2245 DNAfragmentsastemplates.ThebindingratesofGATA-1of5primersinHCMVlatentinfectiongroupwere-4.00± 0 26,-4.50±0.33,-4.41±0.21,-3.61±0.20and-3.47±0.11,
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1 2244 中国病理生理杂志 ChineseJournalofPathophysiology 2012,28(12): [ 文章编号 ] (2012) 转录因子 GATA-1 与人巨细胞病毒 UL111A 基因 5 上游序列结合的实验研究 田可港 1,2#, 浮苗 1, 高艳 1, 彭颖 2, 李祥 2, 郑晓群 1, 徐志伟 1, 宋建华 3 2, 吕建新 ( 1 温州医学院附属第二医院实验诊断中心, 浙江温州 ; 2 温州医学院浙江省医学遗传学重点实验室, 浙江温州 ; 3 俄克拉荷马医学研究中心, 美国俄克拉荷马 73104) [ 摘要 ] 目的 : 利用人巨细胞病毒 (humancytomegalovirus,hcmv) 潜伏及再激活感染 THP-1 细胞模型, 研究细胞核内转录因子 GATA-1 与 HCMVUL111A 基因 5 上游 DNA 序列的相互作用 方法 : 采用免疫印迹 (West ernbloting) 技术定量分析 HCMV 潜伏及再激活感染时细胞核内转录因子 GATA-1 的表达 ; 通过 MATCH 工具软件分析 UL111A 基因 5 上游 DNA 序列, 发现存在着 11 个 GATA-1 的结合位点, 针对这 11 个 GATA-1 结合位点 DNA 序列设计 9 对引物, 采用染色质免疫沉淀 (chromatinimmunoprecipitation,chip) 及实时荧光定量 PCR 技术分析转录因子 GATA-1 与 UL111A 基因 5 上游 DNA 序列的结合情况 结果 :HCMV 潜伏感染时 UL111A 基因未表达 cmvil-10, 激活感染时表达 cmvil-10, 潜伏感染时转录因子 GATA-1 的相对表达量高于激活感染 ; 以 GATA -1 抗体特异性结合的 DNA 片段为模板,9 对引物中共有 5 对扩增出目的条带 ;HCMV 潜伏感染组和激活感染组 5 个位点转录因子 GATA-1 结合率分别为 :-4 00± ± ± ± ± 0 11 和 -1 13± ± ± ±0 03 和 -0 14±0 01, 差异均有统计学意义 (P< 0 05) 结论:HCMV 感染时转录因子 GATA-1 可能通过与 UL111A 基因 5 上游序列 1119(-3760) 位点 107 (-4772) 位点 609(-4270) 位点 849(-4030) 位点和 2047(-2832) 位点结合, 调节 UL111A 基因的转录, 参与 HCMV 潜伏与再激活感染的过程 [ 关键词 ] 转录因子 GATA-1;HCMV 潜伏感染 ;UL111A [ 中图分类号 ] R373.9 [ 文献标志码 ] A doi: /j.isn BindingoftranscriptionfactorGATA-1to5 upstream sequenceofhu mancytomegalovirusul111agene TIANKe-gang 1,2,FU Miao 1,GAO Yan 1,PENG Ying 2,LIXiang 2,ZHENG Xiao- qun 1,XUZhi-wei 1,SONGJian-hua 3,L Jian-xin 2 ( 1 LaboratoryDiagnosisCenter,theSecondAfiliatedHospitalofWenzhouMedicalColege,Wenzhou325027,China; 2 ZhejiangProvincialKeyLaboratoryofMedicalGenetics,WenzhouMedicalColege,Wenzhou325035,China; 3 Oklahoma MedicalResearchFoundation,Oklahoma73104,USA. zhengxiaoqun@gmail.com) [ABSTRACT] AIM:ToinvestigatetheinteractionsbetweentranscriptionfactorGATA-1and5 upstreamdna sequenceofhumancytomegalovirus(hcmv)ul111ageneusingestablishedhcmvlatentandreactivatedinfectionmod els.methods:theexpresionoftranscriptionfactorgata-1intheprocesofhcmvlatentandreactivatedinfections wasdeterminedbywesternbloting.sequenceanalysisrevealedthepresenceof11consensusgata-1bindingsiteson the5 upstreamdnasequenceoful111ageneusingmatchtoolsoftware.moreover,9pairsofprimersweredesignedfor thecorednasequenceofthe11bindingsites.thebindingsofgata-1with5 upstreamdnasequenceoful111agene inhcmvlatentandreactivatedinfectionswereasesedbyreal-timefluorescencequantitativepcrandchromatinimmu noprecipitation(chip).results:ul111agenedidnotexprescmvil-10inlatentinfectionbutdidinreactivatedin fection.therelativeexpresionoftranscriptionfactorgata-1wasmoreinhcmvlatentinfectionthanthatinreactivated infection.fivepairsofprimerswereusedtoamplifythetargetbandwhenusingthegata-1antibody-specificbinding [ 收稿日期 ] [ 修回日期 ] [ 基金项目 ] 国家自然科学基金资助项目 (No ); 温州市对外合作交流科技计划资助项目 (No.H ) 通迅作者 Tel: ; zhengxiaoqun@gmail.com # 现工作单位 : 宁波市鄞州人民医院
2 2245 DNAfragmentsastemplates.ThebindingratesofGATA-1of5primersinHCMVlatentinfectiongroupwere-4.00± 0 26,-4.50±0.33,-4.41±0.21,-3.61±0.20and-3.47±0.11,whilethatinreactivatedinfectiongroupwere -1.13±0.07,-0.63±0.05, -1.10±0.07, -0.24±0.03and -0.14±0.01(P<0.05).CONCLUSION: TranscriptionfactorGATA-1mediatestheUL111AtranscriptionwhichisinvolvedinHCMVlatentandreactivatedinfec tionsbybindingthehcmvul111agene5 upstreamsequence107(-4772)site,609(-4270)site,849(-4030) site,1119(-3760)siteand2047(-2832)siteduringreactivatedinfection. [KEYWORDS] TranscriptionfactorGATA-1;HCMVlatentinfection;UL111A 人巨细胞病毒 (humancytomegalovirus,hcmv) 是疱疹病毒科属的 DNA 病毒, 具有严格的种属特异性 1960 年,Weler 等鉴于病毒感染细胞后所呈现细胞明显增大的特征及该病毒在巨细胞包涵体病中的作用, 将该病毒命名为巨细胞病毒 1973 年, 国际病毒命名委员会 (ICNV) 疱疹病毒组将此病毒正式命名为人类疱疹病毒 5 型 (humanherpesvirus5, HHV-5) 在免疫正常个体,HCMV 的初发感染常无症状, 当宿主免疫功能不全或免疫功能减弱时, HCMV 的原发感染或潜伏再激活感染会引起严重的乃至威胁生命的疾病 [1-2] cmvil-10 是 HCMV UL111A 基因编码的由 175 个氨基酸组成的蛋白质, 功能与人 IL-10(hIL-10) 类似 既往研究表明, HCMV 潜伏感染时,UL111A 基因不表达 cmvil-10, 激活感染时表达 cmvil-10 [3-6] 因此我们推测, cmvil-10 可能参与 HCMV 潜伏及再激活感染的过程 人转录因子 GATA-1 由 413 个氨基酸组成, 含 2 个锌指结构, 即 C- 锌指和 N- 锌指, 可通过与基因启动子中的 (A/T)GATA(A/G) 模序结合激活基因转录 本研究通过染色质免疫沉淀 (chromatinimmu noprecipitation,chip) 方法研究转录因子 GATA-1 与 UL111A 基因 5 上游 DNA 序列的相互作用, 探讨二者在 HCMV 潜伏及再激活感染中可能发挥的作用 1 主要材料 材料和方法 HCMVAD169 株购自中国典型培养物保藏中心, 人白血病单核细胞 (THP-1 细胞 ) 购于中科院上海细胞库,GATA-1 兔抗人抗体购于 Abcam,TaKa Ra 公司合成 PCR 引物,ChIP 试剂盒购自 Upstate, 细胞核蛋白提取试剂盒购自碧云天生物技术研究所 2 HCMV 潜伏感染和激活感染细胞模型建立及分组 2.1 细胞感染模型建立 THP-1 细胞于 Gibco 常规 RPMI-1640 培养液,10% 特级胎牛血清, U/L 青霉素,100mg/L 链霉素, 置于 37 5%CO 2 培养箱中培养 HCMVAD169 株以感染复数 (multi plicityofinfection,moi)=1 感染 THP-1 细胞 ( /L) 100μg/L12- 肉豆 酸 -13- 乙酸佛波酯 (phorbol12-myristate13-acetate,pma) 刺激 HC MV 潜伏感染的 THP-1 细胞, 细胞置于 37 5% CO 2 饱和湿度培养箱中培养 12h 24h 48h 72h 和 96h 后, 分别提取细胞总 RNA,RT-PCR 检测 HC MVUL123 基因和 UL82 基因的表达 UL123 基因表达调节蛋白 IE, 设计上游引物序列为 5 -CAAGAG AAAGATGGACCCTG-3, 下游引物序列为 5 - CGAGTTCTGCCAGGACATC-3, 目的扩增片段为 242bp;UL82 基因表达被膜蛋白 pp65, 设计上游引物序列为 5 -TGCCCTGGATGCGATACTG-3, 下游序列引物为 5 -AGGACCTGACGATGACCCG-3, 目的扩增片段为 378bp, 委托上海捷瑞生物工程有限公司合成 PCR 扩增条件 :94 预变性 5min,94 30s,55 30s,72 30s,35 个循环后 min, 扩增产物用 1 5% 的琼脂糖凝胶进行电泳 同时, 实时荧光定量 PCR 检测细胞内 HCMVDNA 载量, 透射电镜观察 THP-1 细胞内病毒颗粒 根据上述指标, 综合判断病毒感染状态 2.2 实验分组 HCMVAD169 株以 MOI=1 感染 THP-1 细胞 ( /L),37 5%CO 2 培养箱中培养 96h 后作为潜伏感染组 ;100μg/LPMA 刺激 HCMV 潜伏感染的 THP-1 细胞,37 5%CO 2 培养箱中培养 96h 后作为激活感染组 ; 对照组加入相同量的 DMEM 培养液,37 5%CO 2 培养箱中培养 96h 3 RT-PCR 分析 HCMV 潜伏及再激活感染时 cmvil-10 的表达 Trizol 法提取 HCMV 潜伏及再激活感染 96h 后细胞总 RNA, 并逆转录为 cdna 应用 PrimerPremi er5 0 软件设计 cmvil-10 及内参照 GAPDH 的 PCR 引物,cmvIL-10 上游引物 5 -GGGGAAT TCATGCTGTCGGTGATGGTCT-3, 下游引物 5 - ACATTGCCGCATGTCTTTG-3, 目的扩增片段为 381 bp;gapdh 上游引物 5 -GAGTCAACGGATTTG GTCGT-3, 下游引物 5 -GAGTCAACGGATTTG GTCGT-3, 目的扩增片段为 185bp PCR 扩增条件 :94 预变性 5min,94 30s,56 30s,72 30s,35 个循环后 72 10min, 扩增产物用 1.5% 的琼脂糖凝胶进行电泳
3 Westernbloting 检测转录因子 GATA-1 的表达 利用细胞核蛋白提取试剂盒提取对照组,HCMV 潜伏感染组和激活感染组核蛋白, 然后进行 Western bloting 检测, 利用 ImageJ 软件分析条带的灰度值, 目的条带与内参照条带灰度值的比值表示 GATA-1 的相对表达量 5 HCMVUL111A5 上游序列 GATA-1 结合部位的生物信息学预测分析 应用 TRANSFAC 数据库中的 MATCH 工具对 HCMVUL111A5 上游序列转录因子 GATA-1 结合位点进行预测, 采用 TRANSFACProfesional9.4 库中的单核苷酸加权模型集对每个位点进行打分, 通过每个位点所得分数 (0~1) 来确定转录因子结合情况, 从中选出转录因子 GATA-1 对应的结合位点, 见表 1, 并设计合成相应的 ChIP-PCR 引物, 见表 2 GATA-1 结合序列预测分析和引物设计时选用 HCMVAD169 株全基因序列 RefSeqFJ , HCMVUL111A5 上游序列碱基起止位为 ~ ChIP-PCR 试验 采用 Upstate 公司的 ChIP 试剂盒处理 HCMV 潜伏与激活感染组细胞, 操作步骤如下 : 加入 37% 甲醛体外交联和裂解细胞 DNA, 超声处理 ( 功率 500W, 超声 7s, 停 10s, 重复 3 次 )DNA, 使交联的 DNA/ 蛋白质共沉淀, 洗脱 DNA/ 蛋白质复合物, 解交联, 纯化 DNA 在交联的 DNA/ 蛋白质共沉淀过程中, 分为 input 和 IP 组,input 组不加入 GATA-1 抗体,IP 组加入 GATA-1 抗体 严格按照 ChIP 试剂盒说明书操作 表 1 转录因子 GATA-1 结合位点的预测结果 Table1. Thepredictedresultsofbindingsitesoftranscription factorgata-1 Startinglocation Score Sequenceofbindingsite CTATAGATAGCGGC GAGGATGCCT AAGACGATTAACAA CTATCGATAGGCGT AGGCCTATCTTCGT TATTATCTCT ATCACTATCTATGT GTTTTAATCTACCG ATTATGATACGGTC GGGTAGATTATTAT TTTTATCTAT TATTATCTGT CTGTTGATTAGGAG 表 2 GATA-1 的预测结合位点设计的引物 Table2. Theprimersbasedonthepredictedbindingsitesof transcriptionfactorgata-1 Primer Sequence(5-3 ) Product Predictablesite GATA-12F CCGAGCAGAAAGTGATGTGG 202bp 1119 GATA-12R TATCGATAGGTTTCAATTGTGTCT GATA-21F AACGTGACTTTATTGAGCAGG 208bp 107 GATA-21R AAGACGCTGACCCGATAAGTA GATA-22F CTGATCCTATCCGTGACTGCG 250bp 609 GATA-22R CCAAGCCTAGCTGCTCATTCG GATA-23F GTCATTACTTGTTTTCCAGGG 245bp 849 GATA-23R ACCACATCACTTTCTGCTCGG GATA-24F CGAGGTCTTGCTTCGTTTTCTT 246bp 1490,1572 GATA-24R TCTCGTCAGGGAAATACAAG GATA-25F ACCCTTTTAGGTATTTTGCG 184bp 1868 GATA-25R GTTGGGAGGTAGCTTCGTC GATA-26F CCCGCTAAGGACTTACCAAACT 198bp 2047 GATA-26R CTCTTCGCTGTCAACTGATTAG GATA-27F GGACGAAGGAGAAGATGATGGG 194bp 3243 GATA-27R CACAGGCTGACCTTTGAAAACC GATA-28F TCTCCCAATGGCTAGGCGTTCT 221bp 3706,3712 GATA-28R ACCTCACTTAGGATCGATTTCG 将各组得到的 DNA 产物分别加入上述引物进行 PCR 扩增, 反应体系如下 :10 ExTaqbufer2.5 μl,2.5mmol/ldntp2.5μl,25mmol/lmgcl 2 2μL,20μmol/L 上 下游引物各 0.5μL,DNA2μL, 5U/μLTaq 酶 0.125μL, 加 ddh 2 O 至 25μL 反应条件如下 :94 预变性 5min, 继而 94 30s,52 30s,72 30s,35 个循环后 72 10min, 扩增产物用 1.5% 的琼脂糖凝胶进行电泳 实时荧光定量 PCR 反应体系如下 :SYBRPremixExTaq TM (2 )10 μl,20μmol/l 上 下游引物 0.4μL,DNA2μL, ROXReferenceDye0.2μL, 加 ddh 2 O 至 20μL 反应条件 :94 预变性 5min, 继而 94 30s,52 30s,72 30s,35 个循环后 72 10min,AB7500 荧光定量 PCR 仪检测 以 -ΔCt 值来表示 HCMV 潜伏与激活感染时转录因子 GATA-1 与 UL111A5 上游各位点的结合率,ΔCt 为 IP 组与 input 组的 Ct 差值 (Ct IP -Ct input ) 7 统计学处理 数据采用 SPSS18.0 统计学软件进行分析, 计量资料以均数 ± 标准差 ( x±s) 珋表示, 两组间均数比较采用两样本 t 检验, 多组数据采用方差分析, 以 P< 0.05 为差异有统计学意义
4 2247 结 果 1 HCMV 潜伏及再激活感染细胞模型的建立 1.1 HCMV 潜伏感染细胞模型的建立 HCMV AD169 株感染 THP-1 细胞 96h 后, 透射电镜观察发现细胞内有病毒颗粒, 见图 1 HCMVUL123 基因 PCR 扩增片段为 242bp, 表达量随着时间的增加逐渐减少 ; 未检测到 HCMVUL82 基因的表达, 见图 2 Figure4. TheexpresionofHCMV UL123andUL82genesin HCMV-reactivatedly-infectedcels.M:100 bp DNAladdermarker. 图 4 HCMV 再激活感染 THP-1 细胞 及 12h 后 UL123 和 UL82 基因表达 2 HCMV 潜伏与再激活感染时 UL111A 的表达 HCMV 潜伏感染时,RT-PCR 未扩增出 UL111A 基因表达的 cmvil-10, 再激活感染时表达 cmvil- 10, 扩增片段为 381bp, 见图 5 Figure1. ElectronmicrographsofHCMV-infectedTHP-1 cels( 50000).Thearowsindicatetheviralparti cles. 图 1 HCMV 感染 THP-1 细胞电镜图 Figure2. TheexpresionofHCMV UL82andUL123genesin HCMV-infectedTHP-1cels.M:DL2000marker. 图 2 HCMV 感染 THP-1 细胞 及 12h 后 UL123 和 UL82 基因的表达 1.2 HCMV 再激活感染细胞模型的建立 PMA 刺激 HCMV 潜伏感染细胞 96h 后, 悬浮生长的 THP- 1 细胞转为贴壁生长, 电镜观察细胞内出现较多病毒颗粒, 见图 3 HCMVUL123 基因表达量先随着时间的增加而增加, 后逐渐减少,UL82 基因 PCR 扩增片段为 378bp,96h 时检测到表达, 见图 4 Figure3.ElectronmicrographofanHCMV-latently-infected celstimulatedbypma( 30000).Thearowsindi catetheviralparticles. 图 3 PMA 刺激 HCMV 潜伏感染细胞电镜图 Figure5.RT-PCR amplificationresultsofcmvil-10.1,3: HCMV reactivatedandlatentinfection,respectively; 2,4:GAPDH;M:100bpDNAladdermarker 图 5 cmvil-10mrnart-pcr 扩增结果 3 Westernbloting 分析 HCMV 潜伏及再激活感染时转录因子 GATA-1 的表达 HCMV 潜伏及再激活感染后, 分别提取感染的细胞核内蛋白进行 Westernbloting 检测,HCMV 潜伏与激活感染后均检测到转录因子 GATA-1 表达, 见图 6 同时,HCMV 潜伏感染组转录因子 GATA- 1 的相对表达量 (1.13±0.08) 高于激活感染组 (0 51±0 11), 差异有统计学意义 (P<0.05) 4 HCMV 潜伏及再激活感染时 ChIP 结果分析以 input 组和 IP 组 DNA 为模板, 用预测的结合位点所设计的 9 对引物进行 PCR 扩增, 结果显示 5 对引物 (GATA-12 引物 GATA-21 引物 GATA- 22 引物 GATA-23 引物和 GATA-26 引物 ) 均扩增出目的条带, 扩增片段分别为 202bp 208bp 250 bp 245bp 和 198bp, 见图 7 8, 其对应的转录因子 GATA-1 结合位点分别是 1119(-3760) 位点 107 (-4772) 位点 609(-4270) 位点 849(-4030) 位点和 2047(-2832) 位点, 见图 9 前面位点为分析获得, 括号内位点为根据规定算得
5 2248 用上述 5 对引物进行荧光定量 PCR, 结果显示 HCMV 再激活感染组转录因子 GATA-1 与 UL111A 基因 5 端上游序列 5 个位点的结合率 (-1.13± ± ± ±0.03 和 -0.14±0.01) 均高于潜伏感染组 (-4.00± ± ± ±0.20 和 -3.47±0.11) 经两样本 t 检验,5 个结合位点转录因子 GATA-1 的结合率差异均有统计学意义 (P<0.05), 见图 10 Figure6.TheexpresionoftranscriptionfactorGATA-1inHC MVlatentandreactivatedinfection.1:controlgroup; 2:HCMVlatentinfectiongroup;3:HCMVreactivated infectiongroup. x±s.n=3. 珋 P<0.05vsHCMVla tentinfectiongroup. 图 6 Westernbloting 分析 HCMV 潜伏及再激活感染时转录因子 GATA-1 表达 讨论目前认为, 单核细胞和髓系早期细胞是 HCMV 潜伏感染的主要细胞, 一旦分化为巨噬细胞或树突状细胞, 病毒的早期基因表达就会被激活,HCMV 可由潜伏感染向再激活转化 [7-10] 然而,HCMV 病毒由潜伏状态向再激活转化的机制还缺乏更深入的研 Figure7.PCRproductelectrophoresisofHCMVlatentinfectionafterChIP.AandBwasinputgroupandantibodytreatmentgroup,re spectively.1:negativecontrolgroup;2~6:amplifiedproductsof1119(-3760)site,107(-4772)site,609(-4270)site, 849(-4030)siteand2047(-2832)site,respectively;M:100bpDNAladdermarker. 图 7 HCMV 潜伏感染时 ChIP 处理后 PCR 产物电泳图 Figure8.PCRproductelectrophoresisofHCMVreactivatedinfectionafterChIP.AandBwasinputgroupandantibodytreatment group,respectively.1:negativecontrolgroup;2~6:amplifiedproductsof1119(-3760)site,107(-4772)site,609(- 4270)site,849(-4030)siteand2047(-2832)site,respectively;M:100bpDNAladdermarker. 图 8 HCMV 激活感染时 ChIP 处理后 PCR 产物电泳图 Figure9.ThebindingsitesoftranscriptionfactorGATA-1on5 upstreamdnasequenceoful111agene. 图 9 HCMVUL111A 基因 5 端上游核酸序列转录因子 GATA-1 的结合位点
6 2249 Figure10.ComparisonoftranscriptionfactorGATA-1binding ratesinlatentandreactivatedinfection.1~5:1119 (-3760)site,107(-4772)site,609(-4270)site, 849(-4030)siteand2047(-2832)site,respective ly. x±s.n=3. 珋 P<0.05vsHCMVlatentinfection. 图 10 HCMV 潜伏及再激活感染时转录因子 GATA-1 结合率的比较 究 HCMV 具有高度种属特异性, 不能用动物模型对其直接进行研究 ; 在健康携带者的外周血和骨髓细胞中, 被潜伏感染的细胞所占的比例很少, 仅为 % ~0.010%, 且在每个被潜伏感染的细胞中约含有 2~13 个病毒基因组 DNA, 难以满足当前研究的需求 虽然有很多针对 CMV 的模型, 由于 HCMV 具有高度的种属特异性, 针对 CMV 的模型不能用于 HCMV 的研究 因此, 我们参考国内外的研究建立了 HCMV 潜伏及再激活感染的 THP-1 细胞模型 HCMV 潜伏感染时,UL111A 基因不表达 cmvil -10, 激活感染时表达 cmvil-10 我们对 UL111A 5 端上游约 5.0kb 的序列进行了生物信息学分析, 发现其中交错分布着转录因子 GATA-1 的结合位点, 由此推测转录因子 GATA-1 可能参与了 HCMV 潜伏及再激活感染过程 本研究中, 我们证实了 HCMV 潜伏感染时,UL111A 基因不表达 cmvil-10, 激活感染时表达 同时,Westernbloting 分析结果表明 HCMV 潜伏感染时转录因子 GATA-1 的表达量高于再激活感染时, 这可能与 GATA-1 抑制单核细胞的分化有关 [11] 染色质免疫沉淀是体内研究蛋白质与 DNA 相互作用强有力的方法, 此方法不需要分别提取核酸或蛋白, 在天然的染色质环境下进行, 基本保持了二者在细胞内的真实结合状态 本实验中, 通过 GATA-1 抗体, 特异性将超声打断的 DNA-GATA -1 复合物小片段免疫沉淀, 并纯化解交联, 获得 GATA-1 结合的 DNA 片段, 对纯化获得的 DNA 片段进行 PCR 扩增鉴定 结果表明, 转录因子 GATA -1 可与 UL111A5 端上游序列 107(-4772) 位点 609(-4270) 位点 849(-4030) 位点 1119 (-3760) 位点和 2047(-2832) 位点共 5 个位点结合, 且激活感染时转录因子 GATA-1 的结合率高于 潜伏感染 我们推测 HCMV 激活感染后转录因子 GATA-1 可能通过与 UL111A 基因 5 上游序列结合位点的结合, 启动 cmvil-10 的转录, 参与 HCMV 再激活感染的过程 本文研究结果仅是初步的探索性结果, 应做进一步的验证性研究, 如用报告基因技术等 更深入地研究 GATA-1 如何与 UL111A 基因 5 上游序列潜在结合位点作用, 不同位点的缺失是否影响 GATA-1 的调控功能, 哪个位点是 GATA-1 的关键结合区域, 是否存在其它的核转录因子或共调控蛋白作用这些区域? 相信随着这些问题的逐步阐明, 将有利于更全面地理解在转录水平 HCMV 潜伏及再激活感染的调控机制 [ 参考文献 ] [1] RawlinsonW,ScotG.Cytomegalovirus:acommonvirus causingseriousdisease[j].austfam Physician,2003, 32(10): [2] 季育华. 移植领域中人巨细胞病毒感染的关注点与对策 [J]. 中华器官移植杂志,2008,29(3): [3] JenkinsC,GarciaW,AbendrothA,etal.Expresionof ahumancytomegaloviruslatency-asociatedhomologof interleukin-10duringtheproductivephaseofinfection [J].Virology,2008,370(2): [4] ChangWL,BaumgarthN,YuD,etal.Humancytomega lovirus-encodedinterleukin-10homologinhibitsmatura tionofdendriticcelsandalterstheirfunctionality[j].j Virol,2004,78(16): [5] JenkinsC,GarcialW,GodwinMJ,etal.Immunomodula torypropertiesofaviralhomologofhumaninterleukin-10 expresedbyhumancytomegalovirusduringthelatentphase ofinfection[j].jvirol,2008,82(7): [6] SpencerJV,CadaoasJ,CastiloPR,etal.Stimulationof BlymphocytesbycmvIL-10butnotLAcmvIL-10[J]. Virology,2008,374(1): [7] SinclairJ,SisonsP.Latencyandreactivationofhumancyto megalovirus[j].jgenvirol,2006,87(pt7): [8] IoudinkovaE,ArcangeletiMC,RynditchA,etal.Con trolofhumancytomegalovirusgeneexpresionbydiferen tialhistonemodificationsduringlyticandlatentinfectionof amonocyticcelline[j].gene,2006,384(1): [9] ReevesM,MurphyJ,GreavesR,etal.Autorepresionof thehumancytomegalovirusmajorimmediate-earlypro moter/enhanceratlatetimesofinfectionismediatedby therecruitmentofchromatinremodelingenzymesbyie86 [J].JVirol,2006,80(20): [10] SinclairJ.Humancytomegalovirus:latencyandreactiva tioninthemyeloidlineage[j].jclinvirol,2008,41 (3): [11] Wyrick J,YoungRA.Decipheringgeneexpresionregu latorynetworks[j].curopingenetdev,2002,12(2):
材料 方法
生物技术通报 张发洲 杨慧兰 为了构建单纯疱疹病毒 型 感染细胞多肽 真核表达质粒 应用 技术从 株 的基因组中扩增 基因 并连接至真核表达载体 对阳性克隆进行菌落 酶切和测序鉴定后 成功构建了重 组质粒 用 转染试剂盒将重组质粒 转染至 细胞中 并用 及 检测其表达情况 结果显示 基因在 细胞中得到正确表达 真核表达质粒 的构建成功 为进 一步研究 对宿主细胞的影响奠定了基础 单纯疱疹病毒 型 感染细胞多肽
232 研究论文 and the difference was statistically significant (P<0.01). The binding rate of transcription factor GATA-1/2 with 5 terminal of promoter of L
2018-01-31 18:12:47 http://kns.cnki.net/kcms/detail/31.2035.q.20180131.1812.004.html 中国细胞生物学学报 Chinese Journal of Cell Biology 2018, 40(2): 231 238 DOI: 10.11844/cjcb.2018.02.0254 GATA-1/2 对感染 HCMV 人单核细胞中病毒
程汉良 夏德全 吴婷婷 孟学平 吉红九 董志国 陈淑吟 对文蛤 青蛤 硬壳蛤 江户布目蛤 薄片镜蛤 和菲律宾蛤仔 种帘蛤科贝类和 个地理种 群文蛤 大连 连云港 湛江 防城港 的细胞色素 氧化酶亚基 基因片段的核苷酸序列进行了分析 以探讨这一序列在种质鉴定 种群遗传结构和分子系统发生研究中的应用价值 测序结果 表明 所有物种扩增片段长度均为 序列 含量 明显高于 含量 物种间共有变异位点 个 其中简约信息位点
:TGF-β bfgf 23 KEY WORDS:transforminggrowthfactor-β ;basicfibroblastgrowthfactor; bonemarrow mesenchymalstemcels;eukaryoticexpressionvector; liposomet
2 ( )208 58 JournalofNanchangUniversity(MedicalSciences)208,Vol.58No. TGF-β bfgf,, 2 (., 330006; 2., 5040) : -β (TGF-β ) (bfgf) (BMSCs), SD BMSCs Percol PCR TGF-β bfgf, pcdna3.(+), 3 BMSCs RT-PCR Westernblot
福建农业学报 材料与方法 毒株 主要仪器 主要试剂 引物设计 的培养 反应条件的建立 荧光定量 检测临床样本 结果与分析
福建农业学报 林 甦 朱春华 陈 珍 刘斌琼 施少华 江 斌 蔡国漳 林 羽 黄 瑜 甦 男 硕士 助理研究员 主要从事病毒学和动物传染病学研究 福建农业学报 材料与方法 毒株 主要仪器 主要试剂 引物设计 的培养 反应条件的建立 荧光定量 检测临床样本 结果与分析 林 甦等 鸡 亚型白血病病毒荧光定量 检测方法的建立 福建农业学报 讨 论 林 甦等 鸡 亚型白血病病毒荧光定量 检测方法的建立 责任编辑
12 (autophagy),imagej,,, 3 [1-4] (self-eating) Transwelinvasion, 20μmol L -1 LY A549 [5] PI3K/AKT 24h,PBS, [6-8],, ml -1 ( ) 600μL
![12 (autophagy),imagej,,, 3 [1-4] (self-eating) Transwelinvasion, 20μmol L -1 LY A549 [5] PI3K/AKT 24h,PBS, [6-8],, ml -1 ( ) 600μL](/thumbs/91/106935627.jpg "12 (autophagy),imagej,,, 3 [1-4] (self-eating) Transwelinvasion, 20μmol L -1 LY A549 [5] PI3K/AKT 24h,PBS, [6-8],, ml -1 ( ) 600μL")
( )2017 57 5JournalofNanchangUniversity(MedicalSciences)2017,Vol.57No.5 11 LY294002, (, 330006) : LY294002 PI3K/AKT 0 10 15 20 25 30μmol L -1 LY294002(LY294002 ) A549,PBS CCK8 LY294002 A549 ; Westernblot
124 河南农业科学第 42 卷, (HPS) ;PRRSV PCV2, [4] PRRSV CSFV ;20, PRRSV,CSFV [5-9],, 1.2 主要试剂和仪器 Real-timePCR PRRSV CSFV PCV2, 3 RotorGene, RG-3000; ND-1000 Na
![124 河南农业科学第 42 卷, (HPS) ;PRRSV PCV2, [4] PRRSV CSFV ;20, PRRSV,CSFV [5-9],, 1.2 主要试剂和仪器 Real-timePCR PRRSV CSFV PCV2, 3 RotorGene, RG-3000; ND-1000 Na](/thumbs/91/105785327.jpg "124 河南农业科学第 42 卷, (HPS) ;PRRSV PCV2, [4] PRRSV CSFV ;20, PRRSV,CSFV [5-9],, 1.2 主要试剂和仪器 Real-timePCR PRRSV CSFV PCV2, 3 RotorGene, RG-3000; ND-1000 Na")
河南农业科学,2013,42(2):123-127 JournalofHenanAgriculturalSciences PCR PRRSV CSFV PCV2,, (, 450011) : 根据 TaqMan 复合荧光探针设计原则, 应用 Primer5.0 和 Oligo6.0 软件设计检测猪繁殖 与呼吸综合征病毒 (PRRSV) 猪瘟病毒 (CSFV) 和猪圆环病毒 2 型 (PCV2) 的特异性引物和探针,
福建农业学报 材料与方法 试验菌株 引物 主要仪器 主要试剂 细菌培养 模板的制备 反应条件 扩增产物的检测 特异性试验 敏感性试验 分离菌株检测 产物的克隆及序列测定 结果与分析
生物技术通报 材料 方法
生物技术通报 高曰文 朱耀明 王艳林 朱晨宇 秦烨 胡汉卿 韩钰 旨在探讨盐酸普鲁卡因 对人结肠癌 细胞 基因甲基化及表达的影响 应用巢式双重 甲基化特异性聚合酶链反应 检测盐酸普鲁卡因处理前后 细胞中 基因启动子的甲基 化水平 逆转录 聚合酶链反应 和蛋白印迹技术观察 细胞内 基因表达情况 检测发现人结肠癌 细胞中 基因存在甲基化 经盐酸普鲁卡因处理能够使 基因甲基化水平下降 和蛋白印迹分析结果显
未命名-1
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 ss a c y e vg 13 14 15 16 17 18 19 H 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 发现生命的螺旋 克里克在提出 中心法则 时曾指出 遗传信息是沿 Ｄ Ｎ Ａ - Ｒ Ｎ Ａ - 蛋白质的方向流动的 遗传信息不可能从 Ｒ Ｎ Ａ 回到 Ｄ Ｎ
< 1+1 <! " #$% &!"#$ %&' ( )( %&* ) + ), %&- )+. )../'0 ) 1 ) "' )!"#$%&' (1% ( )* " + + %,-.2(13/01 )' 扩增 &' 基因 煮沸获得铜绿假单胞菌 ) 基因组作为模板 ) )( 作为引物
213456!"# $ % # %557;&/55/?5,/ @@@!88>>!"#!$% &'()*+ 武汉市疾病预防控制中心 武汉 /&55, % 华中科技大学同济医学院病原生物学系微生物教研室 武汉 /&55&5 & 武汉市第十一医院 武汉 /&5555,- O ' 0 ' =! 6!, 2 M*34!. 5 '2 ' 0 0* 6) 7 88^9:;0, 6! 89-4 O?@ 7%58
材料! 方法! # 基因的扩增及其序列分析
生物技术通报 黄艳燕 黄靖华 卢福芝 孙靓 彭立新 周兴 黄日波 利用 的方法从鼠李糖乳杆菌基因组 中扩增到 乳酸脱氢酶基因 并连接到载体 上 构建表达质粒 将重组质粒 转化大肠杆菌 重组菌株经 诱导表达 电泳分 析表明 在大肠杆菌中实现了表达 表达产物的分子量约为 同时采用紫外分光光度法测定 乳酸脱氢酶的酶活 测得重组菌株的 乳酸脱氢酶活力为 最适反应温度为 最适 乳酸脱氢酶 克隆 表达 鼠李糖乳杆菌
高 云 钟良军 张源明 周晓欢 梁 平 徐 隽 探讨兔牙周炎对动脉粥样硬化炎性因子的影响及抗生素对其的作用 将 只雄性新西兰大白兔随机分为 组 组为对照组 组为牙周炎组 组为动脉粥样硬化组 组为牙周炎 动脉粥样硬化组 组为干预组 牙周炎 动脉粥样硬化 替硝唑组 各组分别按照实验设计进行相应干预处理 周末处死动物 检测牙周指标 血清中总胆固醇 三酰甘油 高密度脂蛋白胆固醇 低密度脂蛋白胆固醇 反应蛋白
第 期 甘金华等 强力霉素人工抗原的合成与抗体制备 材料与方法 试剂及溶液
第 卷第 期 年 月 食品与生物技术学报 强力霉素人工抗原的合成与抗体制备 甘金华 邓薇 李进平 艾晓辉 中国水产科学研究院长江水产研究所 湖北荆州 武汉纺织大学环境与城建学院 湖北武汉 采用改进的碳二亚胺两步法将强力霉素半抗原与载体蛋白 连接制备强力霉素 牛血清白蛋白 人工免疫抗原 并用同样方法将强力霉素与载体蛋白 连接制备人强力霉素 卵清白蛋白 人工包被抗原 经紫外扫描分析和动物免疫试验证实 强力霉素人工抗原合成成功
材料 方法 载体构建 转基因植株的获得
生物技术通报 唐宏琨 曾洪梅 杨秀芬 邱德文 通过根癌农杆菌 介导转化法 将含有激发子基因 的植物表达载体 转化三生烟 获得了转基因烟草植株 用 检测确认了阳性转化株 用 杂交 和 杂交进一步证实了 基因的整合 转录和表达 对 代转基因阳性株进行 接种试验 结果显示 与非转基 因对照相比 表达 的烟草叶片枯斑数量减少 表明蛋白激发子基因 的表达提高了转基因烟草对 的抗性 激发子 基因 烟草 转化 材料
荧光定量PCR
荧 光 定 量 PCR 荧 光 定 量 PCR 原 理 荧 光 定 量 PCR 最 早 称 TaqMan PCR, 后 来 也 叫 Real-Time PCR, 是 美 国 PE(Perkin Elmer) 公 司 1995 年 研 制 出 来 的 一 种 新 的 核 酸 定 量 技 术 该 技 术 是 在 常 规 PCR 基 础 上 加 入 荧 光 标 记 探 针 或 相 应 的 荧 光 染 料
( CIP) /,,. :, 2003 ( ) ISBN 7-200 - 04978-6.... R766. 1 CIP ( 2003) 053425 YAN TONG * ( 6 ) : 100011 : www. bph. com. cn * 880 1230 32 7. 875 121 200
( CIP) /,,. :, 2003 ( ) ISBN 7-200 - 04978-6.... R766. 1 CIP ( 2003) 053425 YAN TONG * ( 6 ) : 100011 : www. bph. com. cn * 880 1230 32 7. 875 121 2005 1 3 2005 1 1 1 7 000 ISBN 7-200 - 04978-6 / R 218
Microsoft Word - 105YQ403試題分析
1 105 學 年 度 學 科 能 力 測 驗 自 然 考 科 物 理 試 題 分 析 建 國 中 學 物 理 科 教 師 / 高 君 陶 壹 前 言 今 年 的 學 科 能 力 測 驗 是 99 課 綱 課 程 實 施 後 第 四 次 測 驗 命 題 的 重 點 與 方 向 均 能 依 照 課 綱 的 精 神 與 內 容, 題 目 的 難 易 度 也 趨 於 穩 定, 結 合 物 理 觀 念 的
H N H CH 2 要 C要 COOH NH 2 H HN CH 2 要 C要 COOH N NH 2 R 1 O R 2 H 2 N 要 C 要 C 要 OH+H 要 N 要 C 要 COOH -H 2O R 1 O R 2 H 2 N 要 C 要 C 要 N 要 C 要 COOH H H H 氨基酸 H 肽键 H H 氧分压高 Hb-Fe 2+ +O 2 Hb-Fe 2+ -O 2
生命科学研究 房 蓓 武泰存 王景安 以玉米沈单 号为材料 用溶液培养的方法研究了缺锌 低锌和正常供锌对玉米生长发育的影响 进一步明确了一定量低锌比缺锌对玉米的伤害更大 并对其 同工酶谱及蛋白质表达进行了分析 结果表明 一定浓度的低锌培养使玉米生长受抑及受害最重 且地上部分比地下部分更敏感 低锌和缺锌处理时 种同工酶的酶谱和蛋白表达与正常供锌时均有明显的差异 尤其在一定量低锌浓度时 有些同工酶的表达增强或被特异性诱导
第一章 图 １ １ 传染病的特征 ９ Ｔ ｈ１ Ｔ ｈ２ 细胞调节机制简图 正调节 负调节 细胞因子与细菌的相互作用机制目前尚未完全明了 有实验表明 细胞因子与细菌之间 存在有互利和互抑双重效应 例如 Ｔ Ｎ Ｆα 和 ＩＦＮγ 可抑制放线菌的生长而 ＩＬ ６ 的作用则 反之 ＩＬ １ ２ 和 ＧＭ ＣＳＦ 可促进某些致病性大肠杆菌生长而 ＩＬ １ｒａ 可抑制之 研究表 明 某些致病性大肠杆菌有与
标题
吉林农业大学学报 ２０１６ ３８ １ ８７ ９１ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｊｉｌｉｎ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｈｔｔｐ ｘｕｅｂａｏ ｊｌａｕ ｅｄｕ ｃｎ Ｅ ｍａｉｌ ｊｌｎｄｘｂ ｖｉｐ ｓｉｎａ ｃｏｍ 神 经 生 长 因 子 ｍｒｎａ 在 鹅 等 级 前 卵 泡 中 的 表达 刘璐璐 隋玉健 朱海洋 武惠岩 杨 辉 孙永峰 吉林农业大学动物科学技术学院 长春 １３０１１８
自然科学版 预处理 视盘粗定位 视盘垂直坐标的粗定位 视盘水平坐标的粗定位
自然科学版 文章编号 视网膜图像中视盘的快速自动定位方法 赵晓芳 林土胜 李碧 摘 要 基于眼底视网膜血管的分布结构及视盘本身的特点 提出一种快速自动定位视盘的方法 首先根据视网膜血管的网络分布结构大致定位视盘的垂直坐标 然后根据视盘 的亮度信息及视盘与血管的关系来定位视盘的水平坐标 最后把视盘限定在以粗定位的视盘为中心的一个小窗口内 用 变换精确定位视盘中心 该方法不需要事先分割视网膜血管 也不需要对算法进行训练
第一章
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 1500 1450 1400 1350 1300 1250 1200 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 INPUT2006 29 30 31 32 33 34 35 9000 8500 8000 7500 7000 6500 6000 5500 5000 4500 4000 3500
臧晓南 张学成 王高歌 刘金姐 张晓辉 刘 滨 对两种丝状蓝藻 钝顶节旋藻和盐泽螺旋藻 在基因工程中常用作选择试剂的 种抗生素 氯霉素 氨苄青霉素 红霉素 链霉素 卡那霉素 庆大霉素和新霉素 的敏感性作比较实验 结果表明 两种蓝藻对抗生素的敏感性既有共同的特点 也有 明显的差异 它们对红霉素 氯霉素和链霉素最敏感 致死浓度分别为 和 两种蓝藻对氨苄青霉素比较敏感 的氨苄青霉素即可抑制 和 的生长 但
PCR专题改.doc
Primer3 http://frodowimitedu/cgi-bin/primer3/primer3_wwwcgi Primer5 Oligo665 Primer5 http://wwwbioonnet/dispbbsasp?boardid=25&id=38536 Oligo667 http://wwwbioonnet/dispbbsasp?boardid=25&id=40898 1 PCR 1
一 等 奖, 授 予 气 固 环 流 技 术 的 开 发 与 应 用 等 25 项 成 果 高 等 学 校 科 学 研 究 优 秀 成 果 奖 技 术 发 明 奖 二 等 奖 ; 授 予 一 种 连 续 螺 旋 折 流 板 双 壳 程 组 合 异 形 管 管 束 换 热 器 1 项 成 果 高 等
教 技 [2016]1 号 教 育 部 关 于 2015 年 度 高 等 学 校 科 学 研 究 优 秀 成 果 奖 ( 科 学 技 术 ) 奖 励 的 决 定 为 深 入 贯 彻 落 实 党 的 十 八 大 和 十 八 届 三 中 四 中 五 中 全 会 精 神, 大 力 实 施 科 教 兴 国 战 略 人 才 强 国 战 略 和 创 新 驱 动 发 展 战 略, 促 进 高 等 学 校 科 技
国内高等医学院校基础医学二级学科评价结果（1）
国内高等校基础医学二级学科竞争力评价简介 北京大学医学图书馆参考国内外各项评价指标体系, 建立了一套基础医学二级学科竞争力评价指标体系 分别从人才队伍 科学研究和教学成果三方面一共涉及 34 项指标, 对全国 39 家校的 12 个基础医学二级学科进行了评价 我们已经连续做了 4 年的评价,2012 年度的评价结果见下表或 http://library.bjmu.edu.cn/ 名 次 2012 年度国内高等校基础医学二级学科评价结果
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疾 病 名 马 尔 堡 病 毒 病 英 文 名 Marburg virus disease 别 名 Marburg disease; 马 堡 病 毒 病 ; 马 尔 堡 病 ICD 号 A98.3 病 因 和 发 病 机 制 研 究 的 进 展 1. 病 因 研 究 进 展 马 尔 堡 病 毒 病 (MVD) 是 由 丝 状 病 毒 科 马 尔 堡 病 毒 (MBV) 引 起 的 一 种 出 血 性
2004级研究生现代免疫学实验技术结业报告
PCR PCR PCR RT-PCR PCR (Polymerase Chain Reaction,PCR) 80 DNA, DNA PCR PCR PCR DNA PCR -- -- DNA DNA 93 DNA PCR DNA DNA ( ) DNA 55 DNA DNA -- TaqDNA dntp DNA -- -- PCR PCR DNA DNA Y (1 X) n Y DNA X (Y)
特点和作用
2006 10 2007 02 2010 08 2010 11 2015 02 2015 05 2017 03 Valganciclovir Hydrochloride Tablets Yan Suan Xie Geng Xi Luo Wei Pian 1.L-,- 2[(2-- 1,6- -6-- 9H-- 9-) ]-3-- 2.9-[[2--1- ] ] L- O H H 2 N N N N
食 品 与 生 物 技 术 学 报 第 卷
第 卷第 期 年 月 食品与生物技术学报 山药多糖研究进展 王洪新 王远辉 江南大学食品学院 江苏无锡 山药是药食兼用植物 山药多糖被认为是山药中重要的活性物质 综述山药多糖的提取分离工艺 纯化方法 化学结构分析和生理活性研究的现状 为未来研究山药多糖的新提取工艺 探讨构效关系 作用机制提供参考 山药多糖 研究进展 提取与分离 食 品 与 生 物 技 术 学 报 第 卷 第 期 王洪新等 山药多糖研究进展
2015年全国硕士研究生入学考试
2015 年 全 国 硕 士 研 究 生 入 学 考 试 佛 山 科 学 技 术 学 院 自 命 题 考 试 科 目 考 试 大 纲 ( 科 目 名 称 : 农 业 知 识 综 合 二 科 目 代 码 :340 ) 一 考 查 目 标 农 业 知 识 综 合 二 侧 重 于 动 物 生 产 类 综 合 知 识 的 考 查 考 试 内 容 应 主 要 涵 盖 动 物 遗 传 学 动 物 生 理 学 动
國立中山大學學位論文典藏.PDF
國 立 中 山 大 學 中 國 文 學 系 ( 暑 期 專 班 ) 碩 士 在 職 專 班 碩 士 論 文 漢 初 異 姓 諸 侯 王 研 究 研 究 生 : 林 裕 斌 撰 指 導 教 授 : 劉 文 強 教 授 中 華 民 國 97 年 5 月 摘 要 本 篇 論 文 探 究 的 對 象 是 漢 朝 初 年 八 位 異 姓 諸 侯 王, 並 涵 蓋 與 操 縱 他 們 興 盛 殞 落 息 息 相
商 周 三 代 年 代 學 的 研 究 經 過 近 五 年 的 努 力, 完 成 夏 商 周 年 表 本 大 事 概 覽 中 夏 商 周 三 代 的 大 事 紀 年, 即 採 用 夏 商 周 斷 代 工 程 的 考 論 成 果 對 於 無 法 考 證 年 份 的 史 事 或 發 生 在 史 前 時
中 外 歷 史 大 事 概 覽 編 者 說 明 : 1. 傳 說 時 代 與 夏 商 周 年 表 : 人 類 在 未 有 文 字 記 事 之 前, 口 耳 相 傳 的 神 話 傳 說, 是 先 民 對 自 然 變 化 的 體 驗 與 歷 史 經 歷 的 口 述 這 些 傳 說, 或 者 存 有 誇 張 和 穿 鑿, 隨 著 考 古 文 物 的 出 土 與 歷 史 學 家 的 努 力, 汰 偽 存 真,
第 三 条 实 验 室 技 术 安 全 工 作 贯 彻 以 人 为 本 安 全 第 一 预 防 为 主 综 合 治 理 的 方 针 各 单 位 及 教 职 工 学 生 应 树 立 安 全 意 识, 履 行 安 全 义 务 承 担 安 全 责 任 第 四 条 实 验 室 技 术 安 全 工 作 坚 持
校 发 2015 28 号 北 京 科 技 大 学 实 验 室 技 术 安 全 管 理 规 定 第 一 章 总 则 第 一 条 为 加 强 学 校 实 验 室 安 全 管 理, 防 止 实 验 室 安 全 事 故 发 生, 保 障 教 职 工 及 学 生 的 人 身 财 产 安 全, 促 进 学 校 各 项 事 业 健 康 稳 定 发 展, 根 据 国 家 相 关 法 律 法 规, 结 合 学 校
中国商人必胜宝典--各地商人性格特征剖析
-- 13 -- -- -- -- -- -- -- -- -- -- -- -- -- - 1 - - 2 - 570 350-3 - - 4 - (1) (2) (3) 100-5 - ! ( ) 1985-6 - 20 21 300 600-7 - (1) (2) (3) (4) ( ) - 8 - 24-9 - - 10 - ! 20 20 30 100 1994 5 5 5! - 11 -
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臺 北 縣 立 樟 樹 國 中 96 學 年 度 第 二 學 期 區 域 性 自 然 科 學 領 域 資 賦 優 異 教 育 方 案 實 施 計 劃 一 依 據 : ( 一 ) 特 殊 教 育 法 第 二 十 九 條 ( 二 ) 特 殊 教 育 法 施 行 細 則 第 四 條 第 二 項 ( 三 ) 身 心 障 礙 及 資 賦 優 異 學 生 鑑 定 標 準 二 目 的 : ( 一 ) 推 廣 資
（精校版）陕西省语文卷文档版（含答案）-2011年普通高等学校招生统一考试.doc
绝 密 启 封 前 2015 年 普 通 高 等 学 校 招 生 全 国 统 一 考 试 生 物 试 题 ( 江 苏 卷 ) 一 单 项 选 择 题 : 本 部 分 包 括 20 题, 每 题 2 分, 共 计 40 分 1. 下 列 关 于 淀 粉 脂 肪 蛋 白 质 和 核 酸 4 种 生 物 分 子 的 叙 述, 正 确 的 是 ( ) A. 都 能 被 相 应 的 酶 水 解 B. 都 是
材料 方法
生物技术通报 姜燕 采用鼠抗人血红蛋白 单克隆抗体 和胶体金标记鼠抗人血红蛋白 单克隆抗体 及对照抗体羊抗鼠 利用双抗体免疫夹心反应原理特异性地结合人血红蛋白抗原 在 内可得到胶体金显色结果的原理研制便潜血单克 隆一步法胶体金检测试卡 用于诊断因各种原因引起的消化道出血疾病 应用杂交瘤技术制备两株鼠抗人血红蛋白 抗 体 方法检测 效价 免疫胶体金技术制备胶体金检测试卡 法检测 效价的结果显示 鼠抗人
吴克复等 粒 单型人白血病细胞系的建立及其细胞生物学性质的研究 Ｗ ｕｋ ｆ ｕ Ｅｓ ｂ ｓ ｈ ｍ ｆ ｍｙ ｄ ｍ ｙ ｕｋ ｍ ｓ ｄ ｓ ｕ ｄ ｓ ｆ ｈ ｒ ｂ ｇ ｐ ｒ ｐ ｒ ｓ 图版 １ 吴克复等 粒 单型人白血病细胞系的建立及其细胞生物学性质的研究 Ｗ ｕｋ ｆ ｕ Ｅｓ ｂ ｓ ｈ ｍ ｆ ｍｙ ｄ ｍ ｙ ｕｋ ｍ ｓ ｄ ｓ ｕ ｄ ｓ ｆ ｈ ｒ ｂ ｇ ｐ ｒ ｐ
干细胞和再生医学 科学学位 免考 免考 非定向 干细胞和再生医学 科学学位 免考 85 非定向 干细胞和再生医学 科学学位 免考 69 非定向 护理学 科学学位 免考 免考 非定向 护理学 科学学位
2018 年秋季报考博士上线考生名单 序号 准考证号 报考专业名称 学位类型外语成绩专业基础课成绩报考类别 备注 1 180371 病理学与病理生理学 科学学位 免考 免考 非定向 2 180393 病理学与病理生理学 科学学位 免考 免考 非定向 3 180427 病理学与病理生理学 科学学位 免考 免考 非定向 4 180436 病理学与病理生理学 科学学位 免考 免考 非定向 5 180474
Microsoft Word - tck-103-4y-10-1(衛生)
103 學 年 度 技 術 校 院 四 年 制 與 專 科 學 校 二 年 制 統 一 入 學 測 驗 衛 生 與 護 理 類 ( 專 一 ) 試 題 試 題 分 析 : 今 年 衛 護 類 專 一 ( 基 礎 生 物 ) 部 分, 考 題 概 念 簡 單, 選 項 敘 述 也 不 繁 瑣, 且 大 部 分 皆 為 考 古 題 相 關 概 念, 要 拿 高 分 甚 至 滿 分 都 不 是 太 困 難
医学研究杂志 年 月 第 卷 第 期 论 著 0+.%$. 0 1$.# 1,4 : (54!& ,6 8& 295,!&-,:478(4 4&5 &7-9! A, 5 7 *-42&54,,6:478(8(4! & + 7 (& !. (
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张红丽 等 部分功能域基因的原核表达与分析 第６期 发表序列 ＡＹ８１９６５０ 同源性为 １００ 与国外 １０ 株 同源性为 ９８畅 ８ 有 １３ 个碱基发生了突 变 其中 ４ 个是有意义的突变 这 ４ 个有意义的 突变分别为第 ２５７ 位 Ｔ Ｃ 第 ５０５ 位 Ａ Ｃ 第 ９０８ 位 Ａ Ｇ 第 １０１２ 位 Ｇ Ｃ 图 ４ 这些差异可 能是捻转血矛线虫株间存在地域差异所致 ２畅 ５ ＨＰＳ 原核表达与鉴定
<4D6963726F736F667420576F7264202D20B8CAD7E9CDA8A1B232303136A1B33638BAC5B9D8D3DAD4DAC8ABD6DDB5B3D4B1D6D0BFAAD5B9D5FDB7B4B5E4D0CDD1A7CFB0BDCCD3FDBBEEB6AFB5C4CDA8D6AA2E646F63>
甘 组 通 2016 68 号 关 于 在 全 州 党 员 中 开 展 正 反 典 型 学 习 教 育 活 动 的 通 知 各 县 ( 市 ) 委, 州 委 各 部 委, 州 级 各 部 门 党 组 ( 党 委 党 工 委 ), 省 州 属 行 政 企 事 业 单 位 党 委 ( 党 组 ): 为 深 入 推 进 全 州 两 学 一 做 学 习 教 育, 教 育 引 导 全 州 党 员 以 身 边
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度定生老病死
溫度決定生老病死作者: 馬悅淩 江蘇文藝出版社 1 受寒涼的途徑 我遇到的許多患癌症或其他重病的人 都有受寒涼的經歷 一位 44 歲的女士 患有肺癌 骨癌 腎癌 該女士總是發低熱 常規治 療一個月後效果不明顯 CT 檢查發現肺部有兩個腫塊 又繼續做進一步檢查 結果令所有人大吃一驚 腫瘤已全身轉移 3 個月後去世 家人不能理解 說 她身體一向不錯 很少生病 只是這一兩年身體弱一些 怎麼會突然得這麼重
按 照 卫 计 委 的 规 划, 对 于 县 级 医 院 主 要 做 一 下 工 作 加 强 临 床 重 点 专 科 建 设, 提 升 县 级 医 院 医 疗 技 术 水 平, 并 配 备 与 专 科 建 设 目 标 一 致 的 适 宜 设 备 1. 县 医 院 除 了 将 健 全 一 级 诊 疗
首 批 卫 计 委 重 点 扶 持 500 家 县 医 院 名 单 公 布 新 医 改 以 来, 分 级 诊 疗 强 基 层 一 直 都 是 重 点, 县 级 医 疗 市 场 增 长 快 速, 但 是 离 最 理 想 的 状 态 仍 有 较 大 的 差 距, 大 医 院 尤 其 是 知 名 的 三 甲 医 院 仍 是 人 满 为 患, 离 达 到 县 域 就 诊 率 达 到 90%, 基 本 做 到
专科疾病诊治（二十四）
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Microsoft Word - 林金萱.docx
改 觀 王 碧 雲 顏 面 麻 痺, 臉 腫 如 水 月, 雙 目 無 神, 左 眼 圓 瞠 暴 突, 右 眼 凹 陷 崩 垂, 下 顎 頦 部 鬆 弛 右 傾, 笑 起 來 嘴 歪 眼 斜, 兩 頰 連 接 頸 項 一 帶 猶 有 灼 傷 過 的 痕 跡 一 張 令 人 見 識 過 後 猶 帶 了 個 揮 之 不 去 的 夢 魘 般 的 鬼 臉, 正 張 牙 舞 爪 地 衝 擊 著 我 乍 然 回
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何 祚 庥 : 中 医 理 论 的 核 心 是 伪 科 学 环 球 人 物 记 者 路 琰 何 祚 庥 曾 经 有 言 : 中 国 传 统 文 化 有 90% 是 糟 粕 这 句 话 曾 引 起 的 一 场 笔 战 这 段 时 间, 一 些 学 者 发 布 告 别 中 医 的 言 论 再 次 引 起 了 何 祚 庥 对 中 医 的 关 注 开 始 谈 话 之 前, 他 手 里 拿 着 两 份 资 料
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目 录 第 一 章 认 识 亚 健 康 (1) 第 二 章 亚 健 康 状 况 (19) 第 三 章 与 亚 健 康 相 关 的 疾 病 (57) 第 四 章 防 治 亚 健 康 (65) 第 五 章 新 森 田 疗 法 (112) 摆 脱 亚 健 康 的 困 扰 第 一 章 认 识 亚 健 康 第 一 节 亚 健 康 的 症 状 亚 健 康 状 态 涉 及 的 内 容 很 广 泛, 各 种 内 脏
把生命托付给谁？
把 生 命 托 付 给 谁? 一 个 癌 症 患 者 的 重 生 感 悟 本 报 首 席 评 论 徐 迅 雷 2012-11-11 癌 症, 不 等 于 绝 症 癌 症, 不 等 于 死 亡 著 名 作 家 记 者 凌 志 军, 将 自 己 5 年 抗 癌 的 经 历, 写 成 重 生 手 记 一 个 癌 症 患 者 的 康 复 之 路 一 书, 日 前 出 版 在 有 个 购 书 网 站 上, 我
4 0 50 2 30 56 1957 527 1960 1961 1961 1957 20 50 527 19611966 10 10 0 05 2 0 30 0 20 30 50 0 30 0 20 0 10 40 50 0 500 80 1 20 0 20 5 100 10 155 6 1 0
1873 20 1909 56 20 14 1925 1 31 6 1 2 4 25 5 12 1 5 15 15 24 26 O 515 25 525 2 25 2 2 2 2 5 2 25 2 5 520 2 2 5 25 5 130 220 510 25 16 1950 X 30 0 04 0 02 0 10 0 05 1954 0 15 0 10 0 70 0 30 0 30 0 70 0
《中老年男性养生保健》
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第 卷 第 期 年 月 水 生 生 物 学 报 肠 丫 搔蒸霎 原 位杂 交 和 原 位 技 术在 鱼 类基 因 定位 中 的 应 用 黄 袁仕 取 梅 朱作言 中 国科 学 院 水 生 生 物 研 究 所 淡 水 生 态 与 生 物 技 术 国 家 重 点 实验 室 武 汉 陕 西 师 范 大学 生 命 科 学 院 西 安 # 万 尸 了夭 如 趾 郑 人 扭寿 卿 关 键词 艺 只 妙 毛山知
2015年全国射箭重点学校锦标赛.xls
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2017年全国射箭重点体校锦标赛.xls
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2015年全国射箭冠军赛.xls
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2015年全国室外射箭锦标赛.xls
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关于建立境内违法互联网站黑名单管理制度的通知
关 于 建 立 境 内 违 法 互 联 网 站 黑 名 单 管 理 制 度 的 通 知 各 省 自 治 区 直 辖 市 和 计 划 单 列 市 通 信 管 理 局 新 闻 办 教 育 厅 ( 教 委 ) 公 安 厅 ( 局 ) 国 家 安 全 厅 ( 局 ) 文 化 厅 ( 局 ) 卫 生 厅 ( 局 ) 工 商 行 政 管 理 局 广 播 影 视 局 新 闻 出 版 局 食 品 药 品 监 督 管
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国 民 经 济 和 社 会 发 展 第 十 个 五 年 计 划 信 息 化 发 展 重 点 专 项 规 划 前 言 信 息 化 是 当 今 世 界 科 技 经 济 与 社 会 发 展 的 重 要 趋 势 信 息 技 术 已 广 泛 渗 透 到 经 济 和 社 会 的 各 个 领 域, 推 动 人 类 社 会 生 产 力 达 到 一 个 崭 新 的 高 度 全 球 信 息 化 开 创 了 世 界 经
? 這 全 都 是 市 政 府 提 供 給 我 的 資 料 低 底 盤 公 車 計 畫 96 年 預 算 新 台 幣 4,500 萬 元 97 年 預 算 新 台 幣 1 億 6,500 萬 元 98 年 預 算 新 台 幣 3 億 2,300 萬 元, 共 有 307 台 低 底 盤 公 車,99
民 政 部 門 質 詢 第 13 組 質 詢 日 期 : 中 華 民 國 98 年 10 月 6 日 質 詢 對 象 : 民 政 部 門 有 關 各 單 位 質 詢 議 員 : 陳 嘉 銘 周 柏 雅 陳 碧 峰 李 文 英 顏 聖 冠 王 孝 維 洪 健 益 計 7 位 時 間 126 分 鐘 速 記 錄 98 年 10 月 6 日 速 記 : 何 采 穎 主 席 ( 李 議 員 慶 元 ): 現
上海浦~1
上 海 浦 发 银 行 参 与 高 等 职 业 教 育 人 才 培 养 年 度 报 告 ( ) 一 校 企 合 作 概 况 ( 一 ) 企 业 简 介 上 海 浦 东 发 展 银 行 股 份 有 限 公 司 ( 以 下 简 称 : 浦 发 银 行 ) 是 1992 年 8 月 28 日 经 中 国 人 民 银 行 批 准 设 立 1993 年 1 月 9 日 开 业 1999 年 在 上 海 证 券
R r r R r r x V A x V A 1 2 1 2 F = s mv 2 mv 1 2 2 u u 2f 2f u f u f (v) Q = cm t = Q = Lm = Q = Lm Q = qm Q = W / J 2 Q = I Rt 1 1 1 1 = + + + R R1 R2 R n 2gl 4 3 B mgl = 1 2 mv 2 B
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组织样本 mirna 提取细胞样本 mirna 提取全血样本 mirna 提取 TaqMan mirna 反转录试剂盒 通过 HG TaqMan mirna 定量 PCR 试剂盒检测 microrna 1-4 2 3 4 5-6 7-8 7 8 9 B1802 mirna 25T/100T 500/1600 B1803 mirna 25T/100T 500/1600 D1802 HG TaqMan
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区 政 协 第 十 三 届 委 员 会 第 五 次 会 议 召 开 区 政 协 举 行 十 三 届 十 二 次 常 委 ( 扩 大 ) 会 议 区 政 协 组 织 重 点 课 题 调 研 2014 / 4 总 第 16 期 团 结 民 主 的 大 会 中 国 人 民 政 治 协 商 会 议 上 海 市 普 陀 区 第 十 三 届 委 员 会 第 五 次 会 议 于 7 月 29 日 在 普 陀 区
投影片 1
中 國 文 學 學 與 教 系 列 照 顧 學 生 的 多 樣 性 教 學 經 驗 分 享 會 與 教 系 列 照 顧 學 生 的 多 樣 性 地 利 亞 修 女 紀 念 學 校 ( 協 和 ) 李 浩 芝 老 師 教 學 經 驗 分 享 會 1 學 校 背 景 直 資 學 校 只 收 新 移 民 全 年 收 生 2 中 三 推 介 困 難 : 欠 缺 興 趣, 認 為 與 日 常 生 活 無 關
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一 生 要 预 防 的 32 种 重 大 疾 病 ( 下 ) 姜 玉 胜 编 著 哈 尔 滨 出 版 社 书 名 一生要预防的３２种重大疾病 下 作 者 姜玉胜 出 版 社 哈尔滨出版社 ＣＩＰ数据核字 ２００６ 第０５５０４２号 出版日期 ２００６年３月第１版 ＩＳＢＮ ７ ８０６９９ ０３８ １ Ｂ ５５ 定价 ５ ００元 目 录 十 七 痛 风 痛 风 的 症 状 痛 风 的 病 因 痛 风
DOI: /j.cnki.bingduxuebao CHINESEJOURNALOF VIROLOGY Vol.34 No.1 January 2018 RT-PCR *,,,,,, (, ) : (ZIKV virus,zikv) (
34 1 2018 1 DOI:10.13242/j.cnki.bingduxuebao.003304 CHINESEJOURNALOF VIROLOGY Vol.34 No.1 January 2018 RT-PCR *,,,,,, (, 102206) : (ZIKV virus,zikv) (Denguevirus,DENV) (Chikungunyavirus,CHIKV) ZIKV NS1
《佛子行三十七颂》讲记1
佛 子 行 三 十 七 颂 讲 记 1 达 真 堪 布 光 明 大 圆 满 法 坛 城 为 修 持 成 佛 要 发 殊 胜 菩 提 心! 为 度 化 一 切 父 母 众 生 要 发 誓 修 持 成 佛! 为 早 日 圆 成 佛 道 要 精 进 认 真 闻 思 修 行! 今 天 在 这 里 给 大 家 简 单 地 开 示 一 下 佛 子 行 三 十 七 颂 佛 子 行 三 十 七 颂 是 土 美 仁
至 尊 法 王 蒋 阳 龙 朵 加 参 尊 者 上 师 瑜 伽 皈 依 境
至 尊 法 王 蒋 阳 龙 朵 加 参 尊 者 上 师 瑜 伽 皈 依 境 大 恩 上 师 慈 成 加 参 仁 波 切 目 录 修 法 仪 轨 3 16 24 课 前 念 诵 正 修 上 师 瑜 伽 念 诵 课 后 回 向 为 何 修 持 35 36 38 39 42 上 师 的 含 义 上 师 对 寻 求 解 脱 者 的 重 要 性 谨 慎 选 择 上 师 具 德 上 师 应 具 备 的 条 件
（给多有拉姆）佛子行三十七颂1——7
胜 利 道 歌 天 鼓 妙 音 法 王 如 意 宝 晋 美 彭 措 造 颂 怙 主 诸 佛 智 慧 身, 文 殊 师 利 童 子 尊, 恒 住 八 瓣 莲 蕊 心, 所 言 愿 利 诸 有 情 甚 深 光 明 大 圆 满, 仅 闻 词 句 断 有 根, 六 月 修 要 得 解 脱, 唯 此 铭 刻 于 心 中 遇 此 胜 法 善 缘 众, 前 世 累 劫 积 资 果, 与 普 贤 王 同 缘 分,
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检 验 过 程 临 床 PCR 检 验 标 本 的 处 理 保 存 及 核 酸 提 取 方 法 医 师 申 请 检 验 项 目 申 请 患 者 准 备 患 者 识 别 样 本 采 集 样 本 运 送 Ⅰ Ⅱ Ⅲ 分 析 测 定 样 本 处 理 分 析 前 分 析 中 分 析 后 报 告 临 床 应 用 烟 台 市 烟 台 山 医 院 赵 善 娜 结 合 临 床 资 料 分 析 结 果 并 确 认 出
2014年大学生村官考试公共基础知识：社会革命和社会改革
2014 年 吉 林 省 招 募 三 支 一 扶 高 校 毕 业 生 计 划 实 施 公 告 根 据 省 人 社 厅 等 11 部 门 关 于 做 好 2014 年 高 校 毕 业 生 三 支 一 扶 计 划 实 施 工 作 的 通 知 ( 吉 人 社 联 字 2014 22 号 ) 精 神, 决 定 从 即 日 起 部 署 吉 林 省 2014 年 高 校 毕 业 生 三 支 一 扶 计 划 实
朝陽科技大學八十八學年度招考碩士班簡章目錄
24 24 1 1,400 2,400 27 2 3 (042332-3000 ( 7092~7094 http://www.cyut.edu.tw/~finance 18 28 (100 ( (40 (30% ( ( ( ( ( ( 1. 2. 3. 4. (30% ( 4 70 3. 70 4 (042332-3000 ( 7062~7063 http://www.ba.cyut.edu.tw
刊 的 表 现 可 圈 可 点 中 国 共 产 党 章 程 党 的 十 八 大 报 告 及 辅 导 材 料 热 爱 伟 大 祖 国, 建 设 美 好 家 园 系 列 连 环 画 等 51 种 书 籍 的 单 品 种 当 年 累 计 印 数 超 过 100 万 册, 较 2011 年 增 加 3 种,
本 报 告 基 于 2012 年 新 闻 出 版 统 计 年 报 数 据 报 告 的 基 础 数 据 采 集 的 时 段 为 2012 年 1 月 1 日 至 2012 年 12 月 31 日, 信 息 采 集 年 度 为 2012 年 本 报 告 所 涉 数 据 的 统 计 范 围 包 括 图 书 出 版 期 刊 出 版 报 纸 出 版 音 像 制 品 出 版 电 子 出 版 物 出 版 印 刷
【第一类】
第 一 类 用 于 工 业 科 学 摄 影 农 业 园 艺 森 林 的 化 学 品, 未 加 工 人 造 合 成 树 脂, 未 加 工 塑 料 物 质, 肥 料, 灭 火 用 合 成 物, 淬 火 和 金 属 焊 接 用 制 剂, 保 存 食 品 用 化 学 品, 鞣 料, 工 业 用 粘 合 剂 [ 注 释 ] 本 类 主 要 包 括 用 于 工 业 科 学 和 农 业 的 化 学 制 品, 包
标题
第 35 卷第 期西南大学学报 ( 自然科学版 ) 3 年 月 Vol.35 No. JouralofSouthwestUiversity (NaturalScieceEditio) Feb. 3 文章编号 :673 9868(3) 69 4 一类积分型 Meyer-KiḡZeler-Bzier 算子的点态逼近 赵晓娣, 孙渭滨 宁夏大学数学计算机学院, 银川 75 摘要 : 应用一阶 DitziaṉTotik
儿科学 儿科学 儿科学 儿科学 儿科学 儿科学 ( 专业学位 ) 儿科学 ( 专业学位 ) 儿科学 ( 专业学位 ) 儿科学 ( 专业学位 ) 儿科学 ( 专业学位 ) 耳鼻咽喉科学 ( 专业学位 ) 非定向 全国统考
2017 年医学院 ( 含转化院 遗传所 ) 硕士研究生上线考生名单 准考证号 报考专业 外语政治 业务 1 业务 2 总分 报考类别 考试方式 备注 103357000912484 72 72 242 0 386 非定向 全国统考 103357000912003 71 72 242 0 385 非定向 全国统考 103357000911503 77 73 234 0 384 非定向 全国统考 103357000911098
《捕捉儿童敏感期》
捕 捉 儿 童 敏 感 期 出 版 前 言...7 第 一 章 4 个 孩 子 的 敏 感 期 故 事...8 妞 妞 (0 4 岁 )... 8 黑 白 相 交 的 地 方... 8 旋 转... 9 就 不 要 新 帽 子... 9 小 霸 王... 10 诅 咒... 10 畅 畅 (0 4 岁 )... 11 世 界 就 是 味 道... 11 对 接... 12 宝 贝, 你 的 玩 具
2 國 文 考 科 試 題 解 析 命 題 出 處 與 南 一 版 第 五 冊 第 二 課 幽 夢 影 選 課 程 內 涵 同 試 題 解 析 某 君 講 信 用, 重 然 諾, 行 事 穩 健, 工 作 負 責 較 符 合 謹 飭 友 謹 飭 友 指 的 是 言 行 謹 慎 而 有 節 制 的 朋
學年度 1 國中基本學力測驗 國文考科試題解析 一 單題 1-34 題 1. 本以為這次的計畫萬無一失 沒想到 最後竟無法實行 下列詞語 何者最 適宜填入 中 (A)亡羊補牢 (B)百密一疏 (C)咫尺天涯 (D)千鈞一髮 答 案 B 命題出處 與南一版第二冊第十課吃冰的滋味應用練習第二大題 詞語辨用 題型內涵同 試題解析 題幹中 計畫萬無一失 最後 竟然無法實行 故選(B) (A)亡羊補牢 丟失了羊
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1917~2006 ( ) 讀 龍 良 龍 來 便 來 便 老 兩 老 了 便 龍 老 更 不 龍 老 離 牢 了 念 便 了 ( ) 省 ( ) 年 6 年 ---- 95 年 ( ) AD1884 年 陸 讀 盧 北 年 葉 蘭 兩 了 葉 蘭 ( ) 來 林 瑩 兩 勵 立 陵 識 離 見 六 年 惡 力 量 年 不 更 歷 練 了 數 更 留 見 六 六 年 紐 不 流 兩 見 來 落 落
29 碳 酸 钙 D3 片 ( 别 名 维 生 素 D3 碳 酸 钙 ) 吉 林 省 第 一 批 低 价 药 30 炔 诺 酮 滴 丸 吉 林 省 第 一 批 低 价 药 31 去 氯 羟 嗪 片 吉 林 省 第 一 批 低 价 药 32 茶 苯 海 明 片 吉 林 省 第 一 批 低 价 药 33
附 件 3 吉 林 省 公 布 的 低 价 药 品 清 单 1 甲 苯 咪 唑 片 吉 林 省 第 一 批 低 价 药 2 双 羟 萘 酸 噻 嘧 啶 片 吉 林 省 第 一 批 低 价 药 3 布 洛 芬 ( 缓 释 胶 囊 缓 释 片 颗 粒 ) 吉 林 省 第 一 批 低 价 药 4 复 方 对 乙 酰 氨 基 酚 片 吉 林 省 第 一 批 低 价 药 5 萘 普 生 片 ( 胶 囊 ) 分
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AD1897----1931 () 寧 () 年 22 年 ---- 20 年 () 年 更 麟 來 () 1. 年 12 讀 異 15 年 20 北 行 禮 年 六 22 北 23 留 拉 24 紐 倫 25 倫 羅 離 26 林 27 林 林 不 離 女 29 陸 北 識 30 陸 戀 北 不 不 31 陸 北 梁 32 說 黎 鱗 冷 1 / 15 33 梁 葉 參 35 說 輪 36 1119