.19, 含 量 37%)8.5m1, 蒸 馏 水 91.5m1 染 色 步 骤 I) 石 蜡 切 片 3 5μm, 脱 蜡 至 水 洗 2) 蒸 馏 水 洗 1 2min 3) 用 1% 过 碘 酸 水 溶 液 氧 化 5 10min 4) 充 分 水 洗 5) 蒸 馏 水 洗 涤 数 次 6) 用 Schiff 试 剂 浸 染 5 一 10min, 如 温 度 低 时 可 延 长 浸 染 时 间 7) 倾 去 Schiff 试 剂, 直 接 流 水 冲 洗 10min 8) 用 明 砚 苏 木 素

16 染 液 浅 染 胞 核 2 3min, 过 染 时 可 用 o5% 盐 酸 乙 醇 液 稍 分 化 9) 流 水 冲 洗 5 一 l0min 10) 乙 醇 脱 水, 二 甲 苯 运 明, 中 性 树 胶 封 固 注 意 事 项 1) 过 碘 酸 的 浓 度 在 0.5% 一 2% 范 围 内, 其 染 色 结 果 无 显 著 差 异, 但 一 般 多 采 用 在 0.5% 一 1% 的 浓 度 其 PH 为 3 5 之 间 2) 用 过 碘 酿 液 氧 化 时 的 温 度 及 作 用 时 间 值 得 注 意 若 温 度 高 作 用 时 间 长 可 使 某 些 物 质 成 分 发 生 非 特 异 性 反 应, 结 果 会 出 现 假 阳 性, 以 其 氧 化 时 间 应 控 制 在 5 一 10min 环 境 温 度 不 高 于 20 为 宜, 室 温 稍 高 时 其 氧 化 时 间 应 适 当 缩 短 3) 配 制 雪 夫 试 剂 的 方 法 很 多, 其 基 本 原 理 都 是 将 碱 性 品 红 与 亚 硫 酸 氢 钠 等 作 用, 变 成 无 色 终 产 物, 故 较 为 理 想 的 雪 夫 试 剂 应 为 无 色 透 明 溶 液 其 质 量 如 何, 主 要 取 决 于 所 用 试 剂 碱 性 品 红 的 质 量, 也 与 配 制 方 法 所 用 器 皿 的 清 洁 程 度 及 保 存 妥 当 与 否 有 关 当 贮 存 的 溶 液 变 为 橘 红 色 或 粉 红 色 时, 即 说 明 已 变 质 失 效 而 不 能 再 用 4) 亚 硫 酸 氢 钠 冲 洗 液 必 须 在 临 用 前 配 制, 用 过 的 或 放 置 后 溶 液 不 能 再 用 经 此 液 作 用 后,PAS 阳 性 物 质 显 红, 以 谈 染 为 宜 5) 复 染 核 不 要 过 深, 应 谈 染 为 宜 2 粘 液 物 质 人 体 各 种 腺 体 及 其 他 组 织 细 胞 所 分 泌 的 粘 液 类 物 质 大 体 上 相 似, 统 称 为 粘 液 按 其 化 学 结 构 和 物 理 状 态 的 不 同, 粘 液 物 质 由 粘 多 糖 和 粘 蛋 白 组 成 (1) 粘 多 糖 粘 多 糖 包 括 酸 性 粘 多 糖 和 中 性 粘 多 糖, 两 者 均 以 氨 基 已 糖 为 主 要 成 分 1) 酸 性 粘 多 糖 其 基 质 成 分 以 硫 酸 性 和 唾 液 酸 性 2 种 形 式 存 在, 广 泛 地 分 布 于 全 身 各 处 正 常 生 理 情 况 下, 主 要 存 在 于 消 化 道 呼 吸 道 及 其 他 部 位 的 粘 液 腺 分 泌 物 中, 在 滑 膜 玻 璃 体 角 膜 脐 带 等 处 尤 为 丰 富, 硫 酸 软 骨 素 和 肝 素 为 复 杂 的 酸 性 粘 多 糖 硫 酸 软 骨 素 分 A B C3 型, 存 在 于 软 骨 结 缔 组 织 肌 脂 血 管 和 皮 肤 的 基 质 内 ; 而 肝 素 则 存 在 于 肥 大 细 胞 的 胞 浆 中 2) 中 性 粘 多 糖 主 要 存 在 于 胃 粘 膜 表 面 上 皮 幽 门 腺 十 二 指 肠 的 勃 鲁 钠 腺 等 处, 不 如 酸 性 粘 多 糖 分 布 广 泛 (2) 粘 蛋 白 粘 蛋 白 是 由 糖 和 蛋 白 质 相 结 合 而 构 成, 故 又 称 糖 蛋 白 见 于 各 种 组 织 上 皮 和 腺 体 导 管 的 分 泌 物 中, 在 垂 体 前 叶 的 嗜 碱 性 细 胞 所 含 促 生 殖 腺 激 素 和 促 甲 状 腺 激 素 中 也 可 见 到 粘 蛋 白, 还 有 一 些 存 在 于 血 清 中 在 同 一 种 上 皮 和 腺 体 内 常 可 同 时 分 泌 2 种 粘 液 物 质, 而 在 同 部 位 的 分 泌 物 中 两 者 的 比 例 和 含 量 都 有 所 不 同 粘 液 物 质 一 般 具 有 下 列 性 质 :1 对 异 染 性 染 料 具 有 异 染 性 ;2 对 碱 性 染 料 具 有 很 强 的 亲 和 力 ;3 除 胃 粘 蛋 白 外, 其 他 粘 液 遇 醋 酸 时 都 会 发 生 沉 淀 ;4 可 溶 于 弱 碱 性 溶 液 (1) 粘 液 染 色 的 应 用 1 用 于 一 般 粘 液 性 病 变 的 观 察 在 病 理 状 下, 结 缔 组 织 肾 等 一 些 实 质 性 脏 器, 可 出 现 粘 液 水 肿 粘 液 变 性 和 粘 蛋 白 的 增 多 常 规 HE 染 色, 粘 液 呈 污 秽 和 淡 蓝 色, 很 不 清 楚, 如 用 粘 液 物 质 染 色 可 以 得 到 满 意 的 结 果 2 肿 瘤 的 诊 断 和 鉴 别 诊 断 1) 胃 癌 在 粘 膜 表 面 上 皮 和 癌 组 织 内 均 可 见 到 呈 阳 性 反 应 的 粘 液 物 质 : 同 时 还 可 证 明 癌 细 胞 是 否 浸 润 到 间 质 中 ; 粘 液 染 色 对 观 察 肠 上 皮 化 生 也 是 很 有 意 义 的 2) 对 肺 部 某 些 肿 瘤 的 观 察

17 3) 粘 液 瘤 和 粘 液 肉 瘤 用 粘 液 物 质 染 色 均 呈 阳 性, 可 以 明 确 肿 瘤 性 质, 确 立 诊 断 4) 软 骨 粘 液 样 纤 维 瘤 胚 胎 样 横 纹 肌 肉 瘤, 用 粘 液 染 色 均 呈 阳 性 5) 鉴 别 粘 液 表 皮 样 癌 与 鳞 状 上 皮 癌 时, 前 者 呈 阳 性, 后 者 呈 阴 性 6) 鉴 别 粘 液 腺 癌 与 低 分 化 鳞 癌, 前 者 呈 阳 性, 后 者 呈 阴 性 7) 鉴 别 滑 膜 肉 瘤 与 软 组 织 腺 泡 状 肉 瘤 间 皮 瘤 腺 泡 状 横 纹 肌 肉 瘤, 滑 膜 肉 瘤 呈 阳 性, 后 者 呈 阴 性 3. 用 于 动 脉 粥 样 硬 化 胶 原 病 粘 液 性 水 肿 Marfan 氏 综 合 征 等 其 他 疾 病 的 诊 断 和 研 究 ( 二 ) 组 织 固 定 方 法 采 用 含 汞 盐 的 固 定 液 固 定 效 果 最 佳 如 果 是 巳 用 甲 醛 或 乙 醇 固 定 的 组 织, 应 在 切 片 脱 蜡 后 用 5% 氯 化 汞 水 溶 液 媒 染 5min, 再 用 碘 液 和 5% 硫 代 硫 酸 钠 水 溶 液 作 脱 汞 处 理, 可 得 到 一 定 的 改 善 应 注 意 粘 液 物 质 不 能 用 碱 性 甲 醛 等 固 定 液 固 定, 以 免 大 量 的 酸 性 粘 多 糖 被 溶 解 ( 三 ) 染 色 方 法 1 异 染 反 应 法 2 Mayer 胭 脂 红 染 色 法 3 Southgate 胭 脂 红 染 色 法 4 Hale 改 良 胶 质 铁 染 色 法 5 PAS 过 碘 酸 雪 夫 反 应 法 6 AB-PAS 爱 先 蓝 过 碘 酸 雪 夫 反 应 法 7 Culling 爱 先 蓝 醛 复 红 染 色 法 8 爱 先 蓝 染 色 法 B\ 病 理 性 色 素 及 沉 着 物 的 组 化 染 色 黑 色 素 : 在 正 常 情 况 下, 皮 肤 虹 膜 脉 络 膜, 软 脑 膜 等 处 均 可 有 黑 色 素 沉 着 在 病 理 情 况 下 可 能 在 全 身 各 处 含 有 黑 色 素 沉 着 物 (1) 黑 色 素 染 色 的 应 用 1. 用 于 黑 色 素 瘤 的 诊 断 在 疑 为 黑 色 素 瘤 时, 常 需 黑 色 素 染 色 当 肿 瘤 黑 色 素 很 少 时, 黑 色 素 染 色 可 使 黑 色 素 容 易 发 现, 当 病 变 内 黑 色 素 含 量 多 时, 可 用 漂 白 法 以 便 观 察 核 的 结 构 和 核 分 裂 现 象 2. 其 他 色 素 性 神 经 瘤 透 明 细 胞 肉 瘤 也 有 黑 色 素 存 在 ; 皮 病 性 淋 巴 结 炎 时, 淋 巴 结 内 也 可 有 黑 色 素 沉 着 3. 皮 肤 病 黑 色 棘 皮 病 老 年 疣 白 癜 风 色 素 性 荨 麻 疹 瑞 尔 黑 变 病 网 状 色 素 性 皮 肤 异 色 病 红 斑 狼 疮 扁 平 苔 藓 和 许 多 内 分 泌 代 谢 性 疾 病 ( 阿 狄 森 病 肝 病 等 ), 这 些 疾 病 的 皮 肤 中 都 有 色 素 沉 着 或 脱 失 在 必 要 的 情 况 下 用 黑 色 素 染 色 法 4. 神 经 黑 色 素 中 枢 神 经 系 统 的 黑 质 蓝 斑 以 及 其 他 部 位 神 经 细 胞 的 色 素 与 皮 肤 的 黑 色 素 稍 有 区 别, 又 称 神 经 黑 色 素 通 过 黑 色 素 染 色 法, 可 供 神 经 研 究 的 参 考 5. 假 性 黑 变 病 色 素 这 种 假 性 黑 色 素 主 要 见 于 大 肠, 又 称 为 结 肠 黑 变 病 在 临 床 上 见 于 严 重 便 秘 和 习 惯 用 鼠 李 皮 作 缓 泻 剂 者 在 固 有 膜 巨 噬 细 胞 内 有 一 种 性 质 不 明 的 色 素, 普 鲁 士 蓝 反 应 弱 阳 性,PAS 阳 性 有 人 认 为 是 含 铁 血 黄 素 与 肠 道 内 细 菌 黑 色 素 脂 褐 素 相 似 的 物 质 (2) 染 色 方 法 1 Masson Fontana 银 浸 法 2 DOPA 黑 色 素 反 应 法 3 脱 色 素 漂 白 法 脱 黑 色 素 的 方 法, 就 是 将 要 显 示 黑 色 素 的 连 续 切 片 应 用 氧 化 剂 氧 化 及 漂 白 处 理, 使 黑 色 素 被 脱 色, 然 后 再 用 显 示 黑 色 素 的 染 色 方 法 加 以 证 明 为 阳 性 结 果 通 常 采

18 用 此 法 来 证 实 是 否 有 黑 色 素 存 在 时, 需 制 3 张 连 续 石 蜡 切 片, 一 张 作 黑 色 素 染 色, 一 张 用 氧 化 漂 白 脱 色 素 法 脱 色 方 法 1) 氯 化 钾 乙 醇 盐 酸 法 氯 化 钾 1 克,70% 乙 醇 50m1, 浓 盐 酸 1m1 在 立 式 染 色 缸 中 进 行 3h 2) 高 锰 酸 钾 草 酸 法 用 o.1% 一 0.25% 高 锰 酸 钾 溶 液 处 理 切 片 2 ª4h, 水 洗 后 用 1 % 草 酸 处 理 1min 3) 溴 水 脱 色 法 用 1% 浊 水 溶 液 处 理 切 片 12 ª24h 4) 铬 酸 脱 色 法 用 1% 铬 酸 水 溶 液 与 5% 氯 化 钙 水 溶 液 之 等 量 混 合 液 处 理 切 片 8 ª12h 5) 过 氧 化 氢 脱 色 法 用 10% 过 氧 化 氢 狡 处 理 切 片 24 ª48h 6) 过 醋 酸 脱 色 法 用 40% 过 醋 酸 水 溶 液 处 理 2 ª16h 根 据 需 要 进 行 染 色 常 规 脱 水 透 明 及 封 固 在 进 行 氧 化 漂 白 处 理 过 程 中, 应 随 时 取 出 镜 捡, 以 细 胞 内 外 之 黑 色 素 完 全 消 失 为 准 淀 粉 样 物 质 淀 粉 样 物 质 是 一 种 无 细 胞 的 同 质 性 的 嗜 伊 红 性 物 质, 在 化 学 上 属 于 糖 蛋 白, 其 蛋 白 质 部 分 与 球 蛋 白 相 似, 还 可 以 认 为 是 由 蛋 白 质 与 硫 酸 软 骨 素 所 合 成 的 化 合 物 淀 粉 样 蛋 白 90% 为 淀 粉 样 原 纤 维 蛋 白,10% 为 糖 蛋 白 淀 粉 样 物 质 染 色 应 用 1 显 示 淀 粉 样 变 性 程 度 在 心 肾 脾 淋 巴 结 甲 状 腺 舌 喉 肠 道 血 管 及 皮 肤 等 处 较 易 出 现 全 身 性 淀 粉 样 变 性 时, 均 可 用 淀 粉 样 物 质 染 色 法 显 示 以 区 分 变 性 程 度 2 用 以 区 分 淀 粉 样 变 性 与 其 他 变 性 在 胶 原 纤 维 和 网 状 纤 维 周 围 小 动 脉 血 管 外 膜 及 毛 细 血 管 血 窦 等 出 现 变 性 时, 可 用 淀 粉 样 物 质 染 色 法 进 行 显 示 和 区 分 其 性 质 3. 用 于 肿 瘤 的 诊 断 与 鉴 别 某 些 肿 瘤, 特 别 是 内 分 泌 肿 瘤, 间 质 内 时 常 会 出 现 淀 粉 样 物 质 沉 着, 如 甲 状 腺 髓 样 癌 胰 岛 细 胞 癌 肺 小 细 胞 癌 等 4. 皮 肤 组 织 的 淀 粉 样 变 性 多 沉 积 于 真 皮 的 乳 头 层 内 可 见 于 皮 肤 脂 溢 性 角 化 老 年 性 角 化 皮 脂 腺 痣 红 斑 狼 疮 5. 为 某 些 疾 病 的 诊 断 与 鉴 别 提 供 依 据 钙 化 上 皮 瘤, 声 带 息 肉, 老 年 人 胰 岛 脑 垂 体 及 前 列 腺 腔 内, 时 常 会 出 现 淀 粉 样 变 性 染 色 方 法 1.Jurgens 甲 基 紫 法 2.Puchtler Sweat 一 Levine 法 3.Freudenrhal 改 良 刚 果 红 法 4.Cole( 高 PH 值 ) 刚 果 红 法 5. Dennhold 刚 果 红 法 6.Highman 甲 醇 刚 果 红 法 Freudenrhal 改 良 刚 果 红 法 此 法 经 改 良 后 有 较 好 的 效 果, 故 较 为 常 用 [ 染 色 步 骤 ] 1) 切 片 脱 蜡 至 水 2) 浸 入 10% 甲 醛 液,15 30min 3) 直 接 入 刚 果 红 染 色 液 15min 4) 经 自 来 水 洗 2min, 蒸 馏 水 稍 洗 5) 入 Mayer 或 Ehrlish 苏 木 素 液 2min 6) 自 来 水 洗 后 入 0. 5% 盐 酸 乙 醇 分 化 7) 充 分 水 洗 返 蓝 8) 无 水 乙 醇 脱 水, 二 甲 苯 透 明, 中 性 树 胶 封 固 [ 结 果 ] 淀 粉 样 物 质 呈 鲜 红 色, 胞 核 呈 蓝 色 C\ 结 缔 组 织 和 肌 肉 组 织 染 色

19 网 状 纤 维 网 状 纤 维 是 网 状 结 缔 组 织 内 的 一 种 纤 维 这 种 纤 维 用 HE 染 色 一 般 不 易 辨 认, 若 用 氨 银 溶 液 浸 染 能 使 纤 维 变 成 黑 色, 故 又 称 嗜 银 纤 维 (1) 网 状 纤 维 染 色 的 应 用 1. 用 于 显 示 和 鉴 别 肿 瘤 的 性 质 的 来 源 (1) 显 示 和 区 分 癌 与 肉 瘤 来 源 于 上 皮 组 织 的 恶 性 肿 瘤 ( 癌 ) 周 围 有 网 状 纤 维 包 绕, 巢 内 癌 细 胞 之 间 则 没 有 网 状 纤 维 分 布 ; 来 源 于 间 叶 组 织 的 恶 性 肿 瘤 ( 肉 瘤 ), 癌 细 胞 之 间 往 往 可 见 较 多 的 网 状 纤 维 存 在 (2) 区 分 血 管 内 皮 瘤 与 血 管 外 皮 瘤 恶 性 血 管 内 皮 瘤 的 瘤 细 胞 主 要 在 嗜 银 纤 维 鞘 结 构 以 内, 单 个 细 胞 则 无 嗜 银 纤 维 围 绕 ; 恶 性 血 管 外 皮 瘤 的 瘤 细 胞 均 位 于 小 血 管 之 间 网 状 纤 维 鞘 之 外, 并 有 丰 富 的 网 状 纤 维 自 小 血 管 壁 向 外 呈 放 射 状 包 绕 瘤 细 胞 (3) 用 以 鉴 别 恶 性 淋 巴 瘤 与 网 状 细 胞 肉 瘤 在 恶 性 淋 巴 细 胞 瘤 中 产 生 的 网 状 纤 维 比 在 正 常 淋 巴 结 内 的 网 状 纤 维 稍 为 减 少, 网 状 纤 维 在 瘤 细 胞 间 普 遍 存 在 ; 而 网 状 细 胞 肉 瘤 的 网 状 细 胞 中 会 产 生 较 多 的 网 状 纤 维, 与 网 状 纤 维 细 胞 紧 密 粘 连 或 自 胞 浆 伸 出, 分 布 于 每 个 细 胞 之 间 (4) 区 分 骨 尤 文 肉 瘤 与 骨 网 状 细 胞 肉 瘤 骨 尤 文 肉 瘤 肿 瘤 组 织 区 域 没 有 网 状 纤 维. 网 状 纤 准 只 见 于 血 管 周 围 和 纤 维 性 骨 小 梁 之 间 ; 而 骨 网 状 细 胞 肉 瘤 在 网 状 纤 维 染 色 中, 可 见 细 胞 间 有 大 量 的 网 状 纤 维 存 在 (5) 显 示 与 鉴 别 骨 异 质 增 生 与 骨 化 性 纤 维 瘤 用 网 状 纤 维 染 色 骨 异 质 增 生 可 显 示 编 织 状 结 构 ; 骨 化 性 纤 维 瘤 用 银 染 色 可 显 示 呈 平 行 状 结 构 (6) 鉴 别 脑 膜 瘤 与 星 形 细 胞 瘤 脑 膜 瘤 来 自 蛛 网 膜 细 胞, 用 网 状 纤 维 染 色 可 见 网 状 纤 维 散 在 分 布 于 肿 瘤 组 织 中 ; 星 形 细 胞 瘤 则 显 示 不 出 网 状 纤 维 2. 用 于 某 些 肿 瘤 的 诊 断 根 据 染 色 所 显 示 的 网 状 纤 维 多 少 分 布 及 走 行 特 点, 可 用 于 诊 断 下 列 肿 瘤, (1) 平 滑 肌 肉 瘤 细 胞 之 间 见 大 量 平 行 分 布 的 网 状 纤 维 (2) 纤 维 肉 瘤 可 见 大 量 网 状 纤 维 存 在, 并 且 包 绕 瘤 细 胞 (3) 滑 膜 肉 瘤 其 梭 形 细 胞 产 生 网 状 纤 维, 但 不 如 纤 维 肉 瘤 多, 上 皮 样 细 胞 不 产 生 网 状 纤 维 (4) 恶 性 神 经 鞘 瘤 在 细 胞 致 密 区 域 网 状 纤 维 细 长 而 且 行 走 在 细 胞 之 间, 纤 维 与 细 胞 关 系 密 切, 但 不 包 绕 细 胞 3. 显 示 与 观 察 基 底 膜 的 变 化 癌 肿 时 癌 细 胞 不 产 生 网 状 纤 维, 癌 细 胞 巢 周 围 绕 有 网 状 纤 维 形 成 基 底 膜 肉 瘤 时, 瘤 细 胞 间 产 生 网 状 纤 维, 不 形 成 巢, 缺 乏 基 底 膜 上 皮 样 间 叶 细 胞 间 皮 或 滑 膜 等 可 形 成 细 胞 梁, 也 可 产 生 少 量 网 状 纤 维, 不 形 成 基 底 膜 4. 用 于 识 别 坏 死 组 织 的 结 构 凝 固 性 坏 死 用 HE 染 色 往 往 成 为 一 片 红 色 的 无 定 形 物 质, 识 别 不 出 网 状 纤 维 支 架 的 形 态 用 网 状 纤 维 染 色, 可 观 察 列 早 期 凝 固 性 坏 死 处 的 网 状 支 架 还 保 留 其 特 点 5. 用 于 显 示 和 研 究 肝 组 织 病 变 用 网 状 纤 维 的 染 色 法, 可 观 察 肝 脏 病 变 处 的 网 状 支 架 形 态, 分 布 特 点 及 其 破 坏 情 况, 可 以 判 定 和 研 究 其 病 变 性 质 程 度 及 其 发 展 与 转 归 例 如, 探 讨 亚 急 性 黄 色 肝 萎 缩 是 否 向 肝 硬 化 演 变 转 向 硬 化 方 面 演 变 则 可 见 到 网 状 支 架 塌 陷, 黑 色 纤 细 的 网 状 纤 维 逐 渐 移 行 为 囊 状 新 形 成 之 胶 原 纤 维 被 染 成 棕 色

20 (2) 网 状 纤 维 染 色 的 注 意 事 项 网 状 纤 维 染 色 方 法 很 多, 各 种 方 法 的 试 剂 配 制 和 操 作 方 法 不 同, 但 在 染 色 中 的 要 求 都 是 严 格 的 1) 用 新 鲜 蒸 馏 水 ( 最 好 用 双 蒸 馏 水 ) 配 制 2) 所 用 玻 璃 器 材 及 载 破 片 均 达 到 化 学 洁 净 程 度 3) 对 已 配 制 好 的 硝 酸 银 液 和 氨 银 溶 液, 要 贮 藏 冰 箱 保 存 待 用 4) 在 染 色 过 程 中. 用 染 氨 银 溶 液 或 者 硝 酸 银 液 的 前 后 应 用 蒸 馏 水 沉 浸 5) 氯 化 金 调 整 色 和 硫 代 硫 酸 钠 固 定 的 时 间 不 应 太 长 否 则 会 引 起 纤 维 褪 淡 现 象 6) 根 据 诊 断 需 耍, 可 进 行 胞 核 染 色 和 其 他 纤 维 套 色 增 染, 使 色 彩 更 为 鲜 丽 清 晰 7) 脱 水 后 及 时 封 片, 不 宜 在 空 气 中 停 留 时 间 过 长, 以 免 产 生 色 素 颗 粒 (3) 染 色 方 法 1.Gomori 银 染 色 法 [ 固 定 ] 甲 醛 溶 液 乙 醇 或 其 他 固 定 液 均 可 [ 试 剂 配 制 ] 氨 性 银 溶 液 ( 甲 液 : 硝 酸 银 10.2 克, 蒸 馏 水 100ml 乙 液 : 氢 氧 化 钠 3. 1 克, 蒸 溜 水 100ml) 取 甲 液 5ml, 滴 加 氨 水 至 溶 解 清 亮 为 止 再 加 入 5m1 乙 液, 此 时 该 液 突 然 变 为 紫 黑 色, 再 滴 加 氨 水 至 清 亮 为 止 补 加 4 滴 氨 水. 用 蒸 馏 水 补 足 50ml [ 染 色 步 骤 ] 1) 石 蜡 切 片, 脱 蜡 至 水 2) 入 9.5% 高 锰 酸 钾 中, 至 3% 硫 酸 (5ml)5min 3) 自 来 水 洗 4)2% 草 酸 漂 洗 2 次, 水 洗 2min 5)2% 硫 酸 铁 铵 媒 染 1min 6) 自 来 水 及 蒸 馏 水 洗 2 次 7) 入 氨 性 银 溶 液 内 1min 8) 蒸 馏 水 洗 2 次 9) 入 20% 甲 醛 液 中 5min 10) 蒸 馏 水 浸 洗 2 次 11) 入 o.2% 氯 化 金 液 中 2min 12)2% 硫 代 硫 酸 钠 固 定 2min 13) 自 来 水 洗, 蒸 馏 水 洗 2 次 14)V.G 复 染 3min 15) 直 接 用 无 水 乙 醇 脱 水, 二 甲 苯 透 明, 中 性 树 胶 封 固 [ 结 果 ] 网 状 纤 维 灰 黑 色, 胶 原 纤 维 红 色, 基 质 黄 色 结 缔 组 织 多 色 染 色 法 在 组 织 胚 胎 学 中 将 结 缔 组 织 分 为 疏 松 组 织 致 密 组 织 网 状 组 织 软 骨 组 织 骨 组 织 和 血 液 等 结 缔 组 织 结 构 上 的 特 征 是 细 胞 分 散, 有 大 量 的 细 胞 间 质 结 缔 组 织 染 色 主 要 以 显 示 或 区 分 各 种 纤 维 成 分, 故 又 称 为 纤 维 性 结 缔 组 织 多 色 染 色 在 病 理 诊 断 中, 用 于 判 定 各 种 组 织 器 官 和 病 变 程 度 与 修 复 情 况, 以 不 同 色 调 显 示 与 区 别 某 些 非 结 缔 组 织 及 物 质 成 分 1 Masson 三 色 染 色 法 主 要 显 示 核 嗜 银 颗 粒 神 经 胶 质 纤 维 胶 原 角 质 细 胞 间 纤 维 等 [ 固 定 ] 此 法 最 好 用 zenker 液 或 Bouin 液 固 定,10% 甲 醛 固 定 也 可, 若 再 用 重 铬 酸 钾 液 处 理 后 也 能 获 得 较 好 的 结 果 [ 试 剂 配 制 ] (1)Regaud 苏 木 素 染 液 苏 木 素 lg,95% 乙 醇 10ml, 甘 油 10ml, 蒸 馏 水 80ml (2) 丽 春 红 酸 性 复 红 液 丽 春 红 o.7g, 酸 性 复 红 o.3g, 蒸 馏 水 99ml, 冰 醋 酸 1ml (3) 醋 酸 苯 胺 蓝 液 苯 胺 蓝 2g, 蒸 馏 水 98ml, 醋 酸 2ml (4) 苦 味 酸 乙 醇 液 苦 味 酸 ( 约 7%) 加 入 95% 乙 醇 中 的 饱 和 液 20ml, 再 加 95% 乙 醇 10ml 染 色 步 骤 1) 切 片 脱 蜡 至 水, 如 用 zenker 液 固 定 2)Regaud 苏 木 素 液 染 5min 3)95% 乙 醇 中 洗 2 次

21 4) 在 苦 昧 酸 乙 醇 液 中 分 色 5) 在 流 水 中 洗, 蒸 馏 水 洗 6) 丽 春 红 酸 性 复 红 液 中 染 5min 7) 蒸 馏 水 洗 8)1% 磷 钼 酸 中 染 5min 9) 不 经 水 洗, 直 接 入 醋 酸 苯 胺 蓝 液 中 3min 10)1% 醋 酸 处 理 1min 11)95% 乙 醇 脱 水, 无 水 乙 醇 脱 水 多 次 12) 二 甲 苯 透 明, 中 性 树 胶 封 固 D\ 病 原 体 染 色 1 细 菌 细 菌 是 最 常 见 的 一 类 病 原 微 生 物, 是 具 有 细 胞 壁 的 单 细 胞 生 物 根 据 染 色 方 法 可 以 把 细 菌 分 为 一 般 细 菌 和 抗 酸 菌 两 类, 这 两 类 细 菌 在 染 色 方 法 上 是 显 著 不 同 的, 下 面 主 要 介 绍 抗 酸 菌 (1) 抗 酸 菌 染 色 的 应 用 根 据 染 色 特 点 将 结 核 杆 菌 麻 风 杆 菌 通 常 称 为 抗 酸 杆 菌 因 为 结 核 杆 和 麻 风 杆 菌 中 含 有 一 种 特 殊 的 脂 质 性 包 膜, 对 一 些 染 料 有 一 定 的 拒 抗 作 用, 因 此 用 一 般 性 染 料 和 方 法 则 不 易 着 色 ; 经 过 特 殊 的 染 色 处 理 后, 这 类 细 菌 一 经 染 上 颜 色, 又 不 易 脱 色, 所 以 这 类 杆 菌 又 称 为 抗 酸 杆 菌, 所 用 染 色 方 法 称 抗 酸 杆 菌 染 色 此 类 菌 在 HE 中 是 看 不 到 的, 只 有 经 过 特 染 才 能 观 察 到 细 菌 是 否 存 在 (1.1) 结 核 病 与 类 结 核 病 的 鉴 别 在 通 常 的 情 况 下, 有 特 异 病 理 变 化 的 典 型 结 核 不 难 诊 断. 仍 非 典 型 者 常 需 要 特 殊 染 色 与 类 结 核 病 鉴 别 如 结 核 病 用 结 核 杆 菌 的 染 色 方 法 时 其 病 灶 内 可 查 出 抗 酸 杆 菌 为 阳 性 反 应, 而 结 节 病 梅 毒 颗 粒 肿 矽 肺 亚 急 性 甲 状 腺 炎 等 类 结 核 病 变 均 为 阴 性 反 应 (1.2) 用 于 麻 风 病 的 诊 断 与 鉴 别 麻 风 病 变 切 片 用 抗 酸 杆 菌 染 色 显 示 麻 风 杆 菌 可 确 诊 为 麻 风 病, 并 可 根 据 麻 风 杆 菌 的 数 量 区 分 瘤 型 或 类 结 核 型, 也 可 根 据 抗 酸 杆 菌 病 变 的 形 态 分 布 特 点 等 进 行 鉴 别 (2) 染 色 注 意 事 项 在 显 示 抗 酸 杆 菌 的 方 法 中 传 统 的 ZzehI Neelscn 法 较 为 普 通 使 用, 用 染 色 能 力 很 强 的 复 红 作 染 剂, 以 石 炭 酸 作 媒 染 剂 为 了 促 进 染 液 穿 透, 采 用 加 热 的 方 法 细 菌 着 色 后 用 稀 酸 除 去 背 景 染 色, 最 后 再 用 亚 甲 蓝 等 复 染 背 景, 结 果 在 蓝 色 的 背 景 上 抗 酸 杆 菌 呈 鲜 红 色 (3) 染 色 方 法 1.ziehl 一 Neelsen 抗 酸 杆 菌 法 [ 试 剂 配 制 ] 石 炭 酸 复 红 液 ( 碱 性 复 红 lg, 纯 乙 醇 l0ml, 石 炭 酸 (5%) 水 溶 液 100m1) 碱 性 复 红 溶 于 乙 醇 内, 然 后 与 石 炭 酸 水 溶 液 混 合, 用 前 过 滤 [ 染 色 步 骤 ] 1) 切 片 脱 蜡 至 水 2) 入 石 炭 酸 复 红 掖 1h. 于 37C 或 56 温 箱 内 30min 3) 自 来 水 洗 4) 用 0.5% 盐 酸 乙 醇 分 化 5) 水 洗, 用 0.1% 亚 甲 蓝 水 溶 液 复 染 6) 用 95% 乙 醇 分 化, 使 亚 甲 蓝 脱 色, 以 便 显 示 清 楚 7) 无 水 乙 醇 脱 水, 二 甲 苯 透 明, 中 性 树 胶 封 固 ( 二 ) 真 菌 真 菌 又 称 霉 菌, 种 类 很 多, 和 其 他 微 生 物 一 样, 广 泛 分 布 于 自 然 界 在 人 体 中 有 2 种 基 本 形 态, 即 单 细 胞 型 和 多 细 胞 型 (1) 真 菌 染 色 法 的 选 用 1. 曲 菌 通 常 HE 染 色 中 可 见 到 曲 菌, 因 为 曲 菌 菌 丝 对 苏 木 素 有 弱 嗜 染 性, 故 一 般 可 用 高

22 碘 酸 无 色 复 红 法, 但 也 可 用 醛 复 红 法 或 六 胺 银 法, 效 果 均 较 好 这 种 真 菌 感 染 多 见 于 肺 部, 皮 肤 耳 鼻 腔 眼 眶 等 2. 毛 霉 菌 形 态 和 曲 菌 相 似 其 染 色 以 用 六 胺 银 和 无 色 复 红 醛 复 红 为 佳 人 体 毛 霉 菌 常 见 于 头 面 部 肺 部 和 消 化 道, 易 侵 犯 血 管, 常 引 起 脉 管 炎 血 栓 形 成 和 梗 死 等 病 变 3. 新 型 隐 球 菌 呈 圆 形 或 卵 圆 形, 为 一 种 粘 多 糖 物 质 所 组 成 爱 先 蓝 ( 阿 尔 森 蓝 ) 和 粘 液 胭 脂 红 染 色 呈 阳 性 反 应 4. 放 线 茵 是 一 种 有 细 胞 壁, 其 化 学 组 成 与 细 菌 相 似 的 真 菌 在 HE 染 色 中 可 见 中 央 菌 体 呈 紫 蓝 色, 菌 丝 末 端 带 有 胶 样 物 质 组 成 的 鞘 包 围 而 膨 大 成 棒 状, 嗜 染 曙 红 而 呈 红 色 用 六 胺 银 染 色 能 把 菌 丝 和 胶 样 鞘 都 显 示 出 来 主 要 侵 犯 人 的 面 颈 部 腹 部 和 胸 部, 也 可 侵 犯 肠 壁 肝 和 肺 5. 白 色 念 珠 菌 是 一 种 圆 形 生 芽 的 酵 母 样 菌 在 组 织 切 片 内 常 同 时 见 到 孢 子 和 菌 丝 孢 子 和 菌 丝 在 HE 染 色 中 均 呈 蓝 紫 色, 用 革 蓝 法 或 六 胺 银 法 染 色 也 呈 阳 性 本 病 好 发 于 皮 肤 口 腔 外 明 及 阴 道 和 呼 吸 道 等 Grocott 六 胺 银 核 固 红 亮 绿 法 用 铬 酸 氧 化 真 菌 内 多 糖 化 合 物 而 暴 露 醛 基, 醛 基 还 原 六 胺 银 液 成 为 黑 色 的 金 属 银 氯 化 金 用 来 调 色, 把 金 属 银 转 变 为 更 稳 定 的 金 属 银, 并 可 排 除 组 织 中 的 黄 色 色 调 硫 代 硫 酸 钠 液 对 已 显 色 的 银 盐 起 固 定 作 用 并 除 去 末 反 应 的 银 离 于. 对 曲 菌 显 示 较 好 [ 固 定 ] 中 性 甲 醛 液 或 Helly 液 试 剂 配 制 (1) 六 次 甲 基 四 胺 一 硝 酸 银 原 液 ( 简 称 六 胺 银 原 液 )3% 六 次 甲 基 四 胺 水 溶 掖 l00ml,5% 硝 酸 银 水 溶 液 5m1 临 用 时 将 两 液 混 合 呈 现 乳 白 色, 瞬 时 透 明 (2) 六 胺 银 硼 砂 染 色 液 六 胺 银 原 液 25ml, 蒸 馏 水 25ml,5% 硼 砂 ( 四 硼 酸 钠 ) 水 溶 液 2ml (3) 核 固 红 染 液 核 固 红 o.1g, 硫 酸 铝 5g, 蒸 馏 水 100m1 将 硫 酸 铝 溶 于 蒸 馏 水 内. 放 人 核 固 红 染 色 剂 煮 沸, 冷 却, 过 滤, 染 液 可 保 存 于 室 温 (4) 亮 绿 溶 液 亮 绿 0.2g, 蒸 馏 水 100m1, 冰 醋 酸 0.2g 染 色 步 骤 1) 切 片 脱 蜡 至 水 经 Helly 液 固 定 的 组 织 切 片 可 先 脱 汞 2) 氧 化 切 片 于 5% 铬 酸 水 溶 液 1h 3) 流 水 清 洗 5min 4) 浸 人 1% 亚 硫 酸 钠 水 浴 液 1min, 除 掉 铬 酸, 5) 自 来 水 清 洗 5min 6) 蒸 馏 水 清 洗 3 次 7) 放 人 六 胺 银 硼 砂 液 染 色 lh( 于 温 箱 内 ), 切 片 呈 浅 棕 色 为 止 在 镜 下 观 察, 如 过 染 则 结 缔 组 织 着 色 太 深 8) 蒸 馏 水 洗 3 次 9) 用 0.2% 氯 化 金 水 溶 液 调 色 5min 10) 蒸 馏 水 洗 11) 固 定 于 2% 硫 代 硫 酸 钠 水 溶 液 3min 12) 自 来 水 洗 13) 入 核 固 红 染 液 染 细 胞 核 10min 14) 自 来 水 洗, 蒸 馏 水 洗 15) 入 亮 绿 染 液 30 秒 ( 或 用 马 休 黄 液 复 染 ) 16) 蒸 馏 水 快 速 稍 洗 17) 无 水 乙 醇 脱 水 二 甲 苯 透 明, 中 性 树 胶 封 固 [ 结 果 ]: 各 种 真 菌 均 被 着 色 菌 丝 和 孢 子 呈 明 显 的 黑 褐 色, 抗 酸 菌 也 呈 黑 褐 色, 粘 液 呈 紫 色, 细 胞 核 呈 红 色 附 注 1) 当 切 片 置 入 六 胺 银 工 作 液 60min 时 菌 体 才 开 始 淡 淡 地 显 影 因 此 在 60min 左 右 即 取 出 用 蒸 馏 水 洗 后 置 镜 下 观 察 有 否 菌 体 出 现, 以 后 每 隔 10min 取 出 镜 检 控 制 为 准

23 2) 在 低 倍 镜 下 菌 体 不 宜 着 色 太 黑, 否 则 在 高 倍 镜 下 观 察 时 则 不 够 清 晰 透 亮 3) 六 胺 银 溶 液 都 应 放 入 4 冰 箱 中 保 存 为 好 E\ 脂 类 染 色 脂 类 或 脂 质 是 中 性 脂 肪 类 脂 以 及 它 们 的 衍 生 物 的 总 称 脂 类 的 共 同 物 理 性 质 是 不 溶 于 水 而 溶 于 乙 醇 三 氯 甲 烷 乙 醚 和 四 氯 化 碳 等 有 机 溶 剂 人 体 内 脂 质 以 2 种 形 式 存 在 : 一 种 是 贮 藏 脂 肪, 主 要 是 中 性 脂 肪, 另 一 种 是 结 构 脂 肪, 主 要 为 类 脂 1 脂 类 染 色 的 应 用 1) 证 实 和 区 分 脂 肪 变 性 2) 显 示 病 变 的 脂 质 沉 着 3) 用 于 肿 瘤 组 织 的 鉴 别 与 诊 断, 2 染 色 方 法 中 性 脂 肪 的 染 色 常 采 用 偶 氯 类 染 料 如 苏 丹 Ⅱ 苏 丹 Ⅲ 苏 丹 Ⅳ 苏 丹 B 及 油 红 o 等, 这 些 染 料 不 溶 于 水, 稍 溶 于 乙 醇, 但 更 易 溶 于 脂 肪, 因 此 被 广 泛 应 用 于 组 织 切 片 内 脂 滴 的 显 示 1. 苏 丹 Ⅳ 苏 丹 Ⅲ 或 苏 丹 Ⅱ 法 [ 试 剂 配 制 ] (1) 苏 丹 Ⅳ 染 液 苏 丹 Ⅳ 或 苏 丹 Ⅲ 苏 丹 Ⅱ 均 可 0.5g;70% 乙 醇 50ml. 内 酮 50ml 取 一 只 洁 净 的 l00ml 小 口 砂 塞 瓶, 先 倒 人 70% 乙 醇 和 丙 酮 混 合, 再 加 入 苏 丹 Ⅳ 或 Ⅲ 或 Ⅱ, 不 时 摇 动, 使 尽 量 溶 解 达 饱 和, 待 1 2d 后 过 滤 到 另 一 小 口 砂 塞 瓶 内 密 封 保 存 备 用, 也 可 不 过 滤, 用 时 吸 其 上 清 液 (2)Mayer 苏 木 素 液 ( 参 阅 第 章 ) [ 染 色 步 骤 ] 1) 组 织 用 10% 甲 醛 固 定 2) 冰 冻 切 片, 厚 6 一 l0 微 米, 用 玻 璃 钩 把 切 片 捞 入 60% 乙 醇 中 略 洗 ( 如 为 新 鲜 组 织 用 低 温 恒 冲 陈 切 片, 裱 贴 于 玻 片 上, 于 l0% 甲 醛 液 同 定 10min, 稍 水 洗 后, 再 用 60% 乙 醇 洗 ) 3) 用 吸 管 吸 取 苏 丹 Ⅳ 染 液 ( 或 苏 丹 Ⅲ 苏 丹 Ⅱ 均 可 ) 约 3ml 4ml 于 称 量 瓶 内, 从 60% 乙 醇 中 把 切 片 涝 入 盛 有 染 液 的 称 量 瓶 内 并 加 盖 浸 染 1 2min ( 裱 于 玻 片 上 的 切 片 需 要 加 盖 染 色 时 间 要 短, 尽 量 防 止 染 液 挥 发, 否 则 沉 淀 污 染 切 片 ) 4)70% 乙 醇 稍 洗 去 多 余 残 液 5) 流 水 稍 洗 6) 苏 木 素 复 染 胞 核, 必 要 时 用 1% 盐 酸 乙 醇 分 化 7) 水 洗 10min, 或 于 稀 碳 酸 锂 水 溶 液 中 促 蓝, 把 切 片 帖 于 载 玻 片, 并 将 周 围 水 份 抹 干 8) 阿 拉 伯 糖 胶 或 甘 油 明 胶 封 盖,( 如 需 较 长 时 间 保 存 切 片, 应 在 玻 片 干 洁, 所 封 阿 拉 伯 糖 胶 或 甘 油 明 胶 不 溢 出 盖 玻 片 的 条 件 下, 用 中 性 树 胶 在 盖 玻 片 的 四 周 和 载 玻 片 的 交 界 处 作 一 堤 围 状 封 固, 堤 因 宽 度 约 3 3mm) [ 结 果 ] 中 性 脂 肪 呈 猩 红 色 ( 用 苏 丹 Ⅳ 染 色 ) 橙 红 色 ( 用 苏 丹 Ⅲ 染 色 ) 橙 黄 到 橙 红 色 ( 用 苏 丹 Ⅱ 染 色 ), 胞 核 蓝 色 十 三 结 束 语 现 代 的 病 理 诊 断 中 大 部 分 特 殊 染 色 被 免 疫 组 织 化 学 方 法 取 代, 但 是 有 些 特 殊 染 色 是 无 法 完 全 取 代, 如 糖 原 网 织 染 色 淀 粉 样 变 抗 酸 染 色 脂 肪 染 色 等 在 临 床 诊 断 病 理 上 仍 然 广 泛 应 用