Code No. 9178 研究用 DNA Isolation Reagent for Meat and Meat Products 说明书 v201606da
目 录 内容 页码 制品说明 1 制品内容 1 运输温度 1 保存温度 1 使用注意 1 操作方法 1 实验例 2 各种材料适合添加量一览表 6 Q&A 6
制品说明本试剂是从生肉及其加工品 乳制品中提取 DNA 的专用试剂 本试剂为特别的表面活性剂与吸附 PCR 阻害物质树脂的混合制剂, 可从猪 牛 羊等肌肉组织及牛奶 奶粉 香肠等加工品中简便快速提取 PCR 扩增用 DNA 模板 本试剂具有以下特点 : 1. 操作简便快速, 整体操作只需 25 分钟 2. 可以获得 PCR 扩增用 DNA 3. 使用安全, 无需使用有害溶剂 4. 操作简单, 不容易产生交叉污染 本试剂可应用于检测标准中的样品 DNA 提取, 检测标准为 : GB/T21102-2007( 动物源性饲料中兔源性成分定性检测方法实时荧光 PCR 方法 ) GB/T21103-2007( 动物源性饲料中哺乳动物源性成分定性检测方法实时荧光 PCR 方法 ) SN/T2051-2008( 食品 化妆品和饲料中牛羊猪源性成分检测方法实时 PCR 法 ) 制品内容 Extraction Solution 0.5 ml 50 支 试剂盒之外所需准备器具 微量移液枪 微量 ( 冷却 ) 离心机 (12,000 rpm) Heat Block 或水浴锅 (70 ) 1.5 ml Microtube 运输温度 : 室温 保存温度 : 4 使用注意以下为使用本试剂时的注意事项, 使用前请一定认真阅读 1. 多数样品同时提取时, 注意防止样品间交叉污染 2. 为防止 DNase 混入造成 DNA 分解, 实验操作时请戴实验用手套 口罩 3. 操作时使用的剪刀需要高温干热灭菌 操作方法 1. 取适量的实验材料 ( 参见附表 ), 放入装有 0.5 ml Extraction Solution 试剂的 Microtube 中 2. 如果为固态样品, 需用灭过菌的剪刀将试剂中的样品尽量剪碎, 有助于样品中的 DNA 释放出来, 牛奶等液体样品取 50 μl 加入试剂中, 混合均匀即可 3. 盖紧 Microtube 盖,70 (Heat Block 或水浴锅 ) 加热处理 10 分钟, 加热过程中每隔 2-3 分钟用手轻弹混匀, 有助于 DNA 释放和树脂对阻害物质的吸附 4. 加热后立即进行 4 12,000 rpm 离心 10 分钟, 离心后的 Microtube 中将呈图 1 状态 5. 用移液枪吸取水层, 吸取时注意避免取到表面油脂层 树脂以及组织残渣 ( 见图 2) 6. 通常情况下, 吸取的水层可直接作为 PCR 反应的模板 用于普通 PCR 反应, 加入量为 PCR 反应总体积的 1/10 以下,50 μl PCR 反应体系中一般加入 1-5 μl; 用于 Real Time PCR 反应,25 μl 反应体系中一般加入 1 μl 即可 可根据实际提取状况选择模板的加入量, 用量过多, 会抑制 PCR 反应 如果吸取的水层直接作为 PCR 反应的模板对反应有阻害作用时, 建议再稀释 5-100 倍使用 -1-
移液枪 油脂薄膜 含有 DNA 的水层组织残渣 吸附树脂 油脂薄膜 组织残渣 吸附树脂 实验例 实验例 1: 取新鲜的牛 羊 猪肌肉组织各 10 mg, 使用本试剂按上述操作方法进行 DNA 提取, 制备检测用模板, 分别使用 Code No. RR910/ RR911/ RR912 检测试剂盒 * 对提取的三种 DNA 模板进行验证 * 检测试剂盒 1. Real Time PCR Bovine Detection Kit(Code No. RR910) 2. Real Time PCR Ovine Detection Kit(Code No. RR911) 3. Real Time PCR Porcine Detection Kit(Code No. RR912) 实验结果 图 1 图 2 well sample Name Filter Ct(CP) A5 RR910-H2O - A5 RR910-H2O 19.79 A6 RR911-H2O - A6 RR911-H2O 18.91 A7 RR912-H2O - A7 RR912-H2O 18.73 C5 RR910-Control-Bovine 19.84 C5 RR910-Control-Bovine 19.51 C6 RR911-Control-Ovine 21.11 C6 RR911-Control-Ovine 18.22 C7 RR912-Control-Porcine 19.92 C7 RR912-Control-Porcine 18.59 D5 RR910-Sample-Bovine 23.28 D5 RR910-Sample-Bovine 23.84 D6 RR911-Sample-Bovine - D6 RR911-Sample-Bovine 22.85 D7 RR912-Sample-Bovine - D7 RR912-Sample-Bovine 24.64 E5 RR910-Sample-Ovine - E5 RR910-Sample-Ovine 24.05 E6 RR911-Sample-Ovine 21.07 E6 RR911-Sample-Ovine 22.76 E7 RR912-Sample-Ovine - E7 RR912-Sample-Ovine 23.61 G5 RR910-Sample-Porcine - G5 RR910-Sample-Porcine 23.84 G6 RR911-Sample-Porcine - G6 RR911-Sample-Porcine 23.26 G7 RR912-Sample-Porcine 24.15 G7 RR912-Sample-Porcine 25.13 Site Sample 检测体系 A5 dh2o(negative Control) RR910 体系 A6 dh2o(negative Control) RR911 体系 A7 dh2o(negative Control) RR912 体系 C5 Control DNA for Bovine RR910 体系 C6 Control DNA for Ovine RR911 体系 C7 Control DNA for Porcine RR912 体系 D5 Sample of Bovine RR910 体系 D6 Sample of Bovine RR911 体系 D7 Sample of Bovine RR912 体系 E5 Sample of Ovine RR910 体系 E6 Sample of Ovine RR911 体系 E7 Sample of Ovine RR912 体系 G5 Sample of Porcine RR910 体系 G6 Sample of Porcine RR911 体系 G7 Sample of Porcine RR912 体系 -2-
通道扩增曲线图 通道扩增曲线图 (Y 轴 : 荧光信号值 ;X 轴 : 循环圈数 ) (Y 轴 : 荧光信号值 ;X 轴 : 循环圈数 ) Negative Control Positive Control Sample of Bovine Sample of Ovine RR911 体系 Sample of Porcine RR912 体系 -3-
结果判定 No. 样品样品的动物源性成分判定结果 1 Sample of Bovine 牛源成分 2 Sample of Ovine 羊源成分 3 Sample of Porcine 猪源成分 含有牛源性成分, 不含有羊 猪源性成分或含量低于检测界限 * 含有羊源性成分, 不含有牛 猪源性成分或含量低于检测界限 * 含有猪源性成分, 不含有牛 羊源性成分或含量低于检测界限 * 结果显示, 使用本试剂提取样品 DNA, 每个样品的检测效果良好, 无交叉污染 * 检测结果的判定标准为 : Ct 值 >35 判定为不含有或含量低于检测界限 实验例 2: 取牛奶 (50 μl), 羊肉臊子 (), 猪肉香肠 () 三种加工品, 使用本试剂按上述操作方法进行 DNA 提取, 制备检测用模板, 分别使用 Code No. RR910/ RR911/ RR912 检测试剂盒对提取的三种 DNA 模板进行验证 实验结果 well sample Name Filter Ct(CP) C1 RR910-H2O - C1 RR910-H2O 18.33 D1 RR911-H2O - D1 RR911-H2O 19.41 E1 RR912-H2O - E1 RR912-H2O 19.45 C3 RR910-Control-Bovine 20.44 C3 RR910-Control-Bovine 17.92 D3 RR911-Control-Ovine 20.61 D3 RR911-Control-Ovine 18.07 E3 RR912-Control-Porcine 20.24 E3 RR912-Control-Porcine 18.08 C8 RR910-Sample1 25.97 C8 RR910-Sample1 19.42 D8 RR911-Sample1 - D8 RR911-Sample1 19.48 E8 RR912-Sample1 - E8 RR912-Sample1 19.77 C10 RR910-Sample2 38.10 C10 RR910-Sample2 19.63 D10 RR911-Sample2 19.74 D10 RR911-Sample2 19.17 E10 RR912-Sample2 - E10 RR912-Sample2 19.12 C12 RR910-Sample3 - C12 RR910-Sample3 18.75 D12 RR911-Sample3 - D12 RR911-Sample3 19.00 E12 RR912-Sample3 24.26 E12 RR912-Sample3 18.59 Site Sample 检测体系 C1 dh2o(negative Control) RR910 体系 D1 dh2o(negative Control) RR911 体系 E1 dh2o(negative Control) RR912 体系 C3 Control DNA for Bovine RR910 体系 D3 Control DNA for Ovine RR911 体系 E3 Control DNA for Porcine RR912 体系 C8 Sample 1( 牛奶 ) RR910 体系 D8 Sample 1( 牛奶 ) RR911 体系 E8 Sample 1( 牛奶 ) RR912 体系 C10 Sample 2( 羊肉臊子 ) RR910 体系 D10 Sample 2( 羊肉臊子 ) RR911 体系 E10 Sample 2( 羊肉臊子 ) RR912 体系 C12 Sample 3( 猪肉香肠 ) RR910 体系 D12 Sample 3( 猪肉香肠 ) RR911 体系 E12 Sample 3( 猪肉香肠 ) RR912 体系 -4-
通道扩增曲线图 通道扩增曲线图 (Y 轴 : 荧光信号值 ;X 轴 : 循环圈数 ) (Y 轴 : 荧光信号值 ;X 轴 : 循环圈数 ) Negative Control Positive Control Sample1( 牛奶 ) 的扩增曲线 RR910 体系 Sample2( 羊肉臊子 ) 的扩增曲线 RR911 体系 RR910 体系 Sample3( 猪肉香肠 ) 的扩增曲线 RR912 体系 -5-
结果判定 No. 样品产品标识的动物源性成分判定结果 1 Sample1( 牛奶 ) 牛源成分 2 Sample2( 羊肉臊子 ) 羊源成分 3 Sample3( 猪肉香肠 ) 猪源成分 含有牛源性成分, 不含有羊 猪源性成分或含量低于检测界限 * 含有羊源性成分, 不含有牛 猪源性成分或含量低于检测界限 * 含有猪源性成分, 不含有牛 羊源性成分或含量低于检测界限 * 结果显示, 使用本试剂提取样品 DNA, 每个样品的检测效果良好, 无交叉污染 * 检测结果的判定标准为 : Ct 值 >35 判定为不含有或含量低于检测界限 各种材料合适添加量一览表 各种材料合适添加量 Sample 鲜肉组织牛奶酱牛肉奶粉手抓羊肉牛肉干猪肉脯清蒸猪肉罐头猪肉松腊肠 取样量 10 mg 50 μl 30 mg 10 mg Q&A Q1: 能否进行 RNA 回收? A1: 本制品是 DNA 回收专用试剂, 不能进行 RNA 回收 Q2: 一般可以回收多少量的水层溶液? A2: 通常可以回收 200 μl~300 μl 的水层溶液 Q3: 回收的 DNA 能否用分光光度计进行定量? A3: 本制品不是核酸纯化试剂, 是 DNA 的粗提试剂, 因此不建议用 UV 分光光度计进行 DNA 定量 Q4: 回收的 DNA 是否可以通过电泳进行确认? A4: 因回收的 DNA 量少, 往往不能用电泳进行确认 Q5: 提取的 DNA 可以保存多长时间? A5: 我们曾经在 4 中保存过 3 个月, 在 -20 中保存过一年 Q6: 如果吸取的水层直接作为 PCR 反应的模板对反应有阻害作用, 如何处理? A6: 建议稀释 5-100 倍使用 -6-
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