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EK-Bioscience Biotechnology Co., Ltd. Shanghai enzyme research This kit is for in vitro research use, not for clinical diagnosis! ( 本 试 剂 盒 仅 供 体 外 研 究 使 用, 不 用 于 临 床 诊 断!) 人 胰 岛 素 (INS) 酶 联 免 疫 分 析 试 剂 盒 Human(INS)ELISA Kit CAS.NO:Ek-H11985 声 明 : 尊 敬 的 客 户, 感 谢 您 选 用 本 公 司 的 产 品 本 试 剂 盒 用 于 测 定 人 血 清 血 浆 及 相 关 液 体 样 本 中 胰 岛 素 (INS) 含 量 使 用 前 请 仔 细 阅 读 说 明 书 并 检 查 试 剂 组 分! 如 有 疑 问, 请 及 时 联 系 我 们 试 剂 盒 组 成 : 中 文 名 称 English name 96T/48T 含 量 保 存 ELISA 酶 标 板 ( 可 拆 卸 ) Microelisa stripplate 8 12 / 8 6 * 2-8 标 准 品 (160 ng/ml) Standard 1 瓶 0.5ml * 2-8 标 准 品 稀 释 液 Standard diluent 1 瓶 1.5ml * 2-8 酶 标 试 剂 HRP-Conjugate reagent 1 瓶 6 ml/3ml * 2-8 样 品 稀 释 液 Sample diluent 1 瓶 6 ml/3ml * 2-8 显 色 剂 A 液 Chromogen Solution A 1 瓶 6 ml/3ml * 2-8 显 色 剂 B 液 Chromogen Solution B 1 瓶 6 ml/3ml * 2-8 终 止 液 Stop Solution 1 瓶 6 ml/3ml * 2-8 浓 缩 洗 涤 液 wash solution 1 瓶 20ml * 2-8 说 明 书 Instruction 1 份 * 封 板 膜 Closure plate membrane 2 片 * 密 封 袋 Sealed bags 1 个 * 实 验 原 理 本 试 剂 盒 应 用 双 抗 体 夹 心 法 测 定 标 本 中 人 胰 岛 素 (INS) 水 平 用 纯 化 的 人 胰 岛 素 (INS) 抗 体 包 被 微 孔 板, 制 成 固 相 抗 体, 往 包 被 单 抗 的 微 孔 中 依 次 加 入 胰 岛 素 (INS), 再 与 HRP 标 记 的 胰 岛 素 (INS) 抗 体 结 合, 形 成 抗 体 - 抗 原 - 酶 标 抗 体 复 合 物, 经 过 彻 底 洗 涤 后 加 底 物 TMB 显 色 TMB 在 HRP 酶 的 催 化 下 转 化 成 蓝 色, 并 在 酸 的 作 用 下 转 化 成 最 终 的 黄 色 颜 色 的 深 浅 和 样 品 中 的 胰 岛 素 (INS) 呈 正 相 关 用 酶 标 仪 在 450nm 波 长 下 测 定 吸 光 度 (OD 值 ), 通 过

标 准 曲 线 计 算 样 品 中 人 胰 岛 素 (INS) 浓 度 标 本 要 求 1. 血 清 : 室 温 血 液 自 然 凝 固 10-20 分 钟 后, 离 心 20 分 钟 左 右 (2000-3000 转 / 分 ) 仔 细 收 集 上 清 保 存 过 程 中 如 有 沉 淀 形 成, 应 再 次 离 心 2. 血 浆 : 应 根 据 标 本 的 要 求 选 择 EDTA 柠 檬 酸 钠 或 肝 素 作 为 抗 凝 剂, 混 合 10-20 分 钟 后, 离 心 20 分 钟 左 右 (2000-3000 转 / 分 ) 仔 细 收 集 上 清 保 存 过 程 中 如 有 沉 淀 形 成 应 再 次 离 心 3. 尿 液 : 用 无 菌 管 收 集 离 心 20 分 钟 左 右 (2000-3000 转 / 分 ) 仔 细 收 集 上 清 保 存 过 程 中 如 有 沉 淀 形 成, 应 再 次 离 心 胸 腹 水 脑 脊 液 参 照 此 实 行 4. 细 胞 培 养 上 清 : 检 测 分 泌 性 的 成 份 时, 用 无 菌 管 收 集 离 心 20 分 钟 左 右 (2000-3000 转 / 分 ) 仔 细 收 集 上 清 5. 培 养 细 胞 : 检 测 细 胞 内 的 成 份 时, 用 PBS(PH7.2-7.4) 稀 释 细 胞 悬 液, 细 胞 浓 度 达 到 100 万 /ml 左 右 通 过 反 复 冻 融 或 加 入 组 织 蛋 白 萃 取 试 剂, 以 使 细 胞 破 坏 并 放 出 细 胞 内 成 份 离 心 20 分 钟 左 右 (2000-3000 转 / 分 ) 仔 细 收 集 上 清 保 存 过 程 中 如 有 沉 淀 形 成, 应 再 次 离 心 6. 组 织 标 本 : 切 割 标 本 后, 称 取 重 量 加 入 一 定 量 的 PBS,PH7.4 用 液 氮 迅 速 冷 冻 保 存 备 用 标 本 融 化 后 仍 然 保 持 2-8 的 温 度 加 入 一 定 量 的 PBS(PH7.4), 或 组 织 蛋 白 萃 取 试 剂, 用 手 工 或 匀 浆 器 将 标 本 匀 浆 化 离 心 20 分 钟 左 右 (2000-3000 转 / 分 ) 仔 细 收 集 上 清 分 装 后 一 份 待 检 测, 其 余 冷 冻 备 用 7. 标 本 采 集 后 尽 早 进 行 提 取, 提 取 按 相 关 文 献 进 行, 提 取 后 应 尽 快 进 行 实 验 若 不 能 马 上 进 行 试 验, 可 将 标 本 放 于 -20 保 存, 但 应 避 免 反 复 冻 融 8. 不 能 检 测 含 NaN3 的 样 品, 因 NaN3 抑 制 辣 根 过 氧 化 物 酶 的 (HRP) 活 性 试 验 所 需 自 备 物 品 : 1. 酶 标 仪 (450nm 波 长 滤 光 片 ) 2. 高 精 度 移 液 器,EP 管 及 一 次 性 吸 头 3. 37 恒 温 箱, 双 蒸 水 或 去 离 子 水 4. 吸 水 纸 操 作 步 骤 1. 标 准 品 的 稀 释 : 本 试 剂 盒 提 供 原 倍 标 准 品 一 支, 用 户 可 按 照 下 列 图 表 在 小 试 管 中 进 行 稀 释 80ng/ml 5 号 标 准 品 150μl 的 原 倍 标 准 品 加 入 150μl 标 准 品 稀 释 液 40ng/ml 4 号 标 准 品 150μl 的 5 号 标 准 品 加 入 150μl 标 准 品 稀 释 液 20ng/ml 3 号 标 准 品 150μl 的 4 号 标 准 品 加 入 150μl 标 准 品 稀 释 液 10ng/ml 2 号 标 准 品 150μl 的 3 号 标 准 品 加 入 150μl 标 准 品 稀 释 液 5ng/ml 1 号 标 准 品 150μl 的 2 号 标 准 品 加 入 150μl 标 准 品 稀 释 液 2. 加 样 : 分 别 设 空 白 孔 ( 空 白 对 照 孔 不 加 样 品 及 酶 标 试 剂, 其 余 各 步 操 作 相 同 ) 标 准 孔 待 测 样 品 孔 在 酶 标 包 被 板 上 标 准 品 准 确 加 样 50μl, 待 测 样 品 孔 中 先 加 样 品 稀 释 液 40μl, 然 后 再 加 待 测 样 品 10μl( 样 品 最 终 稀 释 度 为 5 倍 ) 加 样 将 样 品 加 于 酶 标 板 孔 底 部, 尽 量 不 触 及 孔 壁, 轻 轻 晃 动 混 匀 3. 温 育 : 用 封 板 膜 封 板 后 置 37 温 育 30 分 钟 4. 配 液 : 将 30 倍 (48T 的 20 倍 ) 浓 缩 洗 涤 液 用 蒸 馏 水 30 倍 稀 释 后 备 用 第 2 页 共 5 页

5. 洗 涤 : 小 心 揭 掉 封 板 膜, 弃 去 液 体, 甩 干, 每 孔 加 满 洗 涤 液, 静 置 30 秒 后 弃 去, 如 此 重 复 5 次, 拍 干 6. 加 酶 : 每 孔 加 入 酶 标 试 剂 50μl, 空 白 孔 除 外 7. 温 育 : 用 封 板 膜 封 板 后 置 37 温 育 30 分 钟 8. 洗 涤 : 小 心 揭 掉 封 板 膜, 弃 去 液 体, 甩 干, 每 孔 加 满 洗 涤 液, 静 置 30 秒 后 弃 去, 如 此 重 复 5 次, 拍 干 9. 显 色 : 每 孔 先 加 入 显 色 剂 A50μl, 再 加 入 显 色 剂 B50μl, 轻 轻 震 荡 混 匀,37 避 光 显 色 10 分 钟. 10. 终 止 : 每 孔 加 终 止 液 50μl, 终 止 反 应 ( 此 时 蓝 色 立 转 黄 色 ) 11. 测 定 : 以 空 白 空 调 零,450nm 波 长 依 序 测 量 各 孔 的 吸 光 度 (OD 值 ) 测 定 应 在 加 终 止 液 后 15 分 钟 以 内 进 行 操 作 程 序 总 结 : 计 算 以 标 准 物 的 浓 度 为 横 坐 标,OD 值 为 纵 坐 标, 在 坐 标 纸 上 绘 出 标 准 曲 线, 根 据 样 品 的 OD 值 由 标 准 曲 线 查 出 相 应 的 浓 度 ; 再 乘 以 稀 释 倍 数 ; 或 用 标 准 物 的 浓 度 与 OD 值 计 算 出 标 准 曲 线 的 直 线 回 归 方 程 式, 将 样 品 的 OD 值 代 入 方 程 式, 计 算 出 样 品 浓 度, 再 乘 以 稀 释 倍 数, 即 为 样 品 的 实 际 浓 度 第 3 页 共 5 页

注 意 事 项 1. 试 剂 盒 从 冷 藏 环 境 中 取 出 应 在 室 温 平 衡 15-30 分 钟 后 方 可 使 用, 酶 标 包 被 板 开 封 后 如 未 用 完, 板 条 应 装 入 密 封 袋 中 保 存 2. 浓 洗 涤 液 可 能 会 有 结 晶 析 出, 稀 释 时 可 在 水 浴 中 加 温 助 溶, 洗 涤 时 不 影 响 结 果 3. 各 步 加 样 均 应 使 用 加 样 器, 并 经 常 校 对 其 准 确 性, 以 避 免 试 验 误 差 一 次 加 样 时 间 最 好 控 制 在 5 分 钟 内, 如 标 本 数 量 多, 推 荐 使 用 排 枪 加 样 4. 请 每 次 测 定 的 同 时 做 标 准 曲 线, 最 好 做 复 孔 如 标 本 中 待 测 物 质 含 量 过 高 ( 样 本 OD 值 大 于 标 准 品 孔 第 一 孔 的 OD 值 ), 请 先 用 样 品 稀 释 液 稀 释 一 定 倍 数 (n 倍 ) 后 再 测 定, 计 算 时 请 最 后 乘 以 总 稀 释 倍 数 ( n 5) 5. 封 板 膜 只 限 一 次 性 使 用, 以 避 免 交 叉 污 染 6. 底 物 请 避 光 保 存 7. 严 格 按 照 说 明 书 的 操 作 进 行, 试 验 结 果 判 定 必 须 以 酶 标 仪 读 数 为 准. 8. 所 有 样 品, 洗 涤 液 和 各 种 废 弃 物 都 应 按 传 染 物 处 理 9. 本 试 剂 不 同 批 号 组 分 不 得 混 用 实 验 目 的 灵 敏 度 检 测 范 围 和 重 复 性 : 实 验 目 的 : 测 定 人 血 清 血 浆 及 相 关 液 体 样 本 中 胰 岛 素 (INS) 含 量 灵 敏 度 : 最 小 可 测 1.5ng/ml 检 测 范 围 2.5 ng/ml -80 ng/ml 重 复 性 : 板 内, 板 间 变 异 系 数 均 <10% 问 题 分 析 若 实 验 效 果 不 好, 请 及 时 对 显 色 结 果 拍 照, 保 留 所 用 板 条 及 未 使 用 试 剂, 并 妥 善 保 存, 然 后 联 系 我 公 司 技 术 支 持 为 您 解 决 问 题 同 时 您 也 可 以 参 考 以 下 资 料 : 问 题 描 述 可 能 原 因 相 应 对 策 吸 液 或 加 液 不 准 检 查 移 液 器 及 吸 头 标 准 曲 线 梯 度 差 显 色 很 弱 或 无 色 标 准 品 稀 释 不 正 确 溶 解 标 准 品 稍 微 旋 转 瓶 身, 轻 轻 混 匀 使 粉 末 完 全 溶 解 洗 涤 不 完 全 保 证 洗 涤 时 间 和 洗 涤 次 数 及 每 孔 的 加 液 量 孵 育 时 间 太 短 保 证 充 足 的 孵 育 时 间 实 验 温 度 不 正 确 使 用 推 荐 的 实 验 温 度 试 剂 体 积 不 够 或 漏 加 检 查 吸 液 及 加 液 过 程, 保 证 所 有 试 剂 按 顺 序 足 量 添 加 稀 释 不 正 确 读 数 数 值 低 酶 标 仪 设 置 不 正 确 在 酶 标 仪 上 检 查 波 长 及 滤 光 片 设 置 提 前 打 开 酶 标 仪 预 热 变 异 系 数 大 加 液 不 正 确 检 查 加 液 情 况 检 测 抗 体 的 工 作 浓 度 使 用 推 荐 的 稀 释 倍 数 背 景 值 高 酶 标 板 洗 涤 不 完 全 重 新 阅 读 操 作 手 册, 保 证 清 洗 完 全 ; 如 果 用 自 动 洗 板 机, 请 检 查 所 有 的 出 口 是 否 有 堵 塞 洗 液 有 污 染 配 制 新 鲜 的 洗 液 灵 敏 度 低 ELISA 试 剂 盒 保 存 按 说 明 书 要 求 保 存 相 关 试 剂 读 数 前 未 终 止 OD 读 数 前 应 在 每 孔 中 加 入 终 止 液 第 4 页 共 5 页

声 明 1. 限 于 现 有 条 件 及 科 学 技 术 水 平, 尚 不 能 对 所 有 原 料 进 行 全 面 的 鉴 定 分 析, 本 产 品 可 能 存 在 一 定 的 质 量 技 术 风 险 2. 最 终 的 实 验 结 果 与 试 剂 的 有 效 性 实 验 者 的 相 关 操 作 以 及 当 时 的 实 验 环 境 密 切 相 关, 请 务 必 准 备 充 足 的 待 测 样 品 3. 只 有 全 部 使 用 试 剂 盒 内 的 试 剂 才 能 保 证 检 测 效 果, 不 能 混 用 其 他 制 造 商 的 产 品 只 有 严 格 遵 守 本 实 验 说 明 才 会 得 到 最 佳 的 检 测 结 果 4. 有 效 期 :6 个 月 使 用 前 请 仔 细 阅 读 说 明 书 如 果 有 任 何 问 题, 请 通 过 以 下 方 式 联 系 我 们 : 销 售 部 电 话 TEL 021-61840799 电 子 邮 箱 ( 销 售 ) E-mail(sale) shmysw06@163.com 电 子 邮 箱 ( 技 术 ) E-mail(technician) shmysw08@163.com QQ 客 服 QQ customer service 2712765620 网 址 http:// 联 系 时 请 提 供 产 品 货 号, 以 便 我 们 更 高 效 地 为 您 服 务 谢 谢! This kit is for in vitro research use, not for clinical diagnosis! 第 5 页 共 5 页