复旦学报 医学版 年 月 & / / /, /,,, /, *,-.-.&- &- & & &&,- / /,-, / / -.&- &- & / /* -.&- &- & &&,& &. * -.&- &- & & & & -.&- &- & 炎症性肠病 -/, 包括溃疡性结肠炎 和克罗恩病, 是

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1 复旦学报 医学版 和 对急性期溃疡性结肠炎小鼠结肠黏膜炎症因子 及 表达的影响 李 鹃 刘 懿 董 乐 岳文杰 黄剑平 蒋蔚茹 孙 旭 钟 良 刘 杰 复旦大学附属华山医院消化科 上海 摘要 目的 探讨 单克隆抗体 & 和 单克隆抗体 & 对葡聚糖硫酸钠 *, 诱导的急性期溃疡性结肠炎 小鼠结肠黏膜的炎症因子 -.&- & 及 - & 表达的影响 方法 只雄性 / / 小鼠分为 组 每组 只 对照组 模型组 / 及 干预组 干预组, 和 联合干预组 组小鼠饮用蒸馏水 /& 组小鼠仅饮用, 水溶液 以产生急性期溃疡性结肠炎模型 造模开始的同时 每隔 分别给予, 干预组小鼠以 腹腔内注射 / 组给予腹腔内注射生理盐水 以观察 和 的干预作用 观察指标包括疾病活动指数 *,- 结肠组织病理学评分 造模及干预 后处死小鼠 & 法检测各组结肠黏膜 -.&- & 及 - & 的. 表达 结果 与 组相比 / 组小鼠肠道,- 及 明显增高 与 / 组相比 组小鼠肠道,- 和 均明显降低 与, 组相比 组小鼠肠道 明显降低 与 组相比 / 组小鼠结肠黏膜 表达明显增高 与 / 组相比, 组小鼠结肠黏膜 表达均有不同程度的降低 与 组相比 / 组小鼠结肠黏膜 -.&- & 及 - & 的. 表达明显增高 与 / 组相比, 组小鼠结肠黏膜 -.&- & 及 - & 的. 表达均有不同程度的降低 结论 和 可能通过下调小鼠结肠黏膜的炎症因子 -.&- &- & 的. 表达而发挥其干预作用 关键词 溃疡性结肠炎 单克隆抗体 单克隆抗体 -.&- &- & 中图分类号 文献标志码 & & & & & *&,-- & - -,. &. & -. & & &./ & & -.&- &- & * *,& 上海市科学技术委员会基金项目 &

2 复旦学报 医学版 年 月 & / / /, /,,, /, *,-.-.&- &- & & &&,- / /,-, / / -.&- &- & / /* -.&- &- & &&,& &. * -.&- &- & & & & -.&- &- & 炎症性肠病 -/, 包括溃疡性结肠炎 和克罗恩病, 是一种由多种因素导致的肠道黏膜慢性炎症性疾病 其病因和发病机制尚未完全阐明 目前传统药物治疗存在疗程长 不良反应较大 停药后易复发的缺点 且缺乏有效的预防复发的措施 样受体 和 样受体 是近年来发现的天然免疫识别受体 能够识别病原体共有的病原相关分子模式 & 并介 导其跨膜信号传导 目前有研究表明 和 在正常的结肠黏膜中呈现低表达 而在溃疡性 结肠炎的结肠黏膜中则呈现异常的高表达 提示 受体及其信号传导通路可能是溃疡性结肠炎发病过程中的重要环节 目前国内外有关用 单克隆抗体 和 单克隆抗体 防治溃疡性结肠炎的研究较少 因此 本研究通过观察 和 对葡聚糖硫酸钠, 诱导的小鼠急性溃疡性结肠炎的干预作用 检测小鼠结肠黏膜内炎症因子 -.&- & 及 - & 的 变化 旨在探讨 和 对溃疡性结肠炎的干预作用及其可能机制 为溃疡性结肠炎的治疗寻找新的方向 材料和方法 实验动物及分组 健康雄性 / / 小鼠 只 周龄 体质量 购于复旦大学医学院实验动物中心 称重 编号后 均分为 组 对照组 组 溃疡性结肠炎模型组 / 组 干预组 组 干预组, 组 和 联合干预组 组 每组 只 清洁级实验室饲养 主要试剂 购于 / 公司, 购于 / 公司,, 购于 公司 溶于蒸馏水 配制成质量浓度为 的, 水溶液. 提取试剂盒购于 - -6 公司 & 试剂盒使用 公司的. 称取邻甲联苯胺 溶于冰醋酸及无水乙醇各 的混合液 置于棕色瓶中 溃疡性结肠炎模型建立 造模前小鼠在清洁级动物房饲养 周 按照 的经典方法 组小鼠饮用蒸馏水 /, 组小鼠自由饮用,

3 李鹃 等 和 对急性期溃疡性结肠炎小鼠结肠黏膜炎症因子 -.&- & 及 - & 表达的影响 溶液连续 建立小鼠急性期溃疡性结肠炎动物模型 造模开始的同时 每隔 分别给, 干预组小鼠以 腹腔内注射 共 次 以观察其干预作用 组 / 组给予腹腔注射生理盐水作为对照 于造模第 天处死所有小鼠 采集小鼠结肠组织以备检 症状及体征观察及评分 造模过程中 观察各组小鼠的体重变化 大便性状和便血情况 参照 的经典评分方法 每日将体重下降 大便性状和隐血或便血情况的评分相加 作为疾病活动指数 *,- 组织病理学炎症损伤评分 - 取 段长约 的小鼠结肠组织 制备石蜡切片 行 染色 以盲法观察光镜下结肠黏膜炎症损伤情况 参照经 典的组织学损伤评分标准进行评分 方法测定受体及炎症因子 取 段长约 的小鼠结肠组织 采用异硫氰酸胍二步法提取总. 紫外分光光度计测定总. 浓度 重复测定 次 为 冰箱保存 取 总. 按说明书进行逆转录反应合成,. 并取逆转录产物,. 用于 扩增 计算,. 拷贝数 予梯度稀释后 行 & 根据 值和,. 拷贝数绘制标准曲线 以, 为内参照,-.&- & - & 引物由 * 设计合成, 上游引物 & & & 下游引物 & & & 扩增长度为 上游引物 & & & 下游引物 & & & 扩增长度为 & 温度条件 变性 退火 延伸各为 重复 个循环 上游引物 & & & 下游引物 && & 扩增长度为 & 温度条件 变性 退火 延伸各为 重复 个循环 -.& 上游引物 & & & 下游引物 & & & 扩增长度为 & 温度条件 变性 退火 延伸各为 重复 个循环 - & 上游引物 & & & 下游引物 & & & 扩增长度为 & 温度条件 变性 退火 延伸各为 重复 个循环 - & 上游引物 & & & 下游引物 & & & 扩增长度为 & 温度条件 变性 退火 延伸各为 重复 个循环 荧光定量 步骤由 / & 系统自动完成 样本目的基因拷贝数的检测为系统通过与标准曲线对比 自动得出各样本的拷贝数 每个样品的目的基因浓度除以其管家基因的浓度 即为此样品此基因的校正后的相对含量 统计学处理方法 实验数据以 表示 应用 统计软件对各组数据进行统计分析 符合方差分析条件的用方差分析 两组间比较用 检验 不符合条件的用秩和检验 以 为差异有统计学意义 结 果, 评分情况 模型组小鼠在给予, 造模 后 开始逐渐出现大便次数增多 软便或稀便 大便末端有黏液或脓点等表现 后小鼠大便完全为稀便 有部分出现肉眼血便 周左右可见脓血便 体重减轻 毛发无光泽 饮食明显减少 懒动等 而对照组小鼠大便正常 体重增加 毛发有光泽 活动均正常 造模第 天发现 干预组死亡 只小鼠 干预组死亡 只小鼠 这 只死亡的小鼠消瘦明显 造模第 天对各组小鼠进行,- 定量评估 各组的,- 评分之间有显著差异 具体表现为 组, 组的,- 与 / 组无明显差异 而 组的,- 则明显低于 / 组 而明显高于 组 表 结肠黏膜损伤情况及 - 光学显微镜下 模型组小鼠结肠黏膜结构损伤明显 表现为固有层充血 水肿明显 大量的中性粒细胞浸润 广泛黏膜糜烂 隐窝炎及脓肿形成 腺管排列紊乱 各组的 评分之间存在明显差异 / 组的 评分明显高于 组, 干预组小鼠的 评分较 / 组减轻 组, 组评分与 / 组无明显差异 组评分明显小于 / 组 和, 组 但与 组无明显差异 表 图

4 复旦学报医学版 年 月 & 及 & 表达水平 <=>>FA各组 <=>>FA 表 达 差 异 明 显. &G 组 <=> >FA. 表达 明 显 高 于 A 组 /D 干 预 组 <=>>FA 表达明显低 于 G 组 与 A 组无明显差异 & <=>>FA各组 <=>>FA 表 达 差 异 显 著. &. &G 组 <=>>FA 表达 明显高 于 A 组 /D 干 预 组 <=> >FA 表 达 明 显 低 于 G 组 与 A 组无明显差异 表 & 表 - 各组 D&和炎症评分的比较 -D&3<= B = 3< L >B L M 3 DAE. I 3 A - - G - && & - / - - D - & - - & -? N. C U... -< 3A -< -< -< 3G 3G 3D 图 - 各组小鼠结肠黏膜病理表现 KMNOO& * 3 > = B = 3 => L >B KMNOO& L-I L? A / 3G &/ 3/ <=>A@ 3 D <=>A@ 3 <=>A@<=>A@ 3 表 各组 及 & 的表达 3<& AB 3 3 =L >B 达明显 低 于 G 组 与 A 组 无 明 显 差 异 & M 3 <=> <=>@ A - - G &- - / - - D &- & - >FA 表 达 明 显 低 于 G 组 和 A 组 & - - E= >FA各 组 E= >FA 表 达 差 异 明? C U. &. -< -<. 3A 3 A -< 3G -< 3G, 及, -.& 表达水平 *, EF >FA各 组 EF >FA 表 达 差 异 显 著.. &G 组 EF >FA 表 达 明显高于 A 组 组 / D EF>FA 表 达明显 低 于 G 组 组 EF >FA 表 E= >FA各 组 E= >FA 表 达 差 异 明 显. &G 组E= >FA 表达. 明显 高 于 A 组 /D 干 预 组 E= 显 &. &G 组 E= >FA. 表达明显高于 A 组 干 / D 预 组 E= >FA 表达明 显 低 于 G 组 与 A 组 无明显差异 表 & 讨 论 溃疡性结肠炎是一种累及直肠和结肠黏膜的炎

5 李鹃 等 和 对急性期溃疡性结肠炎小鼠结肠黏膜炎症因子 -.&- & 及 - & 表达的影响 表 各组 及 的表达 *& * -.& - & - & /, & & & & &/ &/ 症性疾病 目前认为可能与一系列的易感基因 环境 因素及免疫系统异常的相互作用有关 肠黏膜免疫系统中的多种因素包括细胞因子和免疫调节等方面均参与了溃疡性结肠炎的免疫发病机制 样受体 & 是先天性免疫系统中的细胞跨膜受体及病原模式识别受体之一 它可表达于肠道黏膜的多种细胞中 主要参与病原微生物产物的识别及炎症信号的传导 主要识别革兰阳性菌肽聚糖和胞壁酸 而 主要识别革兰阴性菌脂多糖 通过激活 和 共同介导的跨膜信号传导通路 产生大量的炎症因子 如 -.&.&- & - & - & 等 我们的前期研究表明 干预后可以下调结肠黏膜的炎症因子 -.&.& - & - &- & 的表达 减轻肠黏膜的炎症反应 说明这些炎症因子与溃疡性结肠炎的发生 发展关系密切 在溃疡性结肠炎免疫发病机制中起重要作用 本研究发现 联合使用 和 干预后 可以缓解, 诱导的小鼠急性期溃疡性结肠炎的腹泻 体重下降 黏液脓血便等疾病活动指数 *,- 可以减轻溃疡性结肠炎模型肠黏膜的组织病理炎症改变 单用 干预组及单用 干预组小鼠结肠黏膜的,- 和 与模型组相比在数值上均有一定的差异 但统计学上无明显意义 前期研 究发现 干预有一定的剂量依赖性 故推测可能与单抗的剂量偏小有关 而联合使用 和 干预后小鼠结肠黏膜的,- 和 明显下降 提示 和 可能对, 诱导的小鼠急性期溃疡性结肠炎有干预作用 和 联合干预效果要优于单用抗体 两者可能存在协同效应 本研究结果显示 溃疡性结肠炎模型组小鼠结肠黏膜 表达明显增高 对照组小鼠结肠黏膜 表达较少 和 干预后溃疡性结肠炎模型小鼠结肠黏膜 受体表达均明显下降 说明 和 的过度表达可能参与了溃疡性结肠炎的发生和发展 免疫因素是 发病机制的重要因素之一 各种炎症因子包括促炎因子 -.&.&- &- & - & 等 与抑炎因子 - &- & 等 相互作用 导致炎症的反复 持续发展 在 发病中起了关键作用 促炎因子 -.& 主要由 细胞分泌 是强有力的吞噬细胞和中性粒细胞激活物 抑炎因子 - & 是 细胞分泌的主要细胞因子 可抑制单核巨噬细胞产生.& 和 - & 发挥其抗炎作用 - & 主要由 细胞分泌 是 细胞诱导和促进炎症发生过程中的一种重要的可溶性因子 可趋化中性粒细胞和单核巨噬细胞到炎症部位发挥其特殊的抗感染作用 目前 -.&- & 及 - & 炎症因子是 细胞的具有代表性的细胞因子 本实验研究了这三个炎症因子在各组肠黏膜的表达 实验研究结果发现, 诱导的急性溃疡性结肠炎模型小鼠结肠黏膜中 -.&- & 及 - &. 的表达均明显高于正常对照组 与 * 等的报道基本一致 有关 - & 在溃疡性结肠炎发病机制中的作用尚未明确 目前大多数学者认为 - & 是促炎因子 本研究结果也显示模型组小鼠结肠黏膜 - & 的表达明显高于对照组 提示 - & 的高表达与结肠黏膜炎症表现一致 在 -/, 患者中也有一些类似 的研究结果 等观察 例 -/, 患者 其中 例, 和 例 内镜下活检或手术标本 发现结肠黏膜炎症部位的 - & 和 -.& 表达明显高于 非炎症部位 - 等的报道也提示 - & 在 的发病机制中发挥着促炎作用 但也有少数学者认为 - & 是抑炎因子 等研究发现用 - & 抗体治疗, 诱导结肠炎小鼠较未治疗组明显体重下降 结肠缩短等 病理示结肠炎症明显加重.& -.& 等. 表达增加 提示 - & 可能对, 诱导的结肠炎起抑制作用 在 和 干预后 发现, 诱导的急性 模型小鼠结肠黏膜中 -.&

6 复旦学报 医学版 年 月 - & 及 - &. 的表达均明显减少 并与肠道炎症减轻相一致 说明 和 均能有效干预, 诱导的急性 形成 两种单抗之间 单用与联用抗体之间的干预效果比较虽然存在数值上的差异 但统计学上无明显意义 说明 和 对炎症因子 -.&- & 及 - & 的干预作用是相似的 但两者协同作用不明显 我们有关 和 对急性期溃疡性结肠炎小鼠结肠黏膜中炎症因子 -.& - & 及 - & 影响的研究认为 对, 诱导的急性期溃疡性结肠炎小鼠均有一定的干预作用 其机制考虑可能与炎症因子 -.& - & 及 - & 的下调有关 参 考 文 献 / - * 33 * & 王磊 刘懿 张志军 等 对急性期溃疡性结肠炎小鼠结肠黏膜中细胞因 - &- & 及 & 的影响 复旦学报 医学版 张志军 刘懿 王磊 等 对急性期溃疡性结肠炎小鼠结肠黏膜中促炎因子.&-.&- & 的影响 复旦学报 医学版 * 3.., *,./ & * /, * & & 6 /, 6-* & 6 & - &- - &,&. 6 & * & 收稿日期 编辑 张秀峰

高 云 钟良军 张源明 周晓欢 梁 平 徐 隽 探讨兔牙周炎对动脉粥样硬化炎性因子的影响及抗生素对其的作用 将 只雄性新西兰大白兔随机分为 组 组为对照组 组为牙周炎组 组为动脉粥样硬化组 组为牙周炎 动脉粥样硬化组 组为干预组 牙周炎 动脉粥样硬化 替硝唑组 各组分别按照实验设计进行相应干预处理 周末处死动物 检测牙周指标 血清中总胆固醇 三酰甘油 高密度脂蛋白胆固醇 低密度脂蛋白胆固醇 反应蛋白

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西安交通大学学报 医学版 第 卷, #1 +& +,-.)( ( ### ## # ((' 溃疡性结肠炎 8#+*(;# 48(() 是一种病因及发病机制尚不明确的直肠和结肠慢性 反复发作 性 非特异性肠道炎症疾病 中医将其归入泄泻 痢疾等范畴 治疗上多采用辨证施治的原则 根据相应 第 卷第 期 年 月 西安交通大学学报 医学版!"#$## %&'& $& 中医药研究 在湿热证溃疡性结肠炎大鼠模型中的动态表达及意义 张 歆 柯 晓 陈锦团 高尤亮 周 凡 福建中医药大学临床技能教学中心 福建福州 福建中医药大学附属第二人民医院 福建福州 福建省中医药研究院 福建福州 摘要 目的 检测 $%& 和 $%&' 在湿热证溃疡性结肠炎 大鼠血清中的表达 探索其在评价炎症严重程度中的作用及意义

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