第 34 卷第 5 期 2013 年 9 月 西安交通大学学报 ( 医学版 ) 犑狅狌狉狀犪犾狅犳犡犻 犪狀犑犻犪狅狋狅狀犵犝狀犻狏犲狉狊犻狋狔 ( 犕犲犱犻犮犪犾犛犮犻犲狀犮犲狊 ) 犞狅犾.34 犖狅.5 犛犲狆.2013 散癖平胃方剂对人胃癌细胞株增殖和凋亡的影响 姜炅 1, 董蕾 1, 秦斌 1, 郭晓燕 1, 王新阳 2, 李红 1 ( 西安交通大学医学院 :1. 第二附属医院消化科, 陕西西安 710004; 2. 第一附属医院泌尿外科, 陕西西安 710061) 摘要 : 目的探讨中药散癖平胃方剂 (SPPW) 对人胃癌细胞株增殖和凋亡的影响 方法体外培养人胃癌细胞株 SGC 7901 和 BGC 823, 设立 3 个 SPPW 质量浓度组 (10 100 1000μg/mL) 阴性对照组和 5 FU 阳性对照组进行干预,MTT 比色法检测干预不同时间后各组吸光度 ( 犃 ) 值 ; 流式细胞仪检测肿瘤细胞凋亡 ; 透射电镜观察细胞超微结构的改变 ;Westernblot 法检测 β 连环素蛋白 ( β catenin) 表达变化 结果与阴性对照组相比,SPPW 作用于胃癌细胞株 SGC 7901 及 BGC 82312~72h 后, 对细胞增殖均有抑制作用 ( 犘 <0.01);SPPW 干预胃癌细胞株 SGC 790148h 后能促进细胞凋亡, 透射电镜下表现出明显的凋亡形态学改变 ;Westernblot 法检测 β catenin 蛋白表达呈浓度依赖性下降, 差异具有统计学意义 ( 犘 <0.01) 结论 SPPW 可以明显抑制人胃癌细胞株的增殖和促进细胞凋亡, 为 SPPW 的临床应用提供了可靠的理论基础 关键词 : 中药 ; 散癖平胃方剂 (SPPW); 胃癌 ; 增殖 ; 凋亡 ; β 连环素蛋白中图分类号 :R735.2 文献标志码 :A 文章编号 :1671 8259(2013)05 0669 05 犇犗犐 :10.7652/jdyxb201305025 犈犳犳犲犮狋狊狅犳犛犘犘犠狅狀狆狉狅犾犻犳犲狉犪狋犻狅狀犪狀犱犪狆狅狆狋狅狊犻狊狅犳犺狌犿犪狀犵犪狊狋狉犻犮犮犪狀犮犲狉犮犲犾犾犻狀犲狊 JIANGJiong 1,DONGLei 1,QINBin 1,GUO Xiao yan 1,WANG Xin yang 2,LIHong 1 (1.DepartmentofDigestiveDiseases,theSecondAfiliatedHospital, MedicalSchoolofXi anjiaotonguniversity,xi an710004; 2.DepartmentofUrosurgery,theFirstAfiliatedHospital, MedicalSchoolofXi anjiaotonguniversity,xi an710061,china) 犃犅犛犜犚犃犆犜 :Objective 犜狅狊狋狌犱狔狋犺犲犲犳犳犲犮狋狊狅犳犛犘犘犠狅狀狋犺犲狆狉狅犾犻犳犲狉犪狋犻狅狀犪狀犱犪狆狅狆狋狅狊犻狊狅犳犺狌犿犪狀犵犪狊狋狉犻犮犮犪狀犮犲狉犮犲犾犾犻狀犲狊.Methods 犃犳狋犲狉犺狌犿犪狀犵犪狊狋狉犻犮犮犪狀犮犲狉犮犲犾犾犻狀犲狊犛犌犆 7901 犪狀犱犅犌犆 823 狑犲狉犲犮狌犾狋狌狉犲犱犻狀狏犻狋狉狅,5 犲狓狆犲狉犻犿犲狀狋犵狉狅狌狆狊狑犲狉犲犲狊狋犪犫犾犻狊犺犲犱犪狊犳狅犾狅狑狊 : 犛犘犘犠 10μ 犵 / 犿犔,100μ 犵 / 犿犔犪狀犱 1000μ 犵 / 犿犔犵狉狅狌狆狊,5 犉犝犵狉狅狌狆犪狀犱狀狅狉犿犪犾犮狅狀狋狉狅犾犵狉狅狌狆. 犜犺犲犪犫狊狅狉犫犪狀犮犲 ( 犃 ) 狏犪犾狌犲狑犪狊犿犲犪狊狌狉犲犱犫狔犕犜犜犪狊犪狔犪犳狋犲狉犻狀狋犲狉犳犲狉犻狀犵狋犺犲犮犲犾狊犮狅狉狉犲狊狆狅狀犱犻狀犵犾狔犪狋犱犻犳犳犲狉犲狀狋狋犻犿犲狆狅犻狀狋狊 ; 狋犺犲犪狆狅狆狋狅狊犻狊狉犪狋犲狑犪狊犿犲犪狊狌狉犲犱犫狔犳犾狅狑犮狔狋狅犿犲狋狉狔 ; 狌犾狋狉犪狊狋狉狌犮狋狌狉犪犾犮犺犪狀犵犲狊狑犲狉犲狅犫狊犲狉狏犲犱狌狀犱犲狉狋犺犲狋狉犪狀狊犿犻狊犻狅狀犲犾犲犮狋狉狅狀犿犻犮狉狅狊犮狅狆犲 ; 犪狀犱狋犺犲 β 犮犪狋犲狀犻狀狆狉狅狋犲犻狀犲狓狆狉犲狊犻狅狀狑犪狊犿犲犪狊狌狉犲犱犫狔犠犲狊狋犲狉狀犫犾狅狋.Results 犜犺犲狆狉狅犾犻犳犲狉犪狋犻狅狀狅犳犛犌犆 7901 犪狀犱犅犌犆 823 犮犲犾狊狑犪狊狊犻犵狀犻犳犻犮犪狀狋犾狔犻狀犺犻犫犻狋犲犱犪犳狋犲狉狋犺犲狔狑犲狉犲犻狀狋犲狉犳犲狉犲犱狑犻狋犺犛犘犘犠犳狅狉 12 犺狋狅 72 犺 ( 犘 <0.01). 犛犘犘犠犻狀犱狌犮犲犱狋犺犲犪狆狅狆狋狅狊犻狊狅犳犛犌犆 7901 犮犲犾狊犪犳狋犲狉狋犺犲狔狑犲狉犲犻狀狋犲狉犳犲狉犲犱犳狅狉 48 犺犪狀犱狊犻犵狀犻犳犻犮犪狀狋狌犾狋狉犪狊狋狉狌犮狋狌狉犪犾犮犺犪狀犵犲狊狅犳犪狆狅狆狋狅狊犻狊狑犲狉犲狅犫狊犲狉狏犲犱狌狀犱犲狉狋犺犲狋狉犪狀狊犿犻狊犻狅狀犲犾犲犮狋狉狅狀犿犻犮狉狅狊犮狅狆犲.β 犮犪狋犲狀犻狀狆狉狅狋犲犻狀犲狓狆狉犲狊犻狅狀犻狀犛犘犘犠 狋狉犲犪狋犲犱犵狉狅狌狆狊狑犪狊狅犫狏犻狅狌狊犾狔犱犲犮狉犲犪狊犲犱犻狀犪犱狅狊犲 犱犲狆犲狀犱犲狀狋犿犪狀狀犲狉 ( 犘 <0.01).Conclusion 犛犘犘犠犮犪狀犻狀犺犻犫犻狋狆狉狅犾犻犳犲狉犪狋犻狅狀狅犳犺狌犿犪狀犵犪狊狋狉犻犮犮犪狀犮犲狉犮犲犾狊犪狀犱犻狀犱狌犮犲狋犺犲犻狉犪狆狅狆狋狅狊犻狊, 狑犺犻犮犺狆狉狅狏犻犱犲狊狆犺犪狉犿犪犮狅犱狔狀犪犿犻犮犫犪狊犻狊犳狅狉犳狌狋狌狉犲犮犾犻狀犻犮犪犾犪狆狆犾犻犮犪狋犻狅狀狅犳犛犘犘犠. 犓犈犢犠犗犚犇犛 : 犆犺犻狀犲狊犲犿犲犱犻犮犻狀犲 ; 犛犘犘犠 ; 犵犪狊狋狉犻犮犮犪狀犮犲狉 ; 狆狉狅犾犻犳犲狉犪狋犻狅狀 ; 犪狆狅狆狋狅狊犻狊 ;β 犮犪狋犲狀犻狀 收稿日期 :2012 12 03 修回日期 :2013 03 22 基金项目 : 陕西省 13115 重大科技专项课题 (No.2007ZDKG 73) Supportedby13115 MajorScientificandTechnologicalSpecialProjectsofShaanxiProvince(No.2007ZDKG 73) 通讯作者 : 董蕾, 教授.E mail:dong556@126.com 作者简介 : 姜炅 (1981 ), 女 ( 汉族 ), 在读博士研究生, 住院医师. 研究方向 : 消化道肿瘤的机制研究.E mail:tgzy712@163.com 网络出版时间 :2013 04 1110 39 网络出版地址 :htp://www.cnki.net/kcms/detail/61.1399.r.20130411.1039.001.html
670 西安交通大学学报 ( 医学版 ) 第 34 卷 胃癌是最常见的消化道恶性肿瘤 我国胃癌每 [1] 年死亡人数居恶性肿瘤的首位 胃癌起病隐匿, 早期无明显特异症状, 一旦发现已属中晚期 目前胃癌的主要治疗手段仍为手术及化疗, 但很难得到根治, 且均存在较大副作用 因此, 寻找治疗胃癌新的药物和手段是当前热门方向之一 来源于植物的抗肿瘤药物特别是中药方剂因其具有改善症状 稳定病灶 疗效持久 毒副作用小和远期稳定率高等特点, 目前已经成为临床抗肿瘤药物的重要组成部分 散癖平胃方剂 (SPPW) 是我国传统复方制剂, 主要成分包括黄芪 半枝莲 甘草 乌骨藤等多味中药, 其多种成分 [2 5] 都具有抑制肿瘤生长的作用, 使用后具有改善胃癌患者生存质量和延长生存期的作用 但是因为其具体有效成分及作用机制尚不明确, 所以临床应用必须建立在对其药效学研究和作用机制研究基础上 1 材料与方法 1.1 材料人胃癌细胞株 SGC 7901 及 BGC 823 由西安交通大学医学院第一附属医院泌尿外科赠送 ;RPMI 1640 DMEM F12 培养基 (GIBCO 公司, 美国 ); 胎牛血清 (SIGMA, 美国 ); 四甲基偶氮唑盐 MTT(SIGMA, 美国 ); 二甲基亚砜 DMSO(SIGMA, 美国 ); β 连环素蛋白 ( β catenin) 小鼠单抗 (SANTA, 美国 ) 1.2 犛犘犘犠含药血清的制备 SPPW 方由黄芪 30g, 甘草 9g, 半枝莲 15g, 乌骨藤 30g, 姜半夏 12g, 制南星 12g, 枳实 12g 等 13 味中药组成, 中药材由西安交通大学医学院第二附属医院中药房提供, 采用自动煎药机制成水煎液, 调整 ph 为 7.35~7.45,32 层纱布过滤,15000r/min 离心 20min, 重复 2 次, 吸取上清, 过滤器过滤除菌,4 保存备用,-20 长期储存 1.3 细胞培养及传代常规复苏人胃癌细胞株 SGC 7901 和 BGC 823, 分别于含 100mL/L 胎牛血清的 RPMI1640 及 DMEM F12 培养液中,37 50 ml/lco 2 条件下培养 ; 加入 1~2mL2.5g/L 胰酶消化约 30s~1min, 待细胞变成小圆形加入等量培养基终止消化,1000r/min 离心 5min, 弃上清, 培养基重悬分至 2~3 个培养瓶, 实验前取对数生长期细胞进行研究 1.4 犕犜犜法检测犛犘犘犠对胃癌细胞株增殖的影响将传代 24h 后处于对数生长期的 SGC 7901 细胞用 2.5g/L 胰酶消化, 经含 100mL/L 胎牛血清的 RPMI 1640 培养液重悬, 以 1 10 4 细胞数接种于 96 孔板, 常规培养 24h 后, 设置阴性对照组 阳性对照 5 FU 组 (100μg/mL) 和 SPPW 3 个质量浓度组 (10 100 1000μg/mL), 每组设置 5 个复孔, 继续培养 12 24 48 72h 后加入 20μL MTT, 孵育 4h, 加入 DMSO 150μL 于微量振荡器上振荡 10min,490nm 的波长下用酶联检测仪测定吸光度 ( 犃 ) 值, 计算平均犃值和抑制率 ;BGC 823 细胞用 2.5g/L 的胰酶消化, 经含 100mL/L 胎牛血清的 DMEM F12 培养液重悬浮, 接种于 96 孔板上干预及 MTT 步骤同前述方法 1.5 流式细胞仪检测犛犘犘犠对胃癌细胞株犛犌犆 7901 凋亡的影响将传代 24h 后的 SGC 7901 细胞经含 RPMI1640 培养液重悬浮, 接种于 6 孔板上, 常规培养 48h 后, 加入 10 100 1000μg/mLSPPW 的培养基继续培养 24h,2.5g/L 胰酶消化,1000r/min 离心 5min, 加入 1mL PBS 混匀,1000r/min 离心 5min, 重复 2 次, 加入 100μL 结合缓冲液混匀, 避光条件下加入 PI 和 Annexin Ⅴ, 避光反应 15min 后使用流式细胞仪检测细胞凋亡率 1.6 电镜下观察犛犘犘犠干预后胃癌细胞株犛犌犆 7901 形态学改变接种 SGC 7901 细胞于培养瓶, 培养 48h 后, 加入含有 1000μg/mLSPPW 的培养基继续培养 24h,2.5g/L 胰酶消化后 1200r/min 离心 5min, 弃上清, 加入 50mL/L 戊二醛固定, 制作样品 包埋 聚合并染色, 透射式电子显微镜观察 照相 1.7 犠犲狊狋犲狉狀犫犾狅狋法检测细胞 β 犮犪狋犲狀犻狀蛋白的表达分别提取 SPPW 干预 48h 后 10 100 1000μg/mL 组及阴性对照组总蛋白, 采用 BCA 法进行蛋白定量后制备上样蛋白样品,80V 电压电泳,PVDF 膜转膜,50g/L 脱脂牛奶封闭并置于摇床上 2h, 加入小鼠 β catenin 蛋白单抗孵育,TBST 清洗 3 次, 每次 10 min, 加入二抗室温孵育 2h,TBST 清洗 3 次, 每次 15min,PBS 清洗 1 次,10min, 暗室加入等比例 A B 发光液进行化学发光, 拍照记录 1.8 统计学处理所有计量数据以均数 ± 标准差 ( 珔狓 ± 狊 ) 表示, 经方差齐性检验, 采用 SPSS13.0 统计软件进行方差分析和 LSD 狋检验 犘 <0.01 被认为差异具有统计学意义 2 结果 2.1 不同质量浓度组犛犘犘犠对犛犌犆 7901 细胞和犅犌犆 823 细胞增殖活性的影响与阴性对照组相比, 不同浓度组 SPPW 干预胃癌细胞株 SGC 7901 后, 犃值明显减小, 差异有统计学意义 ( 犘 <0.01), 随时间延长, 抑制率呈上升趋势,SPPW 1000μg/mL 组表现最明显 ; 与 5 FU 组相比, 犃值减小, 差异亦具有统计学意义 ( 犘 <0.01, 表 1) 不同 SPPW 干预胃癌细胞株 BGC 823 后, 犃值也明显减小, 差异具有统计学意义 ( 犘 <0.01, 表 2)
5 期姜炅, 董蕾, 秦斌, 等. 散癖平胃方剂对人胃癌细胞株增殖和凋亡的影响 671 表 1 犛犘犘犠对胃癌细胞犛犌犆 7901 增殖活性的影响 Tab.1 EfectsofSPPW ontheproliferativeabilityofgastriccancersgc 7901cels 组别 12h 24h 48h 72h 犃值抑制率 (%) 犃值抑制率 (%) 犃值抑制率 (%) 犃值抑制率 (%) 阴性对照组 0.809±0.058-1.035±0.050-1.573±0.137-1.711±0.116 - SPPW( μ g/ml) 10 0.646±0.034 # 20.1 0.710±0.034 31.4 0.765±0.026 51.3 0.668±0.048 60.9 100 0.519±0.030 # 35.8 0.602±0.095 # 41.8 0.425±0.057 72.9 0.361±0.038 # 78.9 1000 0.306±0.032 # 62.1 0.247±0.044 # 76.1 0.225±0.039 # 85.6 0.184±0.040 # 89.2 5 FU 0.817±0.049-1.0 0.741±0.044 28.4 0.576±0.024 63.3 0.480±0.047 71.9 与阴性对照组相比, 犘 <0.01; 与 5 FU 组相比, # 犘 <0.01 表 2 犛犘犘犠对胃癌细胞犅犌犆 823 增殖活性的影响 Tab.2 EfectsofSPPW ontheproliferativeabilityofgastriccancerbgc 823cels 组别 12h 24h 48h 72h 犃值抑制率 (%) 犃值抑制率 (%) 犃值抑制率 (%) 犃值抑制率 (%) 阴性对照组 0.754±0.036-0.869±0.034-1.158±0.146-1.462±0.093 - SPPW( μ g/ml) 10 0.531±0.018 # 29.5 0.667±0.028 23.2 0.615±0.035 46.9 0.555±0.056 61.9 100 0.467±0.019 # 38.0 0.446±0.047 # 48.6 0.406±0.033 # 64.9 0.363±0.035 # 75.1 1000 0.307±0.043 # 59.3 0.248±0.032 # 71.3 0.231±0.026 # 80.0 0.199±0.028 # 86.3 5 FU 0.741±0.032 1.8 0.600±490.026 25.2 0.570±0.024 50.7 0.456±0.044 68.7 与阴性对照组相比, 犘 <0.01; 与 5 FU 组相比, # 犘 <0.01 2.2 流式细胞仪检测犛犘犘犠对犛犌犆 7901 胃癌细胞凋亡的影响不同质量浓度 SPPW 处理 48h 后的 SGC 7901 细胞, 经 AnnexinV/PI 染色后, 流式细胞仪检测结果显示,SPPW 3 个质量浓度引起早期凋亡的比例分别为 27.58% 43.99% 和 53.47%, 并呈现明显的剂量依赖性 ; 与阴性对照组比, 均明显升高, 差异具有统计学意义 ( 犘 <0.01, 图 1) 2.3 犛犘犘犠对犛犌犆 7901 胃癌细胞超微形态的影响透射电镜下观察发现, 阴性对照组中细胞形态呈圆形, 细胞核形状不规则, 胞模清晰完整, 染色质分布均匀, 核仁较大, 可见多个核仁, 核糖体丰富 ; 而 SPPW 1000μg/mL 组细胞体积略有缩小, 细胞胞膜固缩完整, 表面微绒毛消失, 细胞核内染色质溶解, 线粒体肿胀, 胞质空泡增多, 染色质凝聚 边集, 细胞的电子密度增加, 可见部分有膜包裹细胞器的凋亡小体 ( 图 2) 2.4 犛犘犘犠对胃癌细胞犛犌犆 7901 细胞 β 犮犪狋犲狀犻狀蛋白表达的影响经不同质量浓度 SPPW 作用 48h 后, 各组 β catenin 蛋白表达水平较对照组均明显减弱, 差异具有统计学意义 ( 犘 <0.01), 且呈浓度依赖性 ( 图 3) 3 讨论 SPPW 主要由黄芪 半枝莲 甘草 乌骨藤等多味中药成分配伍而成, 是民间流传至今的验方, 具有扶正祛邪, 散结止痛的作用 部分胃癌患者服用后, 能改善症状, 延长患者带瘤生存期, 提高生活质量 现 已证实其部分单药成分具有抑制肿瘤生长的作用, 但因为使用局限, 其配方及治疗胃癌的作用未作相关研究报道, 其治疗效果尚未经临床前实验及临床实验验证, 缺乏相关的实验室依据, 因此无法推广, 其应用也缺乏科学理论的指导 本研究通过细胞学实验和现代分子学技术验证 SPPW 对胃癌细胞株增殖和凋亡的影响, 为开发新的抗肿瘤复方制剂提供药效学研究基础, 并为以后的临床使用提供实验室依据 本研究 MTT 结果提示, SPPW 对 SGC 7901 和 BGC 823 细胞增殖的抑制作用呈时间依赖性,SPPW 各浓度在作用 12 24 48 72h 抑制率呈递增趋势 ; 而 5 FU 干预的阳性对照组, 作用 12h 并未表现出对 SGC 7901 和 BGC 823 细胞的抑制作用,24h 时才表现出抑制胃癌细胞株增殖的作用 提示 SPPW 发挥作用的时间早于 5 FU SP PW 在作用于 SGC 7901 细胞 48h 时, 经 AnnexinV/PI 染色后,SPPW3 个浓度及 5 FU 均可引起明显的早期凋亡,SPPW 随浓度递增引起早期凋亡的比例依次是 27.58%,43.99% 和 53.47%, 呈浓度依赖性 形态学改变是细胞凋亡最明显的证据 本实验结果表明, 未经药物处理的空白对照 SGC 7901 细胞形态结构正常, 未见有明显的凋亡表现 SPPW 1000μg/mL 处理 48h 的细胞数量减少, 结构不清, 部分细胞肿胀 坏死, 细胞膜消失, 可见核染色质凝聚 边集的细胞, 呈明显凋亡形态学改变
672 西安交通大学学报 ( 医学版 ) 第 34 卷 图 1 犛犘犘犠对胃癌细胞犛犌犆 7901 凋亡的影响 Fig.1EfectsofSPPW onapoptosisofgastriccancersgc 7901cels A: 阴性对照组 ;B C D:SPPW10 100 1000μg/mL 组 Wnt 信号通路由一系列癌基因和抑癌基因编码的蛋白质组成, 其异常激活参与了人类多种肿瘤的发病过程, 如胃癌 食管癌 肝癌 胰腺癌 结肠癌 [6 11] 等 β catenin 蛋白定位于人染色体 3p21, 是一种原癌基因 已有文献报道 β catenin 蛋白与多种肿瘤的发生 发展密切相关, β catenin 蛋白降低时,Wnt [12] 通路关闭, 反之,Wnt 通路开启 Wnt 通路启动后, 激活的 β catenin 蛋白与核内转录因子 TCF/LEF [13] 结合, 激活下游靶基因 c myc 和 cyclind1,c myc 是细胞从 G 0 /G 1 期到 S 期过渡的重要调节因子, 过度激活的 c myc 和 cyclind1 可导致细胞增生失控而 [14] 致癌 本实验通过 Westernblot 检测不同质量浓度 SPPW 干预后的 SGC 7901 胃癌细胞 β catenin 蛋白表达的变化, 结果发现 SPPW 能显著降低 SGC 7901 细胞 β catenin 蛋白表达, 具有剂量依赖性, 剂量越高, 抑制作用越明显, 这表明,SPPW 诱导胃癌细
5 期姜炅, 董蕾, 秦斌, 等. 散癖平胃方剂对人胃癌细胞株增殖和凋亡的影响 673 [2] 徐倩, 张英姿. 黄芪对肿瘤的抑制作用及分子生物学机制研究 [ 犑 ]. 滨州医学院学报,2009,32(3):210 212. [3] 王润田, 单保恩, 李巧霞, 等. 黄芪提取物免疫调节活性的体外实验研究 [ 犑 ]. 中国中西医结合杂志,2002,22(6):453 456. [4] 张慧, 裴志东, 张修亚, 等. 乌骨藤脂溶性成分抗肿瘤活性及其成分分析 [ 犑 ]. 中国中药杂志,2010,35(24):3325 3328. [5] 林敬明, 刘煜, 罗荣城. 半枝莲的化学成分及其抗肿瘤作用的研究现状 [ 犑 ]. 中药材,2006,29(4):407 410. [6] 犖犃犅犃犐犛犛, 犕犃犆犎犃犇犗犑犆, 犔犗犘犈犛犆, 犲狋犪犾. 犘犪狋犲狉狀狊狅犳犫犲狋犪 犮犪狋犲狀犻狀犲狓狆狉犲狊狊犻狅狀犻狀犵犪狊狋狉犻犮犮犪狉犮犻狀狅犿犪 : 犮犾犻狀犻犮狅狆犪狋犺狅犾狅犵犻犮犪犾狉犲犾 图 2 透射电镜下观察犛犘犘犠对胃癌细胞犛犌犆 7901 超微形态的影响 Fig.2EfectsofSPPW onultrastructuralchangesofgastric cancersgc 7901celsunderthetransmissionelectronmicro scope A: 阴性对照组 ;B:SPPW1000μg/mL 组 犲狏犪狀犮犲犪狀犱犿狌狋犪狋犻狅狀犪狀犪犾狔狊犻狊 [ 犑 ]. 犐狀狋犑犛狌狉犵犘犪狋犺狅犾,2003,11 (1):1 9. [7] 犗犛犜犈犚犎犈犔犇犕犆, 犅犐犃犖犢犛, 犅犗犛犕犃犖犉犜, 犲狋犪犾. 犅犲狋犪 犮犪狋犲 狀犻狀犲狓狆狉犲狊狊犻狅狀犪狀犱犻狋狊犪狊狅犮犻犪狋犻狅狀狑犻狋犺狆狉狅犵狀狅狊狋犻犮犳犪犮狋狅狉狊犻狀犪犱犲 狀狅犮犪狉犮犻狀狅犿犪犱犲狏犲犾狅狆犲犱犻狀犅犪狉狉犲狋犲狊狅狆犺犪犵狌狊 [ 犑 ]. 犃犿犑犆犾犻狀犘犪狋犺狅犾,2002,117(3):451 456. [8] 犛犝犣犝犓犐犜, 犢犃犖犗犎, 犖犃犓犃犛犎犐犕犃犢, 犲狋犪犾. 犅犲狋犪 犮犪狋犲狀犻狀 犲狓狆狉犲狊狊犻狅狀犻狀犺犲狆犪狋狅犮犲犾狌犾犪狉犮犪狉犮犻狀狅犿犪 : 犪狆狅狊狊犻犫犾犲狆犪狉狋犻犮犻狆犪狋犻狅狀狅犳犫犲狋犪 犮犪狋犲狀犻狀犻狀狋犺犲犱犲犱犻犳犳犲狉犲狀狋犻犪狋犻狅狀狆狉狅犮犲狊 [ 犑 ]. 犑犌犪狊狋狉狅犲狀 狋犲狉狅犾犎犲狆犪狋狅犾,2002,17(9):994 1000. [9] 犕犗犚犐犖犘犑, 犛犘犃犚犓犛犃犅, 犓犗犚犐犖犈犓犞, 犲狋犪犾. 犃犮狋犻狏犪狋犻狅狀狅犳犫犲狋犪 犮犪狋犲狀犻狀 犜犮犳狊犻犵狀犪犾犻狀犵犻狀犮狅犾狅狀犮犪狀犮犲狉犫狔犿狌狋犪狋犻狅狀狊犻狀犫犲狋犪 犮犪狋犲狀犻狀狅狉犃犘犆 [ 犑 ]. 犛犮犻犲狀犮犲,1997,275(5307):1787 1790. 图 3 犠犲狊狋犲狉狀 犫犾狅狋法检测 β 犮犪狋犲狀犻狀蛋白表达变化 Fig.3β cateninproteinexpressionmeasuredbywesternblot 胞株的凋亡过程可能是抑制 β catenin 蛋白表达, 通过 Wnt 通路, 减少其与下游转录因子 TCF/LEF 的偶联, 从而间接减少肿瘤相关靶基因如 c myc cyclind1 等的表达, 抑制肿瘤发生 发展 但参与细胞增殖及凋亡的信号传导通路还有许多, 其相互交叉形成了复杂的网络 SPPW 介导的 Wnt 信号转导通路的具体作用机制以及其在可能的诸多通路中究竟是发挥主导还是协同作用, 都还没有肯定的答案 因此,SPPW 诱导肿瘤细胞凋亡的具体机制需要进一步的研究 参考文献 : [1] 孙秀娣, 牧人, 周有尚, 等. 中国胃癌死亡率 20 年变化情况分析及其发展趋势预测 [ 犑 ]. 中华肿瘤杂志,2004,26(1):6 11. [10] 犎犃犖犃犐犑, 犌犔犗犢犑, 犓犃犚犝犕犃犖犆犎犐犛犃, 犲狋犪犾. 犈狀犱狅狊狋犪狋犻狀犻狊犪狆狅狋犲狀狋犻犪犾犻狀犺犻犫犻狋狅狉狅犳犠狀狋狊犻犵狀犪犾犻狀犵 [ 犑 ]. 犑犆犲犾犅犻狅犾,2002, 158(3):529 539. [11] 翟倩倩, 岳素文, 张玲, 等. 原发性肝癌组织中犛犗犡 7 犿犚犖犃的表达 [ 犑 ]. 郑州大学学报 : 医学版,2011,46(3):354 357. [12] 犜犝犔犃犆犛, 犖犃犢犃犓犖犚, 犓犃犗犔犆, 犲狋犪犾. 犐犱犲狀狋犻犳犻犮犪狋犻狅狀, 犮犺犪狉 犪犮狋犲狉犻狕犪狋犻狅狀, 犪狀犱狉犲犵狌犾犪狋犻狅狀狅犳狋犺犲犮犪狀狅狀犻犮犪犾犠狀狋狊犻犵狀犪犾犻狀犵狆犪狋犺狑犪狔犻狀犺狌犿犪狀犲狀犱狅犿犲狋狉犻狌犿 [ 犑 ]. 犆犾犻狀犈狀犱狅犮狉犻狀狅犾犕犲狋犪犫, 2003,88(8):3860 3866. [13] 犡犝犎犜, 犠犈犐犙, 犔犐犝犢, 犲狋犪犾. 犗狏犲狉犲狓狆狉犲狊犻狅狀狅犳犪狓犻狀犱狅狑狀 狉犲犵狌犾犪狋犲狊犜犆犉 4 犪狀犱犻狀犺犻犫犻狋狊狋犺犲犱犲狏犲犾狅狆犿犲狀狋狅犳犾狌狀犵犮犪狀犮犲狉 [ 犑 ]. 犃狀狀犛狌狉犵犗狀犮狅犾,2007,14(11):3251 3259. [14] 犢犝犈犠, 犛犝犖犙, 犇犃犆犐犆犛, 犲狋犪犾. 犇狅狑狀狉犲犵狌犾犪狋犻狅狀狅犳犇犽犽 3 犪犮狋犻狏犪狋犲狊犫犲狋犪 犮犪狋犲狀犻狀 / 犜犆犉 4 狊犻犵狀犪犾犻狀犵犻狀犾狌狀犵犮犪狀犮犲狉 [ 犑 ]. 犆犪狉 犮犻狀狅犵犲狀犲狊犻狊,2008,29(1):84 92. ( 编辑国荣 )