第 17 卷第 1 期细胞生物学杂志摘要 [7 J Wittwer, C. T. et al., 1991, BioTechniques, 10 (1): 本文着重介绍并比较转基因研究中外源基 [ 8 J Southern, E. M., 1978,

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锭须贡
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第 17 卷第 1 期细胞生物学杂志 17 1350-1354. 摘要 [7 J Wittwer, C. T. et al., 1991, BioTechniques, 10 (1): 76-83. 本文着重介绍并比较转基因研究中外源基 [ 8 J Southern, E. M., 1978, J. Mol. Biol., 因整合 ( 染色体及基因水平 ) 与表达 ( 转录及翻 98.

Hypertension, 10 : 9-16. [ 1 J 田小利等, 1993, 细胞生物学杂志, 15 (4 ) : [12J F ukamizu, A. et a1., 1991, J. BioZ. ReguZator 164-167. s and Homeostatic Agents, 5: [ 2 J 田小军 Jj 等, 1993, 中国循环杂志, 8(7) : 112-116.

1 第 17 卷第 1 期细胞生物学杂志摘要 [7 J Wittwer, C. T. et al., 1991, BioTechniques, 10 (1): 本文着重介绍并比较转基因研究中外源基 [ 8 J Southern, E. M., 1978, J. Mol. Biol., 因整合 ( 染色体及基因水平 ) 与表达 ( 转录及翻译水平 ) 的各种检测方法, 并就它们的适用范 [9 J Mul1ins J. J. et a1., 1990, Nature, 一 544. 围优缺点等作了比较口 J Tronik, D. et al., 1987, EMBO J. 6: 参考文献 [l1j Buder, M. et al., 1992, J. Hypertension, 10 : [ 1 J 田小利等, 1993, 细胞生物学杂志, 15 (4 ) : [12J F ukamizu, A. et a1., 1991, J. BioZ. ReguZator s and Homeostatic Agents, 5: [ 2 J 田小军 Jj 等, 1993, 中国循环杂志, 8(7) : [13J Ohkubo, H. et a1., 1990, Proc. N atl. [3 J Hogan, B. et al., 1986, l n Manipulating Acad. Sci. USA, 87, the mouse embryo--a laboratory manual, [14 J Makino, R. et a1., 1990, Technique- J. lnd ed. pp , Cold Spring Harbor, Methods in CeH MoZ. Biol., 汩的 : 29 5 一 New York [ 4 J Hochi, S-i. et a1., 1990, Anim. Biotec [15J Fukamizu, A. et al., 1989, Biochem. 儿, 1(2): Biophys. Res. Commun., 165: [ 5 J White, B. A. et al., 1982, J. Biol. [16J Towbin. H. et a1., 1979, Proc. NatZ. Chem., Acad. Sci., USA. 76: [ 6 J Saiki, R. K. et a1., 1985, Science, 230. 细胞生杂志细胞内皮素受体的研究进展丁莉莉 * 内皮素 ( endothelin, 简称 ET) 有强列和长效的缩血管作用 ET 的许多作用是通过受体介导的自 1988 年发现 ET 以来, 对 E T 及其受体的基因蛋白质结构作用在 rc 理生理学功能以及病理学意义做了大量的研究一内皮素受体的分布至今已发现三种 ET 异掏肤 ( ET-1, ET-2, ET-3), 估计应存在多种 ET 受体亚型认为至少存在两种 ET 受体, 李兴隆 ( 滨州医学院山东 ) 目前分别称为 ET A 和 ETB o ET 受体的分布非常广泛, 但仍有组织特异性人乳腺内动脉和静脉兔肺动脉血管平滑肌猪冠状动脉的血管平滑肌同时具有 ETA F 口 ETB 两种受体 [1, 2) 另一些研究证明, 血管中膜平滑肌细胞 ( 但不包括内皮细胞 ) 存在高浓度均一的 ETA rnrna 而血管内膜平滑肌细胞的 ETAmRNA 浓度低且不均一 [3) 用兔抗牛 ET 受体血清确定 ETB 受体在组织中的分布时, 发现各种组织 ETB 受体的含量不同 z 肺 ETB 受体占总 ET 受体的 7 0 %, 脑 55 %, 垂体 50%, 肾 25%, 肾上腺 10%, 辜丸 < 2 占优势, % 此结果意味着在肺中 ETB 受体在辜丸 ETA 受体占优势问犬肾的研究表明, 肾皮质髓质和肾乳头的 ETA 与 ETB 比例分别为 22:28, 内皮细胞上仅有 ETB 受体 [6) 39:61, 50:50 问牛在兔! 旺膜括约肌的平滑肌上, ETA 约占总受体数的 80%, 现在金识大学遗传子实验施设, 日本, 920 物学杂志细胞生物学杂志细胞生物学杂志胞生物学杂志细胞生物学物学杂志

i á 细胞生物学杂志 i9 95 年在牛虹膜括约肌的平滑肌上, ETB 约占 72%[ 7] 在犬鼠视网膜上有高亲和力的 E TB 受体分析人体组织 ET 受体分布时发现, ETA 和 ETB 受体存在于人心脏房室传导系统心肌纤维和心脏瓣膜房室传导系统 ETB 含量高于房间隔和室间隔, 右心房心肌纤维 ETA 受体的密度较高 (91 士 12%)[ 飞脑的灰质和白质仅有 ET B

2 i á 细胞生物学杂志 i9 95 年在牛虹膜括约肌的平滑肌上, ETB 约占 72%[ 7] 在犬鼠视网膜上有高亲和力的 E TB 受体分析人体组织 ET 受体分布时发现, ETA 和 ETB 受体存在于人心脏房室传导系统心肌纤维和心脏瓣膜房室传导系统 ETB 含量高于房间隔和室间隔, 右心房心肌纤维 ETA 受体的密度较高 (91 士 12%)[ 飞脑的灰质和白质仅有 ET B 受体 [ 町, 肾脏的 ETA: ETB=l: 2[IOJ 胎膜的 ETB 受体约占 80%[IIJ 前列腺 ETA: ETB=2:1[ 12J 歹 1], 包括 G ATA m o tif, 快速相反应物调节元件和 E box ( 19J 通过比较大鼠脑和肺 ETB 基因, 发现它们的 cdna 和两端的非编码序列有一定的差异, 说明 ETB 受体的表达可能有组织特异性 [2 日 ] - 一 ET 受体与 ET 结合的动力学平滑肌细胞 ET 受体的 Kd = 3 x 10- IO molj 细胞杂志细有一些实验证明存在着其他受体亚 L, 心脏 ET 受体 Kd = 4 6 x 10- IO mol jl, Bmax = 96 fmol jmg 蛋白质脑干 ET 受体的型 [13-1 飞 - 内皮素受体蛋白及其基因 ETA 和 ETB 受体为单拷贝基因已知的受体亚型成员之间相似性达 90%, 但 ETA 和 ETB 之间的相似性低于 60 %[16J 人胎盘 ETA 受体 cdna 编码 427 个氨基酸, 人肝 ETB 受体 cdna 编码 442 个氨基酸 ETA 受体蛋白与 G-protein 受体家族的结构相似, 也有 7 个跨膜区, 最保守的部分是疏水跨膜区 [1 勺牛基因组的 ETB 受体基因为单拷贝, 长度超过 36Kb 编码区有 7 个外显子第一个外显子编码第一和第二个跨膜区, 此后每一个跨膜区都由不同的外显子编码经核糖核酸酶保护试验, 推测转录本的 5' 末端也有多个起始位点, 上游无明显的 "TATA" box 结构 [ 18 J 人基因组的 ETB 受体基因位于第 13 号染色体, 全长 24Kb, 单拷贝基因, 与牛 ETB 受体基因相似, 也有 7 个外显子和 1 6 个内含子外显子长度范围为 109 一坤, 而内含子长度范围为 Kb 主要转录起始位点位于起始密码子 ATG 上游 25 8 bp 和 229 bp 处 5' 非翻译区缺乏常见的 TATA box 和 CCAAT bo x 在转录起始位点上游含有 SP 1 结合位点 E TB 基因具有典型的顺式元件序 Kd = 5. 4 x 10- IO molj L, Bmax = 284fmoljm g 蛋白质在培养的人脑微血管内皮细胞中, 存在高亲和力和 l 低亲和力两种 ET-1 结合位点, Kd1 = 122pmol; L, 1<.02 = 31 nmol/ L, Bmax...: 1 = 124 fmol j mg 蛋白质, Bmax 2 = 909 fmolj mg 蛋白质 [21 J o WKY 大鼠平滑肌的 ET 受体数为士 374 j 细胞, 而白发性高血压大鼠平滑肌的 ET 受体数为 1, 278:!:299j 细胞 ( 这可能是高血压大鼠对内皮素反应降低的原因之大鼠肾皮质细胞膜与 ET-1 和 ET-3 结合时具有特殊性饱和性及高亲和力等特点此细胞膜上 ET 寸的结合位点比 ET-1 少 40-50% 0 ET-1 的 Kd = 21 8 士 23 pmol jl, Bmax = 275 士 20 fmol j mg 蛋白质 ET-3 的 Kd = 207:!: 19 pmolj L, Bmax = 113 士 1 7 fmol j mg 蛋白质加入 10 nm sarafotoxin 6 c ( 能选择性地与 ETB 受体结合 ), ET 寸的结合能力降低 40-50%, ET 寸的结合能力完全丧失, 说明肾皮质 ET 受体中 ETB 占 40 一 50%, 因为 ET- 3 只有与 ETB 结合时才有高亲和力加入 BQ-123 后 ET-1 的结合能力降低 50%, ET 寸的结合能力不受影响 [ 22 J 用同位素标记的配基与 ET 结合后进行 SDS-PAGE, 电泳结果显示在受体 - 配基复合物中有二硫键用疏基试剂 (NEM 等 ) 处理后, 学杂志细胞生物学杂志细胞生物学杂志生物学杂志细胞生物学学杂志

第 17 卷第 1 期细胞生物学杂志 19 受体与 ET-1 的结合能力下降, 说明受体结合 ET 的区域内或其附近有一个功能性的蔬基 23) 四内皮素受体结构与功能的关系的研究 ETA 受体细胞外 B 环 (B loop 或细胞外环 2 ) 的 5 个氨基酸 (1 40-144, KLLA G) 是受体与配基结合中最重要的结构细胞外 C 环和 D 环 ( 细胞外环 3 和环 4 )

基的功能有关在 ET 受体的家族中, 与结合配此天冬氨酸被赖氨酸取代将大鼠 ETB 受体的 1 8 1 位赖氨酸突变为天冬氨酸, 中一过性表达野生型和突变型受体, 并在 C OS-7 细胞以 125 腆标记的 ET 作为配基, 野生型受体与三种 ET 的结合能力相近 ( IC~o == 0.2 一 0.

3 第 17 卷第 1 期细胞生物学杂志 19 受体与 ET-1 的结合能力下降, 说明受体结合 ET 的区域内或其附近有一个功能性的蔬基 23) 四内皮素受体结构与功能的关系的研究 ETA 受体细胞外 B 环 (B loop 或细胞外环 2 ) 的 5 个氨基酸 ( , KLLA G) 是受体与配基结合中最重要的结构细胞外 C 环和 D 环 ( 细胞外环 3 和环 4 ) 包括跨膜区是识别配基所必需的结构细胞内的环 3 和 C 末端参与了细胞外配基结合所需的三维结构的形成 ETA 受体靠近胞浆尾部的 13 个氨基酸和细胞内的环 3 的 C 末端 10 个氨基酸与 ET-1 诱导钙离子的功能有关, 还可能与 G-protein 的功能有联系 [ 24, 25) 在 G-protein 偶联的受体家族中, 第三个跨膜区有一个非常保守的天冬氨酸, 基的功能有关在 ET 受体的家族中, 与结合配此天冬氨酸被赖氨酸取代将大鼠 ETB 受体的位赖氨酸突变为天冬氨酸, 中一过性表达野生型和突变型受体, 并在 C OS-7 细胞以 125 腆标记的 ET 作为配基, 野生型受体与三种 ET 的结合能力相近 ( IC~o == 0.2 一 0.6 nmol/ L), 而突变型受体的 IC60 分别为 5nmol / L ET -1, 27nmol/L ET-2, 127nmol/ L ET - 3 在 ET 饱和浓度时, 突变受体仍能增加磷酸肌醇的水平, 说明突变不会影响 G - protein 的 { 民联过程 [ 26) 突变研究证明 ETA 受体的第二个跨膜区 C 末端的 140 位赖氨酸是 ET A 结构中与配基结合所必需的氨基酸 [ZE], 细胞外的 17 4 和 255 位半脱氨酸对于配基结合以及受体的稳定也是必需的 [ 叫大多数动物的 ETB 受体 ( 不包括大鼠 ) 都能与 ET-1 形成稳定的复合物, 且能在低温下进行 SDS-PAGE 电泳 ( 2 % SDS ), ETA 无此特点 ETB 受体 N- 末端细胞外的 29 个氨基酸与此复合物的形成有关点突变证明 A Sp 75 Pro 93 参与了复合物的形成 [28) 五受体介导的功能在人冠状左降支动脉标本中, ET 通过 ETA 受体调节人冠状动脉的收缩 ET-1 和 ET- 3 对动脉远端的作用超过近端的 10 倍, 但 ET- 1 的作用超过 ET-3 的 100 倍 B Q-123 能拮抗 E T-1 对远端动脉的作用, 对近端动脉的作用是非竞争性的这些结果指出 ETA 受体介导 ET - 1 对远端动脉的收缩反应, 在近端动细胞生杂志细胞脉收缩反应中可能有其它 ET 受体的参与 [ 29 ) 在兔视网膜动脉中, ETEl 也是通过 ETA 受体调节血管收缩的 [ 30) 麻醉状态下, 犬肾动脉灌注 ET-1 (long/ min /k g) 后, 引起肾血流量和肾小球滤过量分别降低 82% 和 89%, 当加入 BQ-12 3 (10mg/ kg / m i n) 后, 显著抑制了 ET-1 诱导的肾血管收缩 ET - 1 减少尿量但不会影响排铀反应而 sa r af o t o xin 6c 能增加尿流量和排, 铀量, 但不能抑制 ET-1 诱导的肾血管收缩这些结果预示, ET-1 诱导的犬肾血管收缩是通过 ETA 受体发挥作用的, 剌激 ETB 受体可能抑制铀的重吸收 [ 5) 激活兔肺动脉血管平滑肌的 ETA 或 ETB 受体都能引起收缩持续刺激会使 ETB 敏感性降低, sarafotoxin 6 c 从而避免再次被 ET-1 或激活问在信号传递通路中, 大鼠血管平滑肌细胞的 ET A 受体通过 G.-prote in, ETB 受体通过 Gj-protein, 酶而发挥作用的 [ 飞牛内皮细胞的作用于腺昔酸环化大鼠小脑切片的研究发现 ET 诱导磷酸肌醇水解时, 通过百日咳不敏感型 G-pr o tein (G q /ll) 进行信号的传递 [ 3 1) ET 通过 ET 受体, 离子浓度, 的传递增加细胞内自由的钙促进三磷酸肌醇的产生, 进行信号将 ET 加入 NG 细胞 (neu roblastoma-glioma hybrid cell) 中, 一磷酸肌醇和三磷酸肌醇水平增加, 胞浆钙肖子水平增加三种 ET 只是暂时升高钙离子, 无持续相物学杂志细胞生物学杂志细胞生物学杂志胞生物学杂志细胞生物学物学杂志

20 细胞生物学杂志 1995 年加入足够的 EDTA, 可抑制 ET 介导的钙离子反应 ( 降低 40-50%), 提示钙离子实际增长的部分是从细胞外流入的刺激钙离子和磷酸肌醇水平升高的能力依次为 ET-1, ET- 3[ 臼 ] 得到类似的结果 [ 叫 ET-2, 在兔角膜上皮原始培养细胞中, 也在血管平滑肌上, ET 与 ETA 受体结合后, 激活磷脂酶 C, 生成三磷酸肌醇

4 20 细胞生物学杂志 1995 年加入足够的 EDTA, 可抑制 ET 介导的钙离子反应 ( 降低 40-50%), 提示钙离子实际增长的部分是从细胞外流入的刺激钙离子和磷酸肌醇水平升高的能力依次为 ET-1, ET- 3[ 臼 ] 得到类似的结果 [ 叫 ET-2, 在兔角膜上皮原始培养细胞中, 也在血管平滑肌上, ET 与 ETA 受体结合后, 激活磷脂酶 C, 生成三磷酸肌醇甘油二百旨, 并增加细胞内钙离子水平在某些血管内, ET 通过 G i-protein, 影响电压依赖性钙离子通道这种相关性也许能解释为什么钙离子拮抗剂能抑制某些血管的收缩, 而不能抑制另一些血管的收缩在某些大动脉 ( 如人胸廓内动脉 ) 中, ET 诱导的收缩主要是通过细胞内钙离子的释放来发挥作用的因此钙离子拮抗剂不会显著影响 ET 诱导的收缩反应相反, 在人前臂血循环中, 各种钙离子拮抗剂确能对抗 ET 诱导的收缩反应可以认为钙离子拮抗剂在抑制 ET 诱导的阻力动脉收缩中特别有效, 因此能调节血压 [1 6, 34] 在培养的人脑微血管内皮细胞中, 能促进磷酸肌醇的积累, ET-1 ET-3 无比作用配基与受体的结合能力 (ET-1 > ET-2 >sa rafotoxin s6 b > ET-3) 醇合成的能力一致与相应配基诱导三磷酸肌 BQ-123 和蛋白激酶 C 激活剂能抑制 ET-1 诱导的三磷酸肌醇合成蛋白激酶 C 能调节 ET-1 对磷醋酶 C 的诱导, 而不同信息系统间的相互作用调节了 ET- 1 诱导 camp 的积累腺 F 2α 的合成, 上述结果提示 ET-l ET-1 还能促进内皮细胞前列此作用也能被 BQ 抑制与 ETA 受体结合后, 通过三磷酸肌醇使细胞内钙离子移动, 并激活了磷醋酶 2A[ 21] ET 受体不仅参与血管收缩, 还可能具有其他的作用例如, 在脑皮质中的 ETB 受体可能参与神经传导或起调节作用 [8]; 小鼠胚胎星状细胞和星状细胞瘤的 ET 受体, 可能通过诱导 c-fos 的功能, 刺激神经生长因子的表达, 参与脑组织的生长和修复 [S615 肾小球膜细胞的 ET 受体通过蛋白激酶 p (MAPK) c-fos 通路的调节, 参与了基因表达和细胞分裂 [ l5 ]p 血管中膜和内膜平滑肌细胞的 ETA 基因可能影响这些细胞的分裂活性 [3]; ET 通过受体介导的信号传递通路刺激人黑色素细胞的分化和增殖, 在黑色素细胞的增殖和紫外线引起的色素沉着中起着重要的作用 [ 叫盘特殊的 ET- 1 结合位点存在于人足月胎这些结合位点不仅位于绒毛血管平滑肌上, 也存在于滋养层浆膜上, 以及体外培养的滋养层细胞膜上人胎盘融合滋养层是一极化细胞杂志细的上皮, 带有微绒毛膜, 与母体的血液进行交换 E 还带有基底部的浆膜, 沟通胎儿循环高亲和力的 ET- l 上, 结合位点同时存在于两种膜而且基底部的浆膜上数量更多, 说明 ET- 1 可能参与调节胎儿 - 胎盘循环, 同时具有特殊的滋养功能 [ 37 J 的张力人前列腺的 ET 受体能调节前列腺平滑肌内源性 ET 可能在良性前列腺肥厚的病理过程中起一定的作用若能进一步证实, ET 拮抗剂可能是治疗良性前列腺肥厚的有效药物 [1 2] 机体可能通过控制 ET 受体的表达来调节 ET 受体的功能 [ 37-40J 六研究内皮素受体的某些方法和试剂 BQ-123 (D-Asp-L-Pro-D-Val-L-Leu-D Trp) 是一种 ETA 受体的选择性拮抗剂 BQ- 123 可能使 ETA 变构而影响 ETA 与 E T-l 的结合, 但不影响与 ET-3 的结合 (4 飞将 BQ 123 ( nmol / kg /min) 持续灌注到自发性高血压的 WKY 大鼠体内, 平均动脉压下降 30 mmhg, 降压时间超过 18 小时, 而心输出量没有改变, 因而认为 BQ-12 3 是一种有效的抗高血压药物 (43] ETA 的选择性拮抗剂还有 (27-0- caffeoyl myricerone) ( 叫 ( 在体内的作学杂志细胞生物学杂志细胞生物学杂志生物学杂志细胞生物学学杂志

第 17 卷第 1 期细胞生物学杂志 21 用几乎与 BQ-123 一样, Ki= 1 O::!:O.2 nmolj L )[45J FR 139317 ( 与 E TA 的亲和力很高, Ki = 1 nmoljl; 与 ETB 的亲和力低, Ki = 7.

5 第 17 卷第 1 期细胞生物学杂志 21 用几乎与 BQ-123 一样, Ki= 1 O::!:O.2 nmolj L )[45J FR ( 与 E TA 的亲和力很高, Ki = 1 nmoljl; 与 ETB 的亲和力低, Ki = 7.3μmol jl) 等 [1, 46J 常用的 ETB 受体选择性的激动剂有 BQ-3020, Sarafotoxin 6b 和 Sarafotoxin 6C[ 2 山 12, 16, 18, 叫 46J o ETB 受体的拮抗剂有 PD 丰日 P D [46, 4 7 J Ro 和 Ro (bosentan) 属于小分子非多肤类 ET 受体的拮抗剂, 能同时抑制 ETA 和 ETB 两种受体在体内 1-10mgjkg i. v. 的 Ro 足以抑制 big ET- l 的升压作用在大剂量时 (1 00 mgj kg i. v.) 能抑制 big ET-l 降压作用的 4 8, 49J 在正常情况下血浆 ET 浓度很低注射到体内 ET 不一定能反应内源性 ET 的作用在研究 ET 的生理和病理作用时, 使用受体拮抗剂阻断 ET 受体介导的作用, 价值的方法摘要应该是一种有内皮素受体分布广泛受体亚型主要有 ETA 和 ETB 血管平滑肌中 ETA 受体占优势, 内皮细胞上 ETB 受体占优势内皮素受体的结构与 G-prote in 受体家族相似通过信号传递通路, 内皮素受体参与血管的收缩, 节细胞的某些机能内皮素受体及其拮抗剂的研究将为某些疾病的治疗开辟新的途径参考文献 [1 J Seo B. et al., 1994, Circulation, 89(3), [ 2 J LaDouceur D. M. et al., 1993, Biochem. Biophys. Res. Commun., 196(1), 209 一 215. [ 3 J Hasegawa K. et al., 1994, J. Hypertension, 23(3), [ 4 J Hagiwara H. et al., 1993, Am. J. Physiol., 264(4 Pt 2). R 777 一 783. [ 5 J Brooks D. P. et al., 1994, J. PharmacoL. Exp. Ther.. 268(3), [ 6 J Eguchi S. et al , Jpn. Endocrjno- 调 Zogy, 132(2), [ 7 J el Mowafy A. M. et al., 1994, J. PharmacoL. Exp. Ther., 268(3 ), [ 8 J Molenaar P. et a1., 1993, Circ. Res., 72 (3), [9 J Fernandez D. R. et a1., 1994, J. Neurochem., 62 (4), [10J Kar 巳 t F. E. et a1., 199 3, Kidney Int., 44 (1), [l1j Buchan K. W. et a1., 1993, J. Cardiovasc. PharmacoZ., 22 Suupl 8. S [12J Kobayashi S. et a1., 1994, MoL. PharmacoL., 45 (2), [13J Woodcock E. A. et a1., 1993,CHn. Exp. Pha rm αco L. PhysioZ., 20(5), [l4j Sed û et a1., 1993, J. BioZ. Regul. Homeos 仁, 7(3), [15'J Simoson M. S. et a1., 1992, J. Cardiovasc. Phan 忧 acol., 20(suppl 12), S 29- 细胞生杂志细胞 32. [ 16J Yawaza H. et a1., 1993, Jpn. J. Pharmacol., 63 (3), [ 17J Nakamuta M. et aj., 1991, Biochem. Biophys. Res. Commun.. 177(1) [18J Mizuno T. et al., 1992, J. Cardiovasc. PharmacoL.. 20 (suppl 12). S [19J Arai H. et al. 1993, J. BioL. Chem., 268(5 ), [20J Cheng H. F. et al., 1993, MoL. PharmacoL., 44 (3), [21J Stanimirovic D. B. et ai., 1994, J. Neurochem., 62(2 ), 5' [22J Nambi P. et a1., 1992, Mol. PharmacoL., 42 (2), [23J Spinel1a M. J. et al., 1993, FEBS Lett., 328 (1-2), [24J Adachi M. et aj., 1993, J. Cardiovasc. PharmacoL., 22 Suupl 8, S [ 25J Adachi M. et ai., 1994,Eur. j. Biochem., 220 (1), [26J Mauzy C. et a1., 1992, J. Cardiovαsc. PharmacoL., 20 (suppl 12), S 5 一 7. [27J Haendler B et al., 1993, J. Cardiovasc. PharmacoL., 22 Suupl 8, S 4. 一 6. [28J Takasuka T. et a1., 1994,1. BioZ. Chem., 269(10 ), [29] Godfraind T., 1993, Br. J. Pharmacot., 110(3), <30J Takai K. et al., 1993, Life Sci., 53(6), PL 111 一 -115, 物学杂志细胞生物学杂志细胞生物学杂志胞生物学杂志细胞生物学物学杂志

22 细胞生物学杂志 1995 年 [31J Sokolovsky 岛 1:. 1993, Cen SignaL. 5(4 ), i73-48g. [ 32J Chau L. Y. et a1., 1993,J. Neurochem., 60 (2), 454-460. [ 33 J Takagi H et a1., 1994, lnvest. OphthaLmoL. Vis. Sci.

6 22 细胞生物学杂志 1995 年 [31J Sokolovsky 岛 1:. 1993, Cen SignaL. 5(4 ), i73-48g. [ 32J Chau L. Y. et a1., 1993,J. Neurochem., 60 (2), [ 33 J Takagi H et a1., 1994, lnvest. OphthaLmoL. Vis. Sci. 35 (1), 134- l42. [ 34} Luscher T. F. et a } J. Hum. Hypertens.. 6: (snpp12), S 3-8. [ 35J Ladenheim R. G. et a1., 19 93, J. Neurochem.. 60 (1): [ 36J Imokawa G. et a ,J. Biol. Chem., 267(34): [ 37] Mondon F. et al., 1993, J. CLin. Endo. crinol. Metab : [38J Tseng Y. C. L. et a , J. CLin. Endocri nol. Metab., 76 (1): [ 39 J Roubert P. 1994, M ol. PharmacoL., 45 (2): [ 40J Takada M. et a] ,A m. J. Pathol.. 144(3): 联联会复合体 ( syna pto n emal AAZ [41J Schiff E. et ai , Clin. EndocrinoZ. Oxf., 38(3) l [42J Sokolovsky M , Biochem. Biophys. Res. Commun., 196 (1 ) : [43J Ohlstein E. H. et ai., 1993, J. Cardiovα sc. PharmacoZ.. 22 Suupl 8: S [ 44J Mihara S. et a , Eur. J. Pharma~ coz (1) : [45J Mihara S. et ai , J. Pharmacol. Exp. Tlter.. 268(3), [46J Lodge N. J. et a , J. Cardtovasc. PharmacoL.. 22 Suupl 8, S [47J Warner T. D. et al , J. Cardtovasc. Pharmacol., 22 Suupl 8, S [48J Clozel M. et a , Nature. 365 (6448 ) : 759 一 [ 49J Clozel M. et a , J. Cardlovasc. Pharmαcoz.. 22 Suup18, S 细胞杂志细复合体的研究进展林亚康 ( 中国科学院上海细胞生物学研究所上海 ) complex, SC) 是性细胞成熟过程中第一次减数分裂前期一一粗线期时, 同源染色体之间形成的一种三线状结构 SC 首先由 Moses 等在电镜下发现 [1] 它的亚显微结构包括两个侧成分 ( LE) 和一个中央成分 (CE), 在 LE 和 CE 之间有横纤丝相连染色质纤维以 loop 形式排列在 SC 两侧由于联会复合体和同源染色体的配对重组和第一次减数分裂染色体的凝集和分离有关, 因此, 联会复合体一直是细胞生物学和细胞遗传学研究的主题之一 80 年代以前, 对联会复合体的研究, 主要集中在各种生物的 SC 组型 S C 结构 SC 的形成以及 SC 与同源染色体配对重组的关系等 [2-11] 这方面, 施立明和他的学生也做过不少的工作近年来, 人们试图揭示粗线期染色体的分子结构色体之间配对手 n 重组的分子机理, 同源染对 SC 的形成究, 介绍生化组成以及超微结构作了更深入的研本文主要就这些研究的进展作一些简要的一联会复合体的形成一般认为联会复合体的形成分下列三个步骤 :1. 在细线期时, 细长的染色体轴沿每一条染色体形成 ; 2. 在偶线期时, 通过横纤丝的形成使同源染色体轴平行排列, 轴中心便成为 SC 的 LE ; 3. 随着同源染色体的配对, 在 LE 之间的横纤丝上形成 CE, 此时完整的 SC 便形成 [ 9] 对 SC 的发育过程曾有许多作者用光镜和电镜进行过观察 IS'"'1ZI, 但比较有说服力的是 Dietrich 等的工作, 他们用提腮阻断法研究了小鼠精母细胞 SC 的发育过程, 他们的结果表明 SC 是在用药后第 9 天当细胞进入早偶线期时渐渐形成的, 到第 11 天进入粗线学杂志细胞生物学杂志细胞生物学杂志生物学杂志细胞生物学学杂志

附件2：

附件2：中国实验动物学会团体标准实验动物肿瘤坏死因子 α 转基因关节炎小鼠模型饲养繁育规范编制说明联系人 : 李舸联系电话 :15011983691 编制单位 : 广东省实验动物监测所时间 : 2016 年 10 月 25 日中国实验动物学会团体标准人肿瘤坏死因子 α 转基因关节炎小鼠模型饲养繁育规范编制说明 GB/T1.1 2009 1 2011A081401005 2013B040400007

第 17 卷第 1 期 细胞生物学杂志 摘 要 [7 J Wittwer, C. T. et al., 1991, BioTechniques, 10 (1): 本文着重介绍并比较转基因研究中外源基 [ 8 J Southern, E. M., 1978,

第 17 卷第 1 期细胞生物学杂志摘要 [7 J Wittwer, C. T. et al., 1991, BioTechniques, 10 (1): 本文着重介绍并比较转基因研究中外源基 [ 8 J Southern, E. M., 1978,