药物分析与检验 HPLC 梯度洗脱法检测克林霉素磷酸酯及其注射剂的有关物质 梁键谋, 王知坚, 阮昊, 陈悦 * ( 浙江省食品药品检验所, 杭州 310004) 摘要 : 目的探索建立改进的高效液相色谱法 - 梯度洗脱法检测克林霉素磷酸酯及其注射剂的有关物质 方法色谱柱为 Supelco Discovery C 18 (4.6 mm 250 mm,5 m); 流动相 A 为磷酸缓冲液 (ph 3.9)-90% 乙腈甲醇溶液 (92 8), 流动相 B 为磷酸缓冲液 (ph 3.9)-90% 乙腈甲醇溶液 (52 48); 柱温为 40 ; 检测波长为 210 nm; 流速为 1.2 ml min 1 结果克林霉素磷酸酯主峰与其相关物质峰分离良好, 供试品中含林可霉素, 克林霉素 B 磷酸酯, 克林霉素及其他非特定杂质的量为 0.006%~1.137%,0.016%~0.157%,0.005%~0.195% 及 0.016 3%~2.933% 时, 均具有良好的线性关系 林可霉素, 克林霉素 B 磷酸酯, 克林霉素以及非特定杂质 ( 克林霉素磷酸酯 ) 的 LOD 分别为 0.170 5 g ml 1,0.160 0 g ml 1,0.146 2 g ml 1 和 0.488 8 g ml 1 林可霉素, 克林霉素 B 磷酸酯, 克林霉素各杂质的平均回收率分别 104.0%(RSD=1.8%, n=9), 106.8% (RSD=1.8%,n=9) 和 104.9%(RSD=1.8%,n=9) 结论改进方法的杂质色谱性能明显优于现行标准方法和 USP 个论方法, 更适用于克林霉素磷酸酯及其注射剂的有关物质检测 关键词 : 高效液相色谱法 ; 克林霉素磷酸酯 ; 有关物质 ; 特定杂质中图分类号 :R917.101 文献标志码 :B 文章编号 :1007-7693(2012)08-0726-05 HPLC Gradient Elution Determination of Related Substances of Clindamycin Phosphate and Its Injection LIANG Jianmou, WANG Zhijian, RUAN Hao, CHEN Yue * (Zhejiang Institute for Food and Drug Control, Hangzhou 310004, China) ABSTRACT: OBJECTIVE To establish a suitable high-performance liquid chromatography for the determination of the related substances of clindamycin phosphate and its injection. METHODS The HPLC method was carried out using a Supelco Discovery C 18 column (4.6 mm 250 mm, 5 m); where the column temperature was 40 and the detection wavelength was 210 nm; mobile phase A was phosphate buffer-90% acetonitrile-methanol solution (92 8), mobile phase B was phosphate buffer -90% acetonitrile-methanol solution (52 48); the flow rate was 1.2 ml min 1. RESULTS Clindamycin phosphate and related substances could be well isolated, the standard curves for lincomycin, clindamycin-b-phosphate clindamycin and other unspecified impurities were all linear in the range of 0.006% 1.137%, 0.016% 0.157%, 0.005% 0.195% and 0.0163% 2.933%. The limit of detection (LOD) of lincomycin, clindamycin-b-phosphate, clindamycin and clindamycin phosphate were 0.170 5 g ml 1, 0.160 0 g ml 1, 0.146 2 g ml 1 and 0.488 8 g ml 1. The average recovery of lincomycin, clindamycin-bphosphate and clindamycin were 104.0%(RSD=1.8%, n=9), 106.8%(RSD=1.8%, n=9) and 104.9%(RSD=1.8%, n=9). CONCLUSION The method shows much higher chromatographic performance and specificity than existing national standard method and USP monographs method. It is more suitable for determination of the related substances of clindamycin phosphate and its injection. KEY WORDS: HPLC; clindamycin phosphate; related substances; specified impurities 克林霉素磷酸酯 (clindamycin phosphate) 进入机体后水解为具有抗菌活性的克林霉素, 对金葡菌 链球菌等革兰阳性菌及厌氧菌中的拟杆菌属 梭状杆菌属均有显著抗菌作用, 且与青霉素 头孢菌素类抗生素无交叉过敏反应, 可用于对青霉 素过敏者 美国药典 欧洲药典和日本药局方均收载了克林霉素磷酸酯原料和部分外用制剂 口服制剂和注射剂的质量标准 [1-3], 我国药典尚未收载, 现行国家标准均建立于 2005 年前 本品生产上市十余年来, 现行各国家标准质控项目设置和 基金项目 : 国家药品标准提高作者简介 : 梁键谋, 男, 硕士, 药师 Tel: (0571)86459458 E-mail: dashi1982530@163.com (0571)86459427 E-mail: zidccy@163.com * 通信作者 : 陈悦, 男, 主任药师 Tel: 726 Chin JMAP, 2012 August, Vol.29 No.8 中国现代应用药学 2012 年 8 月第 29 卷第 8 期
限度水平参差不齐, 亟待提高和统一 1 仪器与试药 Agilent 1200 组合式高效液相色谱仪, 配备 Agilent G1314A DAD 检测器 Agilent G1313A ALS 自动进样器及 Agilent Chemstation 化学工作站 ; 电子分析天平为 Sartorius CPA225D 型 克林霉素磷酸酯对照品 ( 中国药品生物制品检定所, 批号 :130486-200803, 含量 :80.3%); 克林霉素 B 磷酸酯工作对照品 ( 浙江海翔药业股份有限公司提纯制备, 批号 :20090513, 纯度 :99.3%); 7- 差向克林霉素磷酸酯 ( 浙江海翔药业股份有限公司提纯制备, 批号 :20090408, 纯度 :94.5%); 克林霉素 B 对照品 ( 中国药品生物制品检定所, 批号 : 130576-200901, 含量 :87.9%); 林可霉素对照品 ( 中国药品生物制品检定所, 批号 :130432-200908, 含量 :86.7%); 克林霉素对照品 ( 中国药品生物制品检定所, 批号 :130422-200705, 含量 :86.0%) 乙腈为色谱纯, 其余均为分析纯, 水为重蒸水 克林霉素磷酸酯样品来源及批号, 其中原料的批号分别为 110219,090612; 注射用规格的批号分别为 200907052,200905022; 注射液的批号分别为 1002030,1002031, 分别由海翔医药责任有限公司 浙江九旭药业有限公司 山东新华制药有限公司生产 提供 2 方法和结果 2.1 改进的方法 2.1.1 色谱条件色谱柱 :Supelco Discovery C 18 (4.6 mm 250 mm,5 m); 磷酸缓冲液 : 取磷酸 14 ml, 加水 4 000 ml, 加氨水 10 ml, 必要时再用氨水调节 ph 值至 3.90±0.05; 稀释剂 : 磷酸缓冲液 (ph3.9)-90% 乙腈甲醇溶液 =80 20; 流动相 A : 磷酸缓冲液 (ph3.9)-90% 乙腈甲醇溶液 = 92 8; 流动相 B: 磷酸缓冲液 (ph3.9)-90% 乙腈甲醇溶液 =52 48, 梯度洗脱程序为 0 min(95 5)- 40 min(5 95)-41 min(95 5)-46 min(95 5); 检测波长 :210 nm; 柱温 :40 ; 流速 :1.2 ml min 1 ; 进样量 :50 L 2.1.2 试验溶液的制备 2.1.2.1 供试品溶液的制备精密称取本品适量, 加稀释剂制成每 1 ml 含克林霉素 3 mg 的溶液 2.1.2.2 对照溶液的制备精密量取供试液适量, 加稀释剂制成每 1 ml 含克林霉素 90 g 的溶液 2.1.2.3 混合杂质对照品溶液的制备分别精密 称取林可霉素 克林霉素 克林霉素 B 磷酸酯 7- 表克林霉素磷酸酯对照品及克林霉素磷酸酯对照品各约 5 mg, 各置 20 ml 量瓶中, 分别加稀释剂溶解并稀释至刻度, 摇匀作为各自的贮备溶液 ; 精密量取上述各种对照品的贮备溶液各适量, 用稀释剂定量稀释制成每 1 ml 中含克林霉素磷酸酯 90 g, 克林霉素 30 g 与林可霉素及克林霉素 B 磷酸酯 7- 表克林霉素磷酸酯各 6 g 的混合溶液 2.2 系统适用性试验取 2.1.2.3 项下制备的混合杂质对照品溶液, 按 2.1 项下色谱条件进样测定, 记录色谱图 色谱图中林可霉素 克林霉素 B 磷酸酯 7- 表克林霉素磷酸酯 克林霉素磷酸酯及克林霉素依次流出,7- 表克林霉素磷酸酯与克林霉素磷酸酯峰之间 克林霉素磷酸酯与克林霉素峰之间的分离度分别为 1.7 和 10.5; 理论板数按克林霉素磷酸酯峰计算高于 10 000, 说明本法能够满足等度洗脱色谱条件下难以分离杂质的分离要求 图 1 克林霉素磷酸酯杂质定性图谱 1 林可霉素磷酸酯 ;2 盐酸林可霉素 ;3 克林霉素 B 磷酸酯 ;4 7- 差向克林霉素 ;5 克林霉素磷酸酯 ;6 克林霉素 3- 磷酸酯 ;7 盐酸克林霉素 ;8 克林霉素 -4- 磷酸酯 Fig 1 Qualitative chromatogram of the related substances of clindamycin phosphate 1 lincomycin-2-phosphate(7.990 ); 2 lincomycin HCl(8.712 ); 3 clindamycin-b-phosphate(15.261 ); 4 7-epi clindamycin-2-phosphate(19.903 ); 5 clindamycin-2-phosphate(20.433 ); 6 clindamycin-3-phosphate (22.055 ); 7 clindamycin HCl(22.893 ); 8 clindamycin-4-phosphate(23.523 ) 2.3 专属性研究采用强力破坏试验法对样品中降解产物的形成规律和系统的分离效能进行研究 取供试品适量, 分别照下述方法进行极端条件下的色谱分离试验 :1 热破坏 ( 置 120 恒温干燥箱中放置 1 d) [4-5] ; 2 酸破坏 ( 加 6 mol L 1 盐酸溶液 20 滴, 置 60 水浴放置 1 h);3 碱破坏 ( 加 6 mol L 1 氢氧化钠溶液 4 ml, 置 95 水浴放置 1 h);4 氧化破坏 ( 加 30% 浓过氧化氢溶液 10 滴, 置 40 水浴放置 1 h) 取样品 1~4, 必要时分别加碱或酸中和, 加稀释剂制成每 1 ml 约含 3.0 mg 的溶液, 滤过, 取续滤液 中国现代应用药学 2012 年 8 月第 29 卷第 8 期 Chin JMAP, 2012 August, Vol.29 No.8 727
50 L 进样测定 研究表明, 本品对强碱相对较稳定, 不易破坏 ; 对其他极端条件如高热 强酸和强氧化剂则不够稳定, 各有不同程度的降解产物增加 ; 易破坏程度依次为 : 高热 强氧化剂 强酸 强碱 所得各色谱图中各新生降解产物峰均能与克林霉素磷酸酯主峰良好分离, 说明本色谱条件适用于本品有关物质的控制 2.4 线性关系研究对非特定杂质 ( 以自身对照替代 ) 与特定杂质 ( 林可霉素 克林霉素 B 磷酸酯与克林霉素 ) 检测的线性关系进行研究 取 2.1.2.3 项下制备的混合杂质对照溶液 ( 相当于供试品溶液中主药含量的 0.2% 1.0% 及 3.0%), 加稀释剂逐级稀释制成适宜浓度的梯度测试溶液, 按 2.1 项下色谱条件进样测定, 以峰面积 A 对浓度 C 进行线性回归, 得各自的线性方程为 :A 克林霉素磷酸酯 =3.786 445C 克林霉素磷酸酯 +1.274 657, r=0.999 94 (n=9);a 林可霉素 =7.636 758C 林可霉素 +0.476 772 2, r= 0.999 98(n=7);A 克林霉素 B 磷酸酯 =9.229E 5C 克林霉素 B 磷酸酯 0.347,r=0.999 92(n=7);A 克林霉素 =4.081 106C 克林霉素 0.154 883 5,r=0.999 98(n=6) 结果表明, 供试品中含林可霉素 克林霉素 B 磷酸酯及克林霉素的量分别为 0.006%~1.137% (0.170 5~ 34.107 8 g ml 1 ),0.016%~0.157% (0.470 1~ 4.701 0 g ml 1 ),0.005%~0.195% (0.146 2~5.848 0 g ml 1 ) 时, 以本法测定上述杂质, 线性关系良好 ; 供试品中含除林可霉素 克林霉素 B 磷酸酯及克林霉素外的其他非特定杂质的量为 0.016 3%~2.933% (0.019 6~87.976 7 g ml 1 ) 时, 以本法测定此类杂质, 同样具有良好的线性关系 2.5 特定杂质与非特定杂质的检测限和定量限精密量取 2.1.2.3 项下制备的混合对照品溶液适量, 加稀释剂逐级稀释, 开展各杂质的检测灵敏度试验 结果林可霉素的 LOD 为 0.170 5 g ml 1 (S/N=4.6),LOQ 为 0.852 5 g ml 1 (S/N=10.7); 克林霉素 B 磷酸酯的 LOD 为 0.16 g ml 1 (S/N=3.0), LOQ 为 0.552 5 g ml 1 (S/N=10.2); 克林霉素的 LOD 为 0.146 2 g ml 1 (S/N=3.2),LOQ 为 0.365 5 g ml 1 (S/N=9.5); 代表非特定杂质的主成分自身对照克林霉素磷酸酯的 LOD 为 0.488 8 g ml 1 (S/N=3.1),LOQ 为 1.222 0 g ml 1 (S/N=10.1) 2.6 溶液稳定性实验 取本品, 加稀释剂制成浓度为 3 mg ml 1 的溶液, 在室温下放置, 并照方法规定的色谱条件每隔 1 h 进样测试, 共测试 8 h 结果主成分峰面积的 RSD 为 0.78%(n=8), 林可霉素峰面积的 RSD 为 0.69%, 克林霉素 B 磷酸酯峰面积的 RSD 为 0.72%, 克林霉素峰面积的 RSD 为 0.59%(n=8), 试验结果表明常温下供试品在稀释剂中有良好的稳定性 2.7 杂质加样回收率试验以注射用制剂为例, 精密称取本品 9 份, 分别加溶剂制成每 1 ml 中含有克林霉素 3 mg 的溶液, 摇匀 ; 另取 2.1.2 项下林可霉素 克林霉素 B 磷酸酯 克林霉素杂质对照品溶液贮备液, 分别精密吸取各适量, 添加至供试品中, 依法进样检测, 量取主峰与各杂质峰的峰面积, 按外标法计算各自的加样回收率 结果测得林可霉素 克林霉素 B 磷酸酯 克林霉素的平均回收率分别为 104.0%, 106.8%,104.9%,RSD 均为 1.8% 表明本法加样回收率较好, 符合杂质定量控制的要求 2.8 重复性试验取原料药一批 ( 批号 :110219), 按改进的方法, 依法连续制备 9 份有关物质检查用供试品溶液, 对方法的重复性进行考察 林可霉素, 克林霉素, 克林霉素 B 磷酸酯, 其他单个杂质, 杂质总量平均含量分别为 0.20%,0.11%,0.75%,0.37%,2.88%; 对应的 RSD 分别为 0.46%,0.52%,0.59%,0.93%, 0.35% 结果表明实验方法具有良好的重复性 3 样品有关物质测定分别取本品的原料 注射液和注射用制剂, 按 1 改进的方法 与 2 现行标准方法, 分别对其进行有关物质检查, 结果见图 2 图 3 和表 1 图 2 原料药 ( 海翔医药责任有限公司, 批号 :110219 ) 有关物质检查的典型色谱图 Fig 2 The typical chromatogram of related substances of raw material (Haixiang Pharmaceutical Co. Ltd., batch number: 110219) 728 Chin JMAP, 2012 August, Vol.29 No.8 中国现代应用药学 2012 年 8 月第 29 卷第 8 期
图 3 注射液 ( 上海复旦复华药业有限公司, 批号 :1003102) 有关物质检查的典型色谱图 Fig 3 The typical chromatogram of related substances of injection (Shanghai Fudan Fuhua Pharmaceutical Co. Ltd., batch number: 1003102) 4 讨论 4.1 测定方法的建立先按现行标准方法 [6-7], 对国内近十数个厂家生产的原料药 多个规格多个批次注射剂上市产品进行有关物质分析, 结果发现克林霉素磷酸酯主峰的流出时间通常偏快, 溶剂峰形态复杂, 附近并有疑似杂质的较大较尖锐的色谱峰提前或紧随流出, 见图 4, 难以确定其为溶剂峰还是杂质峰, 色谱图中总体可检出的杂质峰数量也较少, 加之对杂质总量的限度要求过宽, 恐不能有效控制产品质量 ; 将 USP33 版克林霉素磷酸酯原料个论所 表 1 克林霉素磷酸酯有关物质检查结果 Tab 1 The results of related substances of clindamycin phosphate 1 改进的方法 2 现行标准方法 厂家 批号 林可霉素 /% 克林霉素 /% 克林霉素 B 磷酸酯 /% 单个最大杂质 /% 杂质总量 /% 单个最大杂质 /% 总杂质 /% 苏州天马天吉生物 003110206 0.10 0.07 0.601 0.52 1.91 0.3 1.7 003110209 0.09 0.05 0.751 0.55 2.43 0.7 2.2 003110304 0.08 0.05 0.997 0.64 2.71 0.7 2.4 浙江天台药业 110307X1 0.13 0.13 0.810 0.63 2.30 0.8 1.7 110308X1 0.13 0.14 0.944 0.62 2.42 0.7 1.8 110309X1 0.12 0.14 0.827 0.63 2.45 0.5 1.7 华北制药海翔医药 090612 0.35 0.43 0.790 0.36 3.00 0.6 1.8 110219 0.22 0.19 1.110 0.39 2.86 0.5 1.7 南阳普康药业 2011031471 0.41 0.14 0.827 0.16 2.36 0.6 1.8 2011031671 0.35 0.43 0.795 0.37 3.08 0.5 1.9 图 4 现行国家标准方法 (C 8 柱 ) 有关物质检查的典型色谱图 Fig 4 The typical chromatogram of related substances by the current national standard methods (C 8 column) 载 HPLC 梯度洗脱法直接用于本品的有关物质分析, 其色谱系统基线平稳, 基线形态重复性好, 主色谱峰的保留时间也较为合适 (15~20 min), 相同进样浓度下杂质检出的数量也明显增多 进一步的研究表明借鉴 USP 所载 HPLC 梯度洗脱法, 经适当改进 ( 改变固定相 检测波长 ) 后应用于本品 的有关物质分析 [8], 对克林霉素磷酸酯各相关杂质的检出与分离明显更为有效 由此而改进的方法检测到的杂质峰数量明显增加, 杂质之间 杂质与主成分之间的分离状况明显改善 以最大单一杂质和总杂质两个指标进行比较, 标准方法测得结果均明显低于改进方法 4.2 固定相种类的选择对本品而言, 固定相种类的选择不外乎辛烷基柱与十八烷基柱 经实验比较, 发现无论是主成分峰与杂质峰的峰形 理论板数, 还是各杂质峰相互间的分离状况,C 18 柱都相对优于 C 8 柱 ; 更关键的是,C 18 可以分离出主成分峰之前一个明显的 未知 杂质峰 ( 根据经海翔药业提供的杂质对照品, 确认其为 7- 差向克林霉素磷酸酯, 而 C 8 则不能 加之 C 18 可以选择的商品化柱牌号远多于 C 8, 这些综合优势促使我们选择了 C 18 作为修订方法的固定相 中国现代应用药学 2012 年 8 月第 29 卷第 8 期 Chin JMAP, 2012 August, Vol.29 No.8 729
4.3 检测波长的比较在选取检测波长时, 被借鉴的 USP 个论方法采用 214 nm 为检测波长, 但其目的是用于克林霉素磷酸酯的含量测定, 而非有关物质检测 本实验重点在于改进本剂型质控标准的有关物质检测方法, 因此有必要针对杂质检测选择更为灵敏 合适的检测波长 在配备了 DAD 检测器的色谱仪上对本品进行测试, 同时监测 214 nm 与 210 nm 两个波长, 实验数据表明 210 nm 更适合于检测本品主药的相关物质 4.4 特定杂质 7- 差向克林霉素磷酸酯为分离出克林霉素磷酸酯主峰前的 未知杂质 ( 已用海翔药业提供 7- 差向克林霉素磷酸酯 杂质对照品确认, 该杂质的安全性评价有待开展 ) 本次方法改进探索研究初期, 在 USP 梯度洗脱方法基础上进行了很多尝试, 但对其所作的任何改动 优化, 相应的方法学验证均表明其未能超越 USP 个论方法已有的分离水平, 直至将色谱柱换用 C 18 柱结合采用 USP 梯度洗脱程序后, 克林霉素磷酸酯主峰前的 未知杂质 方得以成功分离 本法应是目前最好的改进方法 因此作为一个阶段性成果, 在未开发出更出色的分离方法之前, 建议采用本法控制克林霉素磷酸酯原料及注射剂的有关物质, 使其在实践中得以发展 完善 4.5 特定杂质克林霉素 B 磷酸酯克林霉素磷酸酯合成过程中可能产生多种反 应残留物和副产物, 如林可霉素 克林霉素 克林霉素 B 克林霉素 B 磷酸酯 ( 保留时间 15.3 min) 及 7- 表克林霉素磷酸酯 ( 保留时间 19.9 min) 等, 见图 1 林可霉素和克林霉素已加以控制, 但有文献报道克林霉素 B 与克林霉素 B 磷酸酯可能导致严重不良反应 ; 因此有必要对克林霉素 B 磷酸酯加以重点控制 研究表明, 系统适用性试验表明克林霉素 B 磷酸酯不受相邻各组分及溶剂干扰 强力破坏试验产生的降解产物对克林霉素 B 磷酸酯也无干扰 REFERENCES [1] USP 34 VolⅡ [S]. 2011: 2376, 2377, 2378. [2] EP 7.0 VolⅡ [S]. 2011: 1717. [3] JP 15 [S]. 2006: 470. [4] CHEN Q, LI X W, LI L G. The study of clindamycin phosphate injection stability [J]. Chin J Exp Tradit Med Form ( 中国实验方剂学杂志 ), 2009, 15(7): 31-33 [5] CHANG L J, ZHAO X F. To compare the stability of clindamycini phosphates for injection and clindamycini [J]. Heilongjiang Med J( 黑龙江医学 ), 2009, 22(3): 300-301. [6] Chinese Pharmacopoeia Commission. China National Drug Standards( 国家药典委员会. 国家药品标准 ) [S]. WS 1 -(X-020)- 2003Z, X32-164. [7] Chinese chemical drug standards. Standards for registration( 化学药品标准. 注册标准 ) [S]. YBH09502003. [8] ZHANG D S, LI J, XU M Z, et al. Comparison of the ultrafast liquid chromatography with normal high-performonce liquid chromatography for determination of clindamycin phosphate and its related substances [J]. Chin J Antibiot( 中国抗生素杂志 ), 2008, 33(6): 347-349. 收稿日期 :2011-12-19 寡核苷酸抗流感药物流感泰得钠含量测定 仲婕 1,2, 李保山 1,2, 朱德领 1,2*, 张金钟 1,2, 施明珠 1,2, 殷爱军 龙药物研究院, 杭州 310021) 1,2 (1. 杭州天龙药业有限公司, 杭州 310021;2. 军科天 摘要 : 目的用离子色谱法 (IC) 原子吸收光谱法(AAS) 评价抗流感药物钠含量, 探讨两种测量方法定量结果的一致性 方法在戴安 ICS900 离子色谱仪上, 用阳离子分析柱 Ionpac CS12(4 mm 250 mm), 流动相 : 甲烷磺酸 ; 抑制型电导检测 ; 流速 1 ml min 1 ; 测量结果与国标方法 ( 火焰原子收光谱法 ) 进行方法学评价比较 ; 应用配对 t 检验和 Bland -Altman 法对两种测量方法进行一致性评价 结果两种方法的精密度分别为 2.0% 和 0.7%, 重现性分别为 2.0% 和 7.96%, 回收率分别为 99.6% 和 89.8%, 测量结果无显著性差异, 配对 t 检验 P>0.05;Bland-Altman 法一致性评价的 95% 一致性界限为 : ( 1.514,1.487), 绝大多数差值都位于该区间内 结论 IC 的重复性和回收率均优于 AAS;Bland-Altman 法综合判断两组数据具有高度的一致性 基金项目 : 十二五 国家重大新药创制科技重大专项 (2011ZX09102-009-09) 作者简介 : 仲婕, 女, 副研究员 Tel: (010)66931423 E-mail: law1022@163.com Tel: (0571)81635678 E-mail: delinzhu@163.com * 通信作者 : 朱德领, 男, 硕士, 教授级高级工程师 730 Chin JMAP, 2012 August, Vol.29 No.8 中国现代应用药学 2012 年 8 月第 29 卷第 8 期