第 33 卷 第 5 期 204 年 9 月 华 中 农 业 大 学 学 报 JournalofHuazhongAgriculturalUniversity Vol.33 No.5 Sep.204,45~49 解 淀 粉 芽 孢 杆 菌 B960-Y2 悬 浮 剂 配 方 的 筛 选 谢 兰 芬 吴 毅 歆 2 何 鹏 飞 邱 昂 肖 春 何 月 秋,2. 云 南 农 业 大 学 农 业 生 物 多 样 性 应 用 技 术 国 家 工 程 中 心, 昆 明 65020; 2. 云 南 农 业 大 学 农 学 与 生 物 技 术 学 院, 昆 明 65020 摘 要 通 过 对 润 湿 分 散 剂 黏 度 调 节 剂 UV 保 护 剂 防 腐 剂 抗 冻 剂 和 消 泡 剂 的 筛 选, 确 定 5.0 0 9 cfu/ml 解 淀 粉 芽 孢 杆 菌 B960-Y2 悬 浮 剂 的 最 佳 配 方 :Y2 菌 粉 5.00%, 农 乳 342.50%,D-4252.00%,OP-0.50%, 黄 原 胶 0.5%, 尿 素 0.5%, 对 羟 基 苯 甲 酸 甲 酯 0.06%, 甘 油 5.00%, 正 辛 醇 0.20%, 水 83.44% 经 过 湿 法 研 磨 后 测 定, 解 淀 粉 芽 孢 杆 菌 B960-Y2 悬 浮 剂 的 悬 浮 率 达 92.00% 以 上, 且 冷 热 贮 藏 稳 定 关 键 词 芽 孢 杆 菌 ; 悬 浮 剂 ; 配 方 ; 筛 选 中 图 分 类 号 S482.2 + 92 文 献 标 识 码 A 文 章 编 号 000-242(204)05-0045-05 芽 孢 杆 菌 (Bacilusspp.) 能 够 形 成 耐 热 耐 旱 80) 烷 基 酚 聚 氧 乙 烯 醚 (OP-0); 增 稠 剂 : 黄 原 胶 抗 紫 外 线 的 芽 孢, 是 研 制 生 防 菌 剂 的 良 好 材 料 多 种 解 淀 粉 芽 孢 杆 菌 (B.amyloliquefaciens) 菌 株 因 其 具 有 控 制 植 物 病 害 促 进 植 物 生 长 提 高 作 物 产 量 等 优 势, 在 生 物 防 治 制 剂 中 显 示 出 广 阔 的 应 用 前 [-3] 景 解 淀 粉 芽 孢 杆 菌 B960-Y2( 简 称 Y2, 专 利 号 :ZL200300495.6) 是 笔 者 所 在 实 验 室 从 小 麦 根 系 土 壤 分 离 的 一 株 具 有 广 谱 抑 菌 促 生 长 作 用 的 生 硅 酸 镁 铝 羧 甲 基 纤 维 素 (CMC); 防 冻 剂 : 甘 油 ; 防 腐 剂 : 苯 甲 酸 钠 山 梨 酸 钾 对 羟 基 苯 甲 酸 甲 酯 ; 紫 外 (UV) 保 护 剂 : 黄 原 胶 羧 甲 基 纤 维 素 (CMC) 刚 果 红 淀 粉 糊 精 尿 素 抗 坏 血 酸 (VC) 纯 牛 奶 ; 消 泡 剂 : 正 辛 醇 ; 主 要 仪 器 : 粉 碎 机 小 型 立 式 砂 磨 机 旋 转 粘 度 计 激 光 粒 度 分 析 仪 台 式 离 心 机 恒 温 摇 床 等 [4-6] 防 菌 株, 能 有 效 防 治 玉 米 大 斑 病 小 斑 病 圆 斑 病 等 真 菌 性 病 害, 促 进 多 种 植 物 插 条 生 根, 是 一 种 很 好.2 制 剂 加 工 与 初 始 比 例 将 Y2 菌 粉 与 一 定 比 例 助 剂 补 足 水 混 合 均 匀 后 的 生 物 防 治 制 剂, 但 其 制 剂 较 单 一, 目 前 仅 有 可 湿 性 粉 剂 产 品 为 克 服 Y2 可 湿 性 粉 剂 颗 粒 较 大 易 于 沉 降 和 分 散 性 较 差 等 缺 点, 笔 者 筛 选 并 确 定 了 Y2 悬 浮 剂 的 最 佳 配 方, 旨 在 为 其 产 品 的 商 业 化 生 产 提 经 砂 磨 机 砂 磨 4h 后 制 成 各 种 不 同 的 悬 浮 剂 初 始 制 剂 成 分 配 比 ( 质 量 百 分 数, 下 同 ): 原 粉 5.00% 润 湿 分 散 剂 总 计 0.00% 紫 外 保 护 剂 0.30% 防 腐 剂 0.30% 防 冻 剂 5.00% 消 泡 剂 0.20% 供 理 论 依 据.3 配 方 的 筛 选 材 料 与 方 法. 供 试 材 料 供 试 菌 株 : 解 淀 粉 芽 孢 杆 菌 B960-Y2 菌 粉, 芽 孢 含 量.0 0 cfu/g, 芽 孢 率 95%; 润 湿 分 散 剂 : 烷 基 萘 磺 酸 缩 聚 物 钠 盐 (MorwetD-425) 亚 甲 基 双 萘 磺 酸 钠 (NNO) 聚 乙 烯 醇 (PVA) 苯 乙 基 酚 聚 氧 乙 烯 醚 ( 农 乳 602) 烷 基 芳 基 聚 氧 乙 烯 聚 氧 丙 烯 醚 ( 农 乳 34) 聚 氧 乙 烯 山 梨 醇 酐 单 油 酸 酯 ( 吐 温 - ) 润 湿 分 散 剂 采 用 流 点 法 筛 选 润 湿 分 散 剂 品 [7] 种, 试 验 重 复 4 次 选 用 对 供 试 原 粉 流 点 值 较 低 的 润 湿 分 散 剂 进 行 下 一 步 试 验, 按 悬 浮 剂 配 制 方 法, 配 制 几 个 样 品, 测 定 样 品 悬 浮 剂 的 各 项 指 标, 确 定 润 湿 分 散 剂 组 合 及 用 量 2) 增 稠 剂 按 照 配 方 要 求, 将 粘 度 调 节 剂 按 不 同 的 含 量 制 成 样 品 将 样 品 经 (54±2) 贮 存 4d 后, 测 定 各 样 品 的 倾 倒 性 流 动 性 及 分 层 情 况 3) 紫 外 保 护 剂 将 保 护 剂 按 0.30% 比 例 添 加 收 稿 日 期 :204-03-28 基 金 项 目 : 国 家 自 然 科 学 基 金 项 目 (30660007) 科 技 部 国 际 合 作 项 目 (2009DFA32360) 和 昆 明 市 校 企 合 作 项 目 (09H3030) 谢 兰 芬, 博 士 研 究 生. 研 究 方 向 : 生 物 农 药.E-mail:xlf97@63.com 通 信 作 者 : 何 月 秋, 博 士, 教 授. 研 究 方 向 : 植 物 病 害 生 物 防 治.E-mail:ynfh2007@63.com
46 华 中 农 业 大 学 学 报 第 33 卷 到 发 酵 液 中, 混 合 均 匀 并 分 别 稀 释 后 涂 布 在 LB 平 板 上, 置 于 距 离 紫 外 灯 40cm 处, 分 别 照 射 30 60 90s 后 统 计 存 活 率 以 不 加 保 护 剂 作 对 照, 每 个 处 理 重 复 4 次 保 护 效 能 指 数 =( 处 理 芽 孢 存 活 率 - 对 照 芽 孢 存 活 率 )/(00- 对 照 芽 孢 存 活 率 ) 4) 防 腐 剂 以 上 述 配 方 为 基 础, 加 入 不 同 种 类 和 含 量 的 防 腐 剂, 配 制 不 同 的 样 品 将 样 品 经 室 温 贮 存 4d 后, 测 定 产 品 的 悬 浮 率 和 霉 变 程 度 5) 防 冻 剂 将 筛 选 出 的 润 湿 分 散 剂 增 稠 剂 保 护 剂 防 腐 剂 配 制 成 悬 浮 剂 样 品 后, 添 加 不 同 浓 度 的 防 冻 剂 将 样 品 经 (0±2) 贮 存 24h 后, 测 定 产 品 的 悬 浮 率 析 水 率 和 分 散 性.4 悬 浮 剂 稳 定 性 的 测 试 将 试 验 结 果 得 到 的 最 佳 配 方 制 作 成 悬 浮 剂 样 品, 分 2 组 装 入 安 碚 瓶 中, 每 组 5 瓶, 分 别 进 行 冷 贮 [(0±2) 贮 存 7d] 和 热 贮 [(54±2) 贮 存 4d] 处 理, 测 定 悬 浮 剂 的 芽 孢 含 量 悬 浮 率 流 动 性 粘 度 等 各 项 指 标.5 制 剂 质 量 指 标 的 测 定 按 照 中 华 人 民 共 和 国 国 家 标 准 对 解 淀 粉 芽 孢 杆 菌 Y2 悬 浮 剂 的 各 项 质 量 指 标 进 行 测 定 悬 浮 率 测 定 参 照 GB/T4825-2006 的 方 法 [8] ;ph 值 测 定 参 照 GB/T60-993 的 方 法 [9] ; 冷 贮 稳 定 性 测 定 参 照 GB/T937-2003 的 方 法 [0] ; 热 贮 稳 定 性 测 定 参 照 GB/T936-2003 的 方 法 [] ; 分 散 性 倾 倒 性 持 久 泡 沫 量 测 定 参 照 易 敏 等 的 方 法 [2] ; 有 效 成 分 采 用 平 板 菌 落 计 数 法 测 定 ; 粘 度 采 用 旋 转 粘 度 计 测 定 ; 颗 粒 直 径 采 用 激 光 粒 度 仪 测 定.6 数 据 处 理 与 统 计 方 法 应 用 SPSS9.0 对 所 得 试 验 数 据 进 行 统 计 分 析, 采 用 Excel2007 进 行 图 表 绘 制 2 结 果 与 分 析 2. 润 湿 分 散 剂 的 筛 选 ) 润 湿 分 散 剂 的 流 点 在 预 试 验 助 剂 与 Y2 生 物 相 容 的 基 础 上, 选 择 7 种 生 物 相 容 性 较 好 的 润 湿 分 散 剂, 用 流 点 法 测 定 各 自 流 点, 比 较 其 润 湿 分 散 能 力 ( 表 ) 润 湿 分 散 剂 流 点 越 小, 表 明 润 湿 分 散 能 力 越 强 表 润 湿 分 散 剂 的 流 点 ) Table Flowpointofsurfactants 润 湿 分 散 剂 Surfactant 流 点 /(ml/g) Flowpoint D-425 2.5±0.02bB NNO PVA 农 乳 602Nongru602 农 乳 34Nongru34 吐 温 -80Tweeṉ80 OP-0 2.3±0.08bcB 2.40±0.05aA 2.08±0.0cBC 2.02±0.0dC 2.4±0.0bcB 2.08±0.00cBC ) 表 中 小 写 字 母 表 示 在 5% 水 平 上 差 异 显 著, 大 写 字 母 表 示 在 % 水 平 上 差 异 显 著 ( 下 表 同 ) Datawiththediferentlowercaseandcapitalletersincolumnaresignificantdiference at5% and% level,respectively (thesameasthefolowing tables). 由 表 可 知,7 种 润 湿 分 散 剂 的 流 点 由 小 到 大 依 次 为 农 乳 34< OP-0< 农 乳 602< NNO < D425< 吐 温 80<PVA,PVA 与 其 他 6 种 润 湿 分 散 剂 间 存 在 极 显 著 差 异, 在 润 湿 分 散 剂 配 方 优 化 筛 选 中 将 被 剔 除 2) 润 湿 分 散 剂 配 方 的 优 化 根 据 预 试 验, 样 品 中 的 增 稠 剂 防 腐 剂 和 防 冻 剂 分 别 为 黄 原 胶 对 羟 基 甲 酸 甲 酯 和 甘 油, 添 加 量 分 别 为 0.20% 0.0% 和 5.00%, 配 制 成 不 同 的 样 品 后, 测 定 悬 浮 剂 的 悬 浮 率 和 分 散 性 ( 表 2) 表 2 润 湿 分 散 剂 配 方 优 化 体 系 样 品 Samples 农 乳 34 Nongru34 D-425 NNO Table2 Formulaoptimizationsystemofsurfactant % 农 乳 602 Nongru602 吐 温 -80 Tweeṉ80 OP-0 悬 浮 率 分 散 性 Dispersity 2.50 2.00 2.00 75.35 良 Good 2 2.50 2.00 2.00 82.23 良 Good 3 2.50 2.00 2.00 85.98 良 Good(+) 4 2.50 2.00 2.00 86. 良 Good(+) 5 2.50 2.00.50 96.20 优 Excelent(-) 6 2.50 2.00.50 90.68 优 Excelent 7 2.50 2.00.50.50 8.26 良 Good 8 2.50.50 2.00.50 72.79 良 Good(-) 9 2.50.50 2.00 80.69 良 Good 0 2.50 2.00.50 90.0 良 Good.50 2.00 2.50 8.27 优 Excelent(-) 2 2.00.50 2.50 85.68 良 Good(+)
第 5 期 谢 兰 芬 等 : 解 淀 粉 芽 孢 杆 菌 B960-Y2 悬 浮 剂 配 方 的 筛 选 47 由 表 2 可 知,5 号 样 品 中 润 湿 分 散 剂 选 用 农 乳 34 D-425 以 及 OP-0 组 合, 其 用 量 分 别 为 2.50% 2.00% 和.50%, 样 品 的 悬 浮 率 最 高 达 96.20%, 分 散 性 能 优 越 剂 为 筛 选 对 象, 按 照 已 筛 选 出 的 润 湿 分 散 剂, 加 入 不 同 含 量 和 比 例 的 增 稠 剂, 配 制 成 不 同 的 样 品 后, 测 定 悬 浮 剂 的 倾 倒 性 和 流 动 性 ( 表 3) 由 表 3 可 知, 当 样 品 中 黄 原 胶 的 添 加 量 为 2.2 增 稠 剂 的 确 定 以 黄 原 胶 硅 酸 铝 镁 及 羧 甲 基 纤 维 素 3 种 增 稠 0.5% 时, 悬 浮 剂 的 倾 倒 性 和 流 动 性 均 良 好, 且 没 有 分 层 状 况 表 3 增 稠 剂 的 筛 选 Table3 Selectionofthickeners 增 稠 剂 Thickener 用 量 /% Percent 倾 倒 性 Pourability 流 动 性 Flowability 分 层 状 况 Hierarchicalsituation 黄 原 胶 Xanthangum 0.0 良 Good(+) 优 Excelent 严 重 Worse 黄 原 胶 Xanthangum 0.5 良 Good 良 Good 稳 定 Steady 黄 原 胶 Xanthangum 0.20 良 Good(-) 差 Bad 稳 定 Steady 硅 酸 镁 铝 Veegum 0.0 良 Good 优 Excelent 严 重 Worse 硅 酸 镁 铝 Veegum 0.5 良 Good 良 Good 严 重 Worse 硅 酸 镁 铝 Veegum 0.20 良 Good(-) 差 Bad 严 重 Worse 羧 甲 基 纤 维 素 CMC 0.0 良 Good(+) 优 Excelent 稍 有 分 层 Bad 羧 甲 基 纤 维 素 CMC 0.5 良 Good 良 Good 稍 有 分 层 Bad 羧 甲 基 纤 维 素 CMC 0.20 良 Good(-) 差 Bad 稳 定 Steady 2.3 紫 外 保 护 剂 的 选 择 测 定 结 果 表 明,8 种 紫 外 保 护 剂 不 同 照 射 时 间 上 的 较 高 保 护 效 能 CMC 生 物 相 容 性 较 差 ( 预 试 验 ), 黄 原 胶 已 选 作 为 增 稠 剂, 若 再 加 入 会 影 响 体 系 的 保 护 效 能 表 现 出 差 异 性 ( 表 4) 照 射 30s 后, 各 保 护 剂 均 有 不 同 程 度 的 保 护 作 用, 除 糊 精 和 纯 牛 奶 保 护 效 能 指 数 低 于 0.50 外, 其 余 均 高 于 0.60,VC 保 护 效 率 最 高 0.93; 照 射 60s 后, 淀 粉 和 VC 保 护 效 能 急 剧 下 降 到 0.9 和 0.; 照 射 90s 后, 黄 原 胶 CMC 和 尿 素 3 种 紫 外 保 护 剂 仍 然 保 持 0.40 以 的 平 衡, 因 此, 在 黄 原 胶 添 加 量 的 基 础 上 选 择 尿 素 作 为 保 护 剂 进 一 步 筛 选 结 果 显 示, 在 0.5% 黄 原 胶 的 基 础 上 添 加 0.5% 和 0.20% 尿 素 具 有 较 好 的 保 护 效 果, 且 无 显 著 差 异 ( 表 5) 综 合 分 析 并 考 虑 成 本 因 素, 确 定 以 尿 素 为 悬 浮 剂 的 保 护 剂 表 4 UV 保 护 剂 不 同 照 射 时 间 的 保 护 效 能 指 数 Table4 ProtectiveeficacyindexafterdiferentirradiationtimeofUVprotectants 保 护 剂 Protectants 30s 60s 90s 黄 原 胶 Xanthangum 0.86±0.06bAB 0.76±0.02aA 0.44±0.0aA CMC 0.83±0.02bB 0.76±0.02aA 0.44±0.0aA 刚 果 红 Congo 0.65±0.05dC 0.58±0.0bB 0.26±0.0bB 淀 粉 Amylon 0.7±0.0cC 0.9±0.03dD 0.2±0.00cC 糊 精 Dextrin 0.37±0.03fE 0.3±0.02eE 0.06±0.0dD 尿 素 Urea 0.89±0.02abAB 0.73±0.03aA 0.43±0.02aA VC 0.93±0.02aA 0.±0.04eE 0.02±0.02eE 纯 牛 奶 Puremilk 0.43±0.05eD 0.25±0.03cC 0.07±0.0dD 2.4 防 腐 剂 的 筛 选 表 5 尿 素 不 同 照 射 时 间 的 保 护 效 能 指 数 Table5 Protectiveefficacyindexafterdiferentirradiation 尿 素 /% Urea timeofurea 30s 60s 90s 0.0 0.65±0.05bB 0.39±0.02bB 0.26±0.0bB 0.5 0.84±0.03aA 0.76±0.02aA 0.44±0.0aA 0.20 0.84±0.02aA 0.77±0.00aA 0.45±0.0aA 选 择 与 Y2 生 物 相 容 性 较 好 的 山 梨 酸 钾 苯 甲 酸 钠 和 对 羟 基 苯 甲 酸 甲 酯, 按 照 试 验 筛 选 出 的 助 剂, 加 入 不 同 的 防 腐 剂, 配 制 成 不 同 的 样 品, 再 将 样 品 经 室 温 贮 存 4d 后 测 定 其 悬 浮 率 和 霉 变 度 ( 表 6) 测 定 结 果 表 明, 加 入 0.06% 对 羟 基 苯 甲 酸 甲 酯 防 腐 效 果 较 好, 制 剂 前 后 悬 浮 率 未 发 生 显 著 变 化 且 无 霉 变 现 象 ; 而 0.0%~0.30% 山 梨 酸 钾 和 苯 甲 酸 钠 处 理 后, 制 剂 的 悬 浮 率 下 降 明 显 且 仍 有 霉 变
48 华 中 农 业 大 学 学 报 第 33 卷 表 6 防 腐 剂 的 防 腐 效 果 样 品 Samples 山 梨 酸 钾 Potassiumsorbate 苯 甲 酸 钠 Sodiumbenzoate Table6 Theefectofpreservatives % 对 羟 基 苯 甲 酸 甲 酯 Methylparaben 贮 存 前 悬 浮 率 B-suspensibility 贮 存 后 悬 浮 率 A-suspensibility 霉 变 度 Mould 0.0 95.40 50.80 +++ 2 0.20 95.20 55.30 +++ 3 0.30 95.50 56.0 +++ 4 0.0 95.60 47.50 +++ 5 0.20 94.80 48.50 +++ 6 0.30 95.0 50.20 +++ 7 0.0 95.30 85.0 ++ 8 0.04 94.90 90.40 + 9 0.06 95.30 95.20-2.5 防 冻 剂 的 确 定 制 作 悬 浮 剂 的 一 些 助 剂 在 温 度 较 低 时 可 从 液 态 凝 固 成 固 态 为 防 止 产 品 在 贮 存 过 程 中 出 现 结 晶 现 象 而 影 响 使 用 效 果, 选 用 相 容 性 好 的 甘 油 进 行 浓 度 配 方 按 照 试 验 筛 选 得 到 助 剂 配 方, 加 入 不 同 含 量 的 甘 油, 配 制 成 不 同 的 样 品, 然 后 将 样 品 经 过 (0±2) 贮 存 24h 后, 测 定 产 品 的 悬 浮 率 析 水 率 和 分 散 性 ( 表 7) 测 定 结 果 表 明,5.00% 甘 油 的 防 冻 效 果 好 于 3.00% 和 4.00% 的 甘 油, 且 样 品 中 无 析 水 现 象 甘 油 Glycerol 表 7 甘 油 添 加 量 的 筛 选 Table7 Glycerolcontentscreening % 悬 浮 率 析 水 率 Waterfiltration 分 散 性 Dispersity 3.00 85.60 5.00 良 Good 4.00 90.70 2.00 良 Good 5.00 94.60 0.00 良 Good 2.6 消 泡 剂 的 选 择 在 悬 浮 剂 砂 磨 过 程 中, 会 产 生 大 量 的 泡 沫, 需 要 加 入 小 量 消 泡 剂 试 验 结 果 表 明, 正 辛 醇 添 加 到 0.20% 时, 便 有 良 好 的 消 泡 效 果 2.7 悬 浮 剂 的 稳 定 性 将 试 验 结 果 得 到 的 最 佳 配 方 :Y2 菌 粉 5.00%, 农 乳 342.50%,D-4252.00%,OP-0.50%, 黄 原 胶 0.5%, 尿 素 0.5%, 对 羟 基 苯 甲 酸 甲 酯 0.06%, 甘 油 5.00%, 正 辛 醇 0.20%, 水 83.44%, 采 用 湿 磨 法 研 磨 4h 后 制 得 样 品 后, 测 定 悬 浮 剂 的 各 项 质 量 指 标 ( 表 8) 悬 浮 剂 稳 定 性 的 测 定 结 果 表 明 :Y2 悬 浮 剂 的 芽 孢 含 量 达 50 亿 /ml, 悬 浮 率 达 92.00% 以 上, 5μm 的 粒 径 高 于 96%,pH 值 稳 定 在 7.5~7.6, 粘 度 60~620Pa s; 制 剂 的 倾 倒 性 好, 热 贮 和 冷 贮 前 后 差 异 不 大 表 8 优 化 的 生 防 制 剂 的 冷 热 贮 稳 定 性 Table8 Stabilizationofhotandcoolstoragesoftheoptimizedbiocontrolagent 贮 藏 Storage 状 态 Condition 活 菌 数 / (0 9 cfu/ml) Viablecount 悬 浮 率 /% 粒 径 5μm Diameter 析 水 率 /% Water filtration 泡 沫 体 积 /ml Foamvolume ph 粘 度 /(Pa s) 倾 倒 性 Viscosity Pourability 热 贮 Hot 前 Before 50.30 95.40 96.50 0.00 7.6 620 良 Good 后 After 50.0 92.30 96.20 0.02 3 7.5 60 良 Good 冷 贮 Cool 前 Before 50.30 95.40 96.50 0.00 7.6 620 良 Good 后 After 50.20 93.20 96.30 0.0 2 7.6 620 良 Good 3 讨 论 紫 外 光 对 活 体 的 杀 伤 作 用 是 影 响 生 防 制 剂 在 田 间 稳 定 性 的 重 要 因 素, 在 生 防 制 剂 中 加 入 一 定 量 的 紫 外 保 护 剂 来 保 障 生 防 活 体 在 环 境 中 的 存 活 率 是 一 种 常 用 手 段 本 试 验 结 果 表 明, 黄 原 胶 和 尿 素 在 生 物 相 容 性 良 好 的 条 件 下 对 Y2 芽 孢 表 现 出 良 好 的 防 [3] 护 作 用 黄 原 胶 防 护 效 果 与 程 立 君 等 的 研 究 结 果 一 致 然 而, 在 紫 外 保 护 剂 筛 选 时, 紫 外 灯 照 射 时 间 存 在 较 大 差 异, 从 照 射 30s 到 24h 不 等, 其 中 以 短 时 间 照 射 为 多 [3-7] 本 试 验 中 以 紫 外 灯 照 射 5min 后, 全 部 Y2 芽 孢 几 乎 死 亡 尿 素 对 作 物 叶 片 [8] 损 伤 较 小, 适 宜 作 叶 片 追 肥 袁 立 海 等 的 研 究 结 果 表 明, 尿 素 的 叶 面 追 肥 量 不 超 过 5.00% 时 有 良 好 增 产 效 果 且 不 会 导 致 烧 苗 本 试 验 添 加 0.5% 尿 素, 具 有 芽 孢 紫 外 保 护 剂 作 用, 同 时 还 具 有 叶 片 追 肥 的 功 效, 但 增 产 效 果 有 待 进 一 步 验 证 悬 浮 剂 实 际 上 仍 是 水 分 散 体 系, 其 中 添 加 的 某 些 助 剂 是 有 机 营 养 成 分, 在 室 温 下 容 易 被 外 界 杂 菌 所 利 用, 导 致 制 剂 系 统 平 衡 的 破 坏 同 时, 生 防 活 体
第 5 期 谢 兰 芬 等 : 解 淀 粉 芽 孢 杆 菌 B960-Y2 悬 浮 剂 配 方 的 筛 选 49 微 生 物 也 有 自 身 利 用 的 条 件 为 了 防 止 出 现 这 些 现 象, 农 药 剂 型 中 常 加 入 山 梨 酸 钾 苯 甲 酸 钠 和 甲 [2,9] 醛 本 研 究 结 果 显 示, 制 剂 中 添 加 0.0% ~ 0.30% 的 山 梨 酸 钾 苯 甲 酸 钠 无 防 腐 效 果, 其 原 因 是 该 2 种 物 质 为 酸 性 防 腐 剂, 而 解 淀 粉 芽 孢 杆 菌 B960-Y2 悬 浮 剂 是 弱 碱 性 制 剂 (ph 7.6) 因 此, 将 酸 碱 适 应 范 围 大 的 对 羟 基 苯 甲 酸 甲 酯 作 为 Y2 悬 浮 剂 的 防 腐 剂, 能 明 显 抑 制 霉 变 和 芽 孢 萌 发, 尽 管 其 价 格 是 苯 甲 酸 钠 的 0 倍 山 梨 酸 钾 的 3 倍, 但 添 加 量 只 需 二 者 的 /0~/5, 制 剂 的 成 本 相 差 无 几 及 产 生 条 件 的 研 究 [J]. 植 物 病 理 学 报,2005,35():30-36. [6] 刘 拴 成, 杨 进 成, 马 丽 华, 等. 解 淀 粉 芽 孢 杆 菌 B960-Y2 提 高 玉 米 生 长 和 产 量 的 效 应 [J]. 玉 米 科 学,200,8(6):78-82,85. [7] 郭 武 棣. 液 体 制 剂 [M]. 北 京 : 化 学 工 业 出 版 社,2004:96-236. [8] 国 家 质 量 监 督 检 验 检 疫 总 局.GB/T4825-2006. 农 药 悬 浮 率 测 定 方 法 [S]. 北 京 : 中 国 标 准 出 版 社,2007. [9] 国 家 质 量 监 督 检 验 检 疫 总 局.GB/T60-993. 农 药 ph 值 的 测 定 方 法 [S]. 北 京 : 中 国 标 准 出 版 社,993. [0] 国 家 质 量 监 督 检 验 检 疫 总 局.GB/T937-2003. 农 药 低 温 稳 定 性 测 定 方 法 [S]. 北 京 : 中 国 标 准 出 版 社,2003. [] 国 家 质 量 监 督 检 验 检 疫 总 局.GB/T936-2003. 农 药 热 贮 稳 定 性 测 定 方 法 [S]. 北 京 : 中 国 标 准 出 版 社,2003. [2] 易 敏, 徐 树 兰, 汤 历, 等.0 亿 PIB/mL 斜 纹 夜 蛾 核 型 多 角 体 病 参 考 文 献 [] 王 英 国, 王 军 华, 权 春 善, 等. 解 淀 粉 芽 孢 杆 菌 抗 菌 活 性 物 质 的 分 离 纯 化 及 抑 菌 活 性 研 究 [J]. 中 国 生 物 工 程 杂 志,2007,27 (6):4-45. [2] ROSTAMIS,MALEKIM,SHAHRIARID.TheuseofBacillusamyloliquefacienstocontrolofSclerotiniastemrot(Sclerotiniasclerotiorum)ofcucumber[J].InternationalJournalof FarmingandAliedSciences,203,2(22):965-970. [3] ROMANO A,VITULLO D,SENATORE M,etal.Antifungal cycliclipopeptides from Bacilus amyloliquefaciens strain BO5A [J].JournalofNaturalProducts,203,76():209-2025. [4] 和 凤 美, 何 月 秋, 朱 永 平. 生 防 菌 B960 的 防 治 效 果 研 究 [J]. 西 南 农 业 大 学 学 报,2002,24(4):32-34. [5] 汪 澈, 何 月 秋, 张 永 庆. 枯 草 芽 孢 杆 菌 B960-Y2 抑 菌 蛋 白 活 性 毒 悬 浮 剂 的 研 制 [J]. 广 东 农 业 科 学,20,38(20):8-83. [3] 程 立 君, 陈 玉 惠, 彭 述 敏, 等. 株 生 防 木 霉 菌 可 湿 性 粉 剂 中 助 剂 的 筛 选 [J]. 西 南 林 学 院 学 报,200,30(5):48-52. [4] 张 拥 华, 李 磊, 彭 志 刚, 等. 粘 帚 霉 可 湿 性 粉 剂 助 剂 的 初 步 研 究 [J]. 农 药,2007,46(2):94-96. [5] 王 剑, 王 楠, 高 观 朋, 等.200 亿 芽 孢 /g 枯 草 芽 孢 杆 菌 可 湿 性 粉 剂 的 研 制 [J]. 农 药,200,49(7):486-489. [6] 田 大 伟, 杨 顺 义, 张 新 虎, 等. 顶 孢 霉 Ahyl 菌 株 孢 子 乳 悬 剂 的 配 方 筛 选 [J]. 植 物 保 护,2009,35(4):78-82. [7] NICKLE W R,SHAPIRO M.Useofastilbenebrightener, TinopalLPWasaradiationprotectantforSteinernemacarpo capsae [J].JournalofNematology,992,24(3):37. [8] 袁 立 海, 李 艳 杰, 刘 显 辉, 等. 尿 素 叶 面 施 肥 的 效 果 [J]. 黑 龙 江 八 一 农 垦 大 学 学 报,985():53-60. [9] 张 国 生, 李 琳 光. 农 药 悬 浮 剂 的 配 方 技 术 [J]. 世 界 农 药,200, 32(4):40-47. ScreeningofBacilusamyloliquefaciens960-Y2 suspensionconcentrateformula XIELaṉfen WU Yi-xin 2 HEPeng-fei QIU Ang XIAO Chun HEYue-qiu,2.NationalEngineeringCenterofAppliedTechnologiesforAgriculturalDiversity, YunnanAgriculturalUniversity,Kunming65020,China; 2.FacultyofAgronomyandBiotechnology,YunnanAgriculturalUniversity, Kunming65020,China Abstract AnenvironmentfriendlybiocontrolagentsBacilusamyloliquefaciens960-Y25.0 0 9 cfu/mlsc wasformulatedthoughscreeningsurfactants,thickeners,uv protectants,preservatives, antifreezes,anddefoamers.itincluded5.00% B960-Y2powder,2.50% Nongyu34,2.00% D-425,.50% emulsifierop-0,0.5% xanthangum,0.5% urea,0.06% methylparaben,5.00% glycerol, 0.20% ṉoctanoland83.44% water.bywetgrindingtheproductsuspensionratewasover92.00% and stableaftercoldandhotstorage. Keywords Bacilusspp.;suspensionconcentrate;formula;screening ( 责 任 编 辑 : 陈 红 叶 )