1440 DOI:10.16016/j.10005404.201611064 细胞焦亡在新生儿坏死性小肠结肠炎中的致病作用 胡刘宏, 余加林, 艾青, 贺雨, 肖洒, 程晨, 冯晋兴, 王政力 (400014 重庆, 重庆医科大学附属儿童医院新生儿科, 儿童发育疾病研究教育部重点实验室, 儿科学重庆市重点实验室, 儿童发育重大疾病国家国际科技合作基地 ) [ 摘要 ] 目的探讨细胞焦亡是否参与新生儿坏死性小肠结肠炎 (necrotizingenterocolitis,nec) 发病, 并分析其可能的作用机制 方法将 50 只新生 1d 的 SD 大鼠按随机数字表法分为 2 组 (n= 25): 正常对照组 坏死性小肠结肠炎新生大鼠组 (NEC 组 ) 正常对照组与母鼠同笼, 不予处理 ;NEC 组采用缺氧 冷刺激及人工喂养的方式建立模型 新生鼠于第 1 2 3 天固定时间点测量体质量, 第 4 天处死大鼠,HE 染色观察回盲部肠组织病理学变化并评分 ;qpcr 检测 NLRP3 IL1β IL18 基因表达水平 ;Westernblot 检测 Caspase1 表达及激活情况 ;ELISA 检测肠组织匀浆 IL1β IL18 水平 结果与正常对照组相比,NEC 组大鼠体质量明显降低, 肠上皮损伤明显 ;NLRP3 及 IL1β IL18 基因表达增高 ( 分别为 0.33±0.06vs1.11±0.12,0.40±0.15vs1.25±0.13,1.04±0.16vs2.35±0.17, P<005); 激活的 Caspase1 仅在 NEC 组中表达, 且下游炎症因子 IL1β 及 IL18 水平亦高于正常对照组 ( 分别为 300.4±76.5vs74.4±17.5,214.4±28.1vs23.9±19.3,P<001) 结论细胞焦亡参与了 NEC 的发病, 其具体机制可能与焦亡发生后 IL1β IL18 的水平升高有关 [ 关键词 ] 细胞焦亡 ; 坏死性小肠结肠炎 ; 半胱天冬酶 1; 白介素 1β; 白介素 18 [ 中图法分类号 ] R329.25;R361;R725.746 [ 文献标志码 ] A Pathogenicroleofcelpyroptosisinnecrotizingenterocolitisinneonatalrats HULiuhong,YUJialin,AIQing,HEYu,XIAOSa,CHENGChen,FENGJinxing,WANGZhengli(Departmentof Neonatology,KeyLaboratoryofDevelopmentalDiseasesin Childhood ofministryofeducation, ChongqingKey LaboratoryofPediatrics,ChongqingInternationalScienceandTechnologyCooperationCenterforChildDevelopmentand Disorders,Children shospitalofchongqingmedicaluniversity,chongqing,400014,china) [Abstract] Objective Toinvestigatewhethercelpyroptosisisinvolvedinthepathogenesisof neonatalnecrotizingenterocolitis(nec)andexploretheposiblemechanism.methods Fiftyneonatal(1 dayold)spraguedawleyratswererandomlydividedintocontrolgroupandnecgroup(n=25).theratsin thecontrolgroupwereleftwiththeirmotherswithoutparticulartreatment,andthoseinnec groupwere subjectedtogavagefeeding,hypoxiaandcoldstrestoestablishmodelsofnec.theneonatalratswere weighedatafixedtimepointofthedayfor3consecutivedays.onday4,altheratsweresacrificedby decapitationand a2cm segmentoftheproximalintestineattheileocecaljunction washarvested for histopathologicalevaluation.themrnaexpresionlevelsofnlrp3,interleukin1β(il1β),andil18in theintestinaltisueweredetectedwithquantitativerealtimepcr,andtheexpresionandactivationlevelof caspase1weredetectedwithwesternbloting.enzymelinkedimmunosorbentasaywasperformedtodetect theexpresionlevelsofil1βandil18proteinsintheintestinetisues.results Comparedwiththecontrol group,theneonatalratsinnecgroupshowedsignificantlyloweredbodyweightandobviousintestinalinjury. TheintestinaltisuesoftheneonatalratsinNECgroupshowedsignificantlyincreasedexpresionsofNLRP3, IL1βandIL18atboththemRNA(P<005)andprotein(P<001)levelsascomparedwiththoseinthe [ 基金项目 ] 国家自然科学基金 (81370744,81571483,81601323), 儿童医院临床研究项目 [(2014)254lcyj201411] [ 通信作者 ] 余加林,Email:yujialin486@126.com [ 优先出版 ] htp://kns.cnki.net/kcms/detail/51.1095.r.20170402.1622.002.html
htp://aammt.tmmu.edu.cn 第三军医大学学报,2017,39(14) 1441 controlgroup.activatedcaspase1proteinwasdetectedonlyinnecgroup.conclusion Celpyroptosis participatesinthepathogenesisofneonatalintestinalinjury,inwhichincreasedil1βandil18expresion folowingcelpyroptosismayplayarole. [Keywords] pyroptosis;necrotizingenterocolitis;capsase1;interleukin1β;interleukin18 SupportedbytheNationalNaturalScienceFoundationofChina(81370744,81571483,81601323)andtheClinicalResearchFoundationofChildren shospital ofchongqingmedicaluniversity[(2014)254lcyj201411].corespondingauthor:yujialin,email:yujialin486@126.com 坏死性小肠结肠炎 (necrotizingenterocolitis, NEC) 是新生儿期常见且极为严重的胃肠道急症, 在出生体质量低于 1500g 的早产儿中发病率达 7%, 病死率可达 20% ~30% [1] 研究发现,NEC 虽是肠道的炎症性疾病, 但常常与败血症 全身炎症反应综合征 (SIRS) 休克等全身炎症性疾病伴发 [2-5] 目前国内外对其进行了大量研究, 但其发病机制仍不明确 细胞焦亡 (pyroptosis) 是近年新发现的一种程序性的细胞死亡方式, 其特征为依赖于半胱天冬酶 1(Caspase1) 的激活, 同时伴有大量促炎症因子 ( 包括 IL1β IL18) 的释放 [6-8] 由 Nod 样受体热蛋白结构域相关蛋白 3 (nucleotidebindingoligomerizationdomainlikereceptor familypyrindomaincontaining3,nlrp3) 形成的 NL RP3 炎性小体介导的 Caspase1 的激活是非常重要, 并且是目前研究最为广泛的一个信号轴 既然细胞焦亡是伴有炎症反应发生的程序性的细胞死亡方式, 而 NEC 又是一种公认的炎症性疾病, 那么, 细胞焦亡是否参与了 NEC 的发病, 至今尚少见相关报道 本实验建立 NEC 大鼠模型, 检测 NLRP3 Caspase1 及相关炎症介质水平, 探讨 NEC 疾病中是否有焦亡现象发生并分析其可能的作用机制, 以期为进一步揭示 NEC 的发病机制及其治疗方法提供新思路 1 材料与方法 1.1 主要材料 50 只清洁级新生 1d 的 SD 大鼠, 雌雄不限, 体质量 5~7g( 重庆医科大学动物中心 ), 雅培婴幼儿奶粉 ( 雅培公司, 美国 ), 贝克幼犬奶粉 ( 贝克公司, 美国 ), 组织 RNA 提取试剂盒 (QIAGEN 公司, 德国 ), 逆转录试剂盒 (TaKaRa, 日本 ),PVDF 膜 (BioRad 公司, 美国 ), 脱脂奶粉 (BD 公司, 美国 ), 兔抗大鼠 Caspase1 抗体 山羊抗兔二抗 (Abcam 公司, 英国 ),ECL 增强化学发光检测试剂盒 (Pierce 公司, 美国 ),IL1βELISA 检测试剂盒 ( 武汉优尔森科技有限公司, 中国 ) IL18 ELISA 检测试剂盒 ( 武汉伊莱瑞特生物科技有限公司, 中国 ) 1.2 方法 1.2.1 实验动物分组及处理 50 只新生 1d 的 SD 大鼠按随机数字表法分成 2 组 : 正常对照组 坏死性小 肠结肠炎新生大鼠组 (NEC 组 ), 每组 25 只 正常对照组 : 与母鼠同笼, 鼠乳喂养, 不予处理 NEC 组 : 与母鼠分开, 人工喂养 + 缺氧 冷刺激, 以建立新生鼠 NEC 动物模型 [9] 具体建模方法: 新生 1d 的 SD 大鼠放置在自制保育箱内, 控制保育箱内温度 (36±1), 湿度 45% ~60% 根据文献[10-11] 报道配制代乳品, 经口插入 PICC 管灌胃喂养 第 1 天喂养量为 0.1mL/ 次, 每 4 小时喂养 1 次, 以后每 24 小时增加 0.1~0.15mL 将新生鼠放入自制的缺氧箱内, 向箱内充入纯氮 (N 2 ), 控制 N 2 流量为 10L/min, 当测氧仪测得箱内 O 2 浓度降为零时开始计时,10min 后关闭阀门并将新生鼠取出 5min 后立即将其置于 4 冰箱中刺激 10min 缺氧 冷刺激分别于每日早晚 8 点各进行 1 次, 连续 3d 1.2.2 大鼠一般状况及体质量变化严密观察大鼠一般状况, 有无腹胀 腹泻, 血便 黑便, 活动是否良好等, 并于每日固定时间点测量并记录其体质量 1.2.3 大鼠肠组织大体形态 病理学形态观察及病理损伤评分各组大鼠于第 4 天空腹后断头处死, 打开腹腔, 取出十二指肠下端至回盲部肠管, 肉眼观察有无肠腔积气 出血 坏死等 NEC 样病变 取回盲部近端 1~2cm 肠组织, 立即固定于 4% 多聚甲醛溶液中, 石蜡包埋 切片 HE 染色, 光镜下观察肠组织病理学 [12] 变化并进行组织损伤评分 参照 DVORAK 等报道的标准, 采用双盲法进行肠组织损伤评分, 评分 2 分确定为 NEC 每例组织标本观察 3 个视野, 取其平均值 1.2.4 实时荧光定量 PCR 检测 NLRP3 IL1β IL18 mrna 水平从 -80 取出冻存的肠组织, 提取总 RNA, 所有步骤严格按照 RNA 提取试剂盒 (Invitrogen 公司, 美国 ) 说明书操作 测定每个样本 RNA 浓度后, 按照逆转录试剂盒步骤说明将 RNA 逆转录为 cdna, 然后以 cdna 为模板, 在 CFX90 荧光 PCR 扩增仪上进行 NLRP3 IL1β IL18mRNA 扩增 RTPCR 反应条件 : 95 预变性 30s,95 变性 5s,56 退火 5s,65 延伸 5s, 共 39 个循环 采用 2 ΔΔCt (ΔCt= 目的基因 Ct 值 - 内参 Ct 值 ) 进行目的基因相对表达量分析 实验以 βactin 为内参,βactin 上游引物 :5 TGACAGGAT GCAGAAGGAGA3, 下游引物 :5 TAGAGCCAC CAATCCACACA3, 片段大小 106bp;NLRP3 上游引
1442 物 :5 GCTGCTCAGCTCTGACCTCT3, 下游引物 :5 AGGTGAGGCTGCAGTTGTCT3, 片段大小 146 bp; IL1β 上游引物 :5 CACCTCTCAAGCAGAGCACAG3, 下游引物 :5 GGGTTCCATGGTGAAGTCAAC3, 片段大小 83bp;IL18 上游引物 :5 ACCGCAGTAATACG GAGCAT3, 下游引物 :5 TAGGGTCACAGCCAGTC CTC3, 片段大小 168bp 1.2.5 Westernblot 检测 Caspasee1 的表达及激活情况取出冻存于 -80 的肠组织, 按照 100mg 组织加入 600μLNP40 裂解液的比例加入组织和裂解液, 并加入相应体积蛋白酶抑制剂 PMSF 后进行组织匀浆,4 14000 g 离心 10min, 提取胞浆总蛋白, BCA 法测定蛋白浓度 取 40μg 总蛋白进行凝胶电泳, 湿法电转印至 PVDF 膜, 用 5% 脱脂奶粉封闭 2h 后孵育抗体, 一抗 ( 抗 Caspase1 抗体稀释浓度为 1 500, 抗 GAPDH 抗体稀释浓度为 1 1000),4 孵育过夜, 山羊抗兔二抗 ( 稀释浓度为 1 1000), 室温孵育 1.5h, 洗膜后 ECL 法发光显影 最后用 UVP 凝胶图像处理系统 Labworks4.6 软件进行图像分析, 以目的条带与内参条带灰度值的比值衡量蛋白表达的多少, 比值越高, 表明该目标蛋白表达越多 1.2.6 ELISA 检测肠组织 IL1β IL18 水平取 -80 冻存的肠组织, 按照 100mg 组织加入 500μL 组织裂解液的比例加入组织及裂解液, 同时加入相应体积的蛋白酶抑制剂 PMSF, 组织匀浆,4 5000 g 离心 10min, 取上清液, 保存于 -20 采用酶联免疫吸附试验测定 IL1β IL18 水平, 严格按照试剂盒说明书操作 1.3 统计学方法采用 SPSS22.0 统计软件, 计量资料采用 x±s 珋表示, 正态方差齐性资料组间比较采用独立样本 t 检验, 正态方差不齐组间比较采用 MannWhitney 检验 2 结果 2.1 大鼠一般状况及体质量变化情况从建模第 2 天开始,NEC 组出现明显的胃潴留 腹胀 喂养困难 活动减少 倦怠懒动, 甚至黑便 血便, 体质量明显降低 [(6.20±0.55)gvs(4.87±0.25)g]; 而正常对照组则生长发育良好, 进食及排便正常, 活动正常, 皮下脂肪丰满, 体质量明显增加 [(6.23±0.35)g vs(8.30±0.33)g] 2.2 大鼠肠组织大体形态 病理学形态及病理损伤评分肉眼观察显示 : 正常对照组大鼠肠管颜色呈淡黄色, 肠曲形态自然, 弹性佳, 无积气 出血 水肿等改变 ( 图 1A) NEC 组大鼠肠组织呈黑红色改变, 充血 水 肿, 肠腔明显积气 扩张, 肠壁变薄, 肠管僵直, 肠曲形态不自然, 严重者可有串珠样改变 ( 图 1B) 光镜下观察可见 : 正常对照组肠组织结构清晰完整, 上皮细胞排列整齐, 绒毛高耸, 肌层较厚, 黏膜层 黏膜下层及固有层均未见明显的充血水肿或断裂分离 ( 图 2A) 而 NEC 组肠上皮细胞排列紊乱, 绒毛变性水肿 参差不齐, 部分绒毛坏死 脱落或消失, 肌层变薄甚至断裂, 黏膜层 黏膜下层及固有层可见明显的分离水肿, 甚至可见明显的积气及充血改变 ( 图 2B) 双盲法光镜下肠组织病理损伤评分 :NEC 组肠组织损伤评分 (3.13± 0.69) 明显高于正常对照组 (0.44±0.56), 差异有统计学意义 (P<0.05) A: 正常对照组 ;B: 坏死性小肠结肠炎新生大鼠组图 1 两组大鼠肠组织肉眼观察 A: 正常对照组 ;B: 坏死性小肠结肠炎新生大鼠组图 2 两组大鼠肠组织病理形态学观察 (HE 200) 2.3 qpcr 检测 NLRP3 IL1β 及 IL18 基因水平与正常对照组相比,NEC 组大鼠的 NLRP3(0.33± 0.16vs1.11±0.25) IL1β(0.40±0.15vs1.25± 013) 及 IL18mRNA(1.04±0.16vs2.35±0.17) 水平均表达增高 (P<0.05) 2.4 Westernblot 检测 Caspase1 的表达及激活情况与正常对照组相比,NEC 组 Caspase1 前体的表达量有所降低, 而其激活态 P20 及 P10 则几乎仅在 NEC 组中表达 ( 图 3A), 半定量分析结果显示差异有统计学意义 (P<0.05, 图 3B)
htp://aammt.tmmu.edu.cn 第三军医大学学报,2017,39(14) 1443!"#$ " " # " "# " "# " "# # $ % & %! A:Westernblot 检测 1~4: 正常对照组,5~9:NEC 组 ; B: 半定量分析 a:p<0.05,b:p<0.01, 与正常对照组比较 图 3 Westernblot 法检测 Caspase1 激活情况 2.5 ELISA 检测肠组织 IL1β IL18 水平 与 qpcr 检测结果一致, 肠组织匀浆的 ELISA 法检测结果亦是 NEC 组的 IL1β 及 IL18 水平高于正常对照组 (74.4±17.5vs3004±76.5,23.9±19.3vs 214.4±28.1), 差异有统计学意义 (P<001) 3 讨论 [13] 早在 2001 年,COOKSON 等就首次使用 Py roptosis 来形容在巨噬细胞中发现的 Caspase1 依赖的细胞死亡方式, 但并未引起大家的注意 直到 2014 [6] 年 Doitsh 等在 HIV 感染患者体内发现大量 CD4 + T 细胞 无辜死去 的现象并进一步研究指出细胞焦亡可能是这一现象的 元凶 后, 细胞焦亡才成为人们关注的焦点 大量研究表明, 细胞焦亡参与了许多疾病的发生发展, 例如各种感染性疾病 心力衰竭 糖尿病 痛风 阿尔兹海默病 急性肾损伤等 [14-16] 但关于细胞焦亡是否参与 NEC 这一复杂疾病的发病, 目前尚少见相关报道 本实验采用缺氧 冷刺激及人工喂养的方式建立 NEC 的动物模型, 检测焦亡相关指标, 探究细胞焦亡是否参与了 NEC 的发病, 并分析其可能的作用机制 结果发现,NEC 组大鼠在体质量 一般情况 肠道病理损伤等方面均明显区别于正常对照组, 说明模型建立成功 [17] 在焦亡相关指标方面, 首先需明确的是, 细胞焦亡与我们熟知的细胞凋亡在细胞形态学 发生机制及生物学效应方面均有明显不同 细胞发生凋亡 ' 时, 凋亡细胞的内容物被膜包裹形成凋亡小体, 在体内被吞噬细胞非炎症性吞噬和清除, 该过程依赖于 Caspase3 Caspase8 Caspase9 的活化, 而细胞焦亡, 则依赖于 Caspase1 的活化 [15] 初合成的 Caspase1 以无活性的前体形式存在, 研究表明, 胞内多蛋白复合物炎性小体 (inflammasome) 可调控 Caspase1 前体裂解为具有酶活性的 P20 及 P10 简单来说, 炎性小体是由胞内模式识别受体即 NOD 样受体 (NOD likere ceptor,nlr) 凋亡相关点样蛋白 (ASC) 及 Caspase1 前体蛋白组成 其中由 NLRP3 支架 ASC Caspase1 组成的 NLRP3 炎性小体是目前研究最为广泛且极为重要的炎性小体, 可被多种微生物如细菌 RNA 细菌 RNA 双链类似物 LPS 及各种胞内分子 ( 尿酸盐结晶 成孔毒素 ATP 等 ) 激活 本研究发现 NLRP3 炎性小体的 mrna 表达在 NEC 组中明显高于正常对照组, 且 Caspase1 的激活态 P20 P10 仅在 NEC 组中有表达, 均表明 NEC 组中存在显著的焦亡增加现象 另外我们观察到 Caspase1 前体在正常对照组及 NEC 组中均有表达但在正常对照组中表达更为明显, 这是由于在 NEC 组中部分 Caspase1 前体裂解为其激活态从而导致 NEC 组中 Caspase1 前体含量降低 活化的 Caspase1 可将无活性的 IL1β 及 IL18 前体裂解为具有活性的 IL1β 及 IL18 并介导其分泌至胞外发挥相应的生物学效应 [15] 本研究发现, 不论是 IL1β 及 IL18 的基因水平还是其蛋白水平, 均是 NEC 组明显高于正常对照组 众所周知,IL1β IL18 是常见的促炎症因子, 能募集 激活其他免疫细胞, 诱导其他炎症介质, 放大局部和全身炎症反应, 我们推测这可能是细胞焦亡引发 NEC 的作用机制 另有相关研究报道指出, 在炎症肠病 (inflammatoryboweldisease,ibd) 患者体内或葡聚糖硫酸钠 (DSS) 诱导的结肠炎模型中,IL 1β IL18 水平亦明显高于正常对照组, 并有研究指出 NLRP3 炎性小体可能参与了这些疾病的发病 [18-20] 上述研究结果与本研究有相似之处,IBD 与 NEC 也都是肠道的炎症性疾病, 但其发病多在成人, 两者发病机制仍有较大不同, 而且通过加入 DSS 诱导建立成年大鼠溃疡性结肠炎的动物模型与本研究所采用的目前公认的 NEC 建模方法有本质区别 综上所述, 本实验成功建立 NEC 动物模型并检测 NLRP3 Caspase1 前体及激活态 IL1β IL18 等细胞焦亡相关指标, 得出细胞焦亡参与 NEC 的发病, 并指出 IL1β 及 IL18 的促炎性作用是其可能的作用机制, 为揭示 NEC 这一复杂疾病的发病机制及治疗提供了一定的理论基础 但 NLRP3 是通过怎样的途径被激活以及能否通过加入 Caspase1 抑制剂来阻断 Caspase1 的激活或通过添加 IL1β IL18 受体阻断剂
1444 来达到治疗 NEC 的目的, 仍需进一步的研究 参考文献 : [1]LIM JC,GOLDENJM,FORDH R.Pathogenesisofneo natalnecrotizingenterocolitis[j].pediatrsurgint,2015,31 (6):509-518.DOI:10.1007/s0038301536979. [2]LEVITONA,DAMMANNO,ENGELKES,etal.Theclus teringofdisordersininfantsbornbeforethe28thweekofges tation[j].actapaediatr,2010,99(12):1795-1800. DOI:10.1111/j.16512227.2010.01973.x. [3] WUSF,CAPLANM,LINH C.Necrotizingenterocolitis: oldproblemwithnewhope[j].pediatrneonatol,2012,53 (3):158-163.DOI:10.1016/j.pedneo.2012.04.001. [4] BIZZARROM J,EHRENKRANZRA,GALLAGHERPG. Concurentbloodstream infectionsininfantswithnecrotizing enterocolitis[j].jpediatr,2014,164(1):61-66.doi: 10.1016/j.jpeds.2013.09.020. [5] BERRINGTONJE,STEWARTCJ,CUMMINGSSP,etal. Theneonatalbowelmicrobiomeinhealthandinfection[J]. CurOpinInfectDis,2014,27(3):236-243.DOI:10. 1097/QCO.0000000000000061. [6] DOITSHG,GALLOWAYNL,GENGX,etal.Celdeath bypyroptosisdrivescd4tceldepletioninhiv1infection [J].Nature,2014,505(7484):509-514.DOI:10. 1038/nature12940. [7]GALLUZZIL,LóPEZSOTOA,KUMARS,etal.Caspases ConnectCelDeathSignalingtoOrganismalHomeostasis[J]. Immunity,2016,44(2):221-231.DOI:10.1016/j.im muni.2016.01.020. [8] SHALINIS,DORSTYNL,DAWARS,etal.Old,newand emergingfunctionsofcaspases[j].celdeathdifer,2015, 22(4):526-539.DOI:10.1038/cdd.2014.216. [9] QUINTANILLAHD,LIUY,FATHEREENY,etal.Oral administrationofsurfactantproteinareducespathologyinan experimentalmodelofnecrotizingenterocolitis[j].jpediatr GastroenterolNutr,2015,60(5):613-620.DOI:10. 1097/MPG.0000000000000678. [10]YUX,RADULESCUA,ZORKON,etal.HeparinBinding EGFLikeGrowthFactorIncreasesIntestinalMicrovascular BloodFlowinNecrotizingEnterocolitis[J].Gastroenterolo gy,2009,137(1):221-230.doi:10.1053/j.gastro. 2009.03.060. [11]GONALVESFL,SOARESLM,FIGUEIRARL,etal. EvaluationoftheexpresionofIFABPandLFABPinane crotizingenterocolitismodelaftertheuseoflactobacilusac idophilus[j].jpediatrsurg,2015,50(4):543-549. DOI:10.1016/j.jpedsurg.2014.07.007. [12]DVORAKB,KHAILOVAL,CLARKJA,etal.Compari sonofepidermalgrowthfactorandheparinbindingepidermal growthfactorlikegrowthfactorforpreventionofexperimental necrotizingenterocolitis[j].jpediatrgastroenterolnutr, 2008,47(1):11-18.DOI:10.1097/MPG.0b013e31817 88618. [13] COOKSON BT,BRENNAN M A.Proinflammatorypro grammedceldeath[j].trendsmicrobiol,2001,9(3): 113-114.DOI:10.1016/s0966842x(00)019363. [14] ZHOUK,SHIL,WANGY,etal.RecentAdvancesofthe NLRP3InflammasomeinCentralNervousSystem Disorders [J].JImmunolRes,2016,2016:9238290.DOI:10. 1155/2016/9238290. [15] 林静, 李大主. 细胞焦亡 : 一种新的细胞死亡方式 [J]. 国际免疫学杂志,2011,34(3):213-216.DOI:10. 3760/cma.j.isn.16734394.2011.03.013. LIN J,LID Z.Pyroptosis:acaspase1dependentcel death[j].interjimmunol,2011,34(3):213-216. DOI:10.3760/cma.j.isn.16734394.2011.03.013. [16] 陈雨, 侯卫平, 袁发焕. 动力相关蛋白 1 在缺氧 / 复氧诱导人肾小管上皮细胞焦亡机制中的作用 [J]. 第三军医大学学报,2016,38(11):1251-1256.DOI:10.16016/ j.10005404.201511131. CHENY,HOUW P,YUANFH.Roleofdynaminrelated protein1inhypoxia/reoxygenationinducedhumanrenaltu bularepithelialcelpyroptosis[j].jthirdmilmeduniv. 2016,38(11):1251-1256.DOI:10.16016 /j.1000 5404.201511131. [17] 宋朝敏, 王红, 吴斌, 等. 新生鼠坏死性小肠结肠炎动物模型建立及评价 [J]. 中国新生儿科杂志,2007,22 (5):280-284, 插 2.DOI:10.3969/j.isn.16736710. 2007.05.008. SONGCM,WANG H,WU B,etal.Establishmentand evaluationofnecrotizingenterocolitismodelinneonatalrat [J].ChinJNeonatol,2007,22(5):280-284.DOI:10. 3969/j.isn.16736710.2007.05.008. [18] ZHANGH,GONGC,QUL,etal.Therapeuticefectsof triptolideviatheinhibitionofil1βexpresioninamouse modelofulcerativecolitis[j].expthermed,2016.doi: 10.3892/etm.2016.3490. [19] HEDLM,ZHENGS,ABRAHAM C.TheIL18RAPregion diseasepolymorphismdecreasesil18rap/il18r1/il1r1 expresionand signalingthrough innatereceptorinitiated pathways[j].jimmunol,2014,192(12):5924-5932. DOI:10.4049/jimmunol.1302727. [20] TIANZ,LIUY,YANGB,etal.Astagaluspolysaccharide atenuatesmurinecolitisthroughinhibitonofthenlrp3in flammasome[j].plantamed,2017,83(102):70-77. DOI:10.1055/s0042108589. ( 收稿 :20161108; 修回 :20170124) ( 编辑黄超 )