资料手册 Fractogel 层析介质 : 快速高效地捕获您的目标

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焰汤
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1 资料手册 Fractogel 层析介质 : 快速高效地捕获您的目标

目的是让您在生物制药工艺的每个步骤均获得性能优势来自默克密理博的层析介质对于层析, 挑战在于有效纯化目标产品, 同时尽可能降低成本缩短上市时间

2 引言 300 多年来, 默克 KGaA 为化学与制药工业开发了尖端优质的产品和服务默克 KGaA 的生命科学部门默克密理博, 延续了这一传统, 长期致力于研究和开发, 我们的投资屡次产生了改变行业格局的革新默克密理博提供从发现到制造的一整套创新解决方案和支持服务, 目的是让您在生物制药工艺的每个步骤均获得性能优势来自默克密理博的层析介质对于层析, 挑战在于有效纯化目标产品, 同时尽可能降低成本缩短上市时间产品滴定度稳定增加, 对下游加工提出了更大的需求开发适当的纯化策略是成功的重要因素所选择的层析介质和技术必须稳健, 应当能够去除杂质, 帮助您得到高纯度的目标分子 2

3 Fractogel 介质 : 可靠的层析工具基质 Fractogel 介质为基于合成甲基丙烯酸酯的聚合物小球, 提供优良的压力稳定性, 从而能够采用高流率视您的应用而定, 我们可提供中等大小的 M 型填料 ( 粒度 µm) 和较小的 S 型填料 ( 粒度范围 µm) 触手 Fractogel 介质的独特组成, 是纯化策略的有力工具触手是长线形的聚合物链, 携带功能配位体全部触手与 Fractogel 介质的羟基以共价键连接该构型提供了高表面积, 使生物分子不受空间位阻, 与可及的配位体结合许多配位体可用于各种层析应用 ( 包括离子交换亲和疏水性相互作用和分子筛 ) 常规离子交换介质触手型离子交换介质 Fractogel 介质类型的性质 : 粒度孔径尺寸基质 S 型 :20-40 µm M 型 :40-90 µm 约 800 Å 交联聚甲基丙烯酸酯工作范围 ph 2-12 压力极限储存 8 bar 20% 乙醇,150mM NaCl 3

4 Fractogel 层析介质的优点触手介质的一个主要优点是, 官能团与目标分子之间的空间位阻最小, 更易接触与常规方法相比, 触手介质提供了更高的结合力, 特别是对于大型蛋白质抗体病毒和质粒目标生物分子结合得更紧密, 但在洗脱阶段, 可逆相互作用可以被中和更佳的产品收率独特的表面改性技术的一个结果是, 所有 Fractogel 介质均有高结合力由于目标分子的结合更紧密, 使用 Fractogel 离子交换介质的捕获步骤, 常常比其他介质更高效与其他类型的层析介质相比, 更高效的捕获导致了更大的总收率更安全的产品与基于碳水化合物的介质不同,Fractogel 介质不易为微生物降解因此, 内毒素污染风险大大减少此外,Fractogel 介质可以多次清洁, 也延长了其使用寿命这个特点很重要, 特别是在纯化重组蛋白质 ( 由微生物产生 ) 时更低的运行费用由于 Fractogel 介质的优良化学耐受性, 循环次数可以很多介质寿命极长, 更换频率降至最低, 从而减少了运行费用益处可靠地纯化大分子有效捕获目标蛋白质, 去除病毒 DNA 和内毒素优良收率和高处理量优越的稳定性和质量允许多次柱再生与消毒循环切实地节约时间和成本 4

5 选择正确的 Fractogel 介质默克密理博为不同的层析技术提供多种 Fractogel 介质所有 Fractogel 介质均是为了生产生物分子而设计的例如, 使用各种 Fractogel 离子交换介质, 以高通过速率, 处理天然或重组蛋白质 ( 如血浆因子单克隆抗体 ) M 型 Fractogel 离子交换介质广泛用于捕获步骤, 而最终纯化可使用 S 型离子交换介质或疏水性相互作用层析介质最终纯化也可使用 Fractogel EMD BioSEC 分子筛柱金属螯合亲和层析可以高效地用于特定应用领域 5

6 用于离子交换层析的 Fractogel 介质图 1. 使用 Fractogel EMD SO3 介质, 捕获单克隆抗体平衡 (25 mm 磷酸钠缓冲液,pH 5.5) 后, 将含有 415 mg 蛋白质 ( 相当于 30 mg mab) 的样品装入柱内随后, 用平衡缓冲液清洗柱, 使用盐梯度 (25 mm 磷酸钠缓冲液 /0.5 M NaCl, ph 7), 获得 94% 纯化抗体洗脱液 A Conductivity [ms] mab ml ph 电导率吸收率离子交换层析 (IEX) 是稳健有效的技术, 基于电荷来分离分子区分两种交换类型 : 碱性 ( 带正电荷, 或阳离子 ) 和酸性 ( 带负电荷, 或阴离子 ) 它们又可分为带弱碱弱酸性或强碱强酸性官能团后者的官能团通常以离子化形式存在, 不受规定操作范围内的 ph 值影响离子交换层析可采用结合模式或流过模式操作 Fractogel 离子交换介质的主要应用领域从各种来源 ( 例如细胞培养上清液微生物表达系统包涵体血浆植物组织等 ) 中分离天然和重组蛋白质有效地纯化肽和低分子量物质 ( 例如 NADP ATP 神经节苷脂等) DNA 内毒素和宿主细胞蛋白质, 获得优良的对数减少值安全去除病毒很适合于有效纯化单克隆抗体用于金属螯合亲和层析的 Fractogel 介质图 2. 使用 Fractogel EMD Chelate 介质, 纯化葡糖激酶 ( 来自酵母 ) 在固定的钴离子上, 执行金属螯合层析在由高到低 ph 线性梯度的洗脱过程中, 可将纯化酶集中一个峰处洗脱含有 1 M KCl 和 10 mm 葡萄糖的 20 mm 磷酸盐缓冲液 (ph 7.5), 被用作缓冲液 A 将缓冲液 A 调整到 ph 值为 6.0, 用于洗脱 A 280 活度 (U/ml) ph 分数对于 Fractogel EMD Chelate, 选择亚氨基二乙酸作为功能亲和配基该配基体非常适合于金属离子配位作用金属离子的自由配位点, 被用来与各种蛋白质和肽结合 Fractogel EMD Metal Chelate 亲和介质的主要应用领域非常适合于分离重组组氨酸标签蛋白质肽的分离柱内的在位复性 6

7 用于分子筛层析的 Fractogel 介质分子筛层析 (SEC) 是一种纯化方法, 通常不限制缓冲液的选择使用 Fractogel EMD BioSEC 介质, 可对天然和重组蛋白质病毒和血浆来源生物药剂进行纯化 Fractogel EMD BioSEC 介质具有压力稳定性, 因而易于填充到高性能生产规模的层析柱中益处包括 : 缩短上市时间, 简单直接地从实验室规模放大到生产规模的层析柱 A min 图 3. 使用 Fractogel EMD BioSEC, 分离标准蛋白质混合物样品含有 BSA( 峰 1 为 BSA 的二聚体, 峰 2 为 BSA 单体 ) 卵清蛋白 ( 峰 3) 和细胞色素 ( 峰 4) 以 1.0 ml/min (30 cm/hr) 的流率, 将 500 μl 样品装入 600 x 16 mm Fractogel EMD BioSEC 柱, 使用含有 0.1 M NaCl 的 20 mm Fractogel EMD BioSEC 介质的主要应用领域磷酸钠缓冲液 (ph 7.2) 作为洗脱剂血浆因子的有效纯化步骤去除二聚体和高分子量聚集体 ( 例如单克隆抗体 ) 病毒的纯化测定蛋白质的表观分子量用于疏水性相互作用层析的 Fractogel HIC 介质默克疏水填料 Fractogel Merck Phenyl 介质带有疏水性较强的配基, 可以针对胞质蛋白抗体重组蛋白质或膜蛋白质的做纯化分离 A 280 图 4. 以 Fractogel EMD Phenyl 分离细胞色素 C(cytochrome C) ( 峰 1), 肌血球素 myoglobin ( 峰 2), 溶解酵素 lysozyme ( 峰 3), 和胰凝乳蛋白酶原 A chymotrypsinogen A ( 峰 4) 层析柱规格 150 x 10 mm, 缓冲液 A: 20 mm 磷酸钠, 1.8M 硫酸铵, ph 7, 缓冲液 B: 20 mm 磷酸钠, ph 7; 流速 1ml/min min 7

8 在您的工艺中使用 Fractogel 介质 Fractogel 介质的支持力量, 是默克密理博无可比拟的全球专业知识和客户支持服务 64 个国家有我们的专用服务组织, 在世界范围内提供技术和应用专门知识您可以依靠我们提供现场培训与支持, 或使用我们在世界各地的生物制药科学与培训设施, 将我们的专业知识引入您的工艺我们的目标是帮助您 : 由小试规模, 可预测地有效地转变为制造规模加工确保以计划速率进行生产, 并获得所期望的收率和纯度建立稳健一致可转移的过程确保长房及时并成功地开始运行 8

9 优良的制造质量在生物制药工艺物料的生产与处理中, 默克密理博遵守严格的安全标准默克密理博按照公认的国际质量标准进行操作, 目标是提供最高的产品质量和安全性除了已制定的 DIN ISO 9001:2008 或等效的质量系统,Fractogel 介质产品系列的生产与处理还额外实行了几项 GMP 要求 9

10 Fractogel 介质订购信息说明数量 [ml] 粒度 [µm] 容量 [ 每 ml 凝胶 ] Fractogel EMD IEX 介质 Fractogel 强阴离子交换介质 Fractogel EMD TMAE (M) 10, 100, 500, mg BSA Fractogel EMD TMAE Hicap (M) 10, 100, 500, mg BSA Fractogel EMD TMAE Medcap (M) 10, 100, 500, mg BSA Fractogel EMD TMAE (S) 10, 100, 500, mg BSA Fractogel 弱阴离子交换介质 Fractogel EMD DEAE (M) 10, 100, 500, mg BSA Fractogel EMD DEAE (S) 10, mg BSA Fractogel EMD DMAE (M) 10, 100, 500, mg BSA Fractogel 强阳离子交换介质 Fractogel EMD SO3- (M) 10, 100, 500, mg Lys Fractogel EMD SE Hicap (M) 10, 100, 500, mg Lys Fractogel EMD SO3- (S) 10, 100, mg Lys Fractogel 弱阳离子交换介质 Fractogel EMD COO- (M) 10, 100, 500, mg Lys Fractogel EMD 亲和介质 Fractogel EMD Chelate (M) 10, 250, 500, µmol Cu Fractogel EMD SEC 介质 Fractogel EMD BioSEC 150, 250, 1000, ,000 kda SEC = 尺寸排阻 Lys= 溶菌酶 BSA= 牛血清白蛋白货号筛选工具包的内容 Fractogel AEX 筛选工具包货号 Fractogel DMAE 选型预装柱 Fractogel DEAE 选型预装柱 Fractogel TMAE 选型预装柱 Fractogel TMAE Hicap 选型预装柱连接器 :Luer 锁插口 /1/16 插头 4 件 Fractogel CEX 筛选工具包货号 Fractogel SO3- 选型预装柱 Fractogel SE Hicap 选型预装柱 Fractogel COO- 选型预装柱连接器 :Luer 锁插口 /1/16 插头 3 件 10

预填充柱订购信息说明柱尺寸货号 MiniChrom Fractogel TMAE (M) 1ml 8 20 mm 1.25054.0001 MiniChrom Fractogel TMAE (M) 5ml 8 100 mm 1.25069.0001 RoboColumn Fractogel TMAE (M) 0.2ml 5 10 mm 1.25084.

11 预填充柱订购信息说明柱尺寸货号 MiniChrom Fractogel TMAE (M) 1ml 8 20 mm MiniChrom Fractogel TMAE (M) 5ml mm RoboColumn Fractogel TMAE (M) 0.2ml 5 10 mm RoboColumn Fractogel TMAE (M) 0.6ml 5 30 mm MiniChrom Fractogel TMAE HC (M) 1ml 8 20mm MiniChrom Fractogel TMAE HC (M) 5ml 8 100mm RoboColumn Fractogel TMAE HC 0.2ml 5mm 10mm RoboColumn Fractogel TMAE HC 0.6ml 5mm 30mm MiniChrom Fractogel SO3 (M) 1 ml 8 20mm MiniChrom Fractogel SO3 (M) 5ml 8 100mm RoboColumn Fractogel SO3 0.2ml 5mm 10mm RoboColumn Fractogel SO3 0.6ml 5mm 30mm MiniChrom Fractogel DEAE (M) 1 ml 8 20mm MiniChrom Fractogel DEAE (M) 5ml 8 100mm MiniChrom Fractogel DMAE (M) 1 ml 8 20mm MiniChrom Fractogel DMAE (M) 5ml 8 100mm MiniChrom Fractogel SE HC (M) 1 ml 8 20mm MiniChrom Fractogel SE HC (M) 5ml 8 100mm MiniChrom Fractogel COO (M) 1 ml 8 20mm MiniChrom Fractogel COO (M) 5ml 8 100mm MiniChrom Fractogel TMAE MC (M) 5ml 8 20mm MiniChrom Fractogel TMAE MC (M) 1ml 8 100mm MiniChrom Fractogel Chelate (M) 1 ml 8 100mm MiniChrom Fractogel Chelate (M) 5ml 8 20mm MiniChrom Fractogel TMAE (S) 1ml 8 20mm MiniChrom Fractogel TMAE (S) 5ml 8 100mm RoboColumn Fractogel TMAE (S) 0.2ml 5mm 10mm RoboColumn Fractogel TMAE (S) 0.6ml 5mm 30mm

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