复旦学报 医学版 外泌体在头颈部恶性肿瘤中的研究进展 黄 强 综述 周 梁 审校 复旦大学附属眼耳鼻喉科医院耳鼻喉科 上海 摘要 外泌体为细胞分泌的直径. 的细胞外囊泡 最早发现于绵羊网织红细胞培养上清中 早期研究认为外泌体仅仅为细胞排除代谢废物的 垃圾桶 而近段时间越来越多的证据显示外泌体内的 货

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1 复旦学报 医学版 外泌体在头颈部恶性肿瘤中的研究进展 黄 强 综述 周 梁 审校 复旦大学附属眼耳鼻喉科医院耳鼻喉科 上海 摘要 外泌体为细胞分泌的直径. 的细胞外囊泡 最早发现于绵羊网织红细胞培养上清中 早期研究认为外泌体仅仅为细胞排除代谢废物的 垃圾桶 而近段时间越来越多的证据显示外泌体内的 货物 能够在细胞之间互相传递 从而在介导细胞间通讯 调节免疫反应 诱导肿瘤细胞耐药和转移等方面发挥着重要作用 头颈部恶性肿瘤作为高发恶性肿瘤之一 发病率较高 早期筛查指标缺乏及治疗效果不理想等制约着疾病的诊治 而外泌体在研究头颈部恶性肿瘤发生发展中的内在机制 筛选稳定的生物标记物进行诊断和判断预后以及应用靶向治疗等方面的研究日益增长 因此本文就目前关于外泌体在头颈部恶性肿瘤中的进展作一综述 关键词 外泌体 头颈部恶性肿瘤.1! 中图分类号 1 文献标识码 5((% (#;""!" $3 $ $". ).21 %"()*"" $$"$" %!!-'(.('(((()##.. )($4(,4(#,&#((($$(# '(.()#$#($$(,((.$.)(4.#($(..$($$((#'(.$(.)(#(,$$,(,(4.$%..$$.. $#.#,((4$.((( *.(4.$.()##$#(*((#$((.##$# 44($( %#,4#(#($)$ '(.(($#.#(.4,.,$((4# *.(,,$$#,($(.*($($ #,$((#())(../#(#,$(((4'(.(#*.( $'(.(#*..1! ((!%$!*#$""#(!$ 5/,..! *#3(!2("!! 32.,/1 上海市科委资助项目 上海申康医院发展中心资助项目 2+ +(,$#-%./#.

2 黄 强 等 外泌体在头颈部恶性肿瘤中的研究进展 外泌体是直径. 起源于多泡体.(565 的细胞外囊泡 其具有磷脂双分子层结构 表面表达 +2+2 等具有特征性的标志蛋白 外泌体内包裹着包括.1! 1! 蛋白质和脂质等在内的物质 起初 研究者们认为外泌体是转运细胞内代谢产物的工具 但是目前越来越多的证据显示外泌体在介导细胞间通 讯 调节免疫反应 诱导肿瘤细胞耐药和转 移等方面发挥着巨大作用 更印证了 8$ 提 出的 种子与土壤 假说 而头颈部恶性肿瘤作为全身常见的恶性肿瘤之一 化疗耐药 淋巴结转移等问题一直困扰着广大临床工作者和研究人员 因此本文就目前关于外泌体在鼻咽癌 舌癌 喉癌以及口腔鳞癌等头颈部恶性肿瘤中的研究进展作一综述 外泌体与鼻咽癌 鼻咽癌 (,#$.8+ 是鼻咽部上皮组织常见的恶性肿 瘤 在我国两广地区具有较高的发病率 大于 0 的 8+ 患者就诊时已经有局部淋巴结浸润 因此 更加深刻地认识 8+ 的内在机制变得尤为关键 目前在 8+ 外泌体方面的研究成果较多 外泌体在肿瘤发生发展 演化以及诊断和预后方面都具有极为重要的作用 外泌体.1! 与 8+.1! 是一类具有高度保守性的长度在 之间的内源性非编码 1! 能够通过降解或抑制靶.1! 调节转录后水平的基因表达 在肿瘤发生发展演化中扮演了十分重要的角色 众所周知 8+ 与 -56 感染密 切相关 而 8$ 等率先发现病毒.1! 可通过外泌体运输的方式传递给未被病毒感染的细胞 "/( 等也证实在裸鼠种植模型和患者血清中都能较为特异性地探测到 -56 感染的 8+ 细胞分泌的含有.%5!1%, 的外泌体 这些发现有望成为潜在的鉴别 8+ 和非 8+ 的肿瘤生物标记物 8+ 细胞通过释放富含.1! 的外泌体促 使其适应不断变化的微环境. 等使用阿霉素以及光敏剂!$% 刺激 8+ 细胞株 % 均可显著增加外泌体数量并能改变外泌体中.1! 的表达谱 而其中变化幅度最显著的均是作为癌基因而存在的.1! 这提示在外界环境不佳的条件下 肿瘤细胞可以通过释放有利于肿瘤进展的.1! 从而促进其恶性表型以及转移形成等过程 外泌体.1! 参与调控 8+ 细胞增殖 侵袭 以及免疫调节从而促进肿瘤发展 等通过.1! 芯片技术比较了 8+ 患者血清以及 & 细胞系来源的外泌体 发现均存在.1%%,.1%.1%%,.1%%, 和.1% 的显著升高 生物信息学分析推测这些.1! 可能参与了!19 信号通路的下调 从而影响了细胞的增殖和分化 其中 & 细胞系来源的外泌体可通过抑制 细胞增殖和 ## 细胞分化以及诱导促进 $ 细胞的产生 从而削弱 细胞的功能 并通过促进 +2 或者 +2 细胞释放促炎因子 % % 和 % 以及减少 %% 等抑炎因子等来调控肿瘤免疫微环境 后续实 验则证实了与 细胞增殖分化等密切相关的纤维母细胞生长因子 4($)#4 " 是.1%%, 的直接靶点 外泌体.1%%, 可通过抑制 " 的表达从而抑制 细胞功能 相反地 通过靶向.1%%, 的 1! 海绵特异性敲低外泌体.1%%, 的表达水平可以恢复 细胞增殖和 ## 细胞分化的能力 这均说明了外泌体.1! 在 8+ 发生 发展以及演化过程中发挥着重要作用 外泌体 8 与 8+ 潜伏膜蛋白..,8 被认为是 -56 感染 5 淋巴细胞过程中最为重要的癌基因 并与细胞生长 调控以及增殖过程密切相关 2*( 等首先揭示了 8 与外泌体之间的潜在联系 而 *( 等经过进一步实验 发现 8+ 源性外泌体内高表达的 8 不仅可以增加受体细胞及受体细胞外泌体内表皮生长因子受体,. $)#4,-"1 的含量 而且高表达的 8 与 -"1 的外泌体被内皮细胞 成纤维细胞等摄取后通过激活 -19 和 89!* 信号通路参与细胞增殖等过程 这提示外泌体 8 可以影响外泌体组分及其性状 参与并直接调控肿瘤细胞增殖等恶性进程 另外从间接调控方面来看!$ 等 发现 8 能增加外泌体内缺氧诱导因子 %#,' 4 % 的表达 而 % 是肿瘤细胞恶性转化以及发展中的关键转录因子 直 接促进了肿瘤发展 + 等则证实 8+ 细胞中 8 的表达能显著增加肿瘤细胞外泌体中纤维母细胞生长因子 4($)#4

3 复旦学报 医学版 年 月 " 的表达 而后者被认为是具有促进血管生成作用的潜在促癌因子 这些研究均证实外泌体 8 能从直接调控和间接调控两方面影响着 8+ 的进展 鉴于此 靶 向 8 的治疗显得尤为关键 有研究发现 在 8 定向分拣进入外泌体的过程中 +2 扮演着重要的角色 用 +181+( 技术敲除 +2 后发现细胞外泌体中 8 的含量明显下降 这指明了一种阻断 8 下游信号通路的策略 同时也为治疗 8+ 提供了一种新的思路 外泌体 " 与 8+ 半乳凝素 $%"% 在调节 细胞生物学作用 自身 免疫以及炎性反应中具有重要作用 有研 究证实 -56 感染的 8+ 细胞产生富含 "% 的外泌体 而 "% 是成熟 # 细胞膜表面死亡 受体.% 的特异性激动剂 两者结合可介导成 熟 # 细胞的凋亡过程 9 等发现通过阻断外泌体中的 "%.% 的相互作用 可以显著减缓对 # 细胞的抑制并增强其抗肿瘤作用 说明外泌体 "% 在促进调节性 细胞生长 诱导成熟的 +2# 凋亡方面具有重要作用 提示肿瘤 细胞可能通过产生外泌体以逃脱免疫监视 这也预示着此种策略可作为治疗 8+ 的免疫疗法之一 外泌体其他内容物与 8+# 等证实间充质干细胞.(#.(.+ 可以产生高表达纤维母细胞生长因子 4( $)#4" 的外泌体 与 8+ 细胞共培养后发现其可以通过 "%"1 依赖的级联式 -19 信号通路影响 8+ 细胞间充质转化,#%.(#.(- 的过程 从而参与到肿瘤细胞恶性进展的过程中 这也更加深刻地指明除了肿瘤本身产生的外泌体对其的作用外 间充质干细胞来源的外泌体等因素对肿瘤的影响 除此之外 在 8+ 细胞外泌体中还存在种类繁多的与其发生发展密切相关的因子 包括 相关蛋白 %!% % 8 相关.1! 基质金属蛋白酶 8% 等 这些因子在传递病毒蛋白 参与细胞转移 调控肿瘤演化发展以及免疫调节等方面发挥了重要的作用 相互作用 共同推动了 8+ 的恶性进展 外泌体与口腔鳞癌 口腔鳞癌 (.(.3++ 发病率占头颈部恶性肿瘤的 0 淋巴结转移是导致患者五年生存率较低的主要因素 而肿瘤来源的外泌体被认为肿瘤细胞与肿瘤微环境进行交流的重要方式 并参与到细胞增 殖转移 迁移浸润等一系列影响之中 外泌体.1! 与口腔鳞癌 *# 等发现高度转移的 3++ 细胞株 3+% 来源的外泌体可通过激活 -19 和!9 信号通路诱导细胞增殖 并发现外泌体中高表达的.1!% 通过直接靶向.22 基因 2-!22. $2 增强了转移性较差的细胞株 3+%8 的细胞迁移能力 等通过.1! 测序发现不同氧浓度条件下 3++ 外泌体差异.1! 之中.1!% 的表达水平差异最为显著 并发现外泌体.1!% 在降低细胞 -% 钙黏蛋白表达的同时显著增加了 和波形蛋白的表达水平 这些研究提示外泌体特异性.1! 在口腔鳞癌细胞迁移以及上皮间质转化中具有重要作用 有可能与肿瘤转移密切相关 2*. 等通过 1%8+1 技术发现在 3++ 外泌体中.1!%%, 的表达水平明显高于细胞内 当细胞内.1!%%, 的浓度升高时 通过靶向作用于转化生长因子 % 受体 (4.$ $)# 4%, "51 下调细胞内 "51 的表达水平使得诸如克隆形成 增殖生长等恶性表征减弱 这提示.1! 在细胞和外泌体内表达水平不同.1! 分拣进入外泌体是具有特异性的 即肿瘤细胞将具有恶性特征的.1! 分拣进入外泌体 然后传递给其他肿瘤细胞以及基质细胞等从而影响和改变肿瘤细胞的一系列恶性行为 % 其他 据既往研究证实 肿瘤细胞摄取和内化外泌体取决于细胞表面的硫酸乙酰肝素蛋白聚糖 #,(4,$(8"( 而肝素 可以竞争性结合 8"( 的共受体 等通过肝素处理 3++ 后发现 肝素可通过阻断肿瘤细胞与外泌体的融合内化 阻断外泌体对肿瘤细胞增殖分化等影响 这也为临床治疗 3++ 提供了一个新的思路 外泌体与舌癌 尽管目前手术和放化疗水平的进展迅速 但舌癌患者仍然具有高居不下的转移率 和死亡率 舌癌细胞来源的外泌体在其中占有重要的地位 外泌体 +!6 与舌癌 小窝蛋白 %

4 黄 强 等 外泌体在头颈部恶性肿瘤中的研究进展 +!6 在多种类型的细胞中均有表达 文 献报道 +!6 在介导肿瘤细胞增殖 侵袭等恶性 行为方面具有重要作用 6 等发现 舌鳞癌细胞株 +% 能产生富含 +!6 的外泌体 能将 +!6 通过外泌体运输的形式从肿瘤细胞横向转移至肿瘤微环境中 这说明含有 +!6 的外泌体在舌鳞癌发生发展中可能具有重要的作用 外泌体蛋白质与舌癌 有研究者通过研究舌鳞癌 细胞和正常口腔黏膜细胞外泌体之间的蛋白组学表达差异 发现肿瘤拒绝抗原 $, 和纤维母细胞生长因子受体 4( $)#4,"1 蛋白具有最显著 的差异 目前研究证实 $, 参与抗原递呈过程 在抗肿瘤特异性免疫反应中具有重要作用 推测肿瘤细胞可能通过产生富含 $, 的外泌体排除自身抗原 从而逃避免疫监视 而 "1 在口腔鳞 癌和胃癌 直肠癌等肿瘤中均存在表达 在肿瘤的发生发展和演化中具有重要的促进作用 其他 廖贵清等 较先从舌鳞癌细胞株 培养上清液中分离纯化外泌体 并通过体外抗瘤试验表明 负载外泌体的树突状细胞 2+ 诱导的细胞毒性 淋巴细胞 '.,#+ 对 细胞的杀伤率明显强于未负载外泌体的对照组 提示外泌体在抗原递呈等肿瘤免疫领域具有很强的应用前景 有望形成新型的肿瘤疫苗 外泌体与喉癌 目前外泌体在喉癌 $ (.(.++ 研究中的报道相对 较少 &$ 等通过研究发现 ++ 患者血清中外泌体.1!% 和 3! 1 的表达水平与患者临床分级 分期以及淋巴结转移密切相关 更重要的是通过.1!% 和 3! 1 的联合检验能够筛查可能罹患 ++ 的患者 具有较高的敏感性和特异性 这预示着.1!% 和 3! 1 的联合检验可以作为潜在的 ++ 患者诊断的标志物以及预后评价的指标之一 外泌体与 ++ 之间的联系有待于进行更多的基础及临床研究来揭示 结语 头颈部恶性肿瘤作为全球第六大恶性肿瘤 较高的发病率及较差的预后一直以来制约着患 者的生活水平和寿命 虽然发现外泌体的时间不长 但外泌体在头颈部恶性肿瘤以及其他肿瘤中潜在的研究价值却越来越受到关注 外泌体内各种 货物 通过细胞间物质交换 传递参与了头颈部恶 性肿瘤的增殖迁移 耐药转移以及免疫调节等各个生物学过程 推动了肿瘤的恶性发展 这有助于更加深刻地认识头颈部恶性肿瘤发生发展的内在机制 与此同时 研究者们一直致力于筛选头颈部恶性肿瘤患者血清等体液中存在的外泌体作为合理稳定的生物标志物以期能进行早期筛查 靶向治疗和预后判断等方面 尽管外泌体在头颈部恶性肿瘤中的研究日益丰富 但是仍然存在许多问题亟待解决 就外泌体本身而言 外泌体是否依据其形态和功能具有更细致 的分类是摆在众多研究者面前的重要问题 外泌体被细胞摄取后外泌体内的成分是否一定能够发挥 作用也值得我们进一步探寻 而在头颈部恶性肿瘤的诊治方面 外泌体作为生物标志物在特异性 敏感性 稳定性和临床适用性等方面是否优于传统的血清标志物 利用外泌体作为头颈部恶性肿瘤化疗药物载体给药是否存在抗原性以及毒性等问题都有待论证 这些问题都值得我们进一步探索外泌体以及外泌体在头颈部恶性肿瘤中的作用 参 考 文 献 1!"! 5!15!"! '(.((#(#445 & +9681!23 1!1!3 21($#(..(,((#$#,. ((4(('((" / 9!31!!2! 2-"+ 1!%('(.(#((,.( $.((,. "/ !!91 59 &- -'((%%.(4.((( 8!"-# ( 4 ( $)#( 4# ( -" / 3 3!+3!%6! 5-. '(. $(. $,.((( $# 4 (,#$.!(+ -) 8!-11 25!11!#,. 4.( (,#$. (,,$#,$##(.(((

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转移潜力 本文将关注从原发肿瘤生长一直到进展为远处转移的各个阶段中 的作用 转变为肿瘤相关成纤维细胞 改造肿瘤微环境 肿瘤的演进依赖于癌细胞和周围微环境以及机体内环境之间的相互作用 肿瘤生长发展的关键步骤是肿瘤间质微环境的激活 活化的间质细胞产生大量的生长因子和基质重构蛋白及细胞外基质成分 继而形成

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