蛋白质相关产品选择指南 在生物体内, 蛋白质扮演着构筑生命大厦的 砖块 角色, 随着破译生命密码的人类基因组计划进入尾声, 一个以蛋白质为研究重点的 后基因组时代 已经拉开序幕, 蛋白质将是今后的重点研究方向之一 从 2005 年开始,TIANGEN 公司陆续推出蛋白系列相关产品, 包括抗体, 蛋白质分子量标准, 蛋白质显色试剂, 蛋白胶快速染色液 蛋白质定量试剂盒等, 力争为蛋白质学研究技术的不断进步和完善发挥力量 八蛋白检测相关更多信息请参见 : www.tiangen.com 免费电话 : 800-990-6057 400-810-6057 E-mail: people@tiangen.com 313
八蛋白检测相关更多信息请参见 : www.tiangen.com 免费电话 : 800-990-6057 400-810-6057 E-mail: people@tiangen.com 关于 SDS-PAGE 凝胶电泳 SDS-PAGE 凝胶电泳是在 PAGE 凝胶电泳中引进阴离子去污剂 SDS, 通过 SDS 打开分子内和分子间氢键, 破坏蛋白质的二级和三级结构 蛋白质在一定浓度的含有 SDS 的溶液中, 与 SDS 分子按比例混合, 形成 SDS- 蛋白质复合物, 这种复合物由于结合了大量 SDS, 使蛋白质丧失了原有的电荷状态形成仅保持原有分子大小为特征的负离子团块, 从而降低或消除了各种蛋白质分子间天然的电荷差异 由于 SDS 与蛋白质的结合是与蛋白质分子量成比例的, 因此在进行电泳时, 蛋白质分子的迁移速度取决于蛋白质分子量大小 SDS-PAGE 凝胶的有效分离范围 分离胶浓度 (%) 15 10 7.5 5.0 线性分离范围 (kda) 12-43 16-68 36-94 57-212 SDS-PAGE 凝胶电泳常见问题分析 Q 蛋白带型聚团 A-1 上样过量 降低蛋白上样量或降低蛋白浓度 A-2 样品粘度过大 延长煮沸时间 A-3 样品沉淀 加大样品中 SDS 的浓度 A-4 样品中含有不溶物质 离心或过滤样品以除去特定污染物 A-5 制胶不佳 确保制胶均匀, 一次完成 Q 蛋白 Marker 条带缺失或条带模糊 A-1 分离胶浓度不准确 配制正确浓度的分离胶 A-2 缓冲液放置过长 定期更新缓冲液 A-3 甲叉丙烯酰胺贮存液放置时间过长或配制不准确 及时更新贮存液, 此贮存液配制时在 37 水浴溶解 30 min 以上 A-4 电泳时间过长 观察前面的指示剂染料, 掌握恰当的电泳时间 Q 哑铃形条带或 微笑 条带 A-1 上样体积过大导致不完全堆积 使用恰当的上样体积, 样品不宜过稀 A-2 电压过大 降低电压 A-3 分离胶表面不平 在制胶时使分离胶表面水平 A-4 凝胶过期 在指定的失效期前使用凝胶 314
八蛋白检测相蛋白质分子量标准 目录号 产品名称 包装 价格 蛋白质分子量标准 MP102 (14.4-94 kda) 20 次 90 元 产品组成 产品名称 包装 蛋白质 Marker 200 µl 浓度 TIANGEN 公司研制生产的蛋白质 Marker 是由数种已知氨基酸序列蛋白质分别纯化后混合而成的蛋白质溶液, 经 SDS-PAGE 凝胶电泳后用考马斯亮蓝染色可得清晰的蛋白带 建议使用分离胶浓度为 12% 0.1-0.2 µg/µl 产品特点 适合于 12%-15%SDS-PAGE 电泳 保存条件 无需加热, 直接上样, 使用更方便 -20 保存 适用范围可用于 SDS-PAGE 电泳, 用考马斯亮蓝染色 电泳图蛋白质 Marker (14.4kDa-94.0kDa) MW (kda) 94.0 66.2 45.0 33.0 关26.0 更多信息请参见 : www.tiangen.com 免费电话 : 800-990-6057 400-810-6057 E-mail: people@tiangen.com 20.0 14.4 目录号 :MP102 12%SDS-PAGE 凝胶电泳 ( 上样量 10 µl) 315
八蛋白检测相关更多信息请参见 : www.tiangen.com 免费电话 : 800-990-6057 400-810-6057 E-mail: people@tiangen.com 预染蛋白质分子量标准 目录号 产品名称 包装 价格 MP203 预染蛋白质分子量标准 Ⅱ ( 蓝色, 19-117 kda) 20 次 260 元 MP204 预染蛋白质分子量标准 Ⅲ ( 蓝色, 18-94 kda) 20 次 180 元 MP205 双色预染蛋白质分子量标准 (18-100 kda) 20 次 220 元 MP206 宽范围彩色预染蛋白质分子量标准 (11-245 kda) 20 次 350 元 产品组成 产品名称预染蛋白质 Marker Ⅱ ( 蓝色 ) 预染蛋白质 Marker Ⅲ ( 蓝色 ) 双色预染蛋白质 Marker 宽范围彩色预染蛋白质 Marker 浓度 0.2-0.4 µg/µl 保存条件 -20 保存 包装 100 µl 200 µl 200 µl 100 µl 预染蛋白质 Marker 为几种蛋白质分别纯化预染后混合而成的蛋白 质溶液, 这些蛋白混合物与蓝色或彩色染料共价偶联, 可在凝胶电泳时出现强度均匀的蛋白带, 可以直接观察蛋白电泳及判断 Western 转移效果 同未预染的蛋白标准相比, 预染蛋白 Marker 因与染料共价偶联而在 SDS-PAGE 电泳时的迁移特性发生某些改变 如果要精确判定分子量, 推荐将 TIANGEN 公司的非预染蛋白质 Marker( 目录号 :MP102) 与预染蛋白 Marker 配合使用 产品特点 电泳时 电泳后或转膜后均能通过肉眼观察蛋白条带 无需加热, 直接上样, 使用更方便 适用范围蛋白质凝胶电泳和蛋白质转移 ( 从胶上到膜上 ) 预染蛋白质 Marker Ⅱ ( 蓝 预染蛋白质 Marker Ⅲ ( 蓝 双色预染蛋白质 Mark- 宽范围彩色预染蛋白质 Marker 色 )(19 kda-117 kda) 色 )(18 kda-94 kda) er(18 kda-100 kda) (11 kda-245 kda) MW (kda) MW (kda) MW (kda) MW (kda) 117 85 49 34 25 19 94 60 45 27 18 100 60 45 28 18 245 180 135 100 75 63 48 35 25 20 17 11 目录号 :MP203 12% SDS-PAGE 电泳 ( 上样量 5 µl) 目录号 :MP204 12% SDS-PAGE 电泳 ( 上样量 10 µl) 目录号 :MP205 12% SDS-PAGE 电泳 ( 上样量 10 µl) 目录号 :MP206 4%-20% SDS-PAGE 电泳 ( 上样量 5 µl) 316
八蛋白检测相考马斯亮蓝快速染色液 CBB Fast Staining Solution 快速染色 灵敏度高 安全无害适用范围 SDS-PAGE 或非变性 PAGE 蛋白电泳胶的快速染色, 或 Western 转膜后 PAGE 胶上残余蛋白的检测 自备试剂双蒸水或去离子水保存条件 2-8 保存 目录号包装价格 PA101 100 ml 50 元 TIANGEN 公司研制生产的考马斯亮蓝快速染色液是一种即用型快速灵敏而且安全的考马斯亮蓝 G-250 染液, 采用独特配方配制而成, 用于 SDS-PAGE 或非变性 PAGE 蛋白电泳胶的快速染色 这种染料节省了制备相关溶液所需的时间和精力, 完全没有毒性而且不需要酸 醇固定或者脱色, 以其方便快捷的操作, 卓越的灵敏度, 成为蛋白质染色产品中的首选 产品特点 ( 与常规考马斯亮蓝染色液相比较 ) 考马斯亮蓝快速染色液 染色快, 脱色快, 全过程仅需 10 min 全新配方, 不含甲醇 乙酸, 无毒, 无刺激性气味 低背景, 高灵敏度,BSA 灵敏度可低至 30 ng 易操作, 易保存, 不需特殊设备, 脱色后凝胶可在纯水中保存数月 常规甲醇考马斯亮蓝染色液 染色 脱色长达 4 h 以上 含甲醇 乙酸, 强刺激性气味, 影响身体健康 灵敏度低,BSA 灵敏度达到 100 ng 需要特殊配制的缓冲液来保存凝胶, 长期保存需要制成干胶 染色结果 BSA ng 30 300 1000 BSA 常见问题及分析 关Q 背景高 A-1 脱色不充分 电泳结束后, 取胶放入双蒸水或去离子水中, 延长洗涤时间或增加洗涤次数 Q 染色后未见蛋白条带 A-1 SDS 及盐类等杂质未除尽 电泳结束后, 取胶放入双蒸水或去离子水中, 延长洗涤时间或增加洗涤次数 A-2 染色时间过短 延长煮沸时间或染色时间 A-3 蛋白上样量太少 建议在电泳时加两个不同量的 BSA, 并将此两个泳道作为阳性对照 更多信息请参见 : www.tiangen.com 免费电话 : 800-990-6057 400-810-6057 E-mail: people@tiangen.com 317
八蛋白检测相关更多信息请参见 : www.tiangen.com 免费电话 : 800-990-6057 400-810-6057 E-mail: people@tiangen.com BCA 蛋白质定量试剂盒 BCA Protein Assay Kit 快速 便捷 灵敏 兼容性好 目录号 包装 价格 PA115-01 50 次 ( 试管检测 ) 380 元 500 次 ( 微板检测 ) PA115-02 250 次 ( 试管检测 ) 1000 元 2500 次 ( 微板检测 ) 产品组成 试剂盒组成 PA115-01 PA115-02 BCA 试剂 A 100 ml 500 ml BCA 试剂 B 3 ml 15 ml BSA 标准品 (2 mg/ml) 2 1 ml 10 1 ml 保存条件 BCA 试剂 A 和 BCA 试剂 B: 室温 (15-25 ) 保存 BSA 标准品 :-20 保存 产品应用测定含有较高浓度去垢剂蛋白溶液中的蛋白浓度 使用说明 采用 37 孵育 30 min 或室温放置 2 h 进行反应, 结果无差异 蛋白溶液中含有物质不同需采用不同的定量方法 BCA 蛋白质定量试剂盒 (BCA Protein Assay Kit) 是根据目前世界 上最常用的两种蛋白浓度检测方法之一 BCA(bicinchoninic acid) 法研制而成, 实现了对蛋白质进行快速 稳定 灵敏的浓 度测定 本试剂盒的原理是蛋白质分子中的肽键结构在碱性环境下能与 Cu 2+ 络合生成络合物, 将 Cu 2+ 还原成 Cu +, 而 BCA 试剂可敏感特异地与 Cu + 结合, 形成稳定的有颜色的复合物, 并在 562 nm 处有最大光吸收值, 该复合物颜色深浅与蛋白质浓度成正比, 可根据吸收值的大小来测定蛋白质的含量 1 h 内即可完成蛋白质定量检测 本试剂盒含有牛血清白蛋白 (BSA) 溶液作为蛋白质标准溶液, 测定范围为 20-2000 µg/ml 产品特点 便捷快速 : 与 Lowry 法相比, 该方法可在 1 h 内完成蛋白质定量检测, 工作液配制后 24 h 内使用无影响 灵敏准确 : 测定范围是 20-2000 µg/ml(562 nm 读数 ) 在测定范围内有良好的线性关系, 变异系数小 兼容性好 : 与 Bradford 法相比, 对去垢剂耐受能力大为提高, 在 Tween20 低于 4%,NP40 低于 5%,SDS 低于 4%, Triton X-100 低于 4% 的浓度范围内, 即可获得准确定量结果 ( 其余物质耐受度详见说明书 ) 使用微板法测定时将体积按比例减小 实验例 562 nm 吸光度值 2.5 2 1.5 1 0.5 y=0.0009x+0.0532 R 2 =0.9941 0 0 500 1000 1500 2000 2500 BSA 浓度 (µg/ml) 562 nm 吸光度值 2 1.5 1 0.5 y=0.0009x+0.048 R 2 =0.9967 0 0 500 1000 1500 2000 2500 BSA 浓度 (µg/ml) 试管检测 BSA 浓度标准曲线 微板检测 BSA 浓度标准曲线 318
八蛋白检测相Bradford 蛋白质定量试剂盒 Bradford Protein Assay Kit 目录号 包装 价格 快速灵敏 操作简便 兼容性广 PA102 100 次 ( 试管检测 ) 500 次 ( 微板检测 ) 200 元 产品组成 试剂盒组成考马斯亮蓝染液牛血清白蛋白 BSA 标准溶液 (1 mg/ml) 保存条件考马斯亮蓝 :2-8 避光保存蛋白标准 BSA:-20 保存 实验例 用 BSA 制备的标准曲线 吸光度值 包装 300 ml 10 1 ml 1 0.9 0.8 0.7 0.6 0.5 0.4 0.3 0.2 0.1 0 0 10 20 30 40 50 60 70 y=0.0151x-0.001 R 2 =0.9999 BSA 浓度 (µg/150 µl) Bradford 蛋白质定量试剂盒是根据目前世界上最常用的两种蛋白浓度检测方法之一 : 考马斯亮蓝 G-250(Coomassie Brilliant Blue G) 法研制而成, 实现了蛋白浓度测定的快速, 稳定和高灵敏度, 其原理是考马斯亮蓝 G-250 可以在酸性条件下和蛋白质结合产生特殊的蓝色, 最大吸收波长在 595 nm 处 染色反应可在 5-10 min 内完成, 颜色能保持 30 min 稳定, 因此可通过比色分析在几分钟内快速测定蛋白质含量 本试剂盒含有配制好的考马斯亮蓝溶液和牛血清白蛋白 (BSA) 溶液作为蛋白质标准溶液, 测定范围为 50-1000 µg/ml 产品特点 快速方便 : 即开即用, 操作简便 灵敏准确 : 测定范围是 50-1000 μg/ml(595 nm 读数 ), 可检测 25 μg/ml 的蛋白质, 在测定范围内有较好的线性关系, 变异系数小 兼容性广 : 与其它蛋白浓度测定方法 ( 如 Lowry 法 ) 相比, 该方法测定蛋白浓度不受绝大部分样品中的化学物质的影响 样品中的 DTT 浓度可高达 5 mm, 但受略高浓度的去垢剂影响, 需确保 SDS 低于 0.1%,Triton X-100 低于 0.1%,Tween-20,60 和 80 低于 0.06%, 使用微板法测定时将体积按比例减小 关常见问题及分析 Q 空白对照光吸收值正常, 但标准对照和样品中的吸收值不佳 A-1 试剂保存不当 置于 4 保存 A-2 试剂温度过低 使试剂温度逐渐恢复成室温 A-3 未在正确波长检测吸光度 在 595 nm 处读数 Q 样品试管中有沉淀物 A-1 样品中含有表面活性剂 ( 去垢剂 ) 透析或稀释样品以去除杂质 A-2 样品未充分混匀或放置时间过长, 与染料形成聚合体 定量前充分混匀样品 更多信息请参见 : www.tiangen.com 免费电话 : 800-990-6057 400-810-6057 E-mail: people@tiangen.com 319
八蛋白检测相关更多信息请参见 : www.tiangen.com 免费电话 : 800-990-6057 400-810-6057 E-mail: people@tiangen.com 标签抗体 工作浓度 Western Blot 杂交 (ECL 显色 ): 1:200-5000 稀释, 室温孵育 1 h 免疫染色 :1:500-2000 稀释 免疫沉淀 ELISA Dot Blot: 需通过滴定实验确定最佳反应浓度 适用范围 ELISA Dot Blot Western Blot 免疫沉淀和免疫染色 保存条件 -20 避光保存 应用举例 应用不同公司提供的不同浓度 体积的 anti-his 单克隆抗体检测 His-Tag 蛋白 Marker 融合蛋白显示 :Line3 所用的 anti-his 灵敏度显著高于 Line 1 和 2 1 2 3 1 2 3 1 2 3 1 2 3 Line1: 进口 anti-his 抗体 -A; Line2: 进口 anti-his 抗体 -B; Line3:TIANGEN anti-his 单克隆抗体 1.25 µl 2.5 µl 1.25 µl 2.5 µl Anti-His 抗体 0.1 µg/ml Anti-His 抗体 0.2 µg/ml 应用 TIANGEN Anti-His 检测 His-Tag 融合蛋白 1 2 免疫荧光染色检测 (HEK293 细胞 ) Western Blot 检测转染 His-Tag 融合蛋白红色荧光显示表达的 His-Tag 融合蛋白表达载体的 HEK293 细胞 (C- 末端 ), 蓝色荧光为细胞核 1: 未转染表达载体 ; 2: 转染 His-Tag 融合蛋白表达载体 320
Anti-His Antibody 目录号包装价格 AB102-01 20 µl (1 mg/ml) 320 元 AB102-02 100 µl (1 mg/ml) 1180 元 宿主小鼠, 单克隆抗体 适用范围 ELISA Dot Blot Western Blot 免疫沉淀和免疫染色 工作浓度 Western Blot 杂交 (ECL 显色 ):1:200-5000 稀释, 室温孵育 1 h( 稀释比例与抗原的纯度和量有关, 由实验经验值决定 ) 免疫染色 :1:500-2000 稀释 免疫沉淀 ELISA Dot Blot: 需通过滴定实验确定最佳反应浓度 自备试剂 PBS 或 TBS 保存条件 -20 保存 Anti-His Antibody 为高纯度的小鼠单克隆抗体, 属 IgG2b 亚型 适于检测各种商品化编码 6 His-Tag 序列的载体表达的含组氨酸标签的蛋白产物 该抗体可高度特异性地结合位于蛋白质 C 末端,N 末端和内部的六个连续组氨酸 在蛋白质免疫相关实验中使用该抗体, 可获得特异性高, 目的条带清晰的理想的实验结果 产品特点 高纯度 高浓度 (1 mg/ml 的抗体浓度 ) 高特异性 : 特异检测 HisHisHisHisHisHis 和 C- 末端 N- 末端或内部 His-Tag 融合蛋白 高灵敏度 : 可检测 1-2 ng His-Tag 融合蛋白 (WesternBlot 杂交,ECL 显色 ) 进口品质, 无交叉反应性 : 与细菌 酵母 昆虫细胞或哺乳动物细胞裂解物无交叉反应 八蛋白检测相关更多信息请参见 : www.tiangen.com 免费电话 : 800-990-6057 400-810-6057 E-mail: people@tiangen.com 321
八蛋白检测相关更多信息请参见 : www.tiangen.com 免费电话 : 800-990-6057 400-810-6057 E-mail: people@tiangen.com 可溶型单组分 TMB 底物溶液 Soluble TMB Substrate Solution 灵敏 无毒 使用方便 目录号 包装 价格 PA107-01 100 ml 180 元 PA107-02 5 100 ml 680 元 应用范围 ELISA 其它通过液体反应检测 HRP 的应用 自备试剂 0.1M H 2 SO 4 检测试剂 保存条件 2-8 避光保存 在辣根过氧化物酶 (HRP) 的数种颜色反应底物中,TMB 因其灵敏度较高及无致癌性而得到广泛应用 可溶型单组分 TMB 底物溶液与 HRP 反应形成可溶性蓝褐色产物, 反应动力学较常规 TMB 底物快 40% 左右, 适用于通过液体反应快速检测 HRP 的情形如 ELI- SA 本产品为一步即用型溶液, 无需混合, 方便用户使用 主要成分 TMB 稳定的过氧化物 应用 TIANGEN 可溶型单组分 TMB 显色试剂盒显色实验 1 2 3 4 5 1. 二抗稀释 1:100; 2. 二抗稀释 1:500; 3. 二抗稀释 1:1000; 4. 二抗稀释 1:2000; 5. 二抗稀释 1:3000 注 :TIANGEN IgG-HRP 二抗 ELISA 效价为 1:500-1000 322
八蛋白检测相增强型 HRP-DAB 底物显色试剂盒 Enhanced HRP-DAB Chromogenic Substrate Kit 操作简便 灵敏度高 应用范围 Western blot 沉淀 免疫组化 其它通过沉淀反应检测 HRP 的应用 保存条件 2-8 避光保存 目录号包装价格 PA110 20 试剂 A:2 1.5 ml 20 试剂 B:2 1.5 ml 20 试剂 C:2 1.5 ml 1 HRP 缓冲液 :60 ml 170 元 TIANGEN 公司研究开发的增强型 HRP-DAB 底物显色试剂盒中 含有检测辣根过氧化物酶 (HRP) 的所有试剂, 适合于免疫组化 中的组织切片染色或 Western blot 杂交的 PVDF 膜 尼龙膜等的 染色 经免疫反应固定的辣根过氧化物酶可以催化底物 DAB 在 目的蛋白所在的位置转变为蓝紫色的化合物, 可根据颜色反应来鉴定辣根过氧化物酶的量, 进而确定目的蛋白的位置及含量 产品特点 该显色试剂盒由试剂 A:DAB 底物储存液 ; 试剂 B: 稳定的 过氧化物 ; 试剂 C: 增色溶液组成 显色过程中需要避光, 在显色后可拍照或扫描 使用 A B C 试剂显色后的免疫组织可用 Nuclear fast red 复染 应用 TIANGEN 增强型 HRP-DAB 显色试剂盒显色实验 1 2 3 4 5 应用举例 关1. 二抗稀释 1:100; 2. 二抗稀释 1:300; 3. 二抗稀释 1:500; 4. 二抗稀释 1:1000; 5. 二抗稀释 1:2000 注 :TIANGEN IgG-HRP 二抗 Western blot 效价为 1:400-500 更多信息请参见 : www.tiangen.com 免费电话 : 800-990-6057 400-810-6057 E-mail: people@tiangen.com 增强型 HRP-DAB 显色试剂盒 应用于 Western blot 实验 323
八蛋白检测相关更多信息请参见 : www.tiangen.com 免费电话 : 800-990-6057 400-810-6057 E-mail: people@tiangen.com Pro-light HRP 化学发光检测试剂 Pro-light HRP Chemiluminesent Detection Reagent 方便快捷 高灵敏度 目录号包装价格 PA112-01 PA112-02 试剂 A:25 ml 试剂 B:25 ml 试剂 A:2 25 ml 试剂 B:2 25 ml 280 元 520 元 主要成分溶液 A:Luminol 及特制发光增强剂溶液 B: 过氧化物及特制稳定剂 使用说明 将 A 液和 B 液同等体积混匀组成工作液即可使用 用量以充分覆盖膜或酶标板微孔为基准 ( 每 10 cm 2 膜需要大约 1 ml 工作液,96 孔酶标板每孔建议使用 100 µl 工作液 ) 自备试剂 含 0.05%-0.1%Tween-20 的 PBS Western Blot 膜封闭液 以合适的稀释比率稀释在封闭液或 PBS 中的一抗 以合适的稀释比率稀释在封闭液或 PBS 中的 HRP 标记的二抗 保存条件 2-8 避光保存 Pro-Light HRP 化学发光检测试剂是基于 Luminol 的化学发光底物试剂, 它由辣根过氧化物酶 (HRP) 催化发生化学反应, 发出荧光, 结果可以通过 X 光片压片和其它显影技术展现或使用 Luminometer 检测 产品特点 灵敏度高 : 可检测 pico 级抗原 高信噪比, 背景干净 发光迅速, 持续时间达 1 h 可检测低丰度蛋白, 节省抗体 ( 一抗 1:2000-1:5000; 二抗 1:4000-1:10000) 稳定性好 :Pro-Light HRP 化学发光检测试剂在 A 液和 B 液分开的情况下,4 避光可保存至少一年 应用范围 Western & Far-Western Blot ELISA Southern Blot Northern Blot Dot Blot Pro-Light HRP 化学发光试剂盒, 灵敏度检测实验 应用举例 Pro-Light HRP 化学发光试剂盒应用于 Western blot 实验 324
八蛋白检测相Q&A Western Blot 常见问题分析 Q 转印膜上蛋白样品量少 A-1 蛋白质上样量不足或蛋白样品中目的蛋白的含量低 通过预实验确定最佳上样量, 保证目的蛋白的量在一抗检测范围内 Q 转膜效率低 A-1 蛋白质变性不充分 在转移缓冲液中加入 SDS, 利于蛋白质的变性和转移 A-2 转移过程中凝胶和转印膜之间存在气泡, 使蛋白转移不完全 操作中使用表面光滑的玻璃棒彻底地赶走凝胶和转印膜之间的气泡 A-3 凝胶和转印膜两侧的滤纸过大互相接触, 造成电流直接从滤纸通过, 蛋白质没有转移的推动力 将凝胶和转印膜两侧的滤纸裁成与凝胶一般大小, 对齐滤纸 转印膜及两侧的滤纸的四边, 避免彼此长出边缘的直接接触 A-4 转印膜过期或不适合 选用合适合格的转印膜 A-5 电压或电流过小 严格按照每种蛋白转移装置的要求进行操作 A-6 转印的时间过短 根据不同的转移装置保证转移的时间 A-7 蛋白转移过程中环境过热 应配备冷却装置, 保证凝胶和膜处于 20 以下 Q 显色过程中无条带出现 A-1 所使用的第一抗体 第二抗体及显色方法不合适 选择适于目的蛋白的第一抗体 ; 适于第一抗体的第二抗体 ; 适于第二抗体的显色方法 关A-2 封闭液中起封闭作用的物质过浓 降低起封闭作用物质的浓度 A-3 目的条带含量低于一抗的检测灵敏度 使用合适方法增加目的条带的含量 A-4 一抗的效价低或稀释倍数过大 增加一抗的浓度即减少稀释倍数 A-5 二抗的效价低 增加二抗的浓度即减少稀释倍数 A-6 显色剂底物浓度不足 增加显色剂的用量 A-7 一抗或二抗的作用时间不足 相应地增加作用时间, 保证在 37 作用的时间在 1h 以上 更多信息请参见 : www.tiangen.com 免费电话 : 800-990-6057 400-810-6057 E-mail: people@tiangen.com 325
八蛋白检测相关更多信息请参见 : www.tiangen.com 免费电话 : 800-990-6057 400-810-6057 E-mail: people@tiangen.com A-8 一抗或二抗后洗涤的时间和次数过长 减少洗涤次数和时间, 以 37,5-10 min, 三次为好, 可以酌情增减 A-9 显色剂失效 用二抗直接检测显色剂 Q 显色背景过高 A-1 封闭液中封闭物质不足 增加起封闭作用的物质的浓度 A-2 转印膜未能完全的被封闭液所覆盖, 膜上的非蛋白样品的部位暴露未能被封闭物质占据 注意使封闭液完全的覆盖转印膜的每一部份 A-3 封闭的时间和温度不够 37 下至少应轻轻振摇封闭 2 h 以上或 4 过夜 A-4 一抗为多克隆抗体, 与非目的条带也有作用 适当的减少一抗的浓度和作用的时间, 增加洗涤的次数 A-5 二抗浓度过高洗涤不彻底 降低二抗的浓度, 适当增加洗涤的时间 A-6 化学显色底物过多 按照说明适量加入显色剂各种成分 A-7 二抗的显色时间过长 ( 如辣根过氧化物酶 ) 如果选用的是在短时间内褪色的二抗显色法应注意避光显色时间不宜太长, 显色后即拍照留图 Q 条带信号弱 A-1 一抗或二抗浓度低 减少一抗及二抗的稀释倍数或增加作用的时间 A-2 目的条带量少于一抗检测的灵敏度 浓缩目的蛋白或增加上样用量 326
八蛋白检测相WorkBeads TM 40 Ni 应用于高通量 His-tag 重组蛋白分离纯化 目录号 产品名称 包装 价格 WM6-40 650 001 WorkBeads TM 40 Ni Bulk Media 25 ml 询价 WM6-40 650 003 WorkBeads TM 40 Ni Bulk Media 150 ml 询价 WM6-40 650 010 WorkBeads TM 40 Ni Bulk Media 1 L 询价 性能参数琼脂糖含量 (%) 7.4-7.8 金属离子载量 40-50 ( µeqv Ni 2+ /ml) 颗粒大小 (μm) 32-60 最大流速 >500 cm/h (20 cm 柱床,5Bar 压力 ) ph 稳定性 ph 2-14 100% 甲醇,100% 乙化学稳定性醇,8M 尿素,6M 盐酸胍,30% 乙腈,70% 甲酸,30% 三氟乙酸 WorkBeads TM 40Ni 采用了专利技术的交联方法 该产品可以承受高流速以及拥有极好的物理稳定性 琼脂糖为基质的填料已经应用于工业生产几十年, 其与生物分子 ( 如蛋白质, 核酸, 以及糖类等 ) 相容性好并且特异性高 另外人工合成材的基质存在许多微孔, 这会导致柱子微环境 ph 值的变化, 而琼脂糖基质没有微孔, 这极大的提高了柱子的分离效果 该填料采用溴醇方法活化, 在 Ni 离子和琼脂糖基质之间存在一个间隔臂 Workbeads 40Ni 已经预螯合了 Ni, 因此用户只需将琼脂糖装入柱中即可以直接进行重组蛋白的分离纯化 该填料温保存在 22% 的乙醇中, 经过冲洗后可以直接使用 产品特点 以琼脂糖为基质的填料, 在生物行业中广泛应用 非常高的蛋白载量, 可以高达 60 mg/ml 高特异性, 高纯度 高流速 >500 cm/h 关更多信息请参见 : www.tiangen.com 免费电话 : 800-990-6057 400-810-6057 E-mail: people@tiangen.com 327
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