复旦学报 医学版 年 月 "!' $" $# "!#&' '!,! ",!!"!'2 *$ "! ' $ $!!"'!$ $ '"(3)&-*&-1))! ' "!, $#$&!!' $! ' #! $ -. ' 1 $!"!'! '$!#' '!, 684#! "$' (#!" '!! " '!

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1 复旦学报 医学版 中药更年春 6 方对去势大鼠学习记忆能力及下丘脑神经递质的影响 饶艳秋 陈品丽 程明军 王文君 俞 瑾 复旦大学附属妇产科医院中西医结合科 上海 复旦大学上海医学院妇产科学系 上海 上海市女性生殖内分泌相关疾病重点实验室 上海 摘要 目的 观察中药更年春方 # $ ( 对去势大鼠学习记忆能力及下丘脑内神经递质的影响 方法 分为两批实验 均选用 月龄 3 雌性大鼠 随机分为卵巢切除! ' 684 组 684 ( 组 684 戊酸雌二醇 "!! 组 684 组 $' ( 组和 $' 组 第 批实验连续灌药 个月后经!!" 水迷宫实验检测各组大鼠的学习记忆能力 第 批实验连续灌药 个月后采用高效液相色谱法检测各组大鼠下丘脑内神经递质去甲肾上腺素 ( 多巴胺 3) & 羟色胺 &-* 和 & 羟吲哚乙酸 &-1)) 的水平 结果 第 批实验中 684 组与 $' 组比较 学习记忆能力明显减退 684 ( 组 684 组与 684 组比较 学习记忆能力明显增强 $' ( 组与 $' 组比较 学习记忆能力明显减退 第 批实验中 684 组与 $' 组比较 ( 3) 含量明显减少 &-* &-1)) 含量明显增加 684 ( 组 684 组与 684 组比较 ( 3) 含量明显增加 &-* &-1)) 含量明显减少 $' ( 组与 $' 组比较 ( 3) &-* &-1)) 之间无明显差异 结论 ( 具有提高去势大鼠学习记忆能力的作用 并可维持下丘脑内神经递质的平衡 但未出现卵巢功能衰退则不宜补充 ( 关键词 更年春 ( 中药 去势大鼠 学习记忆能力 神经递质 中图分类号 文献标志码 )0"" & 6#$##" #6 '# " '&' ##$ # &# # # "&!"' #< )6 & -( & -( #&0 +)( + &0 ) 2! 0.! -!!!#$ &' 0. -!!! #$ &' 4 ". #!$'/! * " $ # $!' (!#!!"'! $ $ '"! '2! " " *$ "!'"*$!&' $ 3! "!! '2 684#! 684 (#! 684 "!! #! "$'!$'#!$' (#! *$!' 上海市卫生局中药新药及院内制剂研发项目 4 上海市中医药事业发展三年行动计划 & 上海市名老中医学术经验研究工作室建设项目 ;(43&& ; &!"$!"!! " # $!&'0# '

2 复旦学报 医学版 年 月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随着女性年龄的增长 卵巢功能本身及其中枢调节机制趋向老化 引起神经内分泌功能明显改变 出现以植物神经功能紊乱为主 并伴有神经心理病变等一系列症状 如潮热 心悸 烦躁 抑郁 学习记忆力能力减退等 我们将这类症候群称为围绝经期综合征 目前国内外针对围绝经期综合征主要采用激素替代疗法进行治疗 但因其不良反应及禁忌证限制了其在临床上的应用 近年来因中药治疗围绝经期综合征不良反应小而疗效显著 已逐渐成为围绝经期综合征的主要治疗方法 中药更年春方 # $ ( 由复旦大学附属妇产科医院根据中医理论及多年临床实践而研制 在治疗围绝经期综合征方面已取得良好疗效 因此有必要研究 ( 对围绝经期综合征的治疗机制 本研究拟通过体外实验研究 观察 ( 对去势大鼠学习记忆能力及下丘脑内单胺类神经递质的影响 为 ( 用于临床提供有效的科学依据 材料和方法 实验动物 实验大鼠均为 月龄雌性 3 大鼠 体质量 # 第 批 只大鼠实验动 物生产许可证号 47 沪 第 批 只大鼠实验动物生产许可证号 47 沪 两批大鼠均购自上海中国科学院 在复旦大学附属妇产科医院研究所 清洁级 饲养 实验用药 ( 由淫羊藿 # 生地黄 # 龟版 # 白芍 # 枸杞子 # 知母 # 菟丝子 # 肉苁蓉 # 茯苓 # 黄连 # 等 味生药组成 上海家化江阴天江药业有限公司加工制备 将药物混匀 水提取 浓缩 喷雾干燥得干浸膏粉 每贴中药复方含生药 # 制得干浸膏粉约 # 整个过程严格按照 生产 并派技术人员全程跟踪 保证制剂的质量 补佳乐又名戊酸雌二醇 "!! 由拜尔医药保健有限公司生产 每片 '# 批号 试剂 ( 标准品 3) 标准品 &-* 和 & -1)) 美国 #' 公司 纯度均高于 5 仪器!!" 水迷宫测试系统和自主活动箱检测系统均购自上海吉量公司.$&. 型 )# 型高效液相色谱仪购自美国 )# 公司 包括 ) 在线真空脱气机 ) 二元泵 自动进样器 ) 柱温箱 )#

3 饶艳秋 等 中药更年春 ( 方对去势大鼠学习记忆能力及下丘脑神经递质的影响 1(* ) 数模转换器及 ) 3) 3 3 电化学检测器 方法 模型建立 第 批实验将 只 月龄 3 雌性大鼠随机分组 分为卵巢切除! ' 684 组 即 684 组 684 ( 组 684 组 $' ( 组 $' 组 在 5 水合氯醛 '# # 剂量麻醉下 对 684 ( 组 684 组 684 组进行切除双侧卵巢处理 将 684 ( 组作为实验组 684 组作为阳性对照组 684 组作为模型组 对 $' ( 组 $' 组切除双侧卵巢周边脂肪组织 作为假手术组 术后以青霉素 链霉素常规抗感染 天 术后第 天进行阴道涂片 在光镜下观察阴道脱落细胞 连续 天 确认去势是否完全 排除去势不完全大鼠 术后第 周开始对 684 ( 组 $' ( 组灌服中药复方 ( 颗粒制剂 # 天 对 684 组灌服 '# 天 对 684 组 $' 组灌服生理盐水 '. 天 连续灌药 个月 处死后取子宫置于 5 甲醛中固定备用 第 批实验将 只 月龄 3 雌性大鼠随机分组 分为 684 ( 组 684 组 684 组 $' 组 在 5 水合氯醛 '# # 剂量麻醉下 将 684 ( 组 684 组切除双侧卵巢 将 684 ( 组作为实验组 684 组作为阳性对照组 684 组作为模型组 对 $' 组切除双侧卵巢周边脂肪组织 作为假手术组 术后以青霉素 链霉素常规抗感染 天 术后第 天进行阴道涂片 在光镜下观察阴道脱落细胞 连续 天 确认去势是否完全 排除去势不完全大鼠 术后第 周开始对 684 ( 组灌服 ( # 天 对 684 组灌服 '# 天 对 684 组及 $' 组灌服双蒸水 '. 天 连续灌药 个月 处死大鼠后断头取脑 在冰上分离出各组大鼠下丘脑 迅速以液氮处理后置于 9 冰箱中备用 取子宫置于 5 甲醛中固定备用!!" 水迷宫实验 参照!!" 法并作部分改动 实验分为两个部分 定位航行能力测试 #!!' ( 和空间探索能力测试 "!,!!'( 测试时主要用于评估大鼠在水迷宫中的学习和记忆能力 实验历时 天 第 天动物自由游泳 ' 使大鼠熟悉水池并排除不会游泳的大鼠 第 天至第 天每 只大鼠进行 次 天的训练 每次 " 每次入水点均不相同 将大鼠面向池壁放入水中 记录动物寻找并爬上平台的运动轨迹和所需时间即逃避潜伏期 "!. 如果大鼠在 " 内未找到平台 由实验者将其引致平台. 记为 " 使大鼠在平台上停留 " 每只大鼠共训练 次 最后统计每天各组大鼠 次. 的平均值 测试主要用于评估大鼠对平台空间位置准确记忆能力 又称记忆保持能力 第 天做完 次训练后撤除平台 选择 象限作为入水点 将大鼠放入水中 记录大鼠在水中游 " 内的平台象限中所游行的路程和穿越平台次数 并作出典型轨迹图 -. 方法 取出大鼠下丘脑 采用 -. 法对大鼠脑内 ( 3) &-* &-1)) 进行检测 按 # 脑 湿重 加入 '.5 高氯酸的比例混匀 放入玻璃匀浆管内 冰浴下匀浆 将匀浆液收集于 '. 离心管中 于 # 离心力下低温离心 ' 次 取上清液进样检测 准确称取标准品 ( '#3)'#&-*'#&-1)) '# 分别溶于 '. 高氯酸中 制成标准品储备液 浓度均为 '#'. 9 保存 使用时按需要将流动相稀释成各种浓度的标准液 进样量为. 流动相为 (- 6 ''. 6 ) ''. 3*) '. *) '. 5 的甲醇 - 的水溶液 流速为 '.' 氧化电位为 8 灵敏度为 ) 经过柱温为 9 的色谱柱 色谱柱为 )# " 43 & 柱 ' '' '' 子宫内膜形态学分析 取血后迅速取各组大鼠子宫组织 保存在 5 中性甲醛溶液中固定 固定后石蜡包埋 并切片 ' 常规 - 染色 光镜观察并测量子宫内膜厚度 统计学方法 应用 软件对数据进行统计分析 各指标均用 表示 采用 6 &+ )(68) 单因素方差分析法进行数据分析 为差异有统计学意义 结 果 各组大鼠血清 及子宫内膜厚度检测结果的比较 如表 所示 两批实验中 684 组与 $'

4 复旦学报 医学版 年 月 组 $' ( 组比较 血清 水平明显降低 子宫内膜厚度明显变薄 684 ( 组与 684 组比较 血清 水平无明显差异 子宫内膜厚度无明显差异 684 组与 684 组 684 ( 组比较 血清 水平明显升高 子宫内膜厚度明显增厚 表. 各组大鼠血清 及子宫内膜厚度水平 *. ' '# # ' "+#"$!! " #'. ' 684 ( $' ( $' 684 ( $' ( $' '(684 '(684 第. 批大鼠 水迷宫实验结果 在!!" 水迷宫实验中各组大鼠在 ( 测试中. 时间长短及 测试中各组大鼠穿越平台的次数 如表 所示 结果表明 684 组与 $' 组比较. 时间明显延长 穿越平台次数明显减少 684 ( 组 684 组与 684 组比较. 时间明显缩短 穿越平台次数明显增多 $' ( 组与 $' 组比较. 时间明显延长 穿越平台次数明显减少 在!!" 水迷宫实验中 中的探索轨迹如图 所示 结果表明 684 组与 $' 组比较 探索轨迹呈现无规律分布 684 ( 组 684 组与 684 组比较 探索轨迹明显集中分布于平台所在位置附近 $' ( 组与 $' 组比较 探索轨迹呈无规律分布 表 第. 批大鼠在 中 5 时间及 中穿越平台次数的比较 * 5 ## " "!' # " 7! #! ". " *' " 684 ( $' ( $' '(684 '( $' ( 图. 第. 批大鼠空间探索实验中典型轨迹图,$.*&!'!")&#!'!!# " 7! # 第 批大鼠下丘脑神经递质的检测结果 第 批大鼠灌药后测量其下丘脑内神经递质 表 结 果表明 684 组与 $' 组比较 大鼠下丘脑内神经递质 ( 3) 含量明显降低 &-*

5 饶艳秋 等 中药更年春 ( 方对去势大鼠学习记忆能力及下丘脑神经递质的影响 &-1)) 含量明显升高 684 ( 组 684 组与 684 组比较 大鼠下丘脑内神经递质 ( 3) 含量明显升高 &-* 组与 684 组比较 大鼠下丘脑神经递质之间均无明显差异 $' ( 组与 $' 组比较 大鼠下丘脑神经递质之间均无明显差异 &-1)) 含量明显降低 684 ( 表 / 第 批实验中大鼠下丘脑内神经递质的比较 * / &!"' # # ' ' "# 7! # ##! " ( 3) &-* &-1)) 684 ( $' ( $' '(684 讨 论 妇女进入围绝经期后 卵巢功能逐渐衰退 卵巢内分泌功能逐渐降低 导致妇女体内雌激素水平下降 出现内分泌激素的变化 而子宫内膜厚度也随之变薄 本研究中结果中 大鼠去势后 水平明显降低 符合妇女围绝经期生殖内分泌的变化 去势大鼠灌服 可增加血清 的水平 导致去势大鼠子宫内膜增生 符合围绝经期后妇女使用激素替代治疗 $!'! ' $!- * 治疗后 存在患子宫内膜癌的潜在危险性的观点 去势大鼠灌服 ( 并不导致血清内 水平的变化 也不导致去势大鼠子宫内膜增生 妇女体内雌激素效应 不仅取决于雌激素水平的含量 还与雌激素受体 "!#!! 的数量及亲和力有关 主要存在 两种亚型 两者的区别在于其 末端配体结合区和 ( 末端活性转化区不同 从而导致其在靶组织中分布也不同 受体主要分布于卵巢 子宫内膜 乳腺等组织 而胸腺 下丘脑 主动脉 等部位则以 受体为主 既往实验已证实 ( 能选择性提高 的含量 对 并不产生影响 因此我们推测 ( 主要通过提高 的含量而发挥其调节围绝经期妇女神经内分泌功能的作用 妇女进入围绝经期后 除了会出现潮热 烦躁等植物神经功能紊乱的症状外 还常伴随学习记忆能力衰退 甚至发生阿尔茨海默病 ) 2$ '!:" " " )3 大量研究表明认知功能障碍的发生 与雌激素的缺乏存在一定的因果关系 绝经后妇女 认知功能障碍的发生率较同龄男性高 倍 - * 不仅对认知功能障碍的治疗有效 还能预防 认知功能障碍疾病的发生及推迟其发病的年龄 认知功能障碍疾病的发生与大脑内参与记忆的胆碱能神经元减少有关 与认知功能关系最密切的神经递质是乙酰胆碱 $) $ 胆碱能神经元的存活依赖于脑源性神经营养因子,!!! $! 3( 的神经营养 作用 从中医学角度而言 肾为先天之本 主藏精 主骨生髓 上通于脑 脑为髓之海 因此脑髓充足与否和肾精盛衰关系密切 肾精充足则脑髓生化有源 肾精亏虚则脑髓空虚 围绝经期及绝经后妇女肾精渐亏 髓海渐空 神明不清 产生学习和记忆能力下降 因此围绝经期后宜采用补肾为主的方法来防治围绝经期所伴随的学习记忆能力下降 ( 是我院研制以补肾为主的中药复方 临床观察也证实 ( 的确可改善围绝经期妇女的记忆能力 第 批实验采用经典!!" 水迷宫实验方法 评价 ( 对去势大鼠学习记忆能力的影响 结果提示去势会导致大鼠学习记忆能力减退 而灌服 ( 后去势大鼠学习记忆能力得到改善 而且 ( 与 在改善大鼠学习记忆能力方面产生的效果类似 根据既往研究结果 我们推测 ( 可能通过选择性提高去 势大鼠大脑内 & 的含量 从而调节海马内 ) $ 的代谢 提高海马内 3( 的表达 维持脑内胆碱能神经元的功能 从而达到改善大鼠的学习记忆能力的作用 第 批实验结果还提示 $' 组灌

6 复旦学报 医学版 年 月 服 ( 后学习记忆能力反而减退 我们推测是由于育龄期大鼠的卵巢功能并未衰退 予以补充 ( 类补肾中药 违背了中医学 有是证则用是药 的辨证用药原则 反而适得其反 导致学习记忆能力减退 有是证则用是药 是中医用药的法则 中医用药皆需辨证施治 阴虚者滋其阴 阳虚者温其阳 补不足而损有余 以平为期 各得其所 因此我们认为未出现卵巢功能衰退的育龄妇女 不适宜补充补肾类药物 但具体机制还有待今后进一步研究 目前多数研究表明 下丘脑内单胺类神经递质 ( 3) &-* 参与了人和动物的情绪和心理活动的调节 随着卵巢功能的衰退 下丘脑分泌的单胺类神经递质含量及比例发生了明显变化 进而诱发潮热 出汗 烦躁 失眠等多种以植物神经功能紊乱为主的围绝经期相关症状 有研究指出 ( 与改善注意力 提高学习记忆能力 抗焦虑有关 3) 与维持记忆力 改善睡眠有关 &-* 则参与调节情绪 影响体温调节中枢 其升高多引起潮热 出汗等症状 正常生理状态下 可抑制儿茶酚胺降解酶的活性 但随着卵巢功能下降 水平明显降低 儿茶酚胺降解酶活性增强 导致下丘脑内儿茶酚胺类递 质 ( 3) 因降解过多而含量降低 &-* 的分解虽然增强 但其合成代谢大于分解代谢 因而 & -* 的代谢产物 &-1)) 含量增加 &-* 含量也 增加 关于围绝经期下丘脑神经递质平衡失调的原因还有待进一步研究 第 批实验结果显示去势大鼠下丘脑内神经递质分泌紊乱 ( 3) 含量下降 &-* &-1)) 含量升高 而灌服 ( 可升高下丘脑神经递质 ( 3) 含量 降低 &-* & -1)) 含量 改善围绝经期植物神经功能紊乱的症状 产生作用和 类似 推测 ( 可能也是通过提高大脑内 含量及活性而发挥作用 在第 批实验中 $' ( 组与 $' 组对比 神经递质并未出现明显差异 推测学习记忆能力方面可能是 ( 中药复方对机体的综合调理所表现的结果 而单独针对神经递质方面并没有明显差异 具体机制还有待进一步研究 综上所述 ( 可改善去势大鼠的学习记忆能力 调节下丘脑神经递质的含量 且不增加子宫内膜的厚度 因此我们认为 ( 可能是改善围绝经期综合征妇女神经内分泌功能的安全 有效的药物 而未去势大鼠补充 ( 后反而导致学习记忆能力 下降 提示未出现卵巢功能衰退者不适宜予以服用 ( 类药物 参 考 文 献 *!,!+2 " ( # -!1" "!# "!# " '" $!' $! " $! " '!!!" " ),!8! 61, " )!"!#!"!!" #$ #' $"# '''! #!!!! " 0 赵凡桂 王文君 周文江 等 更年春方对卵巢切除大鼠学习记忆能力和海马 亚型的调节 上海中医药杂志 "! $#.- -!!" " "!$!' "' '!#!' ## ) 2$ '!:"" " 1$.!*. -!! # " "!# "!'! " " " "!#! ' $!! # ) ( ' 2$ '!:"!"#'! 1$.! 8!"0 $!' ' " 2$ '!:" " " )3!' $ $"!" $,!"* 1$!! ;$#7# ;.. +! ",!&!!! $!! ' "&! " 3(*!"# # ) 2$ '!:"" ",!1$ 景苏玉 魏美娟 围绝经期妇女的记忆商与雌激素及补肾中药之间关系的临床研究 中国中西医结合杂志 赵凡桂 王文君 周文江 等 更年春方对卵巢切除大鼠学习记忆能力和海马 亚型的调节 上海中医药杂志 赵凡桂 王文君 周文江 等 更年春方对切除卵巢大鼠学习记忆能力和海马胆碱能系统的影响 中国中西医结合杂志 赵凡桂 王文君 周文江 等 更年春方对卵巢切除大鼠海马中脑源性神经营养因子的影响 中国实验方剂学杂志 叶雪清 围绝经期神经 & 内分泌 & 免疫网络的变化 实用妇产科杂志 何宗宝 胡玲 沈晓明 等 电针不同组合穴位对围绝经期大鼠生殖内分泌免疫网络功能的调节作用 安徽中医学院学报 收稿日期 编辑 沈玲

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灵芝与肿瘤 灵芝 与 肿瘤 Ganoderma lucidum and tumor 现代药理研究汇编 定位灵芝在肿瘤应用中的作用和价值 药理研究 学者观点 病例亲述 灵芝的现代药理研究已有40多年历史 肿瘤应用是 前言 其研究重点 大众对灵芝抗肿瘤虽有一定认知 然而 这种认知仍较模糊甚至是误解 本资料在学术研究基 础上 以尽可能通俗的语言 使大众了解灵芝研究状 况并正确定位灵芝在肿瘤治疗中的三个层级 目录 第一部分

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