第三章 灭菌制剂与无菌制剂 (上)

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1 注射剂 -2

2 本部分学习内容 介绍制剂生产中的灭菌方法 无菌操作法 衡量灭菌可靠性的参数 无菌检查法 洁净室的设计与空气净化技术

3 灭菌 消毒 用物理或化学法杀灭或除去病原微生物 基本概念 利用或控制一定条件, 用物理或化学方法杀灭或使产品避免被微生物污染 除去物品中活的微生物, 使之存活概率不得高于 10-6 无菌 防腐 用物理或化学方法抑制微 生物的生长与繁殖 无菌操作 不得存在任何活的微生物 ( 以现有方法检测不到活的微生物 )

4 灭菌措施的基本目的 : 既要除去或杀灭微生物, 又要保证药物的 稳定性 治疗作用及用药的安全 灭菌效果应以杀死芽胞为准 芽胞 : 整个生物界中抗逆性最强的生命体, 对高温 紫外线 干燥 电离辐射和很多有毒的化学物质都有很强的抗性

5 灭菌法 物理灭菌法 化学灭菌法 干热灭菌法湿热灭菌法射线灭菌法过滤除菌法 气体灭菌法药液消毒法

6 物理灭菌法 干热灭菌法 在高温干热空气中灭菌的方法 灭菌条件 :160~170, >2h; 170~180, >1h; 250, > 45min 此法穿透力弱, 温度不易均匀, 而且灭菌温度较高, 灭菌时间较长 适用于 : 耐高温的玻璃和金属制品以及不允许湿气穿透的油脂类和耐高温的粉末化学药品等 不适用于 : 橡胶 塑料 大部分药品

7 湿热灭菌法 采用高温饱和蒸气 沸水或流通蒸气进行灭菌的方法 蒸汽比热大, 穿透力强, 易使蛋白质变性 凝固, 灭菌效率高 包括 : 热压灭菌法 流通蒸气灭菌法 煮沸灭菌法

8 热压灭菌法 利用高压饱和蒸气 过热水喷淋等手段杀灭微生物的方法 特点 : 具有很强灭菌效果, 能杀灭所有细菌繁殖体和芽胞, 在制剂生产中应用最广 适用于 : 凡能耐高压蒸气的药物制剂 ( 输液 ) 玻璃容器 金属容器 瓷器 橡胶塞 膜滤器等 灭菌条件 : 温度 ( 0 C) 表压力 (kpa) 时间 (min)

9 热压灭菌的基本程序 装瓶 排除空气 进蒸汽升温 灭菌 排汽 冷却 卸瓶注意事项 : 使用饱和蒸气 将灭菌器内空气排出 灭菌时间从全部药液温度达到要求温度开始计时 灭菌结束后操作 停止加热压力降为 0 后方可放出蒸气 略开柜门 10~15min 后全部打开

10 流通蒸气灭菌法 在常压下 100 流通蒸气加热杀灭微生物的方法 灭菌时间 :30 ~ 60min 特点 : 不能保证杀死所有的耐热芽胞, 需加抑菌剂 适用 : 消毒及不耐高热的制剂 ( 如小针剂 ) 煮沸灭菌法 特点 : 灭菌效果差, 必要时加入适当的抑菌剂, 如甲酚 氯甲酚 苯酚 三氯叔丁醇 操作 : 煮沸 30 ~ 60min 适用 : 注射器 注射针的消毒

11 湿热灭菌的影响因素 微生物种类 发育阶段和数量 芽胞 > 繁殖体 > 衰老体 蒸气性质 : 饱和蒸气含热高 穿透强 药物性质和灭菌时间 兼顾药物的稳定性和灭菌的完全性 介质性质 营养物质 ( 糖类 蛋白质等 ) 能增强细菌抗热性 ph 值耐热性中性 > 碱性 > 酸性 灭菌物品的体积和排布

12 1. 紫外线灭菌法 射线灭菌法 波长 : 200~300 nm, 最强灭菌力的波长为 254 nm 适于 : 无菌室空气灭菌及设备 桌面等物体表面的灭菌 不用于药品的灭菌 操作前开启紫外灯 1~2 h, 操作时关闭, 防止对人的灼伤

13 2. 辐射灭菌法 射线灭菌法 操作 : 60 Co 或 137 Cs 的 γ 射线 ( 剂量 Gy) 特点 : 穿透力强, 不升高灭菌物品温度设备费用高, 安全防护问题 适用 : 医疗器械 容器 生产辅助用品 不受辐射破坏的原料药及成品等

14 过滤除菌法 适于 : 不能加热灭菌的药液, 如胰岛素注射液 滤器滤孔应 < 芽胞 (0.5 m) 微孔滤膜, 孔径 0.22 m; 特点 : 机械除菌, 需和无菌操作相配合

15 定义 化学灭菌法 用化学杀菌剂直接作用于微生物而将其杀死的方法 不能杀死芽胞, 仅对繁殖体有效 目的 减少微生物数目, 以控制一定的无菌状态

16 气体灭菌法 化学灭菌法 环氧乙烷 甲醛 气态过氧化氢 臭氧 适用 : 医用敷料 器械 环境 不耐热物品 药液灭菌法 75% 乙醇 1% 聚维酮碘 0.1~0.2% 新洁而灭 酚或煤酚皂溶液

17 无菌操作法 是在无菌控制条件下制备无菌制剂的操作方法 应用 不耐热药物制成的注射剂 眼用溶液 眼用软膏 皮试液 海绵剂 创伤制剂等的制备 要求 无菌操作的一切用具 材料 环境均需用适当 方法灭菌

18 无菌操作室的灭菌 空气灭菌 甲醛溶液加热熏蒸 通氨中和 臭氧发生器 紫外线灭菌 室内空间 用具 采用化学杀菌剂如煤酚皂 苯扎溴铵 75% 乙醇溶液等喷洒或擦拭

19 灭菌参数 灭菌过程和无菌检查中存在的问题 现行无菌检查方法, 难以检出检品中存在的微量微生物 D 值 : 微生物的耐热参数 Z 值 : 温度对灭菌速率的影响 F 和 F 0 值 : 等效灭菌时间 验证灭菌可靠性的参数

20 D 值和 Z 值 D 值 : 在一定温度下将微生物杀灭 90% 所需时间 即 N t =10%N 0 D (lg N lg 0.1N k 0 0 ) k Z 值 :lgd 值降低 1 所须升高的温度数 即灭菌时 间减少到原来 1/10 所需升高的温度 Z 为正值, 单位 为度 Z lg T D 2 1 T1 lg D 2

21 Z lg T D 1 2 T2 lg D 1 D 2 D1 10 T1 T2 Z 举例 : 设 Z=10,T 1 =110,T 2 =121, 则 D 2 =0.079D 1, 即 110 灭菌 1 min 与 121 灭菌 0.079min, 灭菌效果相同 D D 1 T1 T2 Z 2 10

22 若设定一个参比温度 F 值与 F 0 值 则可将不同温度下, 经一定时间所得的灭菌效果都统一在相当于参比温度下灭菌了多少时间 T 1 F 值 Z F t 10 t: 测量被灭菌物温度的时间间隔, 一般为 0.5~1min;T: 每个 t 测得的被灭菌物的温度 ;T 0 : 参比温度 F 值为即一定灭菌温度 (T) 下 给定 Z 值所产生的灭 菌效果与在参比温度 (T 0 ) 下 给定 Z 值所产生的灭菌 效果一致时所相当的灭菌时间, 以 min 为单位 F 值常用于干热灭菌 T0

23 2 F 0 值 湿热灭菌时, 参比温度为 121, 以嗜热脂肪芽胞杆菌作为微生物指示菌, 该菌在 121 时,Z 值为 10, 则 : F 0 t 10 T 即一定灭菌温度下 Z 为 10 所产生的灭菌效果 与 121 Z 为 10 所产生的灭菌效果一致时所相当 的时间 此为物理 F 0,F 0 仅限于热压灭菌

24 F 0 计算实例 temperature( ) time(min)

25 影响 F 0 值的因素 容器大小 形状及热穿透性等 灭菌产品溶液性质, 充填量等 容器在灭菌器内的数量及分布等 注意问题 尽量减少微生物污染 一般规定 F 0 值为 8 min 通常增加 50%, 保证灭菌完全 (12 min)

26 哈尔滨因静点克林霉素死亡女童 欣弗事件 注射欣弗死亡 11 人, 不良反应 93 例

27 1 直接接种法 2 薄膜过滤法 无菌检查法 - 该方法可滤过较大量的样品, 检测灵敏度高, 操作简便, 结果较 直接接种法 可靠

28 洁净室与空气净化技术 注射剂车间

29

30 洁净室的净化标准 洁净室的净化标准分为 静态 和 动态 标准我国 药品生产质量管理规范 : 洁净度级别 尘粒最大允许数 /m 3 微生物最大允许数 0.5 m 5 m 浮游菌 (cfu/m 3 ) 沉降菌 90mm (cfu/4h) 静态动态静态动态静态动态静态动态 A <1 <1 B C D A, B 约相当于 100 级,C 约相当于 1 万级,D 约相当 10 万级

31 洁净室的设计 各级洁净区域的连接必须符合生产工艺的衔接, 并明确人流 物流和空气流的流向 按洁净室等级由低到高依次排列, 保持正压 (>5Pa) 各级洁净室之间需设置缓冲间 气闸室或传递窗 光照度应 >300lx; 紫外灯安装在工作区上方或入口

32 人员 : 主要污染源 如何控制洁净度 咳嗽 / 次, 散发约 70 万尘粒 喷嚏 / 次, 散发约 140 万尘粒 交谈 / 分钟,1.5 万 ~2 万尘粒 头和皮肤上有几万到几百万微生物 指甲污垢中有几千万个到几十亿个微生物 未洗的手 漂洗的手 ( 只用清水 ) 洗净的手 ( 用皂液 ) 洗净的手 ( 用消毒液 )

33 录像 \LU1302.MPG 人流走向 录像 \LU204.MPG

34 如何控制洁净度 物料 : 进入前均需洁净处理 流动物件一次性通过 内部结构 : 定期清洁和消毒

35 空气净化技术 空气净化系指以创造洁净空气为目的的空气调节措施 - 工业净化 : 除去空气中悬浮的尘埃粒子 - 生物净化 : 除去空气中悬浮的尘埃和微生物

36 空气净化系统的设计 空气净化一般采用空气过滤法

37 洁净室的气流形式 乱流 (turbulent flow): 空气流线不规则,C 级 ~D 级层流 (laminar flow): 空气流线呈平行,A 级

38 常用局部净化装置 层流洁净工作台

39 思考题 1. 灭菌法的种类及每种方法的特点和适用范围 2. F 和 F 0 值的定义和意义

105 化学消毒剂按其效力不同可 分为哪几类 1 灭菌剂 能杀灭一切微生物使 其达到灭菌效果 2 高效消毒剂 杀灭一切细菌繁 殖体 包括分枝杆菌 病毒 真菌及其 孢子 并对细菌芽孢有显著杀灭作用 3 中 效 消 毒 剂 杀 灭 细 菌 繁 殖 体 真菌 病毒等除细菌芽孢以外的其 他微生物 4 低效消毒剂 只能杀灭细菌繁 殖体 亲脂病毒和某些真菌 106 化学消毒剂的适用原则是什 么 1 坚持合理使用的原则

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