６年 ７月 第 卷 第 ４期 Ｊ ＯＵＲＮＡＬＯＦＬＩ ＧＨＴＩ ＮＤＵＳ ＴＲＹ Ｖ Ｎ ４Ｊ ６ ４４ 引用格式 任晗 刘宇红 孟宏 等荆芥复方提取液的抗敏功效研究 Ｊ 轻工学报 ６ ４ ４４ ４ ８ 中图分类号 ＴＱ６ 文献标识码 Ａ ＤＯＩ ９６ ９ ９ ６ ６ ４ ６ 文章编号 ９６ ６ ４ ４ ４ 荆芥复方提取液的抗敏功效研究 Ｓ ｄｙ ｙ ｙ Ｎ 任晗 刘宇红 孟宏 董银卯 ＲＥＮＨ ｋ ＬＩ ＵＹ ｈ ＭＥＮＧＨ ＤＯＮＧＹ ｍ 北京工商大学 中国化妆品协同创新中心 北京 ４８ Ｃｈ Ｃ ｍ Ｃ ｂ Ｉ Ｃ Ｂ Ｔ ｈ ｙ ｄｂ Ｕ ｙ Ｂ ４ ８ Ｃｈ 关键词 荆芥 复方提取液 抗 敏功效 动物实验 Ｋ ｙｗ ｄ Ｎ ｙ ｙ ｍ 摘要 采用水提取法制备出荆芥复方提取液 生药的质量浓度 ｍｌ 通 过样品对豚鼠皮肤瘙痒模型的体内止痒实验 大鼠被动皮肤过敏模型的抗敏作 用实验和豚鼠皮肤脱水模型的皮肤修复作用实验 评估荆芥复方提取液在动物 水平上的抗敏功效实验结果表明 在 ｗ 受试浓度下 磷酸组胺致痒阈达 ４± μ 在 ｗ 受试浓度下 毛细血管通透性降低率为 在 ｗ 受试浓度下 敏后肌肤水分散失保护率为 ８ 这说明荆芥复方提取 液在动物水平上具有良好的止痒 消肿及敏后修复功效 收稿日期 ６ ４ 作者简介 任晗 ９ ８ ９ 男 安徽省马鞍山市人 北京工商大学工程师 主要研究方向为功能型化妆品植物功效原料
任 晗, 等 : 荆 芥 复 方 提 取 液 的 抗 敏 功 效 研 究 45 Abstract:NepetacatariaprescriptionswereextractedwithdistiledwaterandthemasconcentrationofNepeta catariaintheextractwas0.05g/ml.theanimalmodelsofanti pruritus,pasivecutaneousanaphylaxis (PCA)anddehydratedskinofguineapigafteralergywereappliedtostudyrelieveitching,detumescenceand alergicskinrepairactivityoftheactiveextraction.resultsshowedthattheextractsofnepetacatariaprescrip tionswithmasconcentrationof0.5wt% couldsignificantlymitigatedtheamountofthehistaminephosphate andrunupthethresholdofitchat(154±31)μg.further,vascularpermeabilityby15.5% withmascon centrationof2.0wt% andtheprotectionrateofwaterdispersioninalergicskinwas18% withmasconcen trationof0.5wt%.meanwhile,theextractofnepetacatariaprescriptionsincream matrixalsocouldpromote relieveitching,eliminatetherednesofredandmoisturizethealergicskininclinicalevaluation. 0 引 言 随 着 人 们 生 活 节 奏 的 加 快 工 作 压 力 的 增 大 及 饮 食 结 构 的 变 化, 过 敏 性 体 质 人 群 快 速 增 长. 据 不 完 全 统 计, 过 敏 病 患 已 占 世 界 人 口 2/5 [1], 在 全 球 范 围 内, 自 我 感 觉 为 过 敏 性 肌 肤 的 人 数 越 来 越 多, 皮 肤 过 敏 已 经 成 为 影 响 人 类 健 康 的 社 会 问 题, 也 是 学 者 们 研 究 的 热 点 问 题, 开 发 一 款 绿 色 天 然 安 全 且 具 有 良 好 抗 过 敏 功 效 的 植 物 原 料 化 妆 品 意 义 深 远. 从 天 然 植 物 中 寻 找 低 毒 高 效 安 全 经 济 的 抗 过 敏 添 加 剂, 可 避 免 化 学 合 成 制 剂 制 作 成 本 高 不 良 反 应 大 的 缺 点, 是 功 能 食 品 及 功 能 化 妆 品 领 域 重 要 的 研 究 方 向 [1]. 中 医 理 论 认 为, 禀 赋 不 耐 湿 热 毒 邪 易 造 成 皮 肤 敏 感 瘙 痒 红 肿 脆 弱 等 一 系 列 问 题 [2-3]. 荆 芥 复 方 按 君 臣 佐 使 配 伍 原 则, 纳 荆 芥 祛 邪 行 风 之 功 取 藤 茶 清 热 解 毒 之 效 蕴 苦 参 祛 热 燥 湿 之 力 收 麦 冬 和 黄 芪 固 本 调 和 之 益, 其 提 取 液 具 有 良 好 的 抗 敏 功 效. 本 文 拟 从 内 在 机 理 出 发, 通 过 动 物 实 验 平 台 研 究 荆 芥 复 方 提 取 液 在 抗 敏 方 面 的 功 效, 为 其 在 化 妆 品 中 的 应 用 提 供 理 论 依 据. 1 材 料 与 方 法 1.1 材 料 和 仪 器 主 要 材 料 : 苦 参 藤 茶 荆 芥 麦 冬 和 黄 芪, 中 药 饮 片, 安 国 市 盛 泰 中 药 饮 片 有 限 公 司 产 ; 健 康 豚 鼠 ( 体 重 (250±10)g),SD 大 鼠 ( 体 重 (180±10)g), 均 为 SPF/VAF 级, 雌 雄 各 半, 由 北 京 金 牧 阳 实 验 动 物 养 殖 有 限 责 任 公 司 提 供. 主 要 试 剂 : 丙 酮 乙 醚, 均 为 分 析 纯, 北 京 化 工 厂 产 ; 磷 酸 组 胺 二 硝 基 苯 酚 单 克 隆 抗 体 (anti DNPIgE) 二 硝 基 酚 - 人 血 清 白 蛋 白 (DNP HAS) 伊 文 思 蓝, 均 为 生 化 试 剂, 美 国 Sigma 公 司 产. 主 要 仪 器 :CM825 型 皮 肤 含 水 量 检 测 仪, 德 国 CK 公 司 产 ;FI-01620 型 酶 标 仪, 美 国 Thermo 公 司 产 ;PL1001-L 型 电 子 天 平, 瑞 士 MetlerToledo 公 司 产. 1.2 方 法 1.2.1 荆 芥 复 方 提 取 液 的 制 备 根 据 传 统 中 医 组 方 思 想, 按 照 质 量 比 2 1 2 1 1 比 例 称 取 苦 参 藤 茶 荆 芥 麦 冬 和 黄 芪 5 味 中 药 共 100g, 加 入 20 倍 95%(v/v) 乙 醇 进 行 热 回 流 提 取 2h, 过 滤, 除 去 滤 渣, 滤 液 经 减 压 浓 缩 除 去 全 部 乙 醇 后, 加 入 与 乙 醇 投 料 量 相 同 质 量 的 1,3- 丁 二 醇 进 行 复 溶, 得 到 荆 芥 复 方 提 取 液, 生 药 的 质 量 浓 度 为 0.05g/mL. 1.2.2 体 内 止 痒 功 效 实 验 采 用 磷 酸 组 胺 致 痒 法 制 作 过 敏 性 瘙 痒 模 型 [4]. 取 豚 鼠 30 只, 雌 雄 各 15 只, 于 实 验 前 1d 右 后 足 背 剃 毛, 去 毛 面 积 约 2cm 2. 将 豚 鼠 随 机 分 成 5 组, 即 模 型 对 照 组 样 品 0.5wt% 浓 度 组 样 品 1.0wt% 浓 度 组 样 品 2.0wt% 浓 度 组 样 品 5.0wt% 浓 度 组. 连 续 2d 于 去 毛 处 分 别 按 照 0.1g/cm 2 的 剂
46 量 均 匀 涂 抹 相 应 受 试 物 ; 模 型 对 照 组 涂 抹 等 容 积 生 理 盐 水. 实 验 第 3d, 称 取 磷 酸 组 胺 适 量, 临 用 前 以 生 理 盐 水 配 成 0.01% (w/v),0.02% (w/v),0.03% (w/v),0.04% (w/v),0.05% (w/v),0.06% (w/v),0.07% (w/v),0.08% (w/v),0.09%(w/v),0.10%(w/v) 梯 度 浓 度 溶 液 备 用. 用 粗 砂 纸 将 豚 鼠 右 后 足 背 去 毛 处 擦 伤, 面 积 约 1cm 2, 局 部 再 涂 样 品 1 次,10min 后 在 擦 伤 处 滴 0.01% (w/v) 磷 酸 组 胺 0.05mL, 观 察 3min 内 是 否 出 现 豚 鼠 回 头 舔 右 后 足 行 为, 如 未 出 现, 在 擦 伤 处 继 续 滴 0.02%(w/v) 磷 酸 组 胺 0.05mL, 观 察 3min 内 是 否 有 添 足 行 为. 以 后 每 隔 3min 按 上 述 梯 度 递 增 浓 度, 每 次 均 在 擦 伤 处 滴 磷 酸 组 胺 溶 液 0.05mL, 直 到 出 现 豚 鼠 回 头 舔 右 后 足. 以 此 时 所 滴 取 的 磷 酸 组 胺 累 计 总 量 为 致 痒 阈, 计 算 各 组 致 痒 阈 并 比 较 组 间 此 项 指 标 的 差 异 性. 1.2.3 被 动 皮 肤 过 敏 实 验 被 动 皮 肤 超 敏 反 应 PCA(PasiveCutaneousAnaphylaxis) 是 利 用 与 同 种 或 异 种 动 物 组 织 有 结 合 性 的 抗 体 所 引 起 的 局 部 过 敏 反 应, 来 检 验 抗 体 或 抗 原 的 高 敏 感 度 的 方 法 [5-6]. 本 文 通 过 研 究 荆 芥 复 方 提 取 液 对 PCA 的 影 响, 探 讨 其 抗 I 型 超 敏 反 应 的 作 用 效 果. 取 大 鼠 70 只, 雌 雄 各 半, 室 温 环 境 下 分 笼 饲 养, 自 由 取 食 及 摄 水, 适 应 性 饲 养 5d 后 按 体 重 随 机 分 为 7 组, 分 别 为 空 白 对 照 组 模 型 对 照 组 阴 性 对 照 组 ( 样 品 溶 剂 ) 样 品 0.5wt% 浓 度 组 样 品 1.0wt% 浓 度 组 样 品 2.0wt% 浓 度 组 样 品 5.0wt% 浓 度 组, 每 组 10 只. 背 部 剃 毛 后, 除 空 白 对 照 组 外, 其 余 各 组 大 鼠 背 部 选 取 3 个 点, 每 两 点 间 距 约 为 1.5cm, 每 点 皮 下 注 射 anti DNPIgE0.5μg.48h 后, 各 组 大 鼠 尾 静 脉 注 射 含 有 4% 伊 文 思 蓝 的 DNP HAS100μg. 在 尾 静 脉 注 射 DNP HAS 前 1h, 在 给 药 各 组 大 鼠 背 部, 以 注 射 anti DNPIgE 的 点 为 中 心, 每 点 涂 2016 年 7 月 第 31 卷 第 4 期 抹 2cm 2 面 积 的 相 应 药 物. 样 品 组 大 鼠 按 照 0.1g/(2cm 2 ) 剂 量 局 部 皮 肤 涂 抹 给 药. 静 脉 注 射 DNP HAS30min 后 处 死 大 鼠. 剪 下 背 部 注 射 点 区 域 蓝 染 皮 肤, 使 用 1 1(v/v) 丙 酮 - 生 理 盐 水 混 合 溶 液 浸 泡 24h, 离 心 取 上 清, 用 酶 标 仪 于 620nm 处 检 测 吸 光 值. 使 用 伊 文 思 蓝 溶 液 制 作 标 准 曲 线, 计 算 每 只 大 鼠 背 部 皮 肤 染 料 含 量 并 比 较 组 间 此 项 指 标 的 差 异 性. 1.2.4 敏 后 皮 肤 修 复 实 验 敏 后 皮 肤 修 复 实 验 借 助 皮 肤 脱 水 模 型, 测 定 样 品 对 皮 肤 含 水 量 的 影 响, 以 评 价 样 品 对 过 敏 皮 肤 的 修 复 功 效. 取 豚 鼠 42 只, 于 实 验 前 1d 颈 背 部 剃 毛, 面 积 约 为 2cm 2cm, 随 机 分 成 7 组 : 空 白 对 照 组 模 型 对 照 组 阴 性 对 照 组 ( 样 品 溶 剂 ) 样 品 0.5wt% 浓 度 组 样 品 1.0wt% 浓 度 组 样 品 2.0wt% 浓 度 组 样 品 5.0wt% 浓 度 组. 除 了 空 白 对 照 组 豚 鼠, 其 余 各 组 取 丙 酮 乙 醚 =1 1 (v/v) 混 合 液 150μL 滴 于 去 毛 处,10min 后 分 别 取 相 应 样 品 涂 抹 于 去 毛 部 位, 每 天 两 次, 连 续 5d, 空 白 对 照 组 和 模 型 对 照 组 豚 鼠 用 蒸 馏 水 涂 抹 于 去 毛 处. 于 第 5d 涂 抹 样 品 20min 后 使 用 水 分 含 量 测 定 仪 测 量 豚 鼠 脱 毛 处 皮 肤 含 水 量, 比 较 组 间 此 项 指 标 的 差 异, 并 计 算 水 分 散 失 保 护 率. 水 分 散 失 保 护 率 = ( 用 药 组 皮 肤 含 水 量 - 模 型 组 皮 肤 含 水 量 )/ 空 白 对 照 组 皮 肤 含 水 量 100% 1.2.5 实 验 数 据 的 统 计 分 析 在 分 析 样 品 组 与 对 照 组 之 间 各 项 指 标 的 差 别 时, 采 用 SPSS 17.0Dunnet t 检 验, 选 定 显 著 性 水 平 P<0.05 或 P<0.01. 2 结 果 与 讨 论 2.1 荆 芥 复 方 提 取 液 体 内 止 痒 功 效 机 体 发 生 过 敏 性 疾 病 或 产 生 炎 症 时, 肥 大 细 胞 中 作 为 化 学 传 递 物 质 的 组 胺 起 着 重 要 作
４７ 任晗 等 荆芥复方提取液的抗敏功效研究 用 ７ 痒是皮肤过敏反应的一个症状 亦与局部 用荆芥复方提取液局部处理发生 Ｉ型过敏 肥大细胞释放组胺有关 因此可利用外源性组 反应并含有蓝色染料的大鼠皮肤 通过抗敏功 胺诱导释放内源性组胺致动物皮肤瘙痒模型来 效达到抑制毛细血管通透性的作用 从而降低 检测样品使动物耐受组胺的能力 进而评价样 局部皮肤的蓝色染料含量 使用分光光度法计 品的止痒和抗敏功效样品的抗敏功效可以通 算每只大鼠背部皮肤染料含量并比较此项指标 过磷酸组胺致痒阈得到直观反映 阈值越高 说 组间的差异性图 给出不同浓度荆芥复方提 明抗敏效果越好 取液对大鼠 ＰＣＡ的影响模型组 伊文思蓝含 不同浓度荆芥复方提取液磷酸组胺致痒豚 量为 ± μ ｍｌ 与空白组 伊文思蓝含 鼠的致痒阈见图 由图 可见 使用受试品涂 量为 ４± μ ｍｌ 呈 极 显 著 差 异 Ｐ 抹致痒部位后 所有浓度荆芥复方提取液均可 建模成功 显著提高豚鼠磷酸组胺致痒阈 与模型对照组 比较有显著性差异 Ｐ 且致痒阈与荆 芥复方提取液浓度呈正比用 ｗ 荆芥复 方提取液处理豚鼠后 阈值极显著高于模型对 照组 Ｐ 达 ４± μ 在样品浓度 为 ｗ 时 致痒阈为 ９± μ 说明荆 芥复方提取液能够显著抑制组胺的释放及致痒 作用 显示出其在抗敏 止痒功效上的潜力 图 不同浓度荆芥复方提取液 对大鼠 ＰＣＡ的影响 Ｆ Ｉ ＰＣＡ ｄ 由图 可知 荆芥复方提取液可显著降低 过敏反应时大鼠皮肤毛细血管通透性 有效缓 解 过 敏 症 状 且 与 质 量 浓 度 呈 正 相 关 图 不同液度荆芥复方提取液磷酸组胺致痒阈 ｗ ｗ 时与阴性对照组相比均具有 Ｆ Ｔｈ Ｎ 显著性差异 Ｐ ｗ 浓度组大鼠皮 ｈ 肤中蓝色染料含量最低 仅为 ８７μ ｍｌ 较阴 ｄ 性对照组降低 ４ ｗ 浓度组大鼠皮 肤中蓝色染料含量为 ９ μ ｍｌ 较阴性对照组 荆芥复方提取液对大鼠 ＰＣＡ的影响 通过 ＰＣＡ模型来研究活性物的抗敏功效 抗体和抗原结合发生 Ｉ型超敏反应 引发局部 降低 这 显 示 出 荆 芥 复 方 提 取 液 在 祛 红 消肿功效上的潜力 荆芥复方提取液对敏后皮肤修复的影响 毛细血管通透性显著增加 出现红肿等过敏症 皮肤屏障因过敏反应受到损伤 皮肤水分 状在大鼠体内模拟这一过程 是目前较理想的 会大量流失为研究荆芥复方提取液是否具有 体内研究活性物抗敏功效的方法 敏后修复 固护屏障的功效 在体内评估其对豚
４８ ６年 ７月 第 卷 第 ４期 鼠皮肤敏后保持含水量能力的影响不同浓度 敏后皮肤修复功效三方面研究了荆芥复方提取 荆芥复方提取液对豚鼠敏后皮肤修复的影响见 液的抗敏功效荆芥复方提取液能够增加磷酸 图 模型组 水含量为 ± 与空白组 组胺致痒阈 有效增强皮肤耐受性 止痒功效显 水 含 量 为 ± 呈 极 显 著 差 异 Ｐ 著 荆芥复方提取液还可以降低过敏皮肤的毛 建模成功 细血管通透性 具有祛红 消肿的功效 此外 荆 芥复方提取液可以提高敏后皮肤水分散失保护 率 达到修复皮肤 固护屏障的效果 参考文献 董银卯萌芽绿豆抗敏抗氧化活性物质分析 及其作用机制研究 Ｄ 哈尔滨 哈尔滨工业 大学 ４ 薛素琴治疗慢性湿疹新药消炎止痒凝胶的 图 不同浓度荆芥复方提取液对 豚鼠敏后皮肤修复的影响 Ｆ Ｉ ｋ ｄ ９ 开发研究 Ｄ 广州 广州中医药大学 金云隆中药抗过敏实验刍议 Ｊ 中国中医 ９ 药现代远程教育 ４ ＺＨＡＮＧＷ ＭＡＤ ＺＨＡＯＱ Ｔｈ ｈｍ ｍ ｄ 由图 可知 荆芥复方提取液可显著降低 过敏反应时豚鼠皮肤的水分散失保护率 有效 修复 皮 肤 屏 障 且 与 质 量 浓 度 呈 正 相 关 Ｊ Ａ ｄ ｂ Ｊ Ｍ ｄ Ｓ ｄ 高天红 朴晋华 王婷婷鱼金注射液被动皮 ｗ 质量浓度时 敏后肌肤水分散失保护 肤过敏试验及对血清 Ｉ Ｅ的影响 Ｊ 山西医 率为 ８ 与阴性对照组相比即具有极显著性 ４ ６ ４７ ７ 科大学学报 差异 Ｐ 表明荆芥复方提取液具有良 好的敏后皮肤修复功效 结论 通过动物实验平台 从体内止痒功效 ＰＣＡ ６ 张信岳 陈爱君 李钦 等绿原酸主动全身过 敏与被动皮肤过敏的实验研究 Ｊ 中国中医 药科技 ８ ７ ７ 陈小文 杨慧 刘玉琳Ｉ Ｌ ８与过敏性疾病 Ｊ 生命的化学 ７ ７ ４４