王军淋 等 超高效液相色谱 大体积流通池荧光法检测奶及奶制品中的黄曲霉毒素 Ｍ １ 第２期 １９５ 左 １ 为国标法 经典提取法 提取 其余为乙腈法提取 从左到右依次为 ｍ 牛奶 Ｖ 乙腈 １ ０ １ １ １ ２ １ ３ １ ４ １ ５ Ｔ ｈｅ ｌｅｆ ｔ ｏｎｅ ｗ ａｓ ｅｘ ｔ ｒａｃｔｅｄ ｂｙ ｎａｔｉｏｎａｌ ｓｔａｎｄａｒｄ ｍｅｔｈｏｄ ｃｌａｓｓｉｃａｌ ｅｘ ｔｒａｃｔｉｏｎ ｍｅｔ ｈｏｄ ｔ ｈｅ ｏｔ ｈｅｒｓ ｗ ｅｒｅ ｅｘ ｔ ｒａｃｔｅｄ ｂｙ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｒａｔｉｏｓ ｏｆ ｍｉｌｋ ｔｏ ａｃｅｔｏｎｉｔ ｒｉｌｅ Ｆｒｏ ｍ ｌｅｆ ｔ ｔｏ ｒｉｇ ｈｔ ｔｈｅ ｒａｔｉｏｓ ｏｆ ｍｉｌｋ ｔｏ ａｃｅｔｏｎｉｔｒｉｌｅ ｗ ｅｒｅ １ ０ １ １ １ ２ １ ３ １ ４ １ ５ ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ 图 ３ 乙腈提取法与国标法离心后的效果比较 Ｆｉｇ ３ 表２ Ｔ ａｂｌｅ ２ Ｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙ ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｏｆ ａｃｅｔｏｎｉｔ ｒｉｌｅ ｅｘ ｔｒａｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｎａｔｉｏｎａｌ ｓｔａｎｄａｒｄ ｍｅｔｈｏｄ ａｆ ｔｅｒ ｃｅｎｔｒｉｆ ｕｇａｔｉｏｎ 乙腈提取法与国标法检测灵敏度及阳性样品检测结果比较 Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ ａｎｄ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｒｅｓｕｌｔ ｏｆ ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｓａｍｐｌｅｓ ｅｘ ｔｒａｃｔｅｄ ｂｙ ａｃｅｔｏｎｉｔ ｒｉｌｅ ａｎｄ ｎａｔｉｏｎａｌ ｓｔａｎｄａｒｄ ｍｅｔｈｏｄｓ 提取法 Ｅｘ ｔ ｒａｃｔｉｏｎ ｍｅｔｈｏｄｓ １ ４ ６ ｗ 阳性样品 Ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｓａｍｐｌｅ ｃｏｎｔｅｎｔ μ ｇ ｋｇ 乙腈提取法 Ａｃｅｔｏｎｉｔｒｉｌｅ ｅｘ ｔｒａｃｔｉｏｎ ｍｅｔ ｈｏｄ １ ０４ ± ０ ０２ １ ２ ５ １ １ １ ０１ ± ０ ０１ ０ ８１ ± ０ ０２ 国标法 Ｎａｔｉｏｎａｌ ｓｔａｎｄａｒｄ ｍｅｔ ｈｏｄ １ ０ ０ ５４ ± ０ ０２ ｍ 牛奶 Ｖ 乙腈 １ ４ ６ １ ２ ５ １ １ １ ０ ２畅 ４ Ｒａｔｉｏｓ ｏｆ ｍｉｌｋ ｔｏ ａｃｅｔｏｎｉｔ ｒｉｌｅ ｉｎ ｍａｓｓ ｔｏ ｖｏｌｕｍｅ ａｒｅ １ ４ ６ １ ２ ５ １ １ １ ０ ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ 线性关系 以 ０ １ ０ ２ ０ ５ ０ ８ １ ０ １ ５ 和 ２ ０ ｎｇ ｍｌ 黄曲 霉毒素 Ｍ１ 为标准 在给定条件下进行 ＵＰＬＣ 分析 以 峰面积为 Ｙ 轴 浓度为 Ｘ 轴作校准曲线 黄曲霉毒素 Ｍ１ 检测方法的线性回归方程为 Ｙ ６ ２０ １０ Ｘ ２ ０３ ５ １０ 线性范围为 ０ １ ２ ０ ｎｇ ｍｌ Ｒ ０ ９９９ ６ ２畅 ５ 加标回收率及精密度 向空白牛奶样品中添加不同质量分数的黄曲霉 毒素 Ｍ １ 每个添加量做 ３ 个平行 黄曲霉毒素 Ｍ １ ４ ２ 表３ Ｔ ａｂｌｅ ３ 的平均回收率在 ８１ ９５ ９４ ２０ 之间 精密度 即相对标准偏差 为 ４ ６１ ７ ９８ 表 ３ 取阳 性样品做日内精密度 ｎ ５ 及日间精密度 ｎ ５ 实验表 明 日 内 精 密 度 为 ３ ４４ 日 间 精 密 度 为 ４ ５０ ２畅 ６ 实际样品测定 用本文所建立的方法对我国某地区 某个时间 段的 ９ 份牛奶样品进行检测表明 黄曲霉毒素 Ｍ １ 的检出率为 １００ 表 ４ 超标率为 ５５ ５６ 牛奶样品黄曲霉毒素 Ｍ１ 的加标回收率和精密度 Ｒｅｃｏｖｅｒｙ ｒａｔｅ ａｎｄ ｐｒｅｃｉｓｉｏｎ ｏｆ ａｆｌａｔｏｘｉｎ Ｍ １ ｉｎ ｍｉｌｋ ｓａｍｐｌｅｓ 添加量 测定值 相对标准偏差 平均回收率 Ｓｐｉｋｅｄ ｌｅｖｅｌ μ ｇ ｋｇ Ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｖａｌｕｅ μ ｇ ｋｇ Ｒｅｌａｔｉｖｅ ｓｔａｎｄａｒｄ ｄｅｖｉａｔｉｏｎ Ｍ ｅａｎ ｒｅｃｏｖｅｒｙ ｒａｔｅ ０ ５ ０ ４１ ± ０ ０３ ６ ６４ ８２ ６４ ０ ２ ｎ ３ １ ０ 表４ Ｔ ａｂｌｅ ４ ０ １９ ± ０ ０２ ７ ９８ ０ ８２ ± ０ ０４ ４ ６１ ９４ ２０ ８１ ９５ 实际样品中黄曲霉毒素 Ｍ１ 的检测结果 Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｒｅｓｕｌｔｓ ｏｆ ａｆｌａｔｏｘｉｎ Ｍ １ ｉｎ ｒｅａｌ ｓａｍｐｌｅｓ 样品号 Ｓａｍｐｌｅ ｎｕｍｂｅｒ １ ２ ３ ４ ５ ６ ７ ８ ９ ｗ 黄曲霉毒素 Ｍ １ Ａｆｌａｔｏｘｉｎ Ｍ １ ｃｏｎｔｅｎｔ μ ｇ ｋｇ １ ２６ ０ １２ ０ ７９ ０ １２ ０ ６７ ０ ５８ ０ ４８ ０ ０３ ０ ６２ ３ 结论 本研究用乙腈对样品中的黄曲霉毒素 Ｍ １ 进行 提取 可以有效地沉淀样品中的蛋白质 从而得到澄 清的提取液 在过免疫亲和柱净化时 只需利用溶液 自身重力作用即能过柱 解决了国标法中直接过柱 易堵塞的问题 提高了提取效率 缩短了前处理时 间 对超高效液相色谱系统分离条件的优化 大大缩 短了分析时间 减少了有毒溶剂使用量 同时 采用