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庸宋
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1 胃肠病学 2015 年第 20 卷第 6 期 329 Faecalibacterium prausnitzi 治疗大鼠 TNBS 结肠炎的机制研究 1# 汤爱荣曹 2 萍张 1 涛 1,3& 于成功南京大学医学院附属鼓楼医院消化科 1 (210008) 2 南京医科大学鼓楼临床医学院消化科 3 南京鼓楼医院集团仪征医院消化科背景 :NLRP3 炎症小体在炎症性肠病中的作用受到广泛关注 Faecalibacteriumprausnitzi(Fp) 是一种具有抗炎作用的共生菌, 研究显示其对大鼠结肠炎具有防治作用目的 : 探讨 Fp 治疗大鼠实验性结肠炎的可能机制方法 :50 只大鼠随机分为对照组 (n=10) 和模型组 (n=40), 模型组以 5% TNBS 和无水乙醇灌肠诱导结肠炎, 造模 24h 后随机分为 PBS 组介质组 Fp 活菌组和 Fp 上清组, 每天予相应成分 1mL 灌胃, 连续 7d 第 8 天处死动物, 评估结肠炎症程度, 以蛋白质印迹法和 realtimepcr 检测 NLRP3 炎症小体组分 NLRP3 ASC caspase1 表达 ; 分别以 realtimepcr 和 ELISA 法检测结肠和血浆 NLRP3 炎症小体下游效应分子 IL1β IL18 水平结果 : 模型组大鼠存在不同程度的体质量减轻结肠缩短和结肠炎症损伤,Fp 活菌组和 Fp 上清组上述表现较 PBS 组和介质组明显减轻 PBS 组和介质组结肠组织 NLRP3 ASC caspase1 蛋白和 mrna 表达显著高于对照组 (P<0.05), 结肠和血浆 IL1β 水平增高 (P<0.05),IL18 水平降低 (P<0.05) Fp 活菌组和 Fp 上清组 IL18 水平较 PBS 组和介质组进一步降低 (P<0.05), 其余参数增高趋势均明显改善 (P<0.05) 结论:NLRP3 炎症小体参与介导 TNBS 大鼠结肠炎发生, 而 Fp 可通过抑制 NLRP3 炎症小体及其下游效应分子而减轻结肠炎症关键词结肠炎 ; NLRP3 炎症小体 ; Faecalibacteriumprausnitzi; 白细胞介素 1β; 白细胞介素 18 Mechanism offaecalibacterium prausnitziintreatingtnbsinducedcolitisinrats TANGAirong 1,CAOPing 2, ZHANGTao 1,YUChenggong 1,3. 1 DepartmentofGastroenterology,theAfiliatedDrumTowerHospitalofNanjingUniversity MedicalSchool,Nanjing(210008); 2 DepartmentofGastroenterology,theDrumTowerClinicalMedicalColegeofNanjing MedicalUniversity,Nanjing; 3 DepartmentofGastroenterology,YizhengHospital,DrumTowerHospitalGroupofNanjing,Nanjing Correspondenceto:YUChenggong, chenggong_yu@nju.edu.cn Background:NLRP3 inflammasomeatractswidespreadatentioninstudyofinflammatoryboweldisease. Faecalibacteriumprausnitzi(Fp)isanantiinflammatorycommensalbacteriumthathaspreventiveandtherapeuticefects onratcolitis.aims:toexploretheunderlyingmechanismoffpintreatingexperimentalcolitisinrats.methods:fifty ratswererandomlydividedintotwogroups,10incontrolgroupand40inmodelgroup.ratsinmodelgroupwere administeredintrarectalywith5% TNBSanddehydratedalcoholtoinduceexperimentalcolitis.Twentyfourhours afterwards,themodelratswerefurtherdividedintofourgroupsandadministeredintragastricalywithpbs,culture medium,livefpandfpsupernatant1mlperday,respectively,for7days.onday8,altheratsweresacrificedfor evaluationofcolonicinflammation.expresionsoftheconstituentsofnlrp3inflammasome(nlrp3,asc,andcaspase 1)wereasesedbyWesternblotingandrealtimePCR;levelsofIL1βandIL18,thedownstreamefectorsofNLRP3 inflammasome,incolonandplasmaweremeasuredbyrealtimepcrandelisa,respectively.results:weightlos, reducedcolonlengthandcolonicinflammatoryinjurywereobservedinmodelrats.thesemanifestationswereamelioratedin livefpandfpsupernatantgroupsthanthoseinpbsandculturemedium groups.inpbsandculturemedium groups, expresionsofnlrp3,asc,andcaspase1proteinandmrnaincolonictisueweresignificantlyhigherthanthosein controlgroup(p<0.05),thecolonicandplasmalevelsofil1βwereincreased(p<0.05),andil18levelswere DOI: /j.isn 基金项目 : 国家自然科学基金面上项目 ( , ) # tangairongno1@163.com & 本文通信作者, chenggong_yu@nju.edu.cn

2 330 ChinJGastroenterol,2015,Vol.20,No6 decreased(p<0.05).inlivefpandfpsupernatantgroups,il18levelshowedafurtherreductionascomparedwithpbs andculturemedium groups(p<0.05),buttheincreasingtrendforotherparameterswasreduced(p<0.05). Conclusions:NLRP3inflammasomeparticipatesinthedevelopmentofTNBSinducedcolitisinrats.Fpmightaleviate colonicinflammationbyinhibitingnlrp3inflammasomeanditsdownstreamefectors. Keywords Colitis; NLRP3Inflammasome; Faecalibacteriumprausnitzi; Interleukin1beta; Interleukin18 炎症性肠病 (inflammatoryboweldisease,ibd) 的病因和发病机制复杂, 目前主要观点认为 IBD 是由肠道菌群与黏膜免疫之间失衡, 导致肠道炎症过度激活所致 [1] 炎症小体(inflammasomes) 是由多种蛋白组成的功能复合物, 参与多种遗传性疾病和自身免疫性疾病的发生发展 [2], 目前研究最为深入的是由 NLRP3(NACHT,LRRandPYDdomains containingprotein3) 衔接蛋白 ASC 和 procaspase1 组成的 NLRP3 炎症小体,NLRP3 通过与 ASC 相互作用, 激活炎症小体中的 caspase1 而发挥功能关于 NLRP3 炎症小体在 IBD 中的作用, 目前观点不 [3] 一 Zaki 等的研究通过敲除小鼠 NLRP3 ASC caspase1 基因表达, 证实 NLRP3 炎症小体及其下游效应分子白细胞介素 1β(IL1β) IL18 对葡聚糖硫酸钠 (DSS) 诱导的小鼠结肠炎具有保护作用, 其中起关键作用的是表达于结肠上皮细胞的 NLRP3 炎 [4] 症小体而 Bauer 等却发现 NLRP3 炎症小体可增加小鼠对 DSS 结肠炎的易感性因此, 其确切作用有待进一步研究 Faecalibacterium prausnitzi(f.prausnitzi,fp) 是从克罗恩病 (CD) 患者肠道菌群中鉴定得到的一种具有抗炎作用的共生菌 [5], 前期研究显示 Fp 活菌及其培养上清液对三硝基苯磺酸 (TNBS) 诱导的大鼠结肠炎具有防治作用, 且上清液的作用优于活菌 [6] 本研究旨在探讨 NLRP3 炎症小体在结肠炎发生发展中的作用, 以及 Fp 活菌及其上清液治疗大鼠实验性结肠炎的可能机制材料与方法一实验动物菌株和主要试剂 SPF 级雄性 6~8 周龄 SpragueDawley 大鼠 50 只, 体质量 160~200g, 由南京大学医学院附属鼓楼医院实验动物中心提供, 饲养于二级动物房 Fp (ATCC27766, 美国模式菌种保藏中心 ),TNBS (SigmaAldrichCo.), 兔抗大鼠 NLRP3 抗体 (Novus Biologicals,Inc), 兔抗大鼠 ASC 抗体小鼠抗大鼠 caspase1 抗体 (SantaCruzBiotechnology,Inc.), TRIzol 试剂 (Thermo Fisher Scientific Inc.), PrimeScript TM 逆转录试剂盒 (PerfectRealTime) SYBR Premix Ex Taq Ⅱ (PerfectRealTime) (TAKARABIOINC.), 大鼠 IL1β IL18ELISA 试剂盒 (AbnovaCorporation.) 二方法 1. 细菌培养和灌胃液制备 : 将 Fp 活菌冻干粉解冻, 于厌氧箱中将混悬液接种至 LYHBHI 培养基, 37 培养取生长至对数期末的菌液离心, 将上清液冻干, 每 100mL 上清液可制成 3.7g 冻干粉, -80 保存备用使用时取 3.7g 冻干粉加去离子水 20mL 溶解, 离心后 PBS 重悬 2 次, 以 PBS 调整浓度至 CFU/mL, 作为灌胃液 2. 动物模型制备 :50 只大鼠随机分为对照组 (n=10) 和模型组 (n=40) 动物禁食不禁水 24h, 模型组以 5% TNBS100mg/kg 和无水乙醇 ( 体积比 1 1) 灌肠诱导结肠炎 [7], 对照组予等体积 0.9% NaCl 溶液灌肠造模 24h 后, 将模型组随机分为模型对照组 (PBS 组 ) 培养基治疗组 ( 介质组 ) Fp 活菌治疗组 (Fp 活菌组 ) 和 Fp 上清液治疗组 (Fp 上清组 ), 每组 10 只, 每天予相应成分 1mL 灌胃, 对照组予 PBS 灌胃, 连续 7d 实验过程中每天记录大鼠体质量粪便性状便血情况精神状态和活动进食情况第 8 天以氯胺酮和地西泮麻醉大鼠, 腹主动脉取血后处死, 取回盲部至肛门口段全结肠, 测量长度后沿纵轴剪开, 擦净粪便, 取炎症明显部位用于组织学评分, 其余部分 -80 保存待测 [8] 3. 粪便性状评分 : 参照 Wirtz 等采用的评分标准 : 粪便成形计 0 分 ; 半成形但未黏附肛门计 1 分 ; 半成形但黏附肛门计 2 分 ; 稀便且黏附肛门计 3 分 [9] 4. 结肠炎症大体评分 : 参照 Butzner 等采用的评分标准 : 无损伤计 0 分 ; 局部充血无溃疡计 1 分 ;1 处溃疡, 不伴充血或肠壁增厚计 2 分 ;1 处溃疡伴有炎症计 3 分 ; 2 处溃疡伴有炎症计 4 分 ; 有

3 胃肠病学 2015 年第 20 卷第 6 期 331 一处损伤范围 1cm 计 5 分 ; 损伤范围 2cm, 每增加 1cm 评分增加 1 分 (6~10 分 ) 黏连评分 : 不黏连周围组织计 0 分 ; 少量黏连可以分离计 1 分 ; 大面积黏连计 2 分总分为两项评分之和 [10] 5. 结肠炎症组织学评分 : 参照 Dashdorj 等采用的评分标准炎症细胞浸润评分 : 固有层未见炎症细胞数量增加计 0 分 ; 固有层炎症细胞数量增加计 1 分 ; 炎症细胞浸润黏膜下层计 2 分 ; 炎症细胞浸润全层计 3 分组织损伤程度评分 : 黏膜未见损伤计 0 分 ; 散在淋巴上皮损伤计 1 分 ; 黏膜糜烂计 2 分 ; 广泛黏膜损坏或肠壁全层损坏计 3 分总分为两项评分之和 6. 蛋白质印迹法 : 取冻存结肠组织约 100mg, RIPA 裂解液提取总蛋白,BSA 法测定蛋白浓度取总蛋白上样, 行 SDSPAGE 电泳, 湿法转膜,5% 脱脂奶粉封闭, 加入 NLRP3 ASC 或 caspase1 抗体孵育 16h, 洗涤后加入抗兔或抗小鼠二抗孵育 2h, 洗涤后曝光,ImageJ 软件分析条带灰度值, 目的蛋白相对表达量以其条带灰度值与内参条带灰度值的比值表示 7.RealtimePCR:TRIzol 试剂抽提结肠组织总 RNA, 逆转录合成 cdna, 以之为模板行 realtime PCR NLRP3 引物 :F5 GCTAAGAAGGACCAG CCAGA3,R5 CCA GCA AACCTA TCCACT CC3 ;ASC 引物 :F5 TTG CTG GATGCTCTG TATGG3,R5 CCA AGTAGG GCTGTG TTT GC3 ;caspase1 引物 :F5 TGA AAG ACA AGC CCAAGG TT3,R5 GGTGTTGAA GAG CAG AAAGCA 3 ;IL1β 引物 :F5 GCC AAC AAG TGGTATTCTCCA3,R5 TGCCGTCTTTCA TCACACAG3 ;IL18 引物 :F5 ATA TCG ACC GAACAG CCA AC3,R5 CATCCTTCCATC CTTCAC AGA3 ; 内参 βactin 引物 :F5 TGT CACCAACTGGGACGATA3,R5 GGGGTG TTGAAGGTCTCAAA3 PCR 反应体系 :cdna 2μL SYBR PremixExTaqⅡ 10μL 上下游引物各 0.4μL ROXReferenceDyeⅡ 0.4μL 和去离子水 6.8μL, 共 20μL 反应条件:95 30s;95 5s,60 30s,40 个循环 2 - Ct 法计算目的基因 mrna 相对表达量表 1 各组大鼠体质量变化和粪便性状评分比较 ( 珋 x±s) 8. 血浆 IL1β IL18 水平测定 : 参照相应大鼠 IL1β IL18ELISA 试剂盒说明书进行操作三统计学分析应用 SPSS19.0 统计软件, 计量资料以 x±s 珋表示, 组间比较采用单因素方差分析 ( 两两比较采用 SNK 法和 LSD 法 ),P<0.05 为差异有统计学意义结一一般情况造模 24h 后, 对照组大鼠未见明显异常, 模型组大鼠出现血便稀水样便, 精神状态差, 活动进食减少, 体质量减轻第 4 天起,Fp 活菌组和 Fp 上清组大鼠体质量较 PBS 组和介质组明显增加, 精神状态好转, 活动进食增加, 粪便性状逐渐转为糊状不成形便, 上清组体质量改善优于活菌组 (P< 0.05)( 表 1) 二结肠长度四组模型组大鼠结肠长度均较对照组显著缩短 (P<0.05),Fp 活菌组和 Fp 上清组缩短程度较 PBS 组和介质组明显改善 (P<0.05)( 图 1A) 三结肠炎症大体和组织学评分四组模型组大鼠结肠肉眼可见不同程度的充血糜烂或溃疡形成, 且与周围组织有不同程度的黏连, 光学显微镜下炎症细胞浸润和组织损伤明显,Fp 活菌组和 Fp 上清组上述表现较 PBS 组和介质组明显减轻 (P<0.05)( 图 1B 1C) 果组别例数体质量变化 (kg) 粪便性状评分第 1 天第 2 天第 3 天第 4 天第 5 天第 6 天第 7 天对照组 ± ± ± ± ± ± ± ±0.00 PBS 组 ± ± ± ± ± ± ± ±0.84 介质组 ± ± ± ± ± ± ± ±0.82 Fp 活菌组 ±8.95 # 3.00± ± ± ± ± ± ±0.48 Fp 上清组 ± ± ± ± ± ± ± ±0.42 体质量变化 = 最后 1d 体质量 - 初期体质量与 PBS 组和介质组比较,P<0.05; 与介质组比较,P<0.05; # 与 Fp 上清组比较,P<0.05

332 ChinJGastroenterol,2015,Vol.20,No6 四结肠组织 NLRP3 ASC caspase1 蛋白表达 PBS 组和介质组结肠组织中的 NLRP3 ASC caspase1 蛋白相对表达量显著高于对照组 (P< 0.05),Fp 活菌组和 Fp 上清组此种增高趋势明显改善 (P<0.

05);PBS 组和介质组 IL18mRNA 相对表达量显著低于对照组 (P<0.05),Fp 活菌组和 Fp 上清组较 PBS 组和介质组进一步降低 (P<0.05)( 图 3) 六血浆 IL1β IL18 水平各组血浆 IL1β IL18 水平与结肠组织中的 IL 1β IL18mRNA 表达水平基本一致 PBS 组和介质组 IL1β 水平显著高于对照组 (P<0.

4 332 ChinJGastroenterol,2015,Vol.20,No6 四结肠组织 NLRP3 ASC caspase1 蛋白表达 PBS 组和介质组结肠组织中的 NLRP3 ASC caspase1 蛋白相对表达量显著高于对照组 (P< 0.05),Fp 活菌组和 Fp 上清组此种增高趋势明显改善 (P<0.05)( 图 2) 五结肠组织 NLRP3 ASC caspase1 IL1β IL 18mRNA 表达 PBS 组和介质组结肠组织中的 NLRP3 ASC caspase1 IL1βmRNA 相对表达量显著高于对照组 (P<0.05),Fp 活菌组和 Fp 上清组此种增高趋势明显改善 (P<0.05), 上清组 IL1β 表达降低更为明显 (P<0.05);PBS 组和介质组 IL18mRNA 相对表达量显著低于对照组 (P<0.05),Fp 活菌组和 Fp 上清组较 PBS 组和介质组进一步降低 (P<0.05)( 图 3) 六血浆 IL1β IL18 水平各组血浆 IL1β IL18 水平与结肠组织中的 IL 1β IL18mRNA 表达水平基本一致 PBS 组和介质组 IL1β 水平显著高于对照组 (P<0.05),Fp 活菌组和 Fp 上清组此种增高趋势明显改善 (P<0.05);PBS 组和介质组 IL18 水平显著低于对照组 (P<0.05), Fp 活菌组和 Fp 上清组较 PBS 组和介质组进一步降低, 但组间差异无统计学意义 (P>0.05)( 表 2) 与 PBS 组和介质组比较,P<0.05;ns:P>0.05 图 1 各组大鼠结肠长度 (A) 以及结肠炎症大体 (B) 和组织学 (C) 评分与 PBS 组和介质组比较,P<0.05;ns:P>0.05 图 2 各组大鼠结肠组织 NLRP3 ASC caspase1 蛋白表达电泳图 (A) 和相对表达量 (B) 与 PBS 组和介质组比较,P<0.05; # Fp 活菌组与 Fp 上清组比较,P<0.05;ns:P>0.05 图 3 各组大鼠结肠组织 NLRP3 ASC caspase1mrna(a) 和 IL1β IL18mRNA(B) 相对表达量

5 胃肠病学 2015 年第 20 卷第 6 期 333 表 2 各组大鼠血浆 IL1β IL18 水平比较 ( x±s,pg/ml) 珋组别例数 IL1β IL18 对照组 ± ±24.91 PBS 组 ± ±12.62 介质组 ± ±8.48 Fp 活菌组 ± ±5.94 Fp 上清组 ± ±3.00 与 PBS 组和介质组比较,P<0.05 讨论近年来, 随着 IBD 发病率的不断增高, 其病因和发病机制的研究逐渐深入, 并发现调节性 T 细胞 (Treg)/Th17 失衡在 IBD 的发生发展中起重要作用在免疫学发病机制方面,NLRP3 炎症小体在 IBD 中的作用受到广泛关注, 其作为炎症调节的中心, 通过激活 procaspase1 成为 caspase1, 继而促进下游效应分子 IL1β IL18 成熟和分泌, 发挥炎症调节作用 [11] 目前观点认为 NLRP3 炎症小体在 IBD 中的作用具有两面性, 原因在于其下游效应分子的功能 IL1β 的主要功能是促进炎症细胞分化并向炎症部位聚集, 同时促进炎症因子分泌而参与机体防御研究显示 IL1β 参与了结肠炎时肠上皮细胞的修复和上皮屏障的重建,IL1β/ 小鼠对 DSS 结肠炎的易感性增加 [12], 而 IBD 患者的肠上皮细胞和黏膜固有层 IL1β 表达又明显高于对照者 [13] pro IL1β 只有在受到相关刺激后才能产生并活化 [14], 表明 IL1β 水平稳定在结肠稳态中起关键作用另一 NLRP3 炎症小体效应分子 IL18 又称干扰素 γ 诱导因子 (IGIF), 可由 Kupfer 细胞单核细胞树突细胞巨噬细胞肠上皮细胞等多种细胞分泌, 能与其他因子协同调节 T 细胞分化, 促进细胞因子分泌, 激活 NFκB MAPK 等多种炎症调节通路, 发挥炎症调节作用正常生物体内存在完善的 IL18 自身调节系统 [15],IL18 过度激活或抑制与炎症性和自身免疫性疾病的发生密切相关 [16] 关于 IL18 在肠道病变中的作用, 有研究显示 IL18/ 或 NLRP3 炎症小体组分缺失致 IL18 表达下调的小鼠对 DSS 结肠炎的易感性增加, 结肠炎症重于野生型小鼠, 死亡率高 [3,17] ; 然而另有研究发现 IBD 患者结肠炎症组织 IL18 表达上调, 提示其参与了炎症的启动和维持 [18] 体内 IL 1β 和 IL18 均以非活性前体形式存在, 需经转化酶或 caspase1 裂解才能转化为活性形式, 但正常人和大鼠体内存在 IL18 储备, 能促进肠上皮细胞再生, 维持肠黏膜屏障的完整性, 此种具有保护功能的 IL18 主要由肠上皮细胞内的 NLRP3 炎症小体产生 [14] 本实验中 TNBS 结肠炎模型大鼠结肠组织中的 NLRP3 炎症小体组分 NLRP3 ASC caspase1 蛋白和 mrna 表达水平均显著高于对照组, 结肠组织 IL1βmRNA 表达和血浆 IL1β 水平同步升高, 与之前报道的结肠炎组织 NLRP3 炎症小体水平升高相一致 [19], 因此可以认为 NLRP3 炎症小体参与介导了结肠炎的形成然而, 本实验发现结肠炎模型大鼠结肠组织 IL18mRNA 表达和血浆 IL18 水平均 [3] 低于对照组, 与 Zaki 等发现的 DSS 小鼠结肠炎模型结肠组织和血浆 IL18 水平升高不符在结肠炎动物模型中,IL1β 水平与疾病活动度和病情进展密切相关 [13] ; 上皮源性 IL18 在结肠炎早期阶段起保护作用, 而固有层单核细胞源性 IL18 则与慢性结肠炎症有关,IL18 拮抗剂可缓解结肠炎症 [20] Lopetuso [21] 等的研究显示, 非活动性 CD 患者结肠上皮中 IL 18 呈高表达, 随着疾病的进展, 其表达逐渐降低, 但该研究并未在溃疡性结肠炎患者中观察到类似现象, 由此推测 IL18 在结肠炎中的作用和表达水平在某种程度上取决于疾病阶段及其严重程度综上推断, 本实验中结肠炎模型大鼠结肠组织和血浆 IL18 水平降低可能是由于模型动物疾病处于早期和活动期, 肠上皮细胞大量损伤, 故肠上皮细胞源性 IL18 产生极少, 血源性 IL18 则可能尚未完全启动, 最终导致结肠组织和血浆 IL18 低于正常水平因此, 关于 NLRP3 炎症小体及其下游效应分子在 IBD 中的具体作用机制, 尚待进一步研究 Fp 已被证实是一种具有抗炎作用的共生菌, 对大鼠结肠炎具有防治作用 [56], 前期研究发现 Fp 活菌及其上清液能通过抑制炎症因子 IL17 IL23 等以及调节 Treg/Th17 比例缓解 TNBS 诱导的大鼠结肠炎, 且上清液的作用优于活菌, 可能与上清液中含有以丁酸盐为主的细菌产物有关上述结果表明 Fp 活菌及其上清液能通过调节免疫系统发挥抗炎作用本实验中 Fp 活菌组和 Fp 上清组大鼠体质量变化粪便性状结肠长度以及结肠炎症大体和组织学评分均较 PBS 组和介质组明显改善, 证实 Fp 活菌及其上清液能缓解大鼠结肠炎症, 在改善体质量方面, 上清液的作用优于活菌此外,Fp 活菌及其上清液处理还能明显抑制结肠炎模型大鼠

6 334 ChinJGastroenterol,2015,Vol.20,No6 结肠组织中的 NLRP3 炎症小体组分 NLRP3 ASC caspase1 表达上调, 同时降低结肠组织和血浆中的 IL1β IL18 水平, 其中上清液降低结肠组织 IL1β 水平的作用优于活菌, 表明 Fp 活菌及其上清液可能通过抑制 NLRP3 炎症小体及其下游效应分子缓解 TNBS 诱导的大鼠结肠炎综上所述,NLRP3 炎症小体作为固有免疫的调节平台, 参与介导 TNBS 大鼠结肠炎发生, 而 Fp 活菌及其上清液可通过抑制 NLRP3 炎症小体形成及其下游效应分子的激活而减轻结肠炎症抑制 NLRP3 炎症小体激活有望成为 IBD 新的治疗靶点, 而 Fp 则可能成为 IBD 治疗领域的新成员关于 Fp 作用于炎症小体的具体机制, 仍有待进一步研究参考文献 1 AhmedJ,ReddyBS,MlbakL,etal.Impactofprobiotics oncolonicmicroflorainpatientswithcolitis:aprospective doubleblindrandomisedcrosoverstudy[j].intjsurg, 2013,11(10): ShawPJ,McDermotMF,KannegantiTD.Inflammasomes andautoimmunity[j].trendsmolmed,2011,17(2): ZakiMH, BoydKL, VogelP, etal. TheNLRP3 inflammasomeprotectsagainstlosofepithelialintegrity andmortalityduringexperimentalcolitis[j].immunity, 2010,32(3): BauerC,DuewelP,MayerC,etal.Colitisinducedin micewithdextransulfatesodium(dss)ismediatedbythe NLRP3 inflammasome[j]. Gut, 2010, 59 (9): SokolH,PigneurB,WaterlotL,etal.Faecalibacterium prausnitziisan antiinflammatorycommensalbacterium identified by gutmicrobiota analysisofcrohn disease patients[j].procnatlacadsciusa,2008,105(43): QiuX,ZhangM,YangX,etal.Faecalibacteriumprausnitzi upregulates regulatory T cels and antiinflammatory cytokinesintreatingtnbsinducedcolitis[j].jcrohns Colitis,2013,7(11):e558e FolignéB,NutenS,SteidlerL,etal.Recommendations forimproveduseofthemurinetnbsinducedcolitismodel inevaluatingantiinflammatorypropertiesoflacticacid bacteria:technicalandmicrobiologicalaspects[j].dig DisSci,2006,51(2): WirtzS,NeufertC,WeigmannB,etal.Chemicalyinduced mousemodelsofintestinalinflammation[j].natprotoc, 2007,2(3): ButznerJD,ParmarR,BelCJ,etal.Butyrateenema therapystimulatesmucosalrepairinexperimentalcolitisin therat[j].gut,1996,38(4): DashdorjA,JyothiKR,LimS,etal.Mitochondriatargeted antioxidantmitoqamelioratesexperimentalmousecolitisby suppresingnlrp3 inflammasomemediatedinflammatory cytokines[j].bmcmed,2013,11: ZakiMH,LamkanfiM,KannegantiTD.TheNlrp3 inflammasome:contributionstointestinalhomeostasis[j]. TrendsImmunol,2011,32(4): BersudskyM,LuskiL,FishmanD,etal.Nonredundant properties of IL1α and IL1β during acute colon inflammationinmice[j].gut,2014,63(4): AguileraM,DarbyT,MelgarS.Thecomplexroleof inflammasomesinthepathogenesisofinflammatorybowel Diseaseslesonslearnedfrom experimentalmodels[j]. CytokineGrowthFactorRev,2014,25(6): JinC,FlavelRA.Molecularmechanism ofnlrp3 inflammasomeactivation[j].jclinimmunol,2010,30 (5): MonteleoneG,TrapasoF,PareloT,etal.BioactiveIL 18expresionisupregulatedinCrohn sdisease[j].j Immunol,1999,163(1): SedimbiSK,HgglfT,KarlsonMC.IL18ininflammatory andautoimmunedisease[j].celmollifesci,2013,70 (24): TakagiH,KanaiT,OkazawaA,etal.Contrastingaction ofil12andil18inthedevelopmentofdextransodium sulphatecolitisinmice[j].scandjgastroenterol,2003, 38(8): LochnerM,FrsterI.Antiinterleukin18therapyinmurine modelsofinflammatoryboweldisease[j].pathobiology, ,70(3): VilaniAC,LemireM,FortinG,etal.Commonvariants in the NLRP3 region contribute to Crohn s disease susceptibility[j].natgenet,2009,41(1): BamiasG,CoridoniD,PizaroTT,etal.Newinsights into the dichotomous role ofinnate cytokines in gut homeostasisandinflammation[j].cytokine,2012,59 (3): LopetusoLR,ChowdhryS,PizaroTT.Opposingfunctions ofclasicandnovelil1familymembersinguthealthand disease[j].frontimmunol,2013,4:181. ( 收稿 ; 修回 )

648 ChinJGastroenterol,2017,Vol.22,No 11 supernatantmayexertanti inflammatoryefectinexperimentalcolitisinmiceviareducingproinflammatorymonocytes, indu

648 ChinJGastroenterol,2017,Vol.22,No 11 supernatantmayexertanti inflammatoryefectinexperimentalcolitisinmiceviareducingproinflammatorymonocytes, indu 胃肠病学 2017 年第 22 卷第 11 期 647 论著 Faecalibacterium prausnitzi 上清液通过调节单核巨噬细胞减轻 DSS 诱导的小鼠结肠炎 1 张东波张 2 敏 1# 于成功南京大学医学院附属鼓楼医院消化科 1 2 (210008) 南京中医药大学第一临床医学院中西医结合系背景 :Faecalibacteriumprausnitzi(Fp) 数量在炎症性肠病