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1 第九章质谱分析 Mass Spectrometry MS Agilent7500 系列 ICP-MS

2 教学目标 1.. 较好地掌握质谱分析法的基本原理 2.. 掌握掌握仪的基本结构 工作流程及性能指标 3.. 在较深入掌握单 双聚焦质量分析器的基础上, 比 较其它质量分析器的基本原理及特点 4.. 一般了解质谱联用技术 5.. 在较深入掌握电子轰击基础上, 比较其它电离源的 基本原理及特点 6.. 较好理解各种离子的碎裂途径及特点 7.. 掌握简单图谱的解析, 进行较简单化合物分子量 分子式及结构式的分析

3 9.1 质谱法概述 质谱法是通过对样品的分子电离后所产生离子的质荷比 m/e 及其强度的测量来进行成分的结构分析的一种仪器分析方法 首先, 被分析样品的气态分子, 在高真空中受到高速电子流或其它能量形式的作用, 失去外层电子生成分子离子, 或进一步发生化学键的断裂或重排, 生成多种碎片离子 然后, 将各种离子导入质量分析器, 利用离子在电场或磁场中的运动性质, 使多种离子按不同质荷比 m/e 的大小次序分开, 并对多种的离子流进行控制 记录, 得到质谱图 最后, 得到谱图中的各种离子及其强度实现对样品成分及结构的分析 1912 年 Thmson J J 研制了世界上第一台质谱仪

4 1913 年 Thmson J J 报道了关于气态元素的第一个研究成果, 证明了该元素有 20 Ne 22 Ne 两种同位素 Aston 用质谱法发现同位素并将质谱法应用于质量分析而于 1922 年获得诺贝尔奖诺贝尔奖 二十世纪六十年代以后, 质谱法在有机化学和生物化学中得到广泛的应用 近几十年来, 质谱法及仪器得到极大发展, 主要表现在 : 计算机的深入应用, 各种各样联用仪器和许多新电离技术的出现等 2002 年的诺贝尔奖诺贝尔奖化学奖被授予美国科学家约翰 芬恩 (John( B. Fenn) ) 日本科学家田中耕一 (Koichi( Tanaka) 和瑞士科学家库尔特 维特里希 (Kurt( Wuthrich), 以表彰他们发明了对生物大分子进行识别

5 和结构分析的方法 前二者主要是发明了对生物大分子进行质谱分析的 软性解吸附电离法 质谱法的特点信息量大, 应用范围广, 是研究有机化学和结构的有力工具 由于分子离子峰可以提供样品分子的相对分子量的信息, 所以质谱法也是测定分子量的常用方法 分析速度快 灵敏度高 高分辨率的质谱仪可以提供分子或离子的精密测定 质谱仪器较为精密, 价格较贵, 工作环境要求较高, 给普及带来一定的限制

6 9.2 质谱仪 从用途 ( 分析对象 ) 分 无机质谱 有机质谱 同位素质谱及气体质谱等 ; 从原理结构分 有单聚焦 双聚焦质谱 飞行时间质谱 四极滤质器 迥旋共振质谱等 一. 质谱仪的基本结构

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8 1. 高真空系统质谱仪的离子产生及经过系统必须处于高真空状态 ( 离子源的高真空度应达到 ~ Pa,, 质量分析器中应达 Pa),, 一般质谱仪都采用机械泵预抽真空后, 再用高效率扩散泵连续地运行以保持真空 现代质谱仪采用分子泵可以获得更高的真空度

9 (1) 间歇式进样系统 该系统可用于气体 液体和中等蒸气压的固体样品进样

10 (2) 直接探针进样 对那些在间歇式进样系统的条件下无法变成的固体 热敏性固体及非挥发性液体试样, 可直接引入到离子源中

11 2. 电离源 电离源的功能是将进样系统引入的气态样品分子转化成离子 (1) 电子轰击源 (Elextron Bomb Ionization, EI) 热阴极发射出能量为 70eV 的高能电子束, 在高速向阳极运动时, 撞击来自进样系统的样品分子, 使样品分子发生电离 电子轰击源电离效率高, 结构简单, 操作方便, 应用广泛 但分子离子容易被进一步断裂成碎片分子, 分子离子峰变弱甚至不出现, 不利于分子量的测定

12 (2) 化学电离源 (Chemical Ionization, CI) 样品在承受电子轰击之前, 被一种 反应气 (( 常用 CH 4 也可用异丁烷 NH 3 ) 以约 10 4 倍于样品分子所稀释 首先生成的离子来自反应气分子, 它与样品分子发生离子 分子反应而产生样品分子离子

13 化学电离源所得到质谱图的特点 1 图谱简单 ;2; 准分子离子峰 (M+1( M+1) + 峰很强, 可提供样品分子的相对分子量的信息 (3) 场电离源 (Field Ionization) 利用强电场诱发样品分子的电离 正负极间施加高达 10KV 的电压差, 两极的电压梯度可达 10 7 ~10 8 V cm -1 若具有较大偶极矩或高极化率的样品分子通过两极间时, 受到极大的电压梯度的作用而发生电离

14 (4) 快原子轰击电离源 (Fast Atom Bombandment, FAB ), FAB 是二十世纪八十年代发展起来新的电离技术, 轰击样品分子的原子通常为氙或氩 首先让气体原子电离, 并通过电场加速, 然后再与热的气体原子碰撞而导致电荷和能量的转移, 获得快速运动的原子, 它们撞击涂有样品的金属极, 通过能量转移而使样品分子电离, 生成二次离子 特点 1 分子离子或准分子离子峰强 ; 2 碎片离子 ;3; 适合于热不稳定 难挥发的样品 ;4; 溶解样品的溶剂也会被电离而使图谱复杂化

15 3. 质量分析器 质量分析器的作用是将离子源中产生的离子按质荷比 m/e 的大小顺序分开, 然后经检测记录成质谱 (1) 单聚焦质量分析器

16 (2) 双聚焦质量分析器离子源中的离子有一定的能量分散, 经加速后离子的能量也仍然不同, 所以同样的离子在磁场中的运动半径也不完全一样, 因而不能完全会聚在一起, 从而降低了质谱仪的分辨率 使用双聚焦质量分析器可提高质谱仪的分辨本领 所谓双聚焦质量分析器是指分析器同时实现能量 ( 或速度 ) 聚焦和方向聚焦

17 (3)) 飞行时间分析器 (Time( Time of Flight, TOF) 这种分析器不是磁场或电场, 而是一根长 直的飞行管 离子受加速电压加速后, 按照相应的时间间隔飞行出分析器而被检测, 各离子的飞行时间差与质荷比 m/e 的平方差相关 第一步开动电离室的电子枪, 大约 10-9 S 时间, 样品电离, 形成离子束 ; 第二步随后施加加速电压, 大约 10-4 S,, 离子被加速后进入飞行管 ; 第三步关闭所有电源, 大约 ms 级, 使离子流在飞行管中无阻的 慢速飞行,, 飞出管进行检测 ; 完成了一个循环程序后, 又一次开动电子枪重新产生离子束 (4)) 四极滤质分析器 (Quadrupole Mass Fliter, QMF) QMF 是由两对四根高度平行的金属电极杆组成的,

18 其中一对电极加上直流电压 V dc, 另一对电极加上射频电压 V 0 cosωt(v 0 为射频电压的振幅,ω, 为射频振荡频率,t, 为时间 ), 即加在两个极杆之间的总电压为 (V dc +V 0 cosωt) ) 离子进入此射频场时, 只有合适 m/e 的离子才能通过稳定的振荡穿过电极间隙而进入控制器, 其它 m/e 的离子则与极杆相撞而被滤去 只要保持 V dc /V 0 值及射频频率不变, 改变 V dc 和 V 0 就可以实现对 m/e 的扫描

19 4. 离子检测器 (1) 法拉第杯 (Faraday( Cup) Faraday 杯与质谱仪的其他部分保持一定电位差以便捕获离子, 当离子经过一个或多个抑制栅极进入杯中时, 将产生电流, 经转换成电压后进行放大记录

20 Faraday 杯简单可靠, 可以检测 A 的离子流 但 Faraday 杯只适用于加速电压 <1KV< 的质谱仪, 因为更高的加速电压使产生能量较大的离子流, 这样离子流轰击入口狭缝或抑制栅极时会产生大量二次电子甚至二次离子, 从而影响信号检测 (2) 电子倍增器放大倍数一般在 10 5 ~10 8

21 二. 质谱仪的性能指标 1. 质量测量范围气体质谱仪的质量测量范围一般较小, 为 2 100,, 有机质谱仪一般可达几千, 而现代质谱仪可测量达几万到几十万质量单位的生物大分子样品 2. 分辨本领 ( 也叫分辨率 ) 对两个相等强度的相邻峰, 当两峰间的峰谷不大于其峰高 10% 时, 则认为两峰已经分开, 其分辨率

22 也可任选一单峰, 测其峰高 5% 处的峰宽, 即可当作上式中的, 此时分辨率为 : 例 1 要鉴别 N + 2 (m/z 为 ) 和 CO + (m/z 为 ) 两个峰, 仪器的分辨率至少是多少? 在某质谱仪上测得一质谱峰中心位置为 245u, 峰高 5% 处的峰宽为 0.52u,, 可否满足上述要求? 解 : 要分辨 N + 2 和 CO +, 要求质谱仪分辨率至少为 : 质谱仪的分辨率 : 故不能满足要求

23 3. 灵敏度质谱仪的灵敏度有绝对灵敏度 相对灵敏度和分析灵敏度等几种表示方法 绝对灵敏度是指仪器可以检测到的最小样品量 ; 相对灵敏度是指仪器可以同时检测的大组分与小组分含量之比 ; 分析灵敏度则是指输入仪器的样品量与仪器输出的信号之比 三. 质谱联用技术 1. 色谱 质谱联用气相色谱 质谱联用技术 (GC MS 联用 ) 已成为最常用的一种联用技术 GC 是在常压下工作, 而 MS 是在高真空下工作, 因此, 必须有一个连接装置, 将色谱柱流出的载气除去, 使压强降低, 样品分子进入离子室 这个连接装置叫做分子分离器 目前一般使用喷射式分子分离器

24 经分子分离器后,50%, 50% 以上的组分分子被浓缩并进入离子源中而压力也降至约 Pa 如果是毛细管色谱, 由于毛细管柱的流量极小, 可以不必经过分子分离器而直接进入离子源

25 液相色谱 质谱联用 (LC MS 联用 ) ) 可用于热稳定性差 不易汽化的样品, 如何有效地除去流动相而不损失样品, 是 LC MS 联用地难题之一 传送带式的接口装置 依靠不锈钢式传送带将 LC 柱的流出样送入离子源, 在传送过程中, 溶剂被加热 ( 可用红外线加热 ) 汽化并由真空泵抽去, 组分进入离子源 这种方法适于非极性流相液溶剂地除去

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