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1 第３９卷第４期２０６年４月Ｖ３９Ｎ４Ａｐ２０６北京中医药大学学报ＪＢＵＴＣＭ２８科技之窗补肾活血方对去卵巢大鼠子宫ＥＲ及ＣＢ表达影响的实验研究唐雨晴张东伟２孙雪娇郭鱼波王丽丽马如风李城刘李北京中医药大学基础医学院北京０００２９２北京中医药大学糖尿病研究中心摘要目的观察补肾活血方对去卵巢大鼠子宫的雌激素受体及周期蛋白ＣＢ表达的影响探讨其治疗围绝经期综合征的作用机制方法选择ＳＤ雌性大鼠５４只随机分为假手术组模型组雌二醇组补肾活血方组联合用药组补肾活血方假手术组每组９只以双侧卵巢切除法建立大鼠围绝经期模型各组灌胃给药４０后取血清和子宫称重酶联免疫吸附ＥＬＩＳＡ法检测血清中雌二醇Ｅ２黄体生成素ＬＨ卵泡刺激素ＦＳＨ浓度ＨＥ染色观察子宫组织病理改变并测定子宫内膜厚度免疫组化法观察雌激素受体ＥＲ α ＥＲβ在子宫组织中分布与表达情况蛋ｂ法检测子宫组织中周期蛋白ＣＢ蛋白表达结果白质印迹法Ｗ补肾活血方治疗４０后与模型组比较血清ＬＨＦＳＨ明显降低Ｐ００５或Ｐ００血清Ｅ２水平升高ＰＢ蛋白表达均明显升００５同时子宫脏器指数子宫内膜厚度子宫组织中ＥＲα ＥＲβ和Ｃ高Ｐ００５与雌激素组呈现相似的作用但作用强度均低于雌激素补肾活血方假手术组大鼠各项指标与假手术组比较无明显差异结论补肾活血方具有雌激素样作用但作用强度弱于雌激素对正常大鼠子宫组织无显著影响关键词补肾活血方子宫雌激素受体周期蛋白去卵巢大鼠中图分类号Ｒ２８５５０３９６９００６２５７２０６０４００４ＥＢＨＦｍｐＣＢｍｚ２ＴＡＮＧＹｑＺＨＡＮＧＤｗＳＵＮＸＧＵＯＹｂＷＡＮＧＬＭＡＲＬＩＣＬＩＵＹＬＩＹＳＰＭＢＵＣＭＢ０００２９２ＤｂＢＵＣＭＣＡｂＯｂＴｐＢＨｋｂＦｍｐＥＲＣＢｍｚｍｍＢＨＦｍＴＣＭｐｍｐｍＭＴ５４ｍＳＤｗｍｍｐｍｐｐＴＣＭｐＴＣＭｐＴＣＭｍｐ９ＲｍｐｍｐｍｗｍｗＲｂｂｍＡ４０ｗｗＴｍＥ２ｚｍＬＨｍｍＦＳＨｗｂＥＬＩＳＡｍｋｐｗｍＨＥｂｐＥＲα 唐雨晴女在读硕士生通信作者李女博士研究员硕士生导师主要研究方向中药药理研究Ｅｍｂ９７３６３ｍＢ０７００７教育部国家外专局创新引智基地资助项目Ｎ

2 282 北京中医药大学学报第 39 卷 ERβinendometrialtisuewereobservedbyimmunohistochemicalmethod;theproteinexpresionof CyclinBwasdetectedbyWesternBlot.Results Comparedwiththemodelgroup,theserumcontentof LHandFSHdecreasedsignificantly(P<0.05,P<0.01)andthatofE 2 increasedintcm group(p< 0 05);whiletheindexofuterus,endometrialthicknesandtheproteinexpresionsofERα,ERβand CyclinBincreasedremarkably(P<0.05).Theestrogen likeefectsofbushenhuoxueformulawas weakerthanestrogen.andeachindicatoroftcm +shamgroupshowednodiferencewiththatofsham group(p>0.05).conclusion Theestrogen likeefectsofbushenhuoxueformulawereprovedtobe weakerthanthatofe 2,withnosignificantimpactonuteritisueofhealthyrats. Keywords:BushenHuoxueFormula;uterus;estrogenrceptor;CyclinB;ovariectomizedrats 妇女在围绝经期, 由于卵巢功能的衰退或丧失而导致雌激素水平下降, 易出现围绝经期综合征临床上多采用激素替代疗法进行治疗 [1] 由于长时间使用雌激素, 会导致子宫内膜增生, 乳腺癌与子宫内膜癌的发病几率都相应升高 [2] 因此, 使用相对安全的中药来预防和治疗围绝经期综合征已成为国内外研究的热点传统中医理论认为围绝经期综合征以肾虚为本, 兼以血瘀, 治疗应遵循补肾固本, 活血化瘀相辅的原则 [3] 我们前期研究发现, 补肾活血方有改善去卵巢模型大鼠骨质疏松的作用, 对于其他系统与器官的影响与作用值得进一步探讨和研究本研究主要通过血清雌激素水平, 子宫内膜萎缩程度及子宫雌激素受体 (ER) 与周期蛋白 (Cyclin)B 的影响, 进一步观察补肾活血方药的雌激素样作用, 探讨中药治疗围绝经期综合征的作用机制 1 材料与方法 1.1 材料动物 3 月龄雌性 SD 大鼠 54 只, 体重 (200±20)g, 由北京斯贝福实验动物中心提供动物合格证号为动物许可证号为 SCXK( 京 ) 大鼠于室内 ( 室温 18~22, 湿度 45%) 适应环境 1 周以后进行实验实验期间, 大鼠自由进水和饮食药物和试剂补肾活血方由熟地淫羊藿丹参红花等药物组成, 饮片购自北京同仁堂, 制成水煎液, 终浓度含生药量 1.4g/mL,4 储存备用, 使用前用蒸馏水稀释成悬浊液后灌胃戊酸雌二醇 ( 拜耳医药保健有限公司 ), 用蒸馏水配成浓度为 0.01g/L 的悬浊液补肾活血方与戊酸雌二醇片给药剂量均根据临床等效剂量与人大鼠体表面积进行换算, 具体步骤如下 : 大鼠用药剂量 = 临床剂量人体重 (70kg) 人大鼠体表面积系数 (0.018)/ 鼠体重 (0.2kg) 雌二醇 (estrogen,e 2 ) 黄体生成素 (luteinizing hormone,lh) 卵泡刺激素 (foliclestimulatinghor mone,fsh) 酶联免疫吸附 (ELISA) 试剂盒 ( 武汉华美生物工程有限公司 ), 兔抗大鼠 ERα 抗体 ( 美国 Abcam 公司 ), 兔抗小鼠 ERβ 抗体 ( 美国 Abcam 公司 ), 兔抗小鼠 CyclinB 抗体 ( 美国 Abcam 公司 ), 山羊抗兔 IgG( 北京普利莱基因技术有限公司 ), 抗体稀释液 ( 武汉博士得生物工程有限公司 ), 两步法免疫组化检测试剂盒 ( 北京中杉金桥生物技术有限公司 ), 二氨基联苯胺 (DAB) 显色液 ( 北京中杉金桥生物技术有限公司 ), 其他试剂均为分析纯 1.2 方法分组 SD 雌性大鼠 54 只, 按体重随机分为 6 组, 每组 9 只, 分别为假手术组模型组雌二醇组补肾活血方组联合用药组和假手术 + 补肾活血方组去卵巢模型大鼠及动物给药用 1.0% 戊巴比妥 (2.5mL/kg) 将大鼠腹腔麻醉, 俯卧位行双侧卵巢切除术 (OVX), 假手术组仅切除卵巢周围约同等大小的脂肪团, 不切除卵巢伤口愈合后逐只进行阴道涂片,1 次 /d, 观察阴道上皮细胞, 连续 5d 处于间情期表明去势成功手术后第 2 周开始灌胃给药, 日 1 次, 连续 40 d 补肾活血方组按 7g/kg 体重给予补肾活血方悬浮液 ; 阳性对照组大鼠 0.1mg/kg 体重给予戊酸雌二醇 ; 联合用药组大鼠按上述剂量同时给予补肾活血方悬浮液和戊酸雌二醇 ; 假手术 + 补肾活血方组大鼠按 7g/kg 体重给予补肾活血方悬浮液模型组和假手术组大鼠给予等体积的生理盐水各组大鼠饲养 40d 后, 麻醉后分别腹主动脉取血分离血清冷藏于 -80 备用然后取双侧子宫组织待进一步研究 1.3 检测指标子宫湿重测量取材时, 沿大鼠腹正中线打开腹腔, 缓慢将子宫

3 第 4 期唐雨晴等补肾活血方对去卵巢大鼠子宫 ER 及 CyclinB 表达影响的实验研究 283 与周围脂肪组织完全剥离, 取出子宫用干净滤纸上吸去血液后称重计算子宫脏器指数 ( 子宫脏器指数 = 子宫湿重 /100g 体重 ) 将称重后的子宫分为两部分, 一部分进行组织病理学研究, 一部分进行分子生物学研究血清指标测定用 ELISA 法测量各组大鼠血清中 E 2 LH 和 FSH 的含量常规组织病理学研究将各组大鼠的子宫组织制成石蜡切片,HE 染色后照相用 Imageproplus6.0 软件对各组照片进行图像分析从每张组织切片中随机选取 3 个视野, 测量子宫内膜游离端到肌层的厚度, 每个视野中测量 50 条线段的长度取平均值作为该视野下样本的子宫内膜的厚度值免疫组织化学染色石蜡切片脱蜡至水后入 3% 过氧化氢室温孵育 30min; 微波修复抗原 8min; 分别滴加相应一抗 ( 兔抗 ERα 或 ERβ 抗体,Abcam,1 100),4 孵育切片, 过夜然后用羊抗兔二抗室温孵育 30min, 然后 DAB 染色, 常规脱水透明封片镜下观察和照相阴性对照用 PBS 代替一抗孵育切片, 用 Imagepro plus6.0 数据分析软件分析各组染色结果, 测定细胞光密度值每组取 6 张切片, 每张切片取 5 个视野, 其平均值为该切片的光密度值蛋白质印迹 (Westrenblot) 法进行蛋白定量分析用不连续丙烯酰胺凝胶 (5% 浓缩胶,10% 分离胶 ) 电泳分离目的蛋白 ; 然后转膜固定蛋白, 用 3% 牛血清蛋白粉封闭, 加一抗 ( 鼠血清单克隆 CyclinB 抗体,1 1000) 进行孵育,TBST 冲洗后孵育二抗 ( 山羊抗鼠 IgG 抗体,1 5000), 曝光显色甘油醛 3 磷酸脱氢酶 (GAPDH) 作为内参用图像分析软件 ImageJ 测定曝光后的蛋白条带平均密度值, 每组蛋白重复测定 3 次, 取其与内参比值的平均值 1.4 统计方法采用 SPSS21.0 软件进行统计分析, 计量资料采用均数 ± 标准差 ( x±s) 珋表示, 数据进行正态分布检验以及组间方差齐性检验 ;2 项均符合的数据, 采用多组间比较单因素方差分析 (One wayanova) 进行统计处理, 使用 LSD 法进行检验后多重比较 ; 若有 1 项不符合时, 采用非参数检验中的多个独立样本 Kruska WalisH 进行统计处理检验水准为结果 2.1 补肾活血方对去卵巢大鼠子宫脏器指数的影响结果见表 1 表 1 各组大鼠子宫脏器指数比较 ( 珋 x±s;n=9) Table1 Comparisonofuterineindexofratsof algroups( x±s;n=9) 珋组别 Group 假手术组 Shamgroup 剂量 Dose 子宫湿重 / 体重 Uterineindex ± 模型组 Modelgroup ± 雌二醇组 Estradiolgroup 0.1mg/kg ± 补肾活血方组 TCM group 7g/kg ± 联合用药组 TCM +estradiolgroup 补肾活血方 + 假手术组 TCM +shamgroup 7g/kg+ 0.1mg/kg ± g/kg ± F P 补肾活血方对去卵巢大鼠血清 E 2 LH FSH 含量的影响结果见表补肾活血方对大鼠子宫组织形态学的影响结果见图 1 表 3 表 2 各组大鼠血清 E 2 LH FSH 含量比较 ( 珋 x±s;n=9) Table2 Comparisonofserum contentofe 2 LH,FSH ofratsofalgroupsanalysisofalgroups( x±s;n=9) 珋组别 Group 剂量 Dose E 2 (ng/l) LH(IU/L) FSH(IU/L) 假手术组 Shamgroup 58.50± ± ±5.92 模型组 Modelgroup 40.01±2.68 ## 1.27±0.23 ## 51.86±10.90 ## 雌二醇组 Estradiolgroup 0.1mg/kg 59.77± ± ±4.56 补肾活血方组 TCM group 7g/kg 50.07±7.56 # 1.03±0.22 ## 34.89±5.49 ## 联合用药组 TCM+estradiolgroup 7g/kg+0.1mg/kg 54.84± ± ±7.58 补肾活血方 + 假手术组 TCM+shamgroup 7g/kg 55.84± ± ±6.11 F P 注 : 与假手术组比较 #P<0.05##P<0.01; 与模型组比较 P<0.05 P<0.01 Note:#P<0.05##P<0.01comparedwithshamgroup; P<0.05 P<0.01comparedwithmodelgroup.

4 284 北京中医药大学学报第 39 卷 A 假手术组 ;B 模型组 ;C 雌二醇组 ;D 补肾活血方组 ;E 联合用药组 ;F 补肾活血方 + 假手术组 Ashamgroup;Bmodelgroup;Cestradiolgroup;DTCM group;etcm +estradiolgroup;ftcm +shamgroup. 图 1 各组大鼠子宫内膜 (HE 100) Fig.1 Sectionsofendometrialtisueofratsofalgroups(HE 100) 由图 1 可知, 假手术组大鼠子宫的管径较粗, 管壁较厚, 内膜腺体丰富, 内皮较厚, 固有层由疏松的结缔组织构成去卵巢后大鼠的内宫内膜管壁明显变薄, 内径狭窄, 体积变小, 内膜腺体减少, 萎缩, 固有层细胞密集, 子宫内膜厚度与假手术组比有显著差异表 3 各组大鼠子宫内膜厚度比较 ( 珋 x±s;n=9) Table3 Endometrialthicknesofalgroups( 珋 x±s;n=9) 组别 Group 假手术组 Shamgroup 剂量 Dose 子宫内膜厚度 Endometrialthicknes (μm) ±94.05 模型组 Modelgroup ±45.38 雌二醇组 Estradiolgroup 0.1mg/kg ±65.51 补肾活血方组 TCM group 7g/kg ±79.81 联合用药组 TCM+estradiolgroup 补肾活血方 + 假手术组 TCM+shamgroup 7g/kg+ 0.1mg/kg 7g/kg ± ±83.79 F P 补肾活血方对子宫组织 ERα 和 ERβ 蛋白表达的影响 ERα 的免疫组化及图像分析结果如图 2A 和表 4 所示, 由图 2 可知,ERα 在各组大鼠子宫的上皮细胞间质细胞及肌细胞均有表达, 且以腺上皮细胞表达最强模型组大鼠与假手术组大鼠相比有显著差异 (P<0.01) 经雌激素和补肾活血方治疗 40 天后,ERα 在子宫的阳性区域面积明显增加, 腺上皮细胞染色明显加深,ERα 表达增加 (P<0.01,p< 0 05) 联合用药组大鼠子宫 ERα 的表达也有显著升高 (P<0.01), 与雌激素治疗组相比,ERα 的表达较少但无明显差异 (P>0.05) ERβ 的免疫组化结果和图像分析结果见图 2B 和表 4 与假手术组大鼠相比, 模型组大鼠 ERβ 阳性区域少, 有显著差异 (P<0.01) 经雌激素和补肾活血方治疗 40 天后, 阳性区域面积明显增加, 腺上皮细胞染色明显加 (P<0.01,P<0.05) 联合用药组大鼠子宫 ERβ 表达情况同模型组相比, 也有显著性升高, 但同雌激素治疗组相比, 虽有减少但无明显差异 (P>0.05) 结果见图 2 图 3 表 4

5 第 4 期唐雨晴等补肾活血方对去卵巢大鼠子宫 ER 及 CyclinB 表达影响的实验研究 285 A 假手术组 ;B 模型组 ;C 雌二醇组 ;D 补肾活血方组 ;E 联合用药组 ;F 补肾活血方 + 假手术组 Ashamgroup;Bmodelgroup;Cestradiolgroup;DTCM group;etcm +estradiolgroup;ftcm +shamgroup. 图 2 ERα 在子宫组织中的分布及表达情况 ( 免疫组化染色 200) Fig.2 DistributionandexpresionofERαinuteri(Immunohistochemicalstaining 200) A 假手术组 ;B 模型组 ;C 雌二醇组 ;D 补肾活血方组 ;E 联合用药组 ;F 补肾活血方 + 假手术组 Ashamgroup;Bmodelgroup;Cestradiolgroup;DTCM group;etcm +estradiolgroup;ftcm +shamgroup. 图 3 ERβ 在子宫组织中的分布及表达情况 ( 免疫组化染色 200) Fig.3 DistributionandexpresionofERβinuterus(Immunohistochemicalstaining 200)

6 286 北京中医药大学学报第 39 卷表 4 ERα ERβ 免疫组化的图像分析结果 ( 珋 x±s;n=9) Table4 TheanalysisresultsofERαandERβexpresionsinuterususingimmunohistochemicalstaining( x±s;n=9) 珋组别 Group 剂量 Dose ERα ERβ 假手术组 Shamgroup ± ± 模型组 Modelgroup ± ±77.33 雌二醇组 Estradiolgroup 0.1mg/kg ± ±96.48 补肾活血方组 TCM group 7g/kg ± ± 联合用药组 TCM+estradiolgroup 7g/kg+0.1mg/kg ± ± 补肾活血方 + 假手术组 TCM +shamgroup 7g/kg ± ± F P 补肾活血方对子宫组织中 CyclinB 蛋白表达的影响 CyclinB 在子宫组织中的表达结果与图像分析见图 5 和表 5 模型组大鼠子宫组织中 CyclinB 的表达明显低于假手术组 (P<0.01), 雄二醇组大鼠与补肾活血方组大鼠的 CyclinB 蛋白表达与模型组比较有明显增加 (P<0.01,P<0.05) 补肾活血方虽能增加 CyclinB 的表达, 但作用效果明显低于雌二醇组 (P<0.05) 联合用药组的 CyclinB 表达量与雌二醇组的 CyclinB 表达量相比平均值较低, 但无统计学差异 (P>0.05) 假手术 + 补肾活血方组同假手术组大鼠相比无明显差异 (P>0.05) 结果见图 4 表 5 a 假手术组 ;b 模型组 ;c 雌二醇组 ;d 补肾活血方组 ;e 联合用药组 ;f 补肾活血方 + 假手术组 ashamgroup;bmodelgroup;cestradiolgroup;dtcmgroup;e TCM +estradiolgroup;ftcm +shamgroup. 图 4 WesternBlot 测定 CyclinB 在各组子宫组织中的蛋白表达情况 Fig.4 ExpresionofCyclinBintheuteriofratsofal groupsbywesternblot 3 讨论绝经前后女性体内的雌激素水平会发生明显的改变当雌激素水平下降后, 它对于下丘脑 - 垂体 - 卵巢轴的负反馈抑制作用降低, 垂体大量释放 FSH LH, 且睾酮的水平也相应升高这些变化使机体生殖内分泌系统发生改变, 出现子宫阴道乳腺等生殖器官的萎缩补充外源性雌激素, 能够改善绝经期女性的这一生理现象 [4] 目前, 围绝经期表 5 CyclinBWesternBlot 分析结果 ( 珋 x±s;n=9) Table5 ResultsofCyclinBexpresioninuterus bywesternblot( x±s;n=9) 珋组别 Group 剂量 Dose CyclinB/GAPDH 假手术组 Shamgroup 2.50±0.14 模型组 Modelgroup 0.58±0.11 雌二醇组 Estradiolgroup 0.1mg/kg 1.79±0.16 补肾活血方组 TCM group 7g/kg 0.13±0.22 联合用药组 TCM +estradiolgroup 补肾活血方 + 假手术组 TCM +shamgroup 7g/kg+ 0.1mg/kg 7g/kg 1.78± ±0.18 F P 激素疗法 (MenopausalHormoneTherapy,MHT) 在临床上得到了广泛应用, 但随之而来, 又出现了一系列的副作用特别是子宫内膜癌及乳腺癌的发生率有了一定程度的提高 [5] 而大量的临床研究表明, 传统中药复方治疗围绝经期综合征有着良好的临床效果, 可有效缓解围绝经期综合征的症状 [6] 雌激素主要通过雌激素受体发挥作用,ER 主要有 2 个亚型分别是 ERα 和 ERβ, 通过雌激素反应元件 (EstrogenReflectElement,ERE) 和 AP 1 通路调控基因的转录和表达 [7] ERα 是雌激素发挥作用的关键, 是促进细胞增殖的主要动力在敲除 ERα 基因的小鼠身上, 并没有发现雌二醇对小鼠有子宫增重作用 [8], 说明雌二醇通过 ERα 起到子宫增重作用 ERβ 主要分布于泌尿生殖器乳腺前列腺结肠中枢神经系统以及免疫系统等, 在子宫分布相对较少主要分布在卵巢和卵巢以外的非生殖器官, 而在子宫和阴道上皮的表达微弱有研究发现激活 ERα 可能导致乳腺及子宫细胞的增生, 增加

7 第 4 期唐雨晴等补肾活血方对去卵巢大鼠子宫 ER 及 CyclinB 表达影响的实验研究 287 乳腺癌或子宫内膜癌的发病风险, 而选择性激动 ERβ 则不会引起相应的细胞增殖作用, 反而有一定的抗细胞增殖作用 [9] 这说明具有 ERβ 选择效应的调节剂不仅能发挥 MHT 的药物治疗作用, 而且能回避 MHT 治疗中可能产生的副作用本实验采用去卵巢大鼠模型模拟绝经期妇女雌激素水平下降生殖器萎缩的现象研究结果表明, 补肾活血方能在一定程度上升高血清 E 2 的含量, 增加子宫脏器指数, 改善其萎缩状况, 但作用效果与雌二醇有显著差异 (P<0.05), 仅表现为弱雌激素样作用以往研究显示, 植物性雌激素主要结合于 β [10] 受体, 与 β 受体的亲和力是 α 受体的 7~30 倍本研究中补肾活血方均能上调大鼠子宫组织中 ERα 和 ERβ 的表达, 但对 2 种受体亚型上调效应未表现出明显差异, 亦即对 ERα 和 ERβ 的亲和力无明显差异另外, 本研究还发现补肾活血方与雌二醇联合使用时能够在一定程度上减弱雌二醇的雌激素效应, 使因雌二醇引起的去卵巢大鼠子宫组织中 ERα 和 ERβ 表达增高的平均数有所下降, 但无统计学差异有研究表明, 植物雌激素可有效地同雌二醇竞争雌激素受体并发挥雌激素样作用, 在内源性雌激素水平较高时, 可发挥雌激素拮抗剂的作用, 在血循环中雌激素水平较低时, 能发挥雌激素的激动剂作用 [11] 结合文献我们推测, 补肾活血方与雌二醇联合应用, 可以竞争性结合 ER, 表现出抗雌激素活性, 其作用机制尚需进一步研究 [12] 中药补肾活血方由熟地淫羊藿丹参红花等药组成, 围绝经期综合征以肾虚为本, 兼以血瘀, 治疗上应遵循补肾固本, 补后天以养先天和活血化瘀相辅原则 [3] 补肾活血方立足于补肾固本, 兼以活血, 符合中医治疗围绝经期综合征的治则现代研究发现淫羊藿苷丹参酮与羟基红花色素 A 的结构为含有芳香环的非类固醇化合物, 与雌激素相似, 具有雌激素活性, 被称为植物雌激素能够与 ER 结合, 表现出雌激素样作用 [13] 子宫内膜异常增生组织上 CyclinB 的 mrna 和蛋白质水平的表达量均明显高于正常妇女子宫内膜上的表达 (P<0.05), 因此 CyclinB 参与了子宫内膜细胞的分裂, 并可以用来预测子宫内膜细胞的增殖能力 [14] 本实验还发现补肾活血方可以上调去卵巢大鼠子宫组织中 CyclinB 的表达, 而 CyclinB 可以促进细胞 G2/M 期的转化进而引起子宫内膜细胞增生和内膜增厚同时, 本研究还证实补肾活血方对假手术大鼠的血清激素水平子宫内膜厚度以及雌激素受体无明显影响, 亦即对正常大鼠血清激素水平和子宫组织无明显作用综上, 本研究结果显示, 补肾活血方具有雌激素样作用, 但作用强度弱于雌激素, 具有用于治疗围绝经期综合征的应用前景参考文献 : [1] 陈永宁, 史惠蓉. 雌激素激素替代疗法与心血管疾病 [J]. 国际妇产科学杂志,2012,39(1): [2] 杨长群, 汪向红, 解敏. 围绝经期女性雌激素替代疗法对激素水平的影响 [J]. 河北医药,2015(1): [3] 张晓华, 王小云. 王小云教授治疗围绝经期综合征经验撷要 [J]. 中医药通报,2014(2): [4] 居锦芬, 谢静燕, 李炜虹. 低剂量雌激素替代疗法对围绝经期症状及激素水平的影响 [J]. 实用临床医药杂志,2013,17(1): [5] 张华, 李红芳, 杨丽娜, 等. 雌激素及植物雌激素对去卵巢大鼠乳腺组织形态和 ERα 亚型表达的影响 [J]. 中国药理学通报,2008,24(4): [6] 杨海侠, 李秀峰. 中药结合心理治疗对围绝经期综合征潮热出汗症状及生殖激素水平的影响 [J]. 河北中医, 2011,33(2): [7] 葛新.G 蛋白偶联雌激素受体介导子宫内膜癌细胞雌激素的非转录效应的研究 [D]. 郑州 : 郑州大学,2013. [8]KURITAT,LEEK,SAUNDERSPT,etal.Regulationof progesteronereceptorsanddecidualizationinuterinestroma oftheestrogenreceptor alphaknockoutmouse[j].biology ofreproduction,2001,64(1): [9] 蔡金亚, 李俊豪, 丁石荟, 等雌激素受体 β 选择性配体的研究进展 [J]. 药学学报,2015(6): [10] 李潮, 薛晓鸥, 师莉莉. 大豆甙元对去卵巢大鼠子宫雌激素受体亚型表达的影响 [J]. 中国妇产科临床杂志, 2005,6(4): [11] 贾玉春. 浅谈植物雌激素 [J]. 北京日化,2005(1): [12] 刘晓霞, 翟曜耀, 赵越. 雌激素受体 ERα 的功能调控及相关疾病的研究进展 [J]. 中国细胞生物学学报, 2011(1): [13] 牛建昭, 赵丕文, 王继峰, 补骨脂等 5 种中药植物雌激素活性的实验研究 [J]. 北京中医药大学学报, 2008,31(10): [14] 唐莉.CyclinB1/Cdc2 和 Polo likekinasel 在子宫内膜异位症发病中的作用研究 [D]. 杭州 : 浙江大学,2007. ( 收稿日期 : )

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中草药致谢李沛赵继敏郑智敏江亚楠等病理生理学教研室老师在实验中给予的指导和帮助狄建彬顾振纶赵笑东钱培刚蒋小岗郭次仪中草药中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 41 卷第 8 期 10 年 8 月 1324 LDL C 非常明显升高 (