标题

2014 年 5 月 Vol.32 No.5 May 2014 Chinese Journal of Chromatography 519 ~ 523 技 术 与 应 用 DOI: 10.3724 / SP.J.1123.2013.12028 高 效 液 相 色 谱 串 联 质 谱 法 检 测 牛 奶 中 头 孢 洛 宁 残 留 李 帅 鹏 1, 郭 春 娜 1, 孟 蕾 2 1, 黄 显 会 (1. 华 南 农 业 大 学 国 家 兽 药 残 留 基 准 实 验 室, 广 东 广 州 510642; 2. 河 南 省 兽 药 监 察 所, 河 南 郑 州 450008) 摘 要 : 建 立 了 牛 奶 中 头 孢 洛 宁 残 留 检 测 的 高 效 液 相 色 谱 串 联 质 谱 方 法 1 g 牛 奶 经 乙 腈 沉 淀 蛋 白 质 后, 上 清 液 于 37 水 浴 下 氮 气 吹 干, 用 1 ml 甲 醇 0 1 甲 酸 水 溶 液 (3 7, v / v) 复 溶, 正 己 烷 除 脂 净 化 后 检 测 流 动 相 为 乙 腈 和 0 1 甲 酸 水 溶 液, 梯 度 洗 脱, 经 C 18 色 谱 柱 分 离, 采 用 多 反 应 监 测 正 离 子 模 式 对 头 孢 洛 宁 进 行 定 性 定 量 分 析 采 用 基 质 匹 配 法 对 牛 奶 中 头 孢 洛 宁 的 含 量 进 行 标 准 校 正, 在 2~ 200 μg / L 范 围 内, 头 孢 洛 宁 质 量 浓 度 与 其 对 应 峰 面 积 的 线 性 关 系 良 好, 相 关 系 数 >0 999 牛 奶 中 加 标 样 品 的 检 出 限 ( 按 S / N 3 计 ) 为 0 5 μg / kg, 定 量 限 (S / N 10 计 ) 为 2 μg / kg 在 定 量 限 1 / 2 最 高 残 留 限 量 最 高 残 留 限 量 2 倍 最 高 残 留 限 量 添 加 水 平 下, 牛 奶 中 头 孢 洛 宁 的 平 均 回 收 率 为 78 5 ~ 86 2, 日 内 相 对 标 准 偏 差 为 1 5 ~ 6 2, 日 间 相 对 标 准 偏 差 为 2 9 ~ 5 6 该 方 法 可 用 于 牛 奶 中 头 孢 洛 宁 的 残 留 检 测 关 键 词 : 高 效 液 相 色 谱 ; 串 联 质 谱 ; 头 孢 洛 宁 ; 牛 奶 ; 残 留 中 图 分 类 号 :O658 文 献 标 识 码 :A 文 章 编 号 :1000 8713(2014)05 0519 05 Determination of cefalonium residue in milk by high performance liquid chromatography tandem mass spectrometry LI Shuaipeng 1, GUO Chunna 1, MENG Lei 2, HUANG Xianhui 1 (1. National Reference Laboratory of Veterinary Drug Residues, South China Agricultural University, Guangzhou 510642, China; 2. Henan Institute of Veterinary Drug Control, Zhengzhou 450008, China) Abstract: An analytical method was developed for the determination of cefalonium in milk by high performance liquid chromatography tandem mass spectrometry ( HPLC MS / MS). A total of 1 g milk was deproteinized by acetonitrile. The supernatant was transferred into a test tube to be blown dry with N 2 at 37. Then the residue was dissolved with methanol 0 1 formic acid in water (3 7, v / v). The sample was determined by HPLC MS / MS after the purification. The chromatographic separation was achieved on a C 18 column using 0 1 formic acid in water and acetonitrile as mobile phases with gradient elution. Qualitative and quantitative analyses were achieved by HPLC MS / MS under positive ionization and multiple reaction monitoring ( MRM) mode. Matrix matched calibration curve was used for the quantification. Good correlation coef ficients were obtained (r>0 999) in the mass concentration range of 2-200 μg / L. The limit of detection (LOD, S / N 3) was 0 5 μg / kg in milk, and the limit of quantification (LOQ, S / N 10) was 2 μg / kg. The mean recoveries at the four levels of LOQ, 1 / 2MRL (maximum residue level), MRL, 2MRL were between 78 5 and 86 2, with the intra day relative standard devi ations (RSDs)of 1 5 to 6 2 and inter day RSDs of 2 9 to 5 6. In conclusion, the estab lished method can be applied for the determination of cefalonium residue in milk. Key words: high performance liquid chromatography ( HPLC); tandem mass spectrometry (MS / MS); cefalonium; milk; residue 头 孢 洛 宁 ( cefalonium ) 是 美 国 先 灵 葆 雅 (Schering Plough) 制 药 公 司 在 英 联 邦 国 家 内 开 发 的 奶 牛 枯 奶 期 针 对 乳 房 炎 的 预 防 性 用 药, 是 全 球 3 个 指 定 的 动 物 专 用 头 孢 类 抗 生 素 之 一, 属 于 第 二 代 通 讯 联 系 人.E mail:xhhuang@ scau.edu.cn. 基 金 项 目 : 公 益 性 行 业 ( 农 业 ) 科 研 专 项 (201303038 5). 收 稿 日 期 :2013 12 25

520 色 谱 第 32 卷 头 孢 类 抗 生 素 [1] 头 孢 洛 宁 对 酸 和 β 内 酰 胺 酶 稳 定, 杀 菌 力 强, 抗 菌 谱 广, 对 革 兰 氏 阴 性 菌 和 革 兰 氏 阳 性 菌 均 有 效 ; 尤 其 对 引 起 奶 牛 乳 房 炎 的 大 多 数 病 原 菌 有 效, 主 要 用 于 细 菌 感 染 引 起 的 奶 牛 乳 房 炎 的 防 治 [2-4] 目 前 该 药 只 在 日 本 新 西 兰 澳 大 利 亚 欧 盟 和 英 联 邦 国 家 范 围 内 使 用, 美 国 加 拿 大 等 市 场 未 使 用 该 药, 我 国 也 未 见 进 口 或 开 发 报 道 头 孢 菌 素 类 抗 生 素 的 过 量 使 用 具 有 毒 副 作 用, 主 要 体 现 在 对 脑 神 经 听 觉 以 及 肾 脏 的 损 害 [5], 对 人 体 健 康 造 成 危 害 因 此, 世 界 各 国 对 动 物 源 性 食 品 中 的 头 孢 洛 宁 残 留 量 均 提 出 了 限 量 要 求, 欧 盟 规 定 牛 奶 中 头 孢 洛 宁 的 最 高 残 留 限 量 ( MRL) 为 10 μg / kg [6], 日 本 肯 定 列 表 规 定 牛 组 织 和 牛 奶 中 头 孢 洛 宁 的 最 高 残 留 限 量 均 为 10 μg / kg [7] 国 外 头 孢 洛 宁 乳 房 注 入 剂 (Cepravin Dry Cow 250 mg Intramammary suspension (Dry Cow)) 已 上 市 使 用 多 年, 但 有 关 牛 奶 中 头 孢 洛 宁 残 留 检 测 方 法 的 报 道 较 少, 主 要 有 微 生 物 法 [8] 酶 联 免 疫 分 析 [9,10] 法 和 高 效 液 相 色 谱 串 联 质 谱 法 [11,12] 牛 奶 中 头 孢 洛 宁 的 MRL 为 10 μg / kg, 且 牛 奶 中 干 扰 基 质 较 多,HPLC 法 不 能 满 足 残 留 检 测 的 要 求 本 研 究 采 用 高 效 液 相 色 谱 串 联 质 谱 法 ( HPLC MS / MS) 分 析 牛 奶 中 头 孢 洛 宁 残 留, 并 进 行 了 方 法 学 评 价 1 实 验 部 分 1.1 仪 器 与 试 剂 API 4000 电 喷 雾 串 联 四 极 杆 质 谱 仪, 配 Ana lyst 4 1 5 软 件 ( 美 国 应 用 生 物 系 统 公 司 ); Agilent 1200 型 液 相 色 谱 仪 ( 美 国 安 捷 伦 公 司 ); B 260 型 恒 温 水 浴 锅 ( 上 海 雅 荣 生 化 仪 器 设 备 有 限 公 司 ); Milli Q 纯 水 机 ( 美 国 Millipore 公 司 ); Mach1 6 R 冷 冻 型 离 心 机 ( 美 国 Thermo 公 司 ) 头 孢 洛 宁 标 准 物 质 : 产 品 编 号 32904, CAS 号 5575 21 3, 由 美 国 Sigma 公 司 提 供 ; 正 己 烷 为 国 产 分 析 纯 ; 甲 醇 乙 腈 甲 酸 均 为 色 谱 纯 ( 美 国 Fisher 公 司 ) 1.2 溶 液 的 配 制 头 孢 洛 宁 标 准 储 备 液 (500 mg / L): 准 确 称 取 头 孢 洛 宁 标 准 物 质 5 00 mg, 置 于 10 ml 容 量 瓶 中, 用 30 (v / v) 乙 腈 水 溶 液 溶 解 并 定 容 至 刻 度, 配 成 500 mg / L 标 准 溶 液, 于 4 冰 箱 中 避 光 保 存 临 用 前 用 甲 醇 0 1 甲 酸 水 溶 液 (3 7, v / v) 稀 释 成 头 孢 洛 宁 系 列 标 准 工 作 液, 现 用 现 配 0 1 甲 酸 水 溶 液 : 取 1 ml 甲 酸, 置 于 1 000 ml 容 量 瓶 内, 用 超 纯 水 定 容 至 刻 度, 超 声 后 使 用 甲 醇 0 1 甲 酸 水 溶 液 (3 7, v / v): 取 30 ml 甲 醇 与 70 ml 0 1 甲 酸 水 混 匀 即 得 1.3 样 品 前 处 理 准 确 称 取 (1 00±0 01) g 牛 奶 置 于 15 ml 离 心 管 中 加 入 5 ml 乙 腈, 涡 旋 1 min, 置 于 振 荡 器 上 以 300 r / min 振 荡 10 min, 在 4 条 件 下, 以 9 000 r / min 离 心 10 min 转 移 上 清 液 至 10 ml 试 管 中, 在 37 水 浴 中 氮 气 吹 干, 加 入 1 ml 甲 醇 0 1 甲 酸 水 溶 液 (3 7, v / v) 复 溶, 涡 旋 1 min, 溶 液 转 移 至 2 ml 离 心 管 中, 加 入 0 8 ml 正 己 烷 除 脂, 涡 旋 1 min, 在 4 下 15 000 r / min 离 心 10 min, 弃 去 正 己 烷, 过 0 22 μm 有 机 相 针 式 过 滤 器 至 2 ml 棕 色 进 样 瓶 中,LC MS / MS 分 析 1.4 色 谱 质 谱 条 件 1.4.1 色 谱 条 件 色 谱 柱 : 美 国 Penomenex Luna C 18 (150 mm 2.1 mm, 3 5 μm); 流 动 相 : 乙 腈 (A), 0 1 甲 酸 水 溶 液 ( B) 梯 度 洗 脱 程 序 :0 0 ~ 0 5 min, 10 B; 0 5 ~ 1 min, 10 B ~ 95 B; 1 ~ 4 min, 95 B; 4 ~ 4 5 min, 95 B ~ 10 B; 4 5 ~ 10 min, 10 B 流 速 :0 25 ml / min; 柱 温 :35 ; 进 样 量 :5 μl 1.4.2 质 谱 条 件 用 多 反 应 监 测 (MRM) 扫 描 模 式 ; 电 喷 雾 离 子 源 (ESI); 正 离 子 扫 描 ; 电 喷 雾 电 压 4 kv; 离 子 源 温 度 600 ; 辅 助 气 压 力 35 kpa; 雾 化 气 压 力 55 kpa; 气 帘 气 压 力 15 kpa 头 孢 洛 宁 的 MRM 质 谱 检 测 参 数 : 选 择 离 子 对 m / z 459 4 / 337 3, 459 4 / 152 3, 其 中 定 量 离 子 对 为 m / z 459 4 / 337 3; 碰 撞 能 量 (CE) 14 ev; 去 簇 电 压 (DP)70 V; 碰 撞 室 射 出 电 压 (CXP) 10 V, 射 入 电 压 (EP)10 V 2 结 果 与 讨 论 2.1 质 谱 参 数 的 确 定 头 孢 洛 宁 标 准 溶 液 (1 mg / L) 分 别 在 正 离 子 和 负 离 子 模 式 下 全 扫 描, 发 现 头 孢 洛 宁 在 正 离 子 模 式 下 的 响 应 值 更 高 头 孢 洛 宁 标 准 溶 液 (1 mg / L) 在 正 离 子 模 式 下 全 扫 描, 得 到 [ M+H] + ( m / z 459 4) 准 分 子 离 子 峰 对 m / z 459 4 进 行 二 级 质 谱 全 扫 描, 得 到 头 孢 洛 宁 二 级 全 扫 描 质 谱 图 ( 见 图 1) 结 [13] 合 头 孢 菌 素 质 子 化 离 子 的 一 般 断 裂 规 律 可 知, 头 孢 洛 宁 的 质 谱 行 为 较 简 单, 主 要 为 R2 断 裂 ( 见 图 2) 得 到 的 m / z 123 4 和 337 3; C ( 6) C ( 7) 键 及 C(7) C(8) 键 断 裂 导 致 β 内 酰 胺 环 开 环 得 到 的 m / z 152 3 和 309 3; 而 m / z 337 3 进 一 步 裂 解 又 可 得 到 m / z 152 3 其 中 m / z 337 3 和 152 3 的 强 度 相 对 较 大, 干 扰 较 小, 故 选 择 m / z 337 3 作 为 定 量 离 子,

第 5 期 李 帅 鹏, 等 : 高 效 液 相 色 谱 串 联 质 谱 法 检 测 牛 奶 中 头 孢 洛 宁 残 留 521 图 1 头 孢 洛 宁 的 二 级 质 谱 图 Fig. 1 MS / MS spectrum of cefalonium Fig. 2 图 2 头 孢 洛 宁 的 结 构 式 Chemical structure of cefalonium m / z 152 3 为 辅 助 定 性 离 子 2.2 色 谱 条 件 的 优 化 头 孢 洛 宁 属 于 β 内 酰 胺 酶 类 抗 生 素, 结 构 式 中 既 有 游 离 羧 基, 又 带 有 氨 基, 为 两 性 物 质, 极 性 小 [14] 所 选 色 谱 柱 的 填 料 应 为 直 链 烷 烃 键 合 的 硅 胶, 其 中 最 常 见 的 为 十 八 烷 基 键 合 硅 胶 ( 即 C 18 ) 研 究 对 比 了 Phenomenex Luna C 18 (150 mm 2 1 mm, 3 5 μm) 和 Waters C 18 (150 mm 2 1 mm, 5 μm) 色 谱 柱 两 种 色 谱 柱 对 头 孢 洛 宁 均 有 良 好 的 保 留, 头 孢 洛 宁 均 可 得 到 优 异 的 峰 形 综 合 考 虑, 本 文 选 择 Phenomenex Luna C 18 (150 mm 2 1 mm, 3 5 μm) 色 谱 柱 为 了 改 善 峰 形 及 提 高 分 离 度, 增 强 目 标 物 在 反 相 色 谱 柱 上 的 保 留, 经 常 在 流 动 相 溶 液 中 添 加 甲 酸 乙 酸 等 酸 性 物 质 或 者 甲 酸 铵 乙 酸 铵 [15] 等 缓 冲 盐 在 水 相 中 添 加 0 1 的 甲 酸 及 对 流 动 相 条 件 的 调 整 能 使 头 孢 洛 宁 在 色 谱 柱 上 较 好 的 保 留 ( 保 留 时 间 在 6 1 min 左 右 ), 响 应 值 高, 峰 形 优 良 2.3 样 品 前 处 理 方 法 的 优 化 2.3.1 样 品 前 处 理 方 法 的 考 察 有 关 牛 奶 中 头 孢 洛 宁 残 留 检 测 方 法 报 道 的 文 献 资 料 中, 有 的 采 用 离 心 的 方 法 预 先 除 去 脂 肪 [11], 有 的 采 用 乙 腈 沉 淀 蛋 白 [16], 有 的 添 加 ph 8 5 磷 酸 盐 [12] 缓 冲 液 稀 释 牛 奶 然 后 过 固 相 萃 取 (SPE) 柱 净 化 文 献 报 道 的 样 品 前 处 理 方 法 中, 大 部 分 都 包 含 了 操 作 繁 琐 的 SPE 净 化 步 骤, 成 本 较 高 国 家 标 准 方 [16] 法 称 取 5 g 牛 奶, 最 后 定 容 至 2 ml, 浓 缩 了 约 2 5 倍,SPE 柱 净 化 后 样 品 足 够 干 净 本 方 法 称 取 1 g 牛 奶, 最 后 定 容 至 1 ml, 正 己 烷 除 脂 后, 采 用 空 白 [17] 基 质 匹 配 标 准 溶 液 法 进 行 校 准, 检 测 结 果 显 示 样 品 同 样 足 够 干 净 而 本 试 验 无 需 SPE 柱 净 化, 成 本 较 低, 简 便 易 行, 效 率 高, 定 量 限 为 2 μg / kg, 灵 敏 度 更 高 2.3.2 提 取 液 及 浓 缩 条 件 的 选 择 牛 奶 中 蛋 白 质 较 多, 本 试 验 比 较 了 乙 腈 甲 醇 和 乙 醇 沉 淀 蛋 白 的 效 果, 结 果 发 现 乙 腈 的 沉 淀 效 果 更 好, 头 孢 洛 宁 的 回 收 率 较 高, 在 75 以 上 ; 甲 醇 和 乙 醇 沉 淀 蛋 白 效 果 不 如 乙 腈, 且 回 收 率 也 相 对 低 些 ( 约 60), 所 以 最 后 选 用 乙 腈 作 为 蛋 白 沉 淀 剂 考 察 了 沉 淀 1 g 牛 奶 中 蛋 白 质 所 需 要 的 乙 腈 的 体 积, 尝 试 过 4 5 6 8 10 ml 4 ml 时 提 取 不 充 分, 回 收 率 约 65; 5 ml 时 回 收 率 为 75 ~ 85; 连 续 增 加 乙 腈 体 积 至 10 ml, 回 收 率 几 乎 没 有 提 高 为 了 节 约 试 剂 及 提 高 方 法 的 简 便 性, 最 终 确 定 采 用 5 ml 乙 腈 进 行 提 取 氮 气 流 吹 干 浓 缩 时 考 察 了 温 度 分 别 为 30 37 40 时 对 头 孢 洛 宁 的 影 响 结 果 表 明 30 下 浓 缩 效 率 低, 单 个 样 品 吹 干 所 需 时 间 为 1 2 h, 回 收 率 为 74 ~ 80; 40 下 浓 缩 效 率 高, 但 头 孢 洛 宁 有 所 降 解, 回 收 率 只 有 58 ~ 65; 在 37 时 浓 缩 效 率 较 高, 单 个 样 品 吹 干 所 需 时 间 为 40 min, 且 头 孢 洛 宁 降 解 不 明 显, 回 收 率 为 75 ~ 87 在 浓 缩 吹 干 后, 加 入 1 ml 甲 醇 0 1 甲 酸 水 溶 液 (3 7, v / v) 复 溶, 加 入 正 己 烷 进 一 步 除 去 脂 溶 性 杂 质, 低 温 高 速 离 心 后 过 0 22 μm 滤 膜 可 保 证 样 品 足 够 干 净 2.4 标 准 曲 线 和 线 性 范 围 准 确 称 取 1 g 空 白 牛 奶 7 份 分 别 置 于 15 ml 离 心 管 中, 按 1 3 节 方 法 处 理 样 品, 用 所 得 空 白 基 质 液 分 别 配 制 头 孢 洛 宁 标 准 工 作 液 (2 5 10 20 50 100 200 μg / L), 用 HPLC MS / MS 进 行 检 测 每 一 水 平 设 5 个 平 行 样 品 同 日 检 测, 连 续 测 定 5 日 以 头 孢 洛 宁 峰 面 积 平 均 值 为 纵 坐 标 ( Y), 质 量 浓 度 为 横 坐 标 ( X,μg / L) 绘 制 标 准 曲 线, 求 得 牛 奶 中 头 孢 洛 宁 的 回 归 方 程 Y = 2 944 9 X + 2 227 5, 相 关 系 数 r = 0 999 6 2.5 检 出 限 和 定 量 限 准 确 称 取 空 白 牛 奶 1 g, 依 次 加 入 不 同 质 量 浓 度 (1 5 10 20 50 μg / L) 的 头 孢 洛 宁 标 准 工 作 液 100 μl, 涡 旋 混 匀, 使 得 样 品 中 头 孢 洛 宁 的 添 加 浓 度 分 别 为 0 1 0 5 1 2 5 μg / kg, 按 1 3 节 方 法 处 理 样 品 以 S / N 3 确 定 检 出 限 (LOD), 以 S / N 10 确 定 定 量 限 (LOQ) 牛 奶 中 头 孢 洛 宁 的 检 出 限 为 0 5 μg / kg, 定 量 限 为 2 μg / kg

522 色 谱 第 32 卷 2.6 回 收 率 和 精 密 度 的 测 定 回 收 率 和 精 密 度 采 用 在 空 白 牛 奶 中 添 加 标 准 溶 液 的 方 法 进 行 检 测 其 MRM 谱 图 见 图 3 和 图 4 根 据 残 留 限 量 要 求 及 欧 盟 对 头 孢 洛 宁 设 置 的 MRL, 在 LOQ 1 / 2MRL MRL 2MRL 4 个 添 加 水 平,1 g 空 白 牛 奶 中 分 别 添 加 20 50 100 200 μg / L 的 头 孢 洛 宁 标 准 工 作 液 100 μl, 即 牛 奶 中 添 加 浓 度 为 2 5 10 20 μg / kg, 旋 涡 混 匀, 按 1 3 节 方 法 处 理 样 品, 每 一 水 平 设 5 个 平 行 样 品 同 日 检 测, 连 续 测 定 5 日 求 得 空 白 牛 奶 中 添 加 头 孢 洛 宁 回 收 率 的 平 均 值 (X) 和 标 准 差 ( SD), 同 时 计 算 日 内 和 日 间 相 对 标 准 偏 差 结 果 表 明, 头 孢 洛 宁 在 牛 奶 中 的 平 均 回 收 率 介 于 78 5 ~ 86 2 之 间, 日 内 相 对 标 准 偏 差 为 1 5 ~ 6 2, 日 间 相 对 准 偏 差 为 2 9 ~ 5 6 ( 见 表 1) 图 3 空 白 牛 奶 的 MRM 谱 图 Fig. 3 MRM chromatogram of a blank milk sample 表 1 牛 奶 中 头 孢 洛 宁 的 加 标 回 收 率 及 相 对 标 准 偏 差 (n = 5) Table 1 Recoveries and relative standard deviations (RSDs)of cefalonium spiked in milk (n = 5) Spiked / (μg / kg) Recovery / Intra day RSD / Inter day RSD / 2 78.5±2.3 1.8 2.9 5 84.5±3.7 2.3 4.4 10 86.2±3.1 1.5 3.6 20 80.8±4.5 6.2 5.6 头 孢 洛 宁 稳 定 性 良 好 2.8 基 质 效 应 的 消 除 样 品 基 质 溶 液 对 待 测 物 的 电 喷 雾 离 子 化 影 响 较 大, 可 抑 制 或 增 强 信 号 响 应, 导 致 检 测 结 果 的 准 确 度 与 精 密 度 降 低 本 试 验 通 过 在 空 白 牛 奶 基 质 提 取 液 中 添 加 低 中 高 3 个 浓 度 即 2 20 200 μg / L 的 头 孢 洛 宁 标 准 溶 液, 与 纯 溶 剂 中 的 信 号 强 度 进 行 比 较, 牛 奶 基 质 峰 面 积 与 纯 溶 剂 的 峰 面 积 比 值 分 别 为 64 ~ 92 75 ~ 88 80 ~ 86, 说 明 牛 奶 基 质 对 头 孢 洛 宁 检 测 有 抑 制 效 应 为 消 除 样 品 基 质 效 应 的 影 响, 采 用 空 白 基 质 匹 配 标 准 溶 液 法 进 行 校 准 2.9 抽 样 检 测 从 不 同 市 场 购 买 新 鲜 牛 奶 10 份, 从 超 市 购 买 国 产 蒙 牛 伊 利 品 牌 盒 装 牛 奶 各 10 份, 以 及 新 西 兰 澳 大 利 亚 进 口 盒 装 牛 奶 各 10 份, 每 份 100 ml, 共 50 份 样 品, 按 本 方 法 进 行 样 品 前 处 理 和 检 测 结 果 显 示, 所 有 国 产 样 品 均 未 检 测 出 头 孢 洛 宁 残 留, 有 1 份 新 西 兰 进 口 样 品 检 测 出 8 0 μg / kg 头 孢 洛 宁 残 留 这 是 因 为 头 孢 洛 宁 在 国 内 尚 未 批 准 使 用, 有 关 头 孢 洛 宁 防 治 奶 牛 乳 房 炎 的 制 剂 还 处 于 研 发 阶 段, 尚 未 投 入 生 产 上 述 结 果 表 明 该 方 法 可 用 于 检 测 牛 奶 中 头 孢 洛 宁 的 残 留 量 3 结 论 图 4 Fig. 4 2.7 稳 定 性 空 白 牛 奶 添 加 2 μg / kg 头 孢 洛 宁 的 MRM 谱 图 MRM chromatogram of a blank milk sample spiked with cefalonium at 2 μg / kg 取 20 份 空 白 牛 奶, 添 加 MRL 水 平 的 头 孢 洛 宁 标 准 溶 液, 按 1 3 节 方 法 处 理 样 品, 用 HPLC MS / MS 进 行 检 测, 记 录 其 峰 面 积 ; 于 室 温 条 件 下 放 置 24 h 后 重 新 检 测, 比 较 两 次 峰 面 积 的 变 化 结 果 显 示, 牛 奶 样 品 中 头 孢 洛 宁 的 峰 面 积 变 化 在 - 3 35 ~ 3 80 之 间, 说 明 样 品 在 室 温 条 件 下 放 置 24h 内, 本 文 建 立 了 HPLC MS / MS 测 定 牛 奶 中 头 孢 洛 宁 残 留 量 的 分 析 方 法 样 品 经 乙 腈 提 取, 氮 气 吹 干 后 用 甲 醇 0 1 甲 酸 水 溶 液 (3 7, v / v) 复 溶, 正 己 烷 去 除 脂 肪 后, 经 HPLC MS / MS 分 析 本 方 法 前 处 理 操 作 简 便 易 行, 不 需 要 SPE 柱 净 化, 所 需 试 剂 较 少, 成 本 较 低, 且 精 密 度 和 重 复 性 好, 灵 敏 度 高, 定 量 限 低 于 欧 盟 对 牛 奶 中 头 孢 洛 宁 制 定 的 最 高 残 留 限 量, 适 用 于 牛 奶 中 头 孢 洛 宁 的 残 留 检 测 参 考 文 献 : [1] Cephalonium ( 头 孢 洛 宁 ). [ 2013 12 16]. http: // www. bi omart.cn / infosupply / 5329604.htm [2] Bryan M A, Heuer C, Emslie F R. New Zeal Vet J, 2011, 59 (4): 166

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