辽宁中医杂志 年第 卷第 期 I R K W m Y E W C M ER VEGF m R w K Y D ZHANGF YIH QIS WUC FANGL YANGY G O D m S A H G U T C M G G C G C T C M G G C A O T w m Y w m m

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1 辽宁中医杂志 年第 卷第 期 DOI 补肾温阳祛风散寒法对肾阳虚型围绝经期 模型大鼠 ERVEGF作用的研究 张帆易华娅齐帅英武创新方丽杨玉涛 贵阳中医学院第二附属医院贵州 贵阳 贵阳中医学院贵州 贵阳 摘 要目的探讨补肾温阳祛风散寒法对肾阳虚型围绝经期模型大鼠 ERVEGF 的影响及作用机制方 法选用自然老化的围绝经期雌性 S D大鼠肌注氢化可的松构建肾阳虚型围绝经期大鼠模型将模型大鼠随机分为更年 D雌性大鼠作为对照组各组给予相应药物治疗 于 汤组教材方组替勃龙组 另选青年组老年组 S 第 天处死大鼠分离摘取双侧子宫称重了解子宫湿重及子宫指数采用病理切片观察大鼠子宫形态学变化免疫组 及信使 mr 化及原位杂交检测方法观察大鼠子宫雌激素受体 ER血管内皮生长因子 VEGF热休克蛋白 NA ERmRNAVEGFmRNA mrna的阳性表达情况结果①更年汤组教材方组替勃龙组能明显增加子宫湿 更年汤组与替勃龙组教材方组比较差异有统计学意义 ②更年汤 重子宫指数有统计学意义 更年汤组与替勃龙组比较无统计学意义 组 教材方组替勃龙组能抑制子宫萎缩有显著性差异 但教材 ③更年汤组教材方组替勃龙组能增加 ERERmRNAVEGFVEGFmRNA阳性表达有统计学意义 替勃龙组与更年汤组之间比较无显著差异 ④更年汤组替 方组的上调低于更年汤组及替勃龙组 及 mrna阳性表达有统计学意义 更年汤组与替勃龙组比较无显著性差异 勃龙组能增加 蛋白及基因在子宫中的阳性表达而发挥雌激素样作用从而 结论自拟更年汤可能通过上调 ERVEGF 达到改善病理状态下的子宫的形态结构及功能的目的 关键词补肾温阳祛风散寒法 雌激素受体 血管内皮生长因子 热休克蛋白 中图分类号R 文献标志码A 文章编号 D 对 T M细胞 ES R与 ES R细胞膜表达水平 B m 受到了显著抑制 而细胞核上 ES R与 ES R的核表达 M S AAH m A K S 有所升高这一结果表明 D 具有类雌激素样 mm J S 作用 并且 能 够 即 刻 和 瞬 间 诱 导 依 赖 于 S 激 活 的 ES R和 ES R从核质膜易位 B m A M B M AT C H YN G C m m w 具有类雌激素样作 总之 我们研究证实 D E D 用 能够促进睾丸支持细胞的增殖的作用 且存在一定 m B m B 的量效与时效关系 其机制可能与激活依赖于 S 诱 导的即时和瞬态 ES R细胞核质膜易位有关但 ES R 是通过其信号通路来完成其生物学效应的 因此 我们 将研究 D 对 ES R信号通路的影响以期进一 步揭示 D 的作用机制 本实验是在第四军医大学预防医学院毒理学教研 L TFN m AR R R w S S m T í FGL M F mm L C S D ES R ES R w S 室完成的 在此特别感谢 m M C E 参考文献 何焱王继双张鹏等薯蓣皂苷元药理作用及其机制研究进展 中草药 J M J m S m A B m A C m G C D S m ES RESR m m D GER G C me VSMC CRF C SB m L HD CE m m m A M S 收稿日期 基金项目国家自然科学基金 作者简介张帆 女贵州贵阳人主任医师硕士研究生导师 研究方向中西医结合治疗妇女生殖内分泌相关疾病 通讯作者易华娅 女贵州人硕士生研究方向中西医结合 HTW D DM E IT R m m S m C D B L TFS ERE CA ES R ESR 治疗妇 女 生 殖 内 分 泌 相 关 疾 病E m qq MAK m m m mm S B R

2 辽宁中医杂志 年第 卷第 期 I R K W m Y E W C M ER VEGF m R w K Y D ZHANGF YIH QIS WUC FANGL YANGY G O D m S A H G U T C M G G C G C T C M G G C A O T w m Y w m m w Y A m mm W ERVEGF m m S D m w Y A w m G D A BT m DA E FS D m w C w m ERERmR A NAVEGFVEGFmRNA mrna I mm m q R ①T G AB C w w W m w G D F w A w G A G BCw ②T G AB C w m w G D F w A w G A G C ③T G AB C VEGFmRNA T G A C ERERmRNAVEGF m w G Bw w G A C ④T mrna G A C w m w G BE G FW w G A C C T G D mrna m m m ERERmRNAVEGFVEGFmRNA w w K w w m Y w m ER VEGF 子宫在女性的生殖内分泌中扮演着重要角色不 给药方法及剂量 仅是孕育胎儿和产生月经的场所 而且也是卵巢甾体 每日 由专人对各组大鼠灌胃 连续 激素的靶器官 近年来研究表明子宫是一个复杂的内 各组给药均按人鼠体重换算 人体重按 计 分泌器官 可产生多种生物活性物质及激素参与生殖 算 人与大鼠的等效剂量比值为 剂量为 m 内分泌活动 本研究通过构建肾阳虚型围绝经期大 计算抽取药液及生理盐水时均选用 ml无菌注射 鼠模型 应用补肾温阳祛风散寒之自拟更年汤对模型 器 更年汤组 含生药量 ml 约 大鼠子宫进行干预 从而探讨更年汤治疗绝经综合征 给药量为 ml 教材方 含生药量 ml约 的作用机理现将研究结果报道如下 给 药 剂 量 为 ml 替 勃 龙 组 含 药 量 材料与方法 m ml 约 m 给药剂量利维 实验动物的造模与分组 应用阴道脱落细胞动情周期观察法对 月 爱溶 液 ml 青 年 组老 年 组生 理 盐 水 组均 用 N CmL灌胃 龄大鼠 只 体重 进行连续 观察筛 实验药品 以上涂片呈现 选 结果所有大鼠底层细胞均在 自拟更年汤 为动情周期紊乱动情间期延长证明其属于围绝经 帆教授多年临床经验总结 药用 熟地 怀山药 期 将符合围绝经期模型的大鼠 每日常规消毒后左右 枣皮 仙茅 淫羊藿 巴戟天 女贞 交替于臀部肌肉丰厚的部位注射氢化可的松 ml 子 旱莲草 桑寄生 当归 桂枝 贵阳中医学院第二附属医院张 连续肌注 间停 见动物出现持续性萎 防风 细辛 炙甘草 独活 靡不振 反应迟钝 扎堆 拱背少动 毛不光洁 竖毛时 教材方 则认为肾阳虚型模型造模成功将造模成功的肾阳虚 惠卿主编 中医妇科学 药用 熟地 仙茅 选自全国高等中医药院校教材 欧阳 型大鼠随机分为更年汤组 教材方组 替勃龙组 生理 淫羊藿 山药 杜仲 枣皮 菟丝子 盐水组 每组各 只另选阴道细胞学表现为有规律 知母 黄柏 当归 肉桂 甘草 的 动情周期的 月龄大鼠 只 体重 生理盐水 N C ml 贵州 及阴道细胞学表现无动情周期改变的 月龄 国药准字 省科伦药业有限公司生产 批号 大鼠 只 体重 为青年和老年对照组 号 H 以上动物均由重庆市中药研究院动物室提供 许可证 注射用氢化可的松 号 渝 微生物控制等级为 I级 民制 药 有 限 公 司批 号 国 药 准 字 号 m ml 支 湖北人

3 辽宁中医杂志 年第 卷第 期 H 每张切片至少察 个视野 替勃龙片 利维爱 m 片 盒 南京 数据处理与统计方法 欧加农制药有限公司生产 批号 国药准字 用S S S 软件进行数据统计 子宫湿重 子宫 H 号 指数利用单因素方差分析进行统计比较 子宫组织病 主要实验试剂及仪器 理 形 态 观 察免 疫 组 化 及 原 位 杂 交 所 得 结 果 利 用 ER VEGF 免疫组化染色试剂盒ERmR K W H检验及 M W U检验等 NA VEGF mrna mrna原 位 杂 交 检 测 试 剂 盒 级资料的两两样本比较用秩和检验以 由贵州爱瑞达生物科技有限公司提供主要仪器 生 作为显著性和极显著性差异的标准 物组织切片机 生物显微图像分析仪 实验结果 摄影生物显微镜 XS Z 电热鼓风干燥箱 GZ X 各组大鼠子宫指数的结果 冰 箱 S Z A电 磁 炉 RC B 各 大 鼠 体 重 之 间 比 较 差 异 无 统 计 学 意 义 型 恒温干燥箱 电子天平 J A N 台式低速离心 各组大鼠子宫湿重比较更年汤组与替勃龙 均由贵阳中医学院中心实验室提供 机 L 组 教材方组 老年组与比较均有极显著差 标本的采集与处理 青年组与更年汤组 老年组与生理盐水 异 在实验过程中由于动物之间的相互撕咬 灌胃时 组 替勃龙组与教材方组比较差异无统计学意义 操作不当导致动物死亡至采集标本时 大鼠的数量 各组大鼠子宫指数比较 更年汤组与各组比较 为 青年组 只 老年组 只 只 更 均有极显著差异 与老年组比 年汤组 只 教材方组 只 替勃龙组 只于末 较 替勃龙组与教材方比 较 差 异 无 统 计 学 意 义 后将各组剩余大鼠进行股动脉放血处 次给药 结果见表 死 剖取出大鼠子宫 去除其周围多余组织 放于电子 天平上称取湿重后放至标记好的盛有 的甲醛溶 液中固定备用 之后将子宫进行病理切片 免疫组化 原位 杂 交 实 验 检 测 ERVEGF VEGF mrna mrna 具体实验方法严格参照试剂盒说明 以电子天平称子宫湿 体 重 并换算成脏器指数脏器指数 脏器湿重 重 子宫病理形态学变化 组别 例数 青年组 老年组 观察指标 子宫湿重子宫指数 珋± 表 各组大鼠体重子宫湿重指数测定结果比较 子宫组织经 甲醛 将标本送至贵阳医学院附属医院病理 溶液固定 后 科 常规取材 脱水 石蜡包埋 切片 HE染色 在光学显 体重 子宫湿重 子宫指数 ± ± ± ± ± ± ± ± ± 替勃龙组 ± ± ± 教材方组 ± ± ± 更年汤组 ± ± ± 注① 经单因素方差分析 ② 经单因素 方差 分 析 LS D检验与比较 与 比较 与 比较 ③经单因素方差分析 LS D检验与比较 微镜下观察和摄影子宫病理切片观察方法 ①内膜变 性坏死脱落 内膜组织结构破坏 细胞形态和结构模糊 与 比较 不清 或有组织缺损形成②内膜萎缩 内膜腺体数量 减少 体积缩小 间质细胞数量减少内膜变薄③肌层 各组大鼠子宫形态学的结果 与 比较 萎缩 肌层平滑肌细胞数量减少 体积缩小 肌层厚度减 子宫内膜萎缩情况表现为总体样本有极显著差异 小以上观察指标均根据病变轻重程度不同 依次标记 更年汤组与青年组 替勃龙组 教材方组 为 表 示 为 无 病 理 改 变 与老年组 比较无统计学意义 表示有轻度病理改变 表示有中度病理改 之间比较有极显著差异 子宫内膜变性坏 变 表 示 有 重 度 病 理 改 变为 方 便 统 计 将 更年汤组 死脱落总体样本有统计学意义 依次计为 分 与替勃龙组比较无统计学意义 与余各组 免疫组化及原位杂交判定标准 运用免疫 子宫肌层萎缩总体样 比较有统计学意义 组化及原位杂交方法观察子宫上 ER VEGF 及 本有统计学意义 更年汤组与替勃龙组 青 将已固定好的子宫组织送至贵 其信使 mrna的表达 与老年组 生 年组之间比较无统计学意义 阳医学院附属医院病理科进行检测 由贵阳医学院附 理盐 水 组教 材 方 之 间 的 比 较 有 统 计 学 意 义 属医院病理科根据试剂盒的说明书严格进行实验操作 结果见插页Ⅸ图 表 并完成结果判定 按阳性细胞所占百分比及染色强 各组大鼠子宫 ER与 ERmRNA阳性表达结果 度两者结合分析判断 阳性细胞所占百分比 即阳性细 模型大鼠子宫 ER阳性表达总体样本有极显著差 胞数 为 为 为 异 更年汤组 教材方组 替勃龙组与生理 无 阳 性 细 胞 染 色 强 度浅 黄 色 为 盐水组比较均有统计学意义 棕黄色 棕褐色为 未着色细 与老年组比较无统计学意义 更年汤组与 胞为 为了统计方便予以半定量计分 记为 替勃龙组比较无统计学意义 更年汤组与 记为 记为 记为 教材方组比较有统计学意义 模型大鼠子

4 1078 辽宁中医杂志 2016 年第 43 卷第 5 期 宫 ERmRNA 阳性表达总体样本有统计学意义 (P< 001), 与老年组比较无统计学意义 (P> 005), 替勃龙组与青年组之间差异无统计学意义 (P >005); 替勃龙组与教材方组更年汤组比较有统计 学意义 (P<005); 更年汤组与教材方组比较无统计 学意义 (P>005) 结果见插页 Ⅸ 图 2~ 图 3 表 3 表 2 大鼠子宫病理切片观察结果 子宫内膜萎缩 子宫内膜变性坏死脱落 子宫肌层萎缩 青年组 老年组 教材方组 更年汤组 替勃龙组 注 :1 总体比较 P<001; 与 比较 P<001, P<001,P<005,P<005,P> 005; 与老年组比较, P>005; 与 比较,P>005,P>005,P>005,P<001, P<001 2 总体比较 P<001, 与 比较 P>005 3 总体比较 P<005, 与 比较,P >005, P<005,P<005 P>005 表 3 各组大鼠子宫 ER 与 ERmRNA 阳性表达结果 ER ERmRNA 青年组 老年组 教材方组 更年汤组 替勃龙组 注 :1 总体比较 P<001; 与 比较,P>005; 与 之间比较 P <005; 与 之间比较 P>005; 与 P<005 2 总体比较 P< 001; 与 比较,P>005; 与 比较 P>005; 与 之间比较 P> 005; 与 之间比较 P<005; 与 P<005 余各组比较 P< 各组 VEGF 与 VEGFmRNA 阳性表达结果 各组 VEGF 阳性表达总体样本有统计学意义 (P <001), 青年组与老年组和比较有极显 著差异 (P<001) 更年汤组教材方组替勃龙组表 达均显著上调 (P<001), 但教材方组的上调低于更 年汤组及替勃龙组 (P<005), 更年汤组替勃龙组与 青年组之间比较无统计学意义 (P>005) 各组 VEGFmRNA 阳性表达总体样本有统计学意义 (P< 001), 更年汤组与替勃龙组比较无统计学意义 (P> 005); 更年汤组替勃龙组与教材方组比较有统计学 意义 (P<005); 更年汤组与生理盐水之间比较有统 计学意义 (P<005), 与老年组比较无统 计学意义 (P>005) 结果见插页 Ⅸ 图 4~ 图 5 表 4 35 各组 HSP70 与 HSP70mRNA 阳性表达结果 各组 HSP70 与 HSP70mRNA 阳性表达总体样本 均有统计学意义 (P<005) 更年汤组替勃龙组与 教材方组比较有统计学意义 (P<005); 更年汤组与替勃龙组比较无统计学意义 (P>005), 教材方组与比较无统计学意义 (P> 005), 更年汤组与比较有极显著差异 (P<001) 结果见表 5 插页 Ⅹ 图 6~ 图 7 表 4 各组大鼠子宫上 VEGF 与 VEGFmRNA 阳性表达结果 VEGF VEGFmRNA 青年组 老年组 教材方组 更年汤组 替勃龙组 注 :1 总体比较 P<001; 与 比较,P>005; 与 比较,P >005; 与 之间比较 P>005; 与 之间比较 P<005; 余各 组两两比较 P<005 2 总体比较 P<001, 与 比较,P>005;P <005; P<001;P<005 表 5 各组大鼠子宫上 HSP70 与 HSP70mRNA 阳性表达结果 HSP70 HSP70mRNA 青年组 老年组 教材方组 更年汤组 替勃龙组 注 :1 总体比较 P<005; 与 比较, P>005, P< 001; 与 比较 P>005 2 总体比较 P<005; 与 比较,P> 005, P<001; 与 比较 P>005 4 讨论 对于绝经综合征目前大部分主要从性激素的靶器 官如垂体前叶卵巢阴道黏膜着手进行相关机制的研 究妇女进入围绝经期后, 卵巢功能的衰退, 雌激素分 泌波动并逐步减少, 将引起全身诸多组织器官结构和 功能的退行性改变子宫作为卵巢甾体激素的最重要 的靶器官之一, 其退行性改变表现较为明显改善子 宫结构和功能的退行性变化对于调节围绝经期卵巢机 能衰退引起的生殖内分泌紊乱具有重要意义 大鼠或小鼠子宫增重法检测药物的雌激素活性是 一种最常用的评价雌激素作用的方法 [3] 具有灵敏度 高, 可直接反映受试物的活性, 并可用于多种外来雌激 素的检测等优点, 其原理主要是子宫含有大量的雌激 素受体 (ERs), 雌激素或具有雌激素活性的化合物通 过与该受体结合, 可诱发细胞内反应, 使子宫的雌激素 诱导蛋白 (IPs) 含量增加, 表现为子宫组织增生变厚而 使子宫增重随着年龄的增长, 雌激素下降, 子宫衰退 萎缩, 其子宫指数降低本实验结果表明, 更年汤能明 显改善子宫内膜萎缩变性坏死脱落及肌层萎缩, 对增

5 辽宁中医杂志 2016 年第 43 卷第 5 期 1079 加大鼠子宫湿重子宫指数有显著作用, 其效果同利维爱相当, 说明了更年汤具有雌激素样作用, 且活性较强 ER 在激素和细胞间起着触发特殊内分泌生物化学键的重要作用雌激素的经典作用机制认为, 雌激素类化合物进入细胞后, 需与 ER 的配体结合区结合, ER 形成二聚化后与雌激素受体反应元件结合, 从而启动靶基因的转录和复制, 调节雌激素促进靶器官组织的增殖和分化, 发挥各自的促进和抑制作用目前大量的研究发现 ER 数目的差异对雌激素生物学作用的发挥及改善更年期紊乱的生殖内分泌轴有至关重要的影响 [4-5] 子宫上分布着大量 ER, 随着机体进入围绝经期, 卵巢功能的衰退, 雌激素分泌紊乱并逐步减少, 并且子宫上的 ER 的功能也逐渐减退, 导致子宫内膜上皮鳞状化, 固有层的基质细胞和血管减少, 腺体逐渐减少甚至消失, 纤维结缔组织增生, 逐渐硬化与萎缩实验结果显示, 大鼠子宫 ER 及基因表达随着月龄的增加而下降, 提示大鼠进入围绝经期后子宫的细胞和组织结合雌激素的能力降低, 表明雌激素对子宫功能的促进和保护作用, 更年汤在上调 ER 及 ERmRNA 的表达方面具有与激素替代疗法相近的效果这可能与该方发挥其雌激素样作用有关, 通过激活子宫因低雌激素水平失活的 ER, 促进 ER 蛋白合成, 并与之结合, 增强靶基因的转录复制, 促进细胞增殖与分化, 延缓子宫的退行性改变 VEGF 是组织细胞产生的一种血管内皮细胞特异性有丝分裂原, 在血管生成和血管通透性的生理病理过程中有着重要的作用 [6] VEGF 与血管发生和发展紧密联系在一起, 如胚胎和出生后脑室的脑垂体肾上腺卵巢子宫内膜和胎盘等正常组织, 与女性的生殖系统也密切相关, 如血管化过程中的黄体卵泡子宫内膜周期和蜕膜过程均伴有 VEGF 的表达 [7] 血管的分化增殖与生成是维持子宫结构和功能的必要条件, 而 VEGF 是促进子宫血管生成的关键因子本实验结果表明, 更年汤与利维爱均能显著上调 VEGF 及 VEG FmRNA 的阳性表达, 有研究表明 E 2 有促进 VEGF 合成和表达的作用 [8-9] 提示更年汤改善子宫老化的作用可能与其发挥雌激素样作用, 调节血管新生基因的表达有关 HSP70 是在各种应激刺激下产生的一种非特异性细胞保护蛋白, 其可发挥分子伴侣抗细胞凋亡抗氧化应激等作用保护机体免遭应激因素的损害 [10] 肾阳虚型患者与衰老机体在内分泌轴及免疫功能上存在相似的反馈调节异常 [11] 研究发现,HSP70 与衰老关系密切, 通过转染 HSP70 基因, 能够延长果蝇美丽线虫的寿命 [12] 伴随着机体衰老,HSP70 及 HSP70mRNA 的表达也呈下降趋势 [13] 故 HSP70 不仅是判断细胞生理状态和应激能力的指标, 而且也可作为机体或细胞老化的一个重要因素 HSP70 虽不直接与性激素受体结合, 但能与 HSP90 及其他伴侣蛋白形成复合物, 影响性激素受体 (ER PR 等 ) 的功能活动, 从而影响性激素的转录活性及效应发挥, 在子宫内膜生长及激素对内膜生长的调控中起重要作用 [14] 在本次实验中, 我们观察到, 子宫 HSP70 及其 mrna 的表达略有升高, 老年组表达呈阴性可能与机体进入围绝经期后由于性激素水平的波动引起子宫结构和功能的改变, 使子宫处于动荡的应激状态中, 进而导致热休克蛋白及基因的表达略有升高, 当机体进入老年期, 子宫组织细胞结构的退变, 其转录和翻译热休克蛋白的功能完全下降有关更年汤组和替勃龙组可进一步升高模型大鼠子宫 HSP70 及 HSP70mRNA 的阳性表达, 说明更年汤可能通过提高 HSP70 及基因的阳性表达, 一方面发挥其对抗应激, 抗细胞凋亡的作用, 延缓子宫衰退 ; 另一方面发挥其分子伴侣的作用, 影响 ER 的功能活动, 从而影响性激素的转录活性及效应发挥, 改善卵巢功能衰退引起的子宫的结构损伤综上, 中医中药在绝经综合征的治疗上具有较好的特色与优势, 自拟更年汤具有雌激素样作用, 且可能通过发挥其雌激素样作用, 增加子宫上 ER VEGF HSP70 及 ERmRNA VEGFmRNA HSP70mRNA 的阳性表达, 改善子宫的退行性变, 维持下丘脑 - 垂体 - 卵巢 - 子宫轴的平衡, 达到治疗绝经综合征的目的参考文献 [1] TakahashiT,OgawaH,InabaR,etal.ChangesinprostaglandinFcon -centrationintheuterus(shelgland)ofthehenoviductinrelation toovipositionandestrogen[j].poultsci,2004,83(10): [2] 邢传平, 刘斌, 董亮, 等. 免疫组织化学标记结果的判断方法 [J]. 中华病理学杂志,2001,30(4):318. [3] 赵丕文, 王大伟, 王玲巧. 用小鼠子宫增重法筛选淫羊藿等 10 种中药雌激素样作用的实验研究 [J]. 北京中医药大学学报,2006, 29(10): [4] 俞瑾, 李超荆. 更年春治疗更年期综合征的临床和药理研究一对神经生殖内分泌免疫网络的调节 [J]. 生殖医学杂志,2000,9 (5): [5] StefanoGB,PrevotV,BeauvilainJC,etal.Celsurfaceestrogenre ceptormediatecalcium dependentnitricreleaseinhumanendothelia [J].Circulation,2000,101(13): [6] FeraraN.Vascularendothelialgrowthfactor:basicscienceandclini calprogres[j].endocrrev,2004,25: [7] 曹阳, 张婷婷. 血管内皮生长因子与子宫内膜异位症关系的探讨 [J]. 生殖与避孕,2009,3(29):193. [8] RobbVA,PepeGJ,AlbrechtED.Acutetemporalregulationofplacen talvascularendothelialgrowth/permeabilityfactorexpresioninba boonsbyestrogen[j].biolreprod,2004,71(5): [9] WangZ.VEGFanditsreceptormechanismfortheregulationofgene expresion[j].foremedsci,2002,25(3):129. [10] 张红波, 万亚涛, 王莲哲, 等. 在细胞应激反应中 HSP70 的保护与调节作用 [J]. 中国实用医药,2009,4(14): [11] 陈英华, 孙琪, 欧阳轶强, 等. 肾阳虚证动物模型造模方法综述 [J]. 中国医药学报,2003,18(60): [12] MuramatsuT,HatokoM,TadaH,etal.Age-relateddecreaseinthe inductabilityofheatshockprotein72innormalhumanskin[j].br JDermato,1996,134(6): [13] 陆金春, 黄宇烽, 张锡然. 热休克蛋白与女性生殖的研究进展 [J]. 国外医学 ( 计划生育分册 ),2001,20(1): [14] 白晓霞, 王文栋. 苯甲酸雌二醇对离体子宫内膜腺上皮细胞中热休克蛋白 70 及 90 表达的影响 [J]. 中华妇产科杂志,2005,40 (11):

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